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MOLECULAR CLONING AND FUNCTIONAL EXPRESSION OF α-BUNGAROTOXIN (V31) FROM CHINESE CONTINENTAL BANDED KRAIT 被引量:4
1
作者 钱友存 范春阳 +3 位作者 胡太山 杨运桂 杨胜利 龚毅 《Zoological Research》 CAS CSCD 2000年第1期41-47,共7页
The cDNA encoding a variant of α bungarotoxin was cloned from the venom glands of Bungarus multicinctus by RT PCR.The deduced protein precursor contained a 21 amino acid signal peptide and a following 74 amino ... The cDNA encoding a variant of α bungarotoxin was cloned from the venom glands of Bungarus multicinctus by RT PCR.The deduced protein precursor contained a 21 amino acid signal peptide and a following 74 amino acid mature protein.The signal peptide is very similar to those of short chain neurotoxins,κ neurotoxins and cardiotoxins.The amino acid sequence of the mature protein is identical to α bungarotoxin (V31),a minor variant of α bungarotoxin identified by protein sequencing technique.Furthermore,the cDNA encoding the deletion precursor of α bungarotoxin was also cloned.By use of pMAL p2,the variant was overexpressed in E coli as a soluble fusion protein and purified by sepharose 6B amylose affinity chromatography,which was confirmed by western blotting with the antisera agai nst α bungarotoxin.The recombinant variant was achieved after digestion by factor X a.It displayed about 1/6 in vivo toxicity of natural α bungarotoxin.The successful cloning and functional expression of α bungarotoxin provided a basis for the future study of structure function of long neurotoxins. 展开更多
关键词 bungarotoxin (V31) cDNA cloning Fusion expression In vivo toxicity
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Purification and Identification of Recombinant Alpha-bungarotoxin
2
作者 Yan JIA Yanchun HU +1 位作者 Naisheng ZHANG Zengshan Liu 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2013年第3期46-49,共4页
[ Objective ] This paper aimed to obtain active alpha-bungarotoxin (α-BGT) protein and investigate the isolation and purification of recombinant α-BGT protein. [ Method] The expressed soluble fusion protein was pu... [ Objective ] This paper aimed to obtain active alpha-bungarotoxin (α-BGT) protein and investigate the isolation and purification of recombinant α-BGT protein. [ Method] The expressed soluble fusion protein was purified by using GSTrap FF affinity columns. Purified fusion protein bound to GSTrap FF affinity col- umns was directly cleaved by thrombin to obtain the solution containing recombinant α-BGT. Using natural α-BGT as control, the antigenicity and biological activity of the purified fusion protein and recombinant α-BGT were detected by SDS-PAGE, Western Blot and toxicity test in vivo. [ Result] Recombinant ot-BGT was iso- lated; the purified fusion protein and recombinant α-BGT were similar to the natural α-BGT in antigenicity; the toxicity of purified fusion protein was relatively wea- ker; recombinant α-BGT was similar to the natural ot-BGT in toxicity. [Condusion] This study laid the foundation for further large-scale production of recombi- nant α-BGT. 展开更多
关键词 Recombinant alpha-bungarotoxin PURIFICATION Biological activity
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电刺激迷走神经对脓毒症小鼠肠道通透性的作用及机制研究
3
作者 钟强 张颖 周锋 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第12期112-117,共6页
目的探讨电刺激迷走神经对脓毒症小鼠肠道通透性的作用及机制。方法将50只C57BL/6小鼠随机分为对照组(CON组)、脓毒症组[脂多糖(LPS)组]、迷走神经切断组(VGX组)、电刺激迷走神经组(STM组)、α-银环蛇毒素(α-BGT)组,每组10只。LPS组、... 目的探讨电刺激迷走神经对脓毒症小鼠肠道通透性的作用及机制。方法将50只C57BL/6小鼠随机分为对照组(CON组)、脓毒症组[脂多糖(LPS)组]、迷走神经切断组(VGX组)、电刺激迷走神经组(STM组)、α-银环蛇毒素(α-BGT)组,每组10只。LPS组、VGX组、STM组、α-BGT组均腹腔注射10 mg/kg LPS制备脓毒症模型,CON组则腹腔注射等体积生理盐水。CON组、LPS组仅暴露双侧颈迷走神经,VGX组、STM组、α-BGT组均切断双侧颈迷走神经,STM组电刺激左颈迷走神经,α-BGT组皮下注射α-BGT后再电刺激左颈迷走神经。处死各组小鼠后取回肠组织,光镜下进行组织病理学观察,评估肠道组织通透性,并检测紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和核因子-κB(NF-κB)蛋白相对表达量。结果LPS组小鼠回肠组织肠黏膜上皮细胞损伤严重,微绒毛坏死、脱落,大量炎性细胞浸润,VGX组回肠组织病理学改变程度较LPS组加重,STM组回肠组织病理学改变程度较LPS组、VGX组减轻,α-BGT组肠黏膜上皮细胞损伤最严重。与CON组比较,LPS组、VGX组小鼠肠上皮组织通透性均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组、VGX组比较,STM组小鼠肠上皮组织通透性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与STM组比较,α-BGT组小鼠肠上皮组织通透性增加,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组、VGX组小鼠肠上皮组织中ZO-1、claudin-2蛋白相对表达量低于CON组,STM组小鼠肠上皮组织中ZO-1、claudin-2蛋白相对表达量高于LPS组、VGX组,α-BGT组小鼠肠上皮组织中ZO-1、claudin-2蛋白相对表达量低于STM组,差异均有统计意义(P<0.05)。LPS组、VGX组小鼠肠上皮组织中MLCK、NF-κB蛋白相对表达量高于CON组,STM组小鼠肠上皮组织中MLCK、NF-κB蛋白相对表达量低于LPS组、VGX组,α-BGT组小鼠肠上皮组织中MLCK、NF-κB蛋白相对表达量高于STM组,差异均有统计意义(P<0.05)。结论电刺激迷走神经有助于保护脓毒症小鼠的肠道屏障功能,其潜在机制或与激活胆碱能抗炎通路,进而抑制炎症反应相关。 展开更多
关键词 电刺激 迷走神经 脂多糖 ZO-1蛋白 claudin-2蛋白 Α-银环蛇毒素 胆碱能抗炎通路
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Total synthesis of snake toxin α-bungarotoxin and its analogues by hydrazide-based native chemical ligation 被引量:1
4
作者 Xiao-Qi Guo Jun Liang +3 位作者 Ying Li Yong Zhang Dongliang Huang Changlin Tian 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2018年第7期1139-1142,共4页
Nicotinic acetylcholine receptors(nAChRs) play important roles in intercellular communications of nerve cells. α-Bungarotoxins(αBtx) is a moderator for the nAChRs. Chemical synthesis provides a promising way to acce... Nicotinic acetylcholine receptors(nAChRs) play important roles in intercellular communications of nerve cells. α-Bungarotoxins(αBtx) is a moderator for the nAChRs. Chemical synthesis provides a promising way to access aBtx and their analogues. Here, we reported a new method for a-bungarotoxin by combining Fmoc-SPPS and peptide hydrazide based ligation strategy. The two-segment ligation method may enable efficient synthesis of aBtx analogues. These synthetic toxin peptides are useful tools for development of imaging or therapeutic reagents. 展开更多
关键词 Chemical synthesis Native chemical ligation Peptide hydrazide Α-bungarotoxin Nicotinic acetylcholine receptors
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不同阶段海洛因成瘾大鼠脑内单胺递质的变化 被引量:7
5
作者 韦世秀 蒙子卿 +1 位作者 叶峻 蒋春华 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期396-398,共3页
目的观察不同阶段海洛因成瘾大鼠脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)及5羟吲哚乙酸(5HIAA)的变化。方法模拟人类吸毒成瘾、治疗;复吸成瘾,再治疗周而复始的模式。按递增法给大鼠染毒,造成动物海洛因成瘾。剖取不同阶段的鼠... 目的观察不同阶段海洛因成瘾大鼠脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)及5羟吲哚乙酸(5HIAA)的变化。方法模拟人类吸毒成瘾、治疗;复吸成瘾,再治疗周而复始的模式。按递增法给大鼠染毒,造成动物海洛因成瘾。剖取不同阶段的鼠脑,以荧光分光光度法检测单胺类递质含量。结果各阶段海洛因成瘾鼠脑单胺类递质含量明显增高,5HT代谢物亦明显增高。α银环蛇毒素和美沙酮等治疗均能显著降低单胺递质。结论海洛因成瘾的大鼠,不同阶段的脑内单胺递质明显升高,两种治疗方案均可显著降低单胺类递质、缓解戒断症状。 展开更多
关键词 海洛因 依赖性 单胺递质 美沙酮 Α-银环蛇毒素
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α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达 被引量:5
6
作者 胡延春 张乃生 +3 位作者 邓俊良 左之才 廖玉辉 欧阳红生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期463-469,共7页
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化B... 根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析。结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%。经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性。表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28μg/g。 展开更多
关键词 Α-银环蛇毒素 基因克隆 非融合原核表达 免疫原性 生物学活性
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K-银环蛇毒素对小鼠被动学习和空间记忆的影响 被引量:9
7
作者 刘洁生 谢丽玲 彭志英 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期96-99,共4页
以K-银环蛇毒素(K-BGT,3.25μg/kg)海马内注射可造成小鼠胆碱能神经N受体功能受损的学习记忆的障碍。水迷宫检测结果表明,K-BGT组小鼠空间学习记忆明显下降,训练第4天,逃避潜伏期比第1天下降仅为16.7... 以K-银环蛇毒素(K-BGT,3.25μg/kg)海马内注射可造成小鼠胆碱能神经N受体功能受损的学习记忆的障碍。水迷宫检测结果表明,K-BGT组小鼠空间学习记忆明显下降,训练第4天,逃避潜伏期比第1天下降仅为16.7%,而对照组逃避潜伏期比第1天下降达58.3%。在第5天6轮共60次训练中,对照组在规定时间内找到平台的百分数为80.0%,而K-BGT组仅为33.3%。撤去平台后第1天,对照组穿越原平台所在部位的次数为(5.3±2.8)次,而K-BGT仅为(1.9±1.2)次。此外搜寻平台方式构成方面也出现了明显变化。避暗测试结果表明,K-BGT组比对照组潜伏期下降38.3%,错误率比对照组增加了2.25倍。卵磷脂40mg/kg经胃灌服14天对K-BGT所致学习记快损伤具有一定的改善作用。 展开更多
关键词 Kappa-银环蛇毒素 学习记忆 行为 卵磷脂
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神经元烟碱乙酰胆碱受体受阻滞所致早老型痴呆动物模型的建立 被引量:5
8
作者 刘洁生 谢丽玲 +1 位作者 洪岸 陈式樛 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期218-220,共3页
海马区内注射K-银环蛇毒素(K-BGT)可造成小鼠学习记忆明显障碍,以建立早老性痴呆(AD)患者学习记忆缺损模型。对小鼠的损害作用随K-BGT剂量增加而明显增加。水迷宫多项指标测试结果表明,K-BGT损害组小鼠与对照... 海马区内注射K-银环蛇毒素(K-BGT)可造成小鼠学习记忆明显障碍,以建立早老性痴呆(AD)患者学习记忆缺损模型。对小鼠的损害作用随K-BGT剂量增加而明显增加。水迷宫多项指标测试结果表明,K-BGT损害组小鼠与对照组小鼠相比,空间学习和记忆能力显著下降。明暗回避反应实验结果也表明,K-BGT损害小鼠潜伏期明显缩短,错误次数增多;两种检测方法均表明K-BGT可导致小鼠学习记忆明显障碍,而且这种损害具有持久的作用。 展开更多
关键词 早老性痴呆 痴呆 动物模型 神经元 乙酰胆碱
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增溶抽提β-银环蛇毒素结合蛋白及某些突触前毒素对其结合的抑制作用 被引量:4
9
作者 沈国光 卓晓亮 +1 位作者 张新妹 徐科 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期94-97,共4页
β-银环蛇神经毒素阻遏神经肌肉接头递质释放的作用机理,可能与它结合于一种突触前的电压依赖的K~+通道有关。本文报告了从大鼠膈肌膜组分中用去垢剂TritonX-100增溶抽提β-银环蛇毒素结合蛋白的结果。这种结合蛋白抽... β-银环蛇神经毒素阻遏神经肌肉接头递质释放的作用机理,可能与它结合于一种突触前的电压依赖的K~+通道有关。本文报告了从大鼠膈肌膜组分中用去垢剂TritonX-100增溶抽提β-银环蛇毒素结合蛋白的结果。这种结合蛋白抽提液的比结合活性为200-400fmol/mg蛋白,比膜制备物的比结合活力提高约一倍。抽提得率为50%-70%。抽提液与^(125)I标记的β-银环蛇毒素的结合可被曼巴蛇神经毒素(dendrotoxin)完全抑制,其IC_(50)约8×10^(-8)mol/L。但另一种β型神经毒素,β-蝮蛇神经毒素(β-agkistrodotokin)却完全不能抑制这种结合。这提示,β-蝮蛇毒素与β-银环蛇毒素具有不同的作用位点。 展开更多
关键词 神经毒素 β-银环蛇毒素 结合蛋白 突触
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重组α-银环蛇毒素P22-A31的原核表达及功能分析 被引量:3
10
作者 林鲁萍 汪芳 +1 位作者 章晓波 王义权 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1102-1108,共7页
α-银环蛇毒素在神经科学研究以及在临床和制药上有重要作用,为获得大量的α-银环蛇毒素,我们用已构建的pGEX-BgTX(P22-A31)质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并用谷胱甘肽Sepharose FF纯化GST-α-银环蛇毒素融合蛋白,再用凝血酶切掉融合... α-银环蛇毒素在神经科学研究以及在临床和制药上有重要作用,为获得大量的α-银环蛇毒素,我们用已构建的pGEX-BgTX(P22-A31)质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并用谷胱甘肽Sepharose FF纯化GST-α-银环蛇毒素融合蛋白,再用凝血酶切掉融合标签谷胱苷肽转移酶(Glutathione S-transferase,GST),得到了较纯的重组α-银环蛇毒素同工毒素,得率约为1.225mg/L。用重组α-银环蛇毒素制备多克隆抗体,经ELISA和Western杂交鉴定后可知重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素的抗原性一致。小鼠毒性试验表明,重组α-银环蛇毒素同工毒素的半致死剂量LD50为1.598mg/kg,约为天然α-银环蛇毒素的1/5。小鼠化学法镇痛试验显示,重组α-银环蛇毒素有一定的镇痛药效,1/4LD50剂量的镇痛百分率为55.2%,1/8LD50剂量的镇痛百分率为20.5%,在外周镇痛作用中呈一定的量效关系。 展开更多
关键词 α银环蛇毒素 蛇毒 基因表达 活性
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两个蛇毒基因克隆及cDNA序列多态性再分析 被引量:4
11
作者 林鲁萍 林群 王义权 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期457-464,共8页
α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin)是一种突触后神经毒素,广泛存在于眼镜蛇科蛇类的毒腺中,对于该基因cDNA多态性是否真实一直存有争议。本研究从银环蛇基因组DNA中克隆到α-银环蛇毒素基因序列,并对其中5个克隆进行测序和序列比对分析。... α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin)是一种突触后神经毒素,广泛存在于眼镜蛇科蛇类的毒腺中,对于该基因cDNA多态性是否真实一直存有争议。本研究从银环蛇基因组DNA中克隆到α-银环蛇毒素基因序列,并对其中5个克隆进行测序和序列比对分析。作为参照,从同一次反转录得到的cDNA混合物中,克隆了蛇毒神经生长因子cDNA,并对其进行测序、比对和突变情况分析。综合各研究组报道的α-银环蛇毒素cDNA序列、α-银环蛇毒素基因序列和神经生长因子cDNA序列的突变情况,发现α-银环蛇毒素cDNA的多态性在基因组模板上不存在对应的变化,因此推测这种多态性不是从不同的转录本而来,同时考虑到不同研究小组报道的序列突变位点并没有出现相同的情况,因此其多样性也不是RNA编辑的结果。可见这种cDNA序列上的多样性很可能是由反转录过程以及基因克隆过程中人为引入的错误造成的。 展开更多
关键词 Α-银环蛇毒素 多态性 RNA编辑 突变
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重组α-银环蛇毒素的纯化及活性分析 被引量:3
12
作者 段海清 张兆山 +1 位作者 李淑琴 黄翠芬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期747-751,共5页
以表达重组α-银环蛇毒素的高效表达菌株BL21(PDZ04)为材料,研究重组α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)的分离纯化.采取亲和色谱和离子交换色谱的方法都得到了重组α-银环蛇毒素的纯品.首先从天然的银环蛇毒干粉中分离纯化得到了... 以表达重组α-银环蛇毒素的高效表达菌株BL21(PDZ04)为材料,研究重组α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)的分离纯化.采取亲和色谱和离子交换色谱的方法都得到了重组α-银环蛇毒素的纯品.首先从天然的银环蛇毒干粉中分离纯化得到了天然α-银环蛇毒素的纯品.然后以天然α-银环蛇毒素为对照来检测重组α-银环蛇毒素的抗原性和毒性.ELISA结果显示其具有与天然α-银环蛇毒素相似的抗原性,以小鼠为动物模型,纯化的重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素相比,其腹腔注射的LD50也基本一致,约为0.22μg/g.结果表明利用基因工程的方法生产蛇神经毒素是可行的. 展开更多
关键词 蛇神经毒素 重组 Α-银环蛇毒素 纯化 生物活性
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银环蛇毒素及其基因工程研究进展 被引量:3
13
作者 胡延春 贾艳 +1 位作者 张乃生 欧阳红生 《动物医学进展》 CSCD 2003年第3期15-18,共4页
文章阐述了银环蛇毒素的特性、成分、蛋白质结构及其 c DNA和基因组 DNA,以及各种银环蛇毒素的克隆和表达研究概况。α,β、κ和γ-银环蛇毒素在结构上具有高度的同源性 ,在应用研究方面具有特殊的功能 ,主要应用在医学药理学、分子生... 文章阐述了银环蛇毒素的特性、成分、蛋白质结构及其 c DNA和基因组 DNA,以及各种银环蛇毒素的克隆和表达研究概况。α,β、κ和γ-银环蛇毒素在结构上具有高度的同源性 ,在应用研究方面具有特殊的功能 ,主要应用在医学药理学、分子生物学和分子免疫学等方面。由于银环蛇毒分子量小 ,活性强 。 展开更多
关键词 银环蛇毒素 基因工程 蛋白质结构 有效成份 基因克隆 基因表达
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α-银环蛇毒素融合基因表达载体的构建及原核表达 被引量:2
14
作者 胡延春 张乃生 +2 位作者 欧阳红生 柳增善 邓俊良 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第4期7-10,共4页
设计并人工合成2条引物,对作者构建的重组质粒pMD-α-BGT进行PCR扩增获得α-BGT基因。将目的基因连接至pUCm-T载体构建克隆质粒pUCm-α-BGT。克隆质粒经BamHⅠ、NotⅠ双酶切后连接至融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,成功构建融合基因表达载... 设计并人工合成2条引物,对作者构建的重组质粒pMD-α-BGT进行PCR扩增获得α-BGT基因。将目的基因连接至pUCm-T载体构建克隆质粒pUCm-α-BGT。克隆质粒经BamHⅠ、NotⅠ双酶切后连接至融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,成功构建融合基因表达载体pGEX-α-BGT,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。表达产物经15%SDS-PAGE分析,在约34ku处可见明显的外源蛋白质表达带,与预计的分子量大小一致,其表达量约占细菌总蛋白的32.6%。Westernblotting和间接ELISA检测结果表明,α-BGT的融合表达蛋白与天然α-BGT标准品具有相似的抗原性。 展开更多
关键词 Α-银环蛇毒素 克隆表达 抗原性
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κ-银环蛇毒素敏感的烟碱受体激活引起的去甲肾上腺素释放参与烟碱诱导的长时程增强样反应(英文) 被引量:1
15
作者 余剑平 何进 +5 位作者 刘丹 邓春玉 朱小南 汪雪兰 王勇 陈汝筑 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期814-820,共7页
烟碱可以增强学习记忆功能,但其相关机制仍不清楚。海马长时程增强被认为是学习记忆的细胞机制。本研究室以往研究表明,当单脉冲的强度为诱发80%最大群体锋电位时,烟碱(10μmol/L)可以在海马CA1区诱导长时程增强样反应。本文通过细胞外... 烟碱可以增强学习记忆功能,但其相关机制仍不清楚。海马长时程增强被认为是学习记忆的细胞机制。本研究室以往研究表明,当单脉冲的强度为诱发80%最大群体锋电位时,烟碱(10μmol/L)可以在海马CA1区诱导长时程增强样反应。本文通过细胞外记录离体海马脑片CA1区锥体细胞层群体锋电位,探讨烟碱诱导长时程增强样反应所涉及的烟碱受体亚型与相应的神经递质释放。结果显示,烟碱诱导的长时程增强样反应可以被美加明(mecamylamine,1μmol/L)或κ-银环蛇毒素(κ- bungarotoxin,0.1μmol/L)阻断,但不被dihydro-β-erythtroidine(DHBE,10μmol/L)阻断。烟碱诱导的长时程增强样反应可以被普萘洛尔(propranolol,10μmol/L)阻断,但不被酚妥拉明(phentolamine,10μmol/L)或阿托品(atropine,10μmol/L)阻断。以上结果提示,κ-银环蛇毒素敏感的烟碱受体激活引起的去甲肾上腺素释放参与烟碱诱导的海马CA1区长时程增强样反应。 展开更多
关键词 长时程增强 K-银环蛇毒素 烟碱受体 去甲肾上腺素 海马
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新斯的明对银环蛇毒致大鼠肌无力的影响 被引量:1
16
作者 陈少英 李燕 +3 位作者 梁子敬 梁庆 晏平 刘荣 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期952-956,I0004,共6页
目的研究新斯的明对银环蛇毒相关性早期肌无力的影响。方法采用银环蛇干毒,按0.24mg/kg予SD大鼠行皮下注射,将SD大鼠随机分为八组,每组10只,按中毒后设置的时间点,予肌肉注射新斯的明。A组为中毒后15rain用新斯的明0.09mg/kg组... 目的研究新斯的明对银环蛇毒相关性早期肌无力的影响。方法采用银环蛇干毒,按0.24mg/kg予SD大鼠行皮下注射,将SD大鼠随机分为八组,每组10只,按中毒后设置的时间点,予肌肉注射新斯的明。A组为中毒后15rain用新斯的明0.09mg/kg组,B组为中毒后30rain用新斯的明0.09mg/kg组,C组为中毒后1.5h用新斯的明0.09mg/kg组,D组为中毒后15min用新斯的明0.18mg/kg组,E组为中毒后30min用新斯的明0.18mg/kg组,F组为中毒后1.5h用新斯的明0.18mg/kg组,G组为中毒后未用新斯的明组,H组为生理盐水对照组;采用低频重复神经刺激测中毒后10min、1h、2h、3h肌电图衰减值,中毒后3h抽取各组大鼠动脉血,检测血氧分压水平,并进行统计分析,取膈肌、腓肠肌行HE染色,了解肌肉细胞情况。结果新斯的明干预各组与对照组,检测相同时间点衰减值和血氧分压水平,差异无统计学意义(P〉0.05)。相同剂量新斯的明组间,于不同时间点给予新斯的明,检测相同时间点衰减值和血氧分压水平,差异无统计学意义(P〉0.05)。不同剂量新斯的明组间,于相同时间点给予新斯的明,检测相同时间点衰减值和血氧分压水平,差异无统计学意义(P〉0.05)。病理结果高倍镜(×200倍)下实验干预各组与对照组的膈肌与腓肠肌细胞形态,镜下均可见膈肌及腓肠肌细胞肿胀、核排列紊乱,组间比较差异无统计学意义。结论新斯的明拮抗银环蛇毒所致的肌无力方面未观察到效果。 展开更多
关键词 新斯的明 银环蛇毒 肌无力 低频重复神经刺激
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α-银环蛇毒素基因的克隆与表达 被引量:3
17
作者 段海清 张兆山 +1 位作者 李淑琴 黄翠芬 《生物技术通讯》 CAS 1998年第4期247-252,共6页
与传统的捕蛇或养蛇提毒的方法相比,利用基因工程方法生产蛇神经毒素具有明显的潜在优势。本研究结合国内外的研究现状,以α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)为例子来探讨蛇神经毒素基因在大肠杆菌表达体系中的表达情况及其规模生... 与传统的捕蛇或养蛇提毒的方法相比,利用基因工程方法生产蛇神经毒素具有明显的潜在优势。本研究结合国内外的研究现状,以α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)为例子来探讨蛇神经毒素基因在大肠杆菌表达体系中的表达情况及其规模生产的可行性。首先根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列,推导出其DNA序列并设计成部分互补的4条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化其寡核苷酸片段,通过片段退火、切口补平、连接、克隆、测序鉴定获得了α-银环蛇毒素基因;然后将α-银环蛇毒素基因克隆至pGEX-2T质粒中分别转化大肠杆菌DH5(和JM109进行表达分析,融合蛋白约占细菌总蛋白的30%~40%,其中部分为可溶性表达,部分以包含体的形式表达;对可溶性表达的条件进行了优化。最后以天然纯化的α-银环蛇毒素作为对照,分析融合方式表达的重组α-银环蛇毒素的活性,ELISA结果显示其与天然的α-银环蛇毒素比较具有相似的抗原性。 展开更多
关键词 蛇神经毒素 Α-银环蛇毒素 基因表达
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β-银环蛇神经毒素结合蛋白的分离纯化 被引量:2
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作者 沈国光 徐科 《Zoological Research》 CAS CSCD 2000年第3期177-180,共4页
大鼠膈肌神经突触前膜上存在 β -银环蛇毒素结合蛋白。膈肌经匀浆、去垢剂抽提、离子交换层析、植物凝集素亲和层析及银环蛇毒素亲和层析 ,可获得纯化的 β -银环蛇毒素结合蛋白。其比结合活性达 1nmol/mg蛋白质。整个纯化过程的总得率... 大鼠膈肌神经突触前膜上存在 β -银环蛇毒素结合蛋白。膈肌经匀浆、去垢剂抽提、离子交换层析、植物凝集素亲和层析及银环蛇毒素亲和层析 ,可获得纯化的 β -银环蛇毒素结合蛋白。其比结合活性达 1nmol/mg蛋白质。整个纯化过程的总得率为 3%。纯化蛋白制品的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示 ,有两个共纯化的多肽链 ,其分子量分别为 6 1和 6 9kD。 展开更多
关键词 β-银环蛇毒素 结合蛋白 大鼠膈肌 层析 纯化
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银环蛇粗毒若干有效组分对SWO细胞的作用 被引量:1
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作者 刘洁生 邢少璟 +1 位作者 陈勇 杨维东 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期286-288,共3页
目的 测定银环蛇毒素组分是否抑制人神经胶质瘤细胞SWO的生长 ,以及确定抑制的原因是诱导凋亡或是杀伤。方法 用MTT和流式细胞术等方法探讨银环蛇粗毒及其有效组分对人神经胶质瘤细胞SWO的作用。结果 MTT试验结果显示 ,SWO细胞对银... 目的 测定银环蛇毒素组分是否抑制人神经胶质瘤细胞SWO的生长 ,以及确定抑制的原因是诱导凋亡或是杀伤。方法 用MTT和流式细胞术等方法探讨银环蛇粗毒及其有效组分对人神经胶质瘤细胞SWO的作用。结果 MTT试验结果显示 ,SWO细胞对银环蛇粗毒、第Ⅲ峰毒素、α 银环蛇毒素 (α BTX)的作用比较敏感 ,同时SWO细胞比 3T3细胞更敏感。SWO对其他组分的作用不敏感。 3种毒素作用于SWO细胞 ,流式细胞术检测未见凋亡峰。结论银环蛇粗毒、第Ⅲ峰毒素、α BTX对SWO细胞有杀伤作用 。 展开更多
关键词 银环蛇 银环蛇毒素类 神经胶质瘤
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Kappa-银环蛇毒素对猫颈上神经节突触传递的影响 被引量:1
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作者 陈少刚 陈汝筑 +1 位作者 胡本荣 谢昭材 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期485-489,共5页
采用猫在体颈上神经节灌流方法研究新型神经元烟碱受体拮抗剂Kappa-银环蛇毒素对该神经节突触传递的影响。结果表明:1μmol·L-Kappa银环蛇毒素缓慢灌流约60min可完全阻断神经节突触的传递,使刺激神经节节... 采用猫在体颈上神经节灌流方法研究新型神经元烟碱受体拮抗剂Kappa-银环蛇毒素对该神经节突触传递的影响。结果表明:1μmol·L-Kappa银环蛇毒素缓慢灌流约60min可完全阻断神经节突触的传递,使刺激神经节节前纤维及往神经节方向注射乙酰胆碱所引起的瞬膜收缩反应消失,停药冲洗后瞬膜反应半数恢复时间为83.6±19.2min,阻断速度呈浓度依赖性。1mmol·L-1箭筒毒碱可明显地拮抗3μmol·L-1Kappa-银环蛇毒素对神经节的长效阻断作用,而同浓度的六烃季铵则无此作用。提示Kappa-银环蛇毒素可能与筒箭毒碱作用于烟碱受体上的同一结合位点。 展开更多
关键词 交感神经节 突触传递 烟碱采体 蛇毒
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