毛菊苣正丁醇萃取物中母菊素含量测定及其对大鼠肝纤维化保护作用

目的研究毛菊苣正丁醇萃取部位(Cichorium glandulosum N-butanol extraction site,CGE)对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的保护作用并测定其主要有效成分母菊素的含量。方法采用HPLC法测定CGE中母菊素的含量及方法学考察;大鼠随机分为正常组,模型组,CGE低、中、高剂量组,姜黄素组,除正常组大鼠背部sc生理盐水外,其余各组大鼠按体质量剂量sc 40%CCl 4橄榄油溶液建立HF模型,每周2次,连续12周,于第5周起,对相应给药组的大鼠在每日同一时间ig相应剂量的药物。12周后取肝脾组织及血清,检测肝脾指数及相关血清指标;观察肝脏病理组织学变化;采用免疫组化染色法和Western blot法考察肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7及α-SMA的蛋白表达。结果母菊素在CGE中的含量为7.69%;模型组大鼠肝功能严重受损,出现炎症细胞浸润及纤维蛋白,提示HF模型建立成功;与模型组比较,各给药组可明显降低肝脾指数及血清中的AST、ALT、LDH、γ-GT、AKP和MDA水平,明显改善肝组织病理损伤程度,能够有效抑制HF大鼠肝组织的TGF-β1、Smad3、α-SMA的蛋白表达,上调Smad7蛋白表达。结论CGE主要成分是母菊素,CGE对CCl 4诱导的大鼠HF具有保护作用,其作用机制可能与阻断TGF-β1/Smads信号转导通路有关。

仙鹤草正丁醇提取部位抗炎作用及其化学成分研究

目的考察仙鹤草正丁醇提取部位抗炎的活性部位,并探讨其作用机制和物质基础。方法采用花生四烯酸、角叉菜胶复制大鼠足趾肿胀模型,蛋白质印迹法检测大鼠足部组织中COX-1、COX-2、5-LO的含量,探讨仙鹤草正丁醇提取部位的抗炎作用;采用大孔树脂对仙鹤草正丁醇提取部位进行分离,采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验对仙鹤草正丁醇提取部位的不同洗脱部位(水洗脱部位、30%乙醇洗脱部位、60%乙醇洗脱部位、90%乙醇洗脱部位)进行抗炎有效部位筛选;采用花生四烯酸、角叉菜胶复制小鼠足趾肿胀模型,ELISA法检测小鼠血液IL-1β、PGE2、LTB4、TNF-a、IL-10的含量,对仙鹤草正丁醇提取部位的90%乙醇洗脱部位进行抗炎机制研究并进行化学成分分离。结果仙鹤草正丁醇提取部位能够减少AA、角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀度,降低AA、角叉菜胶诱导的大鼠足趾组织中COX-1、COX-2、5-LO的表达;仙鹤草90%乙醇洗脱部位能抑制小鼠耳肿胀度以及足趾肿胀度,降低IL-1β、TNF-a、PGE2的表达,升高IL-10的表达,但对LTB4的表达未见明显抑制作用;分离得到8个化合物,鉴定了5个化合物的结构,分别为:科罗索酸、槲皮素、芦丁、胡萝卜苷、β-谷甾醇。结论(1)仙鹤草正丁醇提取部位可通过抑制COX和5-LO两条途径发挥抗炎作用。(2)仙鹤草正丁醇提取部位的90%乙醇洗脱部位通过抑制COX途径从而降低致炎因子PGE2、IL-1β、TNF-a的表达、升高抗炎因子IL-10的表达实现抗炎,但对5-LO途径诱导的LTB4未见明显抑制作用。(3)已鉴定的5个化合物中,科罗索酸、槲皮素和芦丁均有文献报道其具备抗炎活性,表明仙鹤草正丁醇提取部位的90%乙醇洗脱部位是由科罗索酸、槲皮素和芦丁等共同发挥抗炎作用。

刺山柑果实醇提物正丁醇部位提取物抗炎镇痛效果分析

【目的】研究刺山柑乙醇提取物正丁醇萃取部位的抗炎镇痛活性。【方法】以总黄酮提取量为指标采用超声波辅助提取法并结合响应面优化乙醇提取物最佳工艺,将乙醇提取物浸膏通过萃取得到正丁醇部位。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性分析正丁醇萃取部位抗炎效果;以热板法和醋酸扭体考察正丁醇萃取部位镇痛效果。【结果】正丁醇部位高剂量组、中剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用(P<0.01);正丁醇部位高剂量组、中剂量组对小鼠毛细血管通透性有明显抑制作用(P<0.01);正丁醇部位高剂量组、中剂量组可显著提高小鼠热板痛阈值,正丁醇部位高剂量组、中剂量组能明显减少醋酸所致小鼠扭体次数(P<0.01)。【结论】刺山柑果实醇提物正丁醇部位提取物具有潜在的抗炎镇痛作用。

正交试验法优选大连翘胶囊提取工艺

目的:优选大连翘胶囊提取工艺条件。方法:采用L9(34)正交试验设计,以浸膏得率、正丁醇萃取部位得率、乙酸乙酯萃取部位得率、连翘苷含量为评价指标筛选最佳提取工艺,采用高效液相色谱法测定连翘苷含量。结果:正交试验所得的最佳提取条件为加水量8倍,提取次数2次,每次2 h。结论:该提取工艺合理、稳定、可行。

不同产地磨盘草正丁醇部位提取物抗炎作用研究

目的探讨磨盘草正丁醇部位提取物抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、棉球致小鼠肉芽肿炎症模型观察磨盘草正丁醇部位提取物对急、慢性炎症的影响。结果各个产地磨盘草正丁醇部位提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有显著抑制作用(P<0.01),对小鼠棉球肉芽肿慢性炎症模型有抑制作用(P<0.05)。结论磨盘草正丁醇部位提取物对急、慢性炎症均有一定的抑制作用。

墨旱莲组分中组织蛋白酶K非活性位点抑制剂研究

组织蛋白酶K(CTSK)是抗骨质疏松药物的关键靶标。CTSK活性位点抑制剂能抑制胶原蛋白降解活性,同时抑制CTSK降解其他蛋白的水解活性,存在较大的不良反应,CTSK非活性位点(exosite)抑制剂具有抑制骨胶原降解活性且不影响活性位点(active site)的生物活性。本研究通过毕赤酵母表达系统表达出重组CTSK,进一步通过N端正丁基琼脂糖凝胶柱和SP-琼脂糖凝胶柱分离,得到高纯度有活性的重组CTSK。利用所得CTSK考察筛选了中药墨旱莲不同提取物及化学成分对CTSK的胶原降解活性和对CTSK与Z-FR-MCA底物结合的抑制作用,明确了墨旱莲的正丁醇部位为理想的潜在非活性位点活性部位,从中提取的墨旱莲皂苷IX为潜在的非活性位点抑制剂。

基于灰色关联分析探索艾纳香非挥发性部位的抗炎活性谱效关系

目的:研究艾纳香非挥发性部位UPLC指纹图谱与抗炎药效之间的相关性,为明确艾纳香抗炎药效物质基础提供实验依据。方法:采用UPLC建立12批艾纳香非挥发性部位的指纹图谱,运用UPLC-Q-TOF-MS对艾纳香非挥发性部位的共有指纹峰进行指认,通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型获取相应的药效数据,通过灰色关联分析建立其谱效关系。结果:UPLC指纹图谱显示艾纳香非挥发性部位有14个共有峰,与抗炎药效的关联度处于0.717 1~0.550 5,各特征峰所代表的化学成分对其抗炎药效贡献的大小顺序为3号峰> 9号峰> 4号峰> 11号峰> 2号峰> 1号峰> 14号峰> 7号峰> 6号峰> 5号峰> 12号峰> 8号峰> 10号峰> 13号峰,并指认了其中9个共有峰,对抗炎药效贡献较大的前2个共有峰(3号和9号)对应的化学成分分别为3-O-咖啡酰基奎宁酸和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。结论:通过谱效关系研究获得了艾纳香非挥发性部位的抗炎药效物质群,其抗炎药效是多种成分共同作用的结果,明确咖啡酰基奎宁酸类化合物为艾纳香非挥发性部位发挥抗炎药效的主要物质基础。

菥蓂正丁醇部位抑制TLR-4/NF-κB信号通路抗脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应作用研究

目的研究菥蓂Thlaspi arvense水提醇沉部位、正丁醇部位的抗炎活性以及正丁醇部位的作用机制。方法将菥蓂水提物经过乙醇、正丁醇萃取后制得菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位。采用MTT法确定水提醇沉部位、正丁醇部位(15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000μg/mL)对RAW264.7细胞的毒性。采用脂多糖(LPS)1μg/mL诱导RAW264.7细胞产生炎性反应,建立体外炎症细胞模型。Griess法检测水提醇沉部位、正丁醇部位(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000μg/mL)对LPS诱导RAW264.7细胞后NO释放量的影响;ELISA法检测水提醇沉部位、正丁醇部位(125、250、500μg/mL)对白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放量的影响;Western Blotting法检测正丁醇部位(125、250、500μg/mL)对环氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)p-P65、Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)蛋白表达的影响。结果菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位质量浓度在1000μg/mL以下时对RAW264.7细胞几乎无毒性作用。与模型组比较,菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位62.5、125、250、500、1000μg/mL组NO释放量显著下降(P<0.01);菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位125、250、500μg/mL组IL-6、TNF-α的分泌量显著降低(P<0.01),且正丁醇部位作用优于水提醇沉部位;菥蓂正丁醇部位500μg/mL组的iNOS和250、500μg/mL组COX-2、IL-1β、NF-κB p-P65、TLR-4、p-IκBα蛋白表达量显著降低(P<0.01),作用均呈浓度相关性。结论菥蓂正丁醇部位显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌以及COX-2、iNOS蛋白的表达,其抗炎作用机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路相关。