补肾壮筋汤对腰椎间盘退变大鼠椎间盘及行为学特征影响的实验研究

目的:观察补肾壮筋汤对腰椎间盘退变大鼠椎间盘及行为学特征的影响,并观察其安全性。方法:选取40只清洁级8周龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、补肾壮筋汤组、吲哚美辛组,每组10只。应用椎间盘穿刺法对模型组、补肾壮筋汤组、吲哚美辛组大鼠L5~6椎间盘进行椎间盘退变造模,假手术组充分暴露L5~6椎间盘前缘,不进行穿刺干预。造模后24 h,补肾壮筋汤组大鼠以补肾壮筋汤(1.5 g·kg^(-1))灌胃,吲哚美辛组大鼠以吲哚美辛胶囊水溶液(7.5 mg·kg^(-1))灌胃,假手术组、模型组大鼠均以生理盐水(10 mL·kg^(-1))灌胃,每天1次,连续给药7周。分别于造模前及药物干预开始后1、3、5、7周时进行机械痛阈实验和斜板实验。最后一次行为学特征测定结束后,从眼底静脉丛取血测定血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,AAT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、肌酐(creatinine,CRE)、尿素氮(urea nitrogen,UN)的水平;取L5~6椎间盘、肝脏及肾脏,椎间盘组织分别进行HE染色、改良番红O-固绿染色后观察组织形态变化,肝脏及肾脏组织进行HE染色、Masson染色后观察组织病理改变。结果:(1)机械痛阈实验痛阈值。造模前及药物干预开始后不同时点痛阈值的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=36.245,P=0.000)。假手术组痛阈值随时间变化趋势不明显;模型组痛阈值随时间变化逐渐降低;补肾壮筋汤组和吲哚美辛组的痛阈值于药物干预开始后1周时降至最低,后期变化不明显。4组大鼠痛阈值总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=54.170,P=0.000)。除造模前外(F=1.375,P=0.266),药物干预开始后各时点4组大鼠痛阈值比较,组间差异均有统计学意义(F=30.059,P=0.000;F=34.117,P=0.000;F=33.454,P=0.000;F=35.617,P=0.000);药物干预开始后各时点假手术组痛阈值均高于模型组(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000);除药物干预开始后1周时外(P=0.197,P=0.191),其余各时点模型组的痛阈值均低于补肾壮筋汤组和吲哚美辛组(P=0.010,P=0.013;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000);药物干预开始后各时点补肾壮筋汤组和吲哚美辛组痛阈值比较,组间差异均无统计学意义(P=0.100;P=0.067;P=0.108;P=0.097)。时间因素和分组因素存在交互效应(F=16.490,P=0.000)。(2)斜板实验角度。造模前及药物干预开始后不同时点斜板实验角度的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=3.746,P=0.019)。假手术组、补肾壮筋汤组和吲哚美辛组斜板实验角度随时间变化整体呈上升趋势;模型组斜板实验角度随时间变化整体呈下降趋势。4组大鼠斜板实验角度总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=7.640,P=0.000)。造模前及药物干预开始后1周和3周时,4组大鼠斜板实验角度比较,组间差异均无统计学意义(F=0.575,P=0.635;F=2.664,P=0.063;F=0.994,P=0.407)。药物干预开始后5周和7周时,4组大鼠斜板实验角度比较,组间差异均有统计学意义(F=9.666,P=0.000;F=2.685,P=0.006);假手术组斜板实验角度均大于模型组(P=0.000;P=0.026),模型组斜板实验角度均小于补肾壮筋汤组和吲哚美辛组(P=0.000,P=0.007;P=0.000,P=0.042),补肾壮筋汤组斜板实验角度均大于吲哚美辛组(P=0.000;P=0.047)。时间因素和分组因素存在交互效应(F=2.934,P=0.012)。(3)血清学检测结果。药物干预结束后4组大鼠血清中AAT、AST、CRE、UN含量比较,组间差异均无统计学意义(F=1.023,P=0.398;F=0.237,P=0.869;F=0.629,P=0.602;F=1.141,P=0.350)。(4)组织学检测结果。HE染色及改良番红O-固绿染色显示,与模型组相比,补肾壮筋汤组和吲哚美辛组大鼠腰椎间盘组织退变程度较轻,3组中补肾壮筋汤组椎间盘组织退变程度最轻;肝、肾组织HE染色和Masson染色显示,模型组、补肾壮筋汤组及吲哚美辛组均未见肝、肾组织纤维化。结论:补肾壮筋汤在延缓腰椎间盘退变大鼠椎间盘退变及改善其行为学特征方面具有一定作用,效果略优于吲哚美辛,短期应用不会对肝肾组织及肝肾功能造成损伤。

补肾壮筋汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎的临床研究

目的:探讨补肾壮筋汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎的临床疗效。方法:将220例膝骨关节炎患者随机分为治疗组和对照组,每组110例。治疗组口服补肾壮筋汤治疗,对照组口服盐酸氨基葡萄糖胶囊治疗。2组均以12周为1个疗程。观察2组及治疗前后疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、西安大略和麦马斯特大学(WOMAC)骨关节炎指数的变化。结果:治疗组完成101例,脱落9例;对照组完成97例,脱落13例。2组脱落率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组优22例,良45例,中20例,差14例,优良率为66.34%,总有效率为86.14%;对照组优16例,良34例,中32例,差15例,优良率为51.55%,总有效率为84.54%。治疗组优良率明显高于对照组(P<0.05);2组总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组VAS评分与WOMAC骨关节炎指数均有明显改善(P<0.01),且治疗组优于对照组(P<0.05)。结论:补肾壮筋汤能有效缓解肝肾亏虚型膝骨关节炎的临床症状,改善关节功能。

补肾壮筋汤治疗膝骨关节炎作用机制的网络药理学研究

目的:采用网络药理学方法探讨补肾壮筋汤治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台、中药分子机制的生物信息学分析工具,检索和筛选补肾壮筋汤的活性成分,然后借助PubChem和Swiss Target Prediction数据库检索和筛选活性成分对应的靶点,预测补肾壮筋汤的作用靶点。在GeneCard数据库中检索KOA的靶点。将检索到的KOA靶点和补肾壮筋汤靶点取交集,获取补肾壮筋汤治疗KOA的作用靶点。通过String数据库和Cytoscape3.7.2软件分析补肾壮筋汤治疗KOA的作用靶点,构建补肾壮筋汤治疗KOA靶点蛋白互作网络,筛选补肾壮筋汤治疗KOA的关键靶点。筛选与补肾壮筋汤治疗KOA的作用靶点有关的活性成分,并将其与补肾壮筋汤治疗KOA的作用靶点、补肾壮筋汤组成中药一同输入Cytoscape3.7.2软件,构建补肾壮筋汤治疗KOA“中药-活性成分-靶点”网络,分析补肾壮筋汤治疗KOA的主要活性成分。利用DAVID数据库和R3.6.2软件进行补肾壮筋汤治疗KOA靶点基因GO富集分析和KEGG富集分析。运用Autodock vina软件将补肾壮筋汤治疗KOA的主要活性成分与关键靶点进行分子对接,对其结合能进行评估,并通过Pymol软件将结果可视化。结果:共筛选到补肾壮筋汤的活性成分99个、预测到对应的靶点768个,通过与检索到的989个KOA靶点取交集,共获得补肾壮筋汤治疗KOA的靶点172个。通过分析共获得15个补肾壮筋汤治疗KOA的关键靶点[促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen activated proteinkinase,MAPK)1、Akt激酶(aktkinase,AKT)1、淀粉样前体蛋白、Harvey大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物、MAPK8、白细胞介素(interleukin,IL)-6、激肽原1、血管内皮生长因子A、热激蛋白90AA1、JUN原癌基因、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、MAPK14、IL-2、表皮生长因子受体、凝血因子Ⅱ],5个补肾壮筋汤治疗KOA的主要活性成分(汉黄芩素、啤酒甾醇、槲皮素、黄芩素、山奈酚)。GO富集分析结果显示,补肾壮筋汤治疗KOA主要涉及RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的调控、凋亡过程的负调控、信号传导、调控细胞增殖、转录等生物过程,蛋白质结合、ATP结合、锌离子结合、相同蛋白质结合、酶结合等分子功能,以及细胞内质膜、细胞质、细胞核、胞质溶胶、核质等细胞组分;KEGG富集分析共筛选出磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-AKT、MAPK、TNF等3条主要信号通路。分子对接结果显示,5个主要活性成分与15个关键靶点均有良好的结合能力,结合能均≤-5.0kJ·mol^(-1);分子对接图显示,活性成分大多嵌入靶点活性口袋的疏水区,结合模式多以π-π作用和氢键为主,提示其具有较好的结合活性,结合后构象稳定。结论:补肾壮筋汤治疗KOA的作用机制可能是通过汉黄芩素、啤酒甾醇、槲皮素、黄芩素、山奈酚等活性成分,参与调控RNA聚合酶Ⅱ启动子转录、凋亡过程、信号传导、细胞增殖、转录,影响PI3KAKT、MAPK、TNF等信号通路。

温针灸联合补肾壮筋汤治疗肝肾不足型膝骨关节炎临床研究

目的:观察温针灸联合补肾壮筋汤治疗肝肾不足型膝骨关节炎患者的临床疗效。方法:选择82例膝骨关节炎患者为研究对象,以随机数字表法分为研究组与对照组各41例。对照组给予补肾壮筋汤治疗,研究组在对照组基础上联合温针灸治疗。比较治疗前后2组白细胞介素-8(IL-8)、维生长因子-2(FGF-2)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)水平及疼痛数字评价量表(NRS)、现时疼痛强度(PPI)、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎调查量表(WOMAC)评分,并比较2组临床疗效。结果:与同组治疗前比较,治疗后2组IL-8、VEGF水平及WOMAC、NRS、PPI评分均降低(P<0.05),FGF-2、TGF-β水平升高(P<0.05);与对照组治疗后比较,研究组治疗后IL-8、VEGF水平及WOMAC、NRS、PPI评分均较低(P<0.05),FGF-2、TGF-β水平较高(P<0.05)。研究组总有效率97.56%,高于对照组85.37%(P<0.05)。结论:温针灸联合补肾壮筋汤治疗肝肾不足型膝骨关节炎,可抑制患者炎症,降低VEGF水平,提升FGF-2、TGF-β水平,缓解疼痛,提升膝关节功能和临床疗效。

补肾壮筋汤介导内质网应激延缓毒胡萝卜素诱导大鼠椎间盘软骨细胞的退变

目的:观察补肾壮筋汤(BZD)对毒胡萝卜素(TG)诱导大鼠椎间盘软骨细胞内质网应激反应的影响。方法:①RT-PCR法检测经TG(2μmol·L-1)诱导大鼠椎间盘软骨细胞中蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核翻译起始因子(Eif2α)、激活转录因子4(ATF4)、生长阻滞和DNA损伤诱导基因153(GADD153)mRNA表达;②Western Blot法检测经TG诱导大鼠椎间盘软骨细胞PERK、Eif2α、ATF4、GADD153蛋白含量表达。结果:①RT-PCR结果显示,与模型对照组比较,补肾壮筋汤200,400,600μg·mL^-1组的PERK、Eif2α、ATF4、GADD153mRNA含量表达均呈降低趋势;②Western Blot结果显示,与模型对照组比较,补肾壮筋汤200,400,600μg·mL^-1组的PERK、Eif2α、ATF4、GADD153蛋白含量表达显著降低,尤其400μg·mL^-1组降低更显著(P<0.01)。结论:补肾壮筋汤可通过下调TG诱导大鼠椎间盘软骨细胞中与内质网应激反应相关的PERK、Eif2α、ATF4、GADD153 mRNA与蛋白含量表达,进而延缓大鼠椎间盘软骨细胞退变。

补肾壮筋汤联合针刺治疗肝肾亏虚型腰椎间盘突出症疗效观察及对单核细胞NLRP3表达的影响

目的:观察补肾壮筋汤联合针刺治疗肝肾亏虚型腰椎间盘突出症的临床疗效及其对外周血单核细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达的影响。方法:将96例患者随机分为对照组和观察组,对照组48例采用常规牵引治疗,观察组48例在对照组的基础上加用补肾壮筋汤联合针刺治疗;观察比较2组患者临床疗效、NLRP3炎症小体表达、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)、日本骨科协会评估治疗评分(JOA)及不良反应情况。结果:总有效率观察组为95.83%,对照组为77.08%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者凋亡相关斑点蛋白(ASC)mRNA水平较治疗前低(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA、NLRP3 mRNA水平较治疗升高(P<0.05);且观察组上述指标改善均较对照组更明显(P<0.05)。治疗后,2组患者IL-1β、IL-6水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组IL-1β、IL-6水平低于对照组(P<0.05)。2组患者JOA评分均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组JOA评分高于对照组(P<0.05)。观察组患者针刺部位出现血肿2例,局部剧烈刺痛感1例,经对症治疗后好转。结论:补肾壮筋汤联合针刺治疗肝肾亏虚型腰椎间盘突出症疗效显著,可有效抑制机体炎症反应,从而改善患者临床症状。