基于高通量测序的北柴胡根转录组SSR位点信息分析

以北柴胡根为试材,采用高通量转录组测序方法,获得uingene序列信息,研究分析SSR分布、基元特征,设计、验证EST-SSR引物的有效性,为开发、丰富EST-SSR分子标记奠定基础。结果表明:从北柴胡根转录组中共筛选到31176个SSR位点,分布于21732条unigenes,出现的频率为20.08%,分布密度为3.20个/10 kb,主要重复基元类型以二核苷酸最为丰富,共21056个,占SSR位点总数的67.54%;其次是单核苷酸和三核苷酸,分别占总SSR的19.05%和12.07%;四核苷酸~六核苷酸重复基元数量均较少。不同核苷酸基序类型共有131种基元,重复基元次数在5~11次的数量最多,占SSR总数的91.7%,且长度基本小于15 bp,其中AT/AT和AC/GT这两种基元在二核苷酸中出现频率最高。2064条和1004条含有SSR位点的unigenes分别注释到GO和KEGG通路,获得注释的基因功能主要与基础代谢相关。从22090对具有潜在多态性的EST-SSR引物中,随机挑选20对引物对3个北柴胡种质DNA进行PCR扩增,扩增成功率最高达85%。北柴胡根转录组SSR位点丰富、可用性较强,将促进柴胡的种质资源评价及分子标记辅助育种等工作。

庆阳地区柴胡根腐病病原物的分离与鉴定

为明确引起柴胡根腐病的主要致病菌,有效防治柴胡根腐病,采用组织分离法对感染根腐病的柴胡病原菌进行分离纯化,按照离体根部接种法,采用刺伤和无刺伤接种两种方式进行致病性测定,结合形态学观察和分子生物学方法鉴定致病菌的种类。结果表明,庆阳地区柴胡根腐病致病菌主要有尼伦伯格镰刀菌、尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、锐顶镰刀菌和燕麦镰刀菌,且存在复合侵染的现象。在柴胡种植栽培过程中,尽量保持植株的完整性有利于降低柴胡根腐病发病率。

柴胡对癫痫模型电活动的调制

目的 :研究柴胡对癫痫发作的影响。方法 :以家兔和大鼠为实验对象 ,用毛果芸香碱致痫 ,采用脑电图和细胞外玻璃微电极记录技术 ,观察柴胡对癫痫模型大脑皮层放电及海马脑片场电位的影响。结果 :腹腔注射柴胡后可使癫痫发作次数及发作持续时间显著减少 ,发作间隔时间显著延长 ,(P <0 .0 5 ) ,脑片旁滴注柴胡后使致痫大鼠海马脑片诱发场电位幅度平均降低 2 0 .4 1% ,恢复时间平均为 6 .86min ,(P <0 .0 1)。结论 :柴胡注射液能明显抑制癫痫模型电活动 。

柴胡、赤芍与醋柴胡、杭白芍对大鼠高脂血症作用的实验研究

目的 :观察药对柴胡、赤芍与醋柴胡、杭白芍 ,对高脂血症大鼠脂质代谢、血小板功能影响 ,比较它们作用环节的差异。方法 :本实验采用高脂应激造成大鼠高脂血症血瘀模型方法 ,观察大鼠血瘀模型脂质代谢、血小板功能的变化。结果 :醋柴胡、杭白芍、柴胡、赤芍对TC(cholesterol)均有显著降低作用 ,醋柴胡、杭白芍强于柴胡、赤芍 ,而两者对LDL C(lowdensityli poprotein)、Lp(a) [lipoprotein(a) ]也有显著降低作用 ,但柴胡、赤芍作用较强 ,和模型组比较有明显差异 (P <0 0 5和P <0 0 1) ;醋柴胡、杭白芍对TG (triglyceride)有显著降低作用 ,和模型组比较有明显差异 (P <0 0 1) ;柴胡、赤芍对血小板聚集率和活化阳性率均有显著降低作用 (P <0 0 5 )。结论 :柴胡、赤芍与醋柴胡、杭白芍可作用于引起动脉粥样硬化的不同环节 ,柴胡、赤芍药对在抑制血小板聚集、降低血小板活化率方面优于醋柴胡、杭白芍。

肝郁模型大鼠行为学与脑单胺递质的变化及柴胡的干预作用

目的:观察慢性束缚致肝郁模型大鼠行为学及脑内单胺递质的变化以及柴胡对该模型的干预作用,探讨肝郁模型大鼠行为学变化特征以及柴胡疏肝解郁的部分机制。方法:取体质量为200-220g的Wistar大鼠,随机分成正常组、模型组、柴胡疏肝散组(8.50g生药/kg)、柴胡小、中、大剂量组(0.81、2.43、4.86g生药/kg)。除正常组外,其他各组动物采用慢性束缚法,束缚大鼠3h/d,连续束缚3w,制备肝郁模型。从第2w开始按剂量灌胃给药,连续2w。应用Open-field-test试验仪测定大鼠不同造模时间的行为学变化;采用HPLC法测定造模3w后海马组织中NA、5-HT含量。结果:与正常组比较,造模1w后的大鼠水平爬行格数有增加趋势(P>0.05),造模1w-3w后大鼠体质量降低(P<0.05),水平爬行格数显著性减少(P<0.05),海马组织中NA和5-HT含量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,柴胡不同剂量组大鼠的体质量均有不同程度增加,爬行格数明显增加(P<0.05)、海马组织中NA、5-HT含量显著性降低(P<0.05)。结论:慢性束缚法诱导的肝郁模型大鼠存在自主性活动和海马单胺递质的异常变化;柴胡能明显改善该模型大鼠行为学异常,其机制可能与调节脑内单胺递质的平衡有关。

柴胡 黄芩 炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究

目的 探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法 用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型 ,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗 ,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理变化。结果 柴胡组小鼠在感染后第 5 ,7,10天心肌病理积分为 1.33±0 .82 ,1.6 0± 0 .6 3和 1.87± 0 .74 ,明显低于对照组 (2 .2 2± 1.37,3.2 7± 0 .96 ,2 .6 0± 1.0 6 ) (P <0 .0 5或 0 .0 1)。炙甘草组小鼠在感染后第 5 ,7天心肌病理积分为 1.2 6± 0 .88和 1.80± 0 .6 8,明显低于相应对照组 (P <0 .0 5或0 .0 1)。黄芩组小鼠在感染第 14 ,2 1天后心肌病理积分 (1.5 3± 0 .74 ,0 .80± 0 .5 6 )与对照组 (2 .33± 0 .98,1.4 0±0 .83)比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 单剂柴胡、黄芩。

小柴胡汤和柴胡—黄芩含药血清对CCl_4损伤肝细胞的影响

目的 建立CCl4肝细胞损伤模型 ,考察小柴胡汤及柴胡—黄芩配方含药血清对CCl4损伤肝细胞的保护作用。方法 制备小柴胡汤及柴胡—黄芩配方的大鼠含药血清 ,体外10mol·L-1CCl4诱导肝细胞损伤模型 ,观察体积分数为 0 1的含药血清对损伤肝细胞增殖率、GPT、细胞形态学以及凋亡率的影响。结果 与正常组比较 ,模型组肝细胞增殖率降低 (P <0 0 1) ,细胞培养上清液中GPT含量升高 (P <0 0 1) ;与模型组比较 ,小柴胡汤及柴胡—黄芩配方组的肝细胞增殖率提高 (P <0 0 1) ,细胞培养上清液中GPT含量降低 (P <0 0 1)。倒置显微镜和Giemsa染色观察到模型组肝细胞存在着明显的坏死和凋亡 ,小柴胡汤及柴胡—黄芩配方的凋亡细胞明显减少。与正常组比较 ,CCL4模型组细胞凋亡增高 (P <0 0 1) ;与模型组比较 ,柴芩组和小柴胡汤全方组的细胞凋亡率降低 (P <0 0 1)。结论 小柴胡汤及柴胡—黄芩配方含药血清对体外CCl4诱导的肝细胞损伤有保护作用。CCl4引起的肝损伤同时存在着明显的凋亡和坏死 ,小柴胡汤及柴胡 -黄芩配方可能具有抗CCl4诱导的肝细胞凋亡的作用。

柴芩合煎液与分煎液对LPS诱导的大鼠发热模型的影响

柴胡、黄芩是古方小柴胡汤“和解少阳”的核心药对。本实验通过观察柴 芩合煎液 (CQHJ)与分煎液 (CQFJ) (剂量为10g kg)对 2 0 μg kg和 80 μg kgLPS诱导的大鼠发热模型的影响 ,考察了它们的解热作用。结果发现 ,CQHJ与CQFJ对不同剂量的LPS诱导的大鼠发热均有显著的解热作用 ;但CQHJ与CQFJ在起效时间和作用效度上有所区别 ,总体上以CQHJ更具优势。

柴胡与赤芍、醋柴胡与白芍配伍前后药效学比较研究

目的 :观察柴胡与赤芍、醋柴胡与白芍配伍前后的药效学变化。方法 :小鼠以醋酸腹腔注射致痛、致炎观察药物的抗炎、镇痛作用 ;以酚红比色法观察胃推空和小肠排进功能 ;以胆总管引流观察大鼠的胆汁排泌功能。结果 :1 柴胡醋炙后在镇痛、利胆方面药效增强。 2 柴胡与赤芍、醋柴胡与白芍配伍后解痉作用增强。 3 柴胡与赤芍配伍 (1∶1)、醋柴胡与白芍配伍 (1∶2 )在抗炎、镇痛及胆汁排泌量上未见明显协同作用。

北柴胡根的发育解剖学研究

应用常规石蜡切片方法对北柴胡(B up leurum ch inense DC.)1年生主根的中部和2年生主根的根尖和中部进行了横向与纵向解剖观察,研究根的发育过程,并对其1年生与2年生主根中部的结构进行了比较分析.结果表明,北柴胡根的发育包括原分生组织、初生分生组织、初生结构和次生生长4个发育阶段.原分生组织由3群原始细胞组成,其细胞具有典型分生组织的细胞学特征;初生分生组织包括根冠原、表皮原、皮层原和中柱原.初生结构由表皮、皮层和中柱组成.初生木质部为二原型.次生生长主要是依靠维管形成层和木栓形成层的活动来完成.其木栓形成层由中柱鞘细胞恢复分裂能力而形成.2年生北柴胡主根的基本结构与1年生的相同,但与1年生的相比,其周皮、次生韧皮部和木质部面积均增加.不同点具体表现在:2年生主根的周皮增厚;分泌道数量增加;次生木质部中木纤维成群分布,在横切面上连接成一个圆环,其维管射线明显,多为多列射线.分泌道主要分布在中柱鞘薄壁组织和次生韧皮部中,均是裂生方式发生,属次生分泌道,初生结构中无分泌道存在.

氮、磷、钾预防柴胡根腐病初步研究

在本试验条件下,施用氮、钾肥都显著降低了柴胡对根腐病的抗性。施中低量磷肥时,柴胡对根腐病的抗性降低,但大量施用磷肥可降低柴胡根腐病的病情指数。柴胡得到较佳的产量时,其施肥措施并未增强柴胡对根腐病的抗性。从预防柴胡根腐病的角度,在第二年拔节前应多施磷肥,适量施用氮钾肥。

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化兔主动脉内膜增生的影响

目的探讨血府逐瘀汤对动脉粥样硬化(AS)兔主动脉内膜增生的影响。方法将21只兔随机分为空白组、模型组、血府逐瘀汤组。采用高脂喂饲复制兔AS模型,用MIASE医学图像分析管理系统测主动脉内膜厚度、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积;用免疫组化染色法观察兔主动脉平滑肌细胞肌动蛋白(SMα-actin)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果模型组兔主动脉内膜厚度、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积均明显增大,兔主动脉SMα-actin表达降低、PCNA表达增强;与模型组比较,血府逐瘀汤组兔主动脉内膜厚度、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积均明显减小,差异具有统计学意义(P<0.01),主动脉SMα-actin表达增强,差异具有统计学意义(P<0.05)、PCNA表达降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论血府逐瘀汤具有增强AS主动脉SMα-actin表达,抑制PCNA表达的作用,其抗AS的机制可能与调节平滑肌细胞表型转变和抑制VSMC增殖有关。

柴胡临床应用心得

结合临证心得，对柴胡的品种来源、退热、和解少阳、解郁、劫肝阴、升阳、应用剂量、治疗高血压八个方面作深入研究和探讨，澄清疑难纷争，提出独家见解，并介绍了数首验效方，为柴胡的理论研究和临床应用提供参考。

柴胡在组方中不同用量临床辨析

通过对古医籍及临床应用中柴胡用量与功效之间关系的辨析,得出临床应用柴胡,大剂量和解少阳、泻火外,更可推陈致新以治疗疑难杂症;中等剂量则疏肝解郁、调畅情志;小剂量升举阳气。

HPLC法测定柴胡不同部位4种黄酮类成分

目的定量测定开封市场上不同部位和不同产地柴胡中4种黄酮(芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素)。方法以ODS2色谱柱、乙腈-0.12%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,检测波长为360 nm。结果样品间的黄酮成分的量存在明显差异。叶片中芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素的总量远远高于柴胡根中。结论柴胡茎和叶中4种黄酮总量远远高于传统的入药部位根中的量,有必要对柴胡茎、叶进行进一步的研究和开发。

基因芯片技术分析舒郁胶囊对抑郁症肝气郁结证大鼠模型的干预作用

中医认为，抑郁症基本机制是肝失疏泄，基础证候是肝气郁结，基本治疗原则是调肝。中药舒郁胶囊主疏肝解郁、调畅情志，临床证实疗效确切。该复方主成分为柴胡皂苷可调理气机、疏肝解郁。本研究通过慢性温和应激（CMs）刺激方法，复制抑郁症肝气郁结证大鼠模型，通过基因芯片技术探讨舒郁胶囊及其主成分柴胡皂苷的干预作用，

柴胡根腐病致病菌生物学特性研究初报

根腐病是目前对柴胡为害最为严重的病害之一,此文对该病病原菌的生物学特性进行了研究。结果表明,致病菌生长最适温度为25～30℃,最适pH6～8,在麦汁培养基上较在PDA培养基上容易产孢。孢子萌发的最适条件是20～25℃,pH4～6和100%相对湿度。孢子在25℃水滴中3h后开始萌发,10h时全部萌发,孢子临界致死条件为51℃,10min。

舒郁胶囊对大鼠海马神经元5-HT3R激活后Ca^(2+)的影响

目的:观察海马神经元内5-羟色胺3受体(5-HT3R)激活后信号通路中Ca2+浓度的变化,探索复方舒郁胶囊治疗抑郁情绪的微观作用机制。方法:培养大鼠海马神经元,在中药血清药理学指导下进行实验:于培养基中添加5-HT3R激动剂激活其介导的信号通路,再以一定浓度舒郁胶囊和柴胡提取物含药血清孵育神经元。采用荧光探针Fluo-3/AM标记结合激光共聚焦显微镜技术测定海马神经元胞内[Ca2+]i。结果:激动剂激活5-HT3R信号通路,神经元胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.01)。给予正常大鼠舒郁胶囊和柴胡提取物含药血清干预,再次激活信号通路,胞内[Ca2+]i与正常组相比无明显变化,较激动剂组显著降低(P<0.05)。结论:舒郁胶囊通过5-HT3R调控海马神经元胞内[Ca2+]i的变化,可能是其治疗抑郁情绪的作用机制之一。

柴胡愈伤组织生长和不定根诱导的研究

目的探讨柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的适宜培养条件。方法以无菌苗为外植体诱导获得愈伤组织后,对不同种类和不同质量浓度的生长素进行实验,并对光和温度对柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的影响进行了研究。结果柴胡的愈伤组织适宜于在MS+NAA4mg/L+KT0.2mg/L培养基或MS+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培养基上继代培养。诱导其不定根时宜采用的培养基为MS+IBA2mg/L+KT0.2mg/L。25℃条件下,黑暗培养既有利于柴胡愈伤组织的生长又有利于其不定根的诱导。结论比较适宜于柴胡愈伤组织生长的生长素为NAA,而有利于不定根诱导的生长素为IBA。温度对愈伤组织的生长影响非常明显,光照是其发根的限制因素。

紫花大叶柴胡根、茎、叶的结构及与药效成分积累关系

目的揭示紫花大叶柴胡Bupleurum longiradiatum Turcz.var.porphyranthum Shan et Y.Li根、茎、叶的结构及与药效成分柴胡皂苷和黄酮类物质的积累关系。方法采用植物解剖学、组织化学以及植物化学方法对紫花大叶柴胡根、茎、叶的解剖结构、柴胡皂苷和黄酮类物质的分布以及含有量进行研究,并探讨其结构与主要成分积累关系。结果紫花大叶柴胡根由内到外主要由初生木质部、次生木质部、维管形成层、次生韧皮部、中柱鞘组织及周皮组成,在中柱鞘位置还分布有由3~30个分泌细胞组成的大小不等的分泌道;茎主要由表皮、皮层和维管柱组成,在紧贴韧皮部外方和髓周围还分布有分泌道;叶由表皮、叶肉组织和叶脉维管束组成,在紧贴韧皮部以及木质部上方分别分布有分泌道和纤维束;根茎过渡区兼有根和茎的结构特点。组化定位表明柴胡皂苷和黄酮类物质主要分布于根的周皮、中柱鞘组织、次生韧皮部、维管形成层以及次生木质部薄壁细胞、茎的表皮、皮层、韧皮部薄壁细胞、叶的表皮、叶肉组织及叶脉韧皮部中。植化结果表明,紫花大叶柴胡根茎叶中柴胡总皂苷含有量较高,分别为0.68%、0.15%和0.99%,总黄酮的含有量分别为0.61%、0.09%和0.85%。结论紫花大叶柴胡营养器官中均分布有柴胡皂苷和黄酮类物质;其中根和叶中柴胡总皂苷和总黄酮的含有量均较高,具有非常好的开发利用潜力。