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天蚕素AD和BuforinⅡ表达载体的改良和融合蛋白表达条件优化 被引量:1
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作者 陈泉 扈进冬 +3 位作者 赵晓燕 李哲 李纪顺 杨合同 《福建农业学报》 CAS 2013年第12期1195-1199,共5页
为提高重组大肠杆菌表达天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白的表达效率,研究表达菌株、质粒稳定性和诱导条件对天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白表达的影响。通过SDS-PAGE分析目的蛋白占全菌总蛋白的含量,确定大肠杆菌BER2566为表达菌株;利用基因... 为提高重组大肠杆菌表达天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白的表达效率,研究表达菌株、质粒稳定性和诱导条件对天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白表达的影响。通过SDS-PAGE分析目的蛋白占全菌总蛋白的含量,确定大肠杆菌BER2566为表达菌株;利用基因工程技术,构建卡那霉素抗性的表达质粒pET(K)-Trx-CADBuforinII,提高质粒稳定性和蛋白表达效率;优化了IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等诱导条件,确定菌体浓度为OD600=0.8时,IPTG浓度为0.8mmol·L-1,诱导时间为5h,目的蛋白表达量最高,可达到全菌总蛋白含量的50%以上。 展开更多
关键词 大肠杆菌 蛋白表达
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Hybrid Antimicrobial Peptide Buforin Ⅱ-Cecropin B Exhibits Antimicrobial Activity 被引量:1
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作者 Xin NIE Li ZHANG +2 位作者 Shanshan WANG Jie DING Zhiping ZHAO 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2015年第1期55-58,共4页
[ Objective ] This study aimed to investigate the antimicrobial activity of hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B. [ Method ] Gene fragment BC encoding the hybrid antimicrobial peptide Buforin II-Cecropin... [ Objective ] This study aimed to investigate the antimicrobial activity of hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B. [ Method ] Gene fragment BC encoding the hybrid antimicrobial peptide Buforin II-Cecropin B was synthesized by SOE-PCR with six primers designed according to the published amino acid sequences. Then, the BC gene fragment was ligated into pET32a vector and expressed in BI21. Antimierobial ability of the crude hybrid antimicrobial peptide was detected with the Oxford cup method. [ Result] The BC gene fragment was correctly amplified by SOE-PCR and ligated into pET32a vector, to construct the expression vector pET32-BC. The hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B was expressed in BI21 after induction by IPTG. The optimal induction time was 2 h. Antimicrobial activity assay suggested that the hybrid antimicrobial peptide possessed antimicrobial activity to Escherichia coli and Bacillus subtilis. [ Conclusion] The hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B exhibited antimicrobial activity to Gram-negative E. coli and Gram-positive B. subtilis strains. 展开更多
关键词 Hybrid antimicrobial peptide buforin ii Cecropin B EXPRESSION Antimicrobial activity
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Buforin Ⅱ衍生肽的分子设计、结构分析及活性研究 被引量:3
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作者 郝刚 乐国伟 +1 位作者 施用晖 马丹雅 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期366-371,共6页
在Buforin Ⅱ衍生肽BF2-A的结构特征基础上,重新设计新抗菌肽BF2-X。BF2-X是将BF2-A的N-端保持不变,在第10位精氨酸上接入一个3次重复的α-螺旋序列RLLR,并将第8位上的缬氨酸用亮氨酸取代。生物信息学分析表明,与BF2-A相比,BF2-X的正电... 在Buforin Ⅱ衍生肽BF2-A的结构特征基础上,重新设计新抗菌肽BF2-X。BF2-X是将BF2-A的N-端保持不变,在第10位精氨酸上接入一个3次重复的α-螺旋序列RLLR,并将第8位上的缬氨酸用亮氨酸取代。生物信息学分析表明,与BF2-A相比,BF2-X的正电荷增加,疏水性比例提高,螺旋度增加,同时两亲性也增强。化学合成后经圆二色谱检测表明,BF2-A/X在水相中是一种无规则卷曲结构,当置于模拟细胞膜疏水环境的50%三氟乙醇中时,BF2-A/X会被诱导成α-螺旋结构,并且BF2-X的α-螺旋含量明显高于BF2-A。抑菌试验表明BF2-X对细菌以及真菌都具有广谱抗菌活性,BF2-X对细菌的抗菌活性要比BF2-A强。BF2-X的α-螺旋含量的提高可能与抗菌活性的增强有直接的关系。BF2-A/X对小鼠红血球不具有体外溶血活性。 展开更多
关键词 抗菌肽 buforin 分子设计 结构分析 抑菌活性
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抗菌肽BF2-A/B对细菌表面特性的影响及与脂质体的相互作用 被引量:2
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作者 郝刚 乐国伟 +1 位作者 施用晖 唐俊妮 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1235-1240,共6页
研究抗菌肽BuforinⅡ的衍生肽BF2-A/B对细菌表面特性的影响,以及与脂质体的作用模式。Zeta电位仪和十六烷萃取法检测发现BF2-A/B作用G-菌和G+菌后,能够提高细胞表面电负性和疏水性。选用卵磷脂和心磷脂制备包裹钙黄绿素的脂质体,模拟细... 研究抗菌肽BuforinⅡ的衍生肽BF2-A/B对细菌表面特性的影响,以及与脂质体的作用模式。Zeta电位仪和十六烷萃取法检测发现BF2-A/B作用G-菌和G+菌后,能够提高细胞表面电负性和疏水性。选用卵磷脂和心磷脂制备包裹钙黄绿素的脂质体,模拟细菌胞膜,考察发现BF2-A/B能够引起荧光素从脂质体中泄漏,BF2-B对膜的扰动作用更大,引起的泄漏率比BF2-A高,但它们都不破裂脂质体膜。用FITC标记衍生肽,研究发现加入脂质体后,FITC-肽荧光光谱蓝移,量子产率增大,并且脂质体保护FITC-肽免受丙烯酰胺的荧光淬灭,说明BF2-A/B的N-端插入了脂质体的磷脂双分子层中。 展开更多
关键词 抗菌肽 buforinii 细菌 表面特性 脂质体
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