紫铆素经EGFR-STAT3信号通路对荷宫颈癌裸鼠肿瘤生长的影响

目的探讨紫铆素对荷宫颈癌裸鼠肿瘤生长与肿瘤组织表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of ranscription 3,STAT3)表达的影响。方法裸鼠左侧腑下接种宫颈癌SiHa细胞的方法构建宫颈癌模型,将成功构建的荷宫颈癌裸鼠随机分为模型组、阳性药组与低、中、高剂量组,每组各12只。低、中、高剂量组裸鼠分别给予11.5 mg/ml、46 mg/ml、115 mg/ml注射剂量的紫铆素注射,阳性药组给予4.3 ml/kg剂量的顺铂注射,模型组给予等量生理盐水;每天1次,连续注射7 d后,观察1周。测定各组裸鼠的抑瘤率及肝脏指数、肾脏指数;HE染色形态学观察肿瘤的病理特点,免疫组化、RT-qPCR检测肿瘤组织中EGFR、STAT3的表达水平。结果抑瘤率分析阳性药组(60.82±7.30%)和高剂量组(49.30±10.42)高于低、中剂量组,肿瘤体积与瘤重低于低、中剂量组和模型组;肾脏指数分析阳性药组(10.25±0.48)和高剂量组(10.13±0.47)低于模型组和低、中剂量组;EGFR蛋白表达阳性药组(0.002±0.002)、高剂量组(0.012±0.008)和STAT3蛋白表达阳性药组(0.063±0.011)、高剂量组(0.099±0.013)显著低于模型组和低、中剂量组;EGFR基因表达阳性药组(0.462±0.092)、高剂量组(0.524±0.115)和STAT3蛋白相对表达量阳性药组(0.435±0.123)、高剂量组(0.593±0.092)显著低于模型组和低、中剂量组;病理特点显示阳性药组、高剂量组肿瘤组织坏死情况较模型组和低、中剂量组明显降低;以上指标,差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫铆素可有效抑制宫颈肿瘤的生长,且无明显毒性作用,其机制可能与宫颈肿瘤组织EGFR、STAT3表达相关。

紫铆素类衍生物的合成及其体外免疫活性的评价

目的以紫铆素为母核合成20个化合物(1～20),并进行体外免疫活性的评价,为临床上寻找新型免疫调节剂提供实验依据。方法以紫铆素为母核,在3'和4'位引入不同基团合成一系列衍生物(1～20),MTT法检测目标化合物对刀豆蛋白(Con A)刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖率的影响,ELISA试剂盒检测化合物对小鼠脾淋巴细胞上清中免疫相关因子IL-4、Ig-G、TNF-α分泌情况的影响。结果化合物1、2、3、4、5、15、16、17、18、19、20可以显著抑制ConA对小鼠脾淋巴细胞的增殖反应,同时化合物3、4可以显著抑制IL-4的分泌,化合物1、3、17可以抑制TNF-α的分泌,4、5和20则可以显著促进IgG的分泌。结论化合物1、3、4、17对小鼠脾淋巴细胞的免疫功能具有抑制作用,这些衍生物有可能成为潜在的免疫抑制剂。

HPLC法同时测定维药驱虫斑鸠菊中4个黄酮类成分含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定维药驱虫斑鸠菊中圣草酚、紫铆查耳酮、紫铆素和异鼠李素含量的方法,为完善驱虫斑鸠菊质量标准提供依据。方法:以圣草酚、紫铆查耳酮、紫铆素和异鼠李素为对照品,采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,0.2%磷酸水溶液为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长310 nm,流速1.0 m L·min-1,柱温25℃,测定驱虫斑鸠菊药材中这4个黄酮类成分的含量。结果:本法中圣草酚、紫铆查耳酮、紫铆素和异鼠李素的进样量分别在13.44~107.52、30.24~241.92、9.60~76.80、6.25~49.97 ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,r分别为0.9998、0.9999、0.9991、0.9997,平均加样回收率(n=9)在99.70%~100.56%,RSD小于2.0%。结论:本法简单、快速、重现性好,可为评价驱虫斑鸠菊药材的质量提供依据。

紫铆素通过AMPK通路促进正常人黑素细胞黑素合成的机制研究

目的探讨紫铆素对正常人黑素细胞PIG1细胞黑素合成功能的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测紫铆素对PIG1细胞活力的影响,LDH释放法检测紫铆素对PIG1细胞的毒性,NaOH裂解法、L-Dopa氧化法检测紫铆素对PIG1细胞黑素含量及酪氨酸酶活力的影响,Western blot法观察对PIG1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路和黑素合成关键蛋白表达的影响,结合AMPK激动剂以深入探讨其在该过程中的作用和分子机制。结果紫铆素能促进PIG1细胞增殖且不引起细胞毒性,还能剂量依赖性的促进黑素合成和酪氨酸酶活性,上调黑素合成关键调控因子MITF及相关蛋白(TRP-1和TRP-2)的表达,阻断AMPK信号通路,AMPK激动剂能抑制紫铆素所诱导的PIG1细胞黑素合成功能增强。结论紫铆素通过抑制AMPK通路上调MITF及其调控的黑素合成相关蛋白表达与黑素细胞的增殖促进PIG1细胞的黑素生成。

1,4-二氯-2-丁炔的合成

1 ,4-二氯 - 2 -丁炔是合成链状脂肪烃类化合物的中间体。将 2 -丁炔 - 1 ,4-二醇和 PCl3 混合于CH2 Cl2 中 ,在吡啶的存在下 ,以六甲基磷酰胺 ( HMPA)为催化剂 ,反应物回流 1 2 h,1 ,4-二氯 - 2 -丁炔的得率可达 72 %。合成物经 IR、1H NMR及元素分析证实。

4-(4-氟苯基)-3-丁炔-1-醇的催化合成

设计合成了一种水溶性好、结构简单、性质稳定、安全无毒的高效含氮钯配合物催化剂[(NH2CH2COOH)2Pd Cl2],以对氟碘苯与3-丁炔-1-醇为起始原料,考察了溶剂、催化剂的用量、温度、时间和碱对Sonogashira偶联反应的影响,确定了最优反应条件,目标化合物分离产率高达96%。

骆驼刺中的紫铆素诱导SiHa细胞凋亡及其作用机制研究

目的分析骆驼刺中分离富集的紫铆素对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法以CCK-8法检测紫铆素对SiHa细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测紫铆素对细胞凋亡水平和细胞周期影响,RT-PCR法检测紫铆素对细胞凋亡相关基因表达的影响,Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果与空白对照组比较,紫铆素可明显诱导SiHa细胞发生凋亡(P<0.01),紫铆素干预SiHa细胞可使克隆形成数量明显减少(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05,P<0.01),线粒体膜电位明显下降(P<0.01),G0/G1期细胞所占的百分比增加(P<0.01),胱天蛋白酶3(Caspase-3)和胱天蛋白酶7(Caspase-7)的基因和蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),同时Caspase-3的底物PARP蛋白被剪切活化(P<0.05),亦明显降低Bcl-2的基因和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论紫铆素对SiHa细胞的增殖具有抑制作用,其抑制作用可能与促进细胞凋亡有关。

驱虫斑鸠菊中紫铆素对人永生化角质形成细胞株HaCaT增殖及细胞分泌因子的影响

目的:研究驱虫斑鸠菊(VW)中紫铆素对人永生化角质形成细胞株HaCaT的增殖及细胞分泌因子的影响,初步探讨VW中紫铆素治疗白癜风的机制。方法:采用MTT法测定0(空白对照)、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL紫铆素作用于HaCaT细胞48 h后的细胞存活率;采用酶联免疫吸附法测定0.5、1.0、5.0 μg/mL紫铆素作用于HaCaT细胞48 h后培养液中细胞分泌因子内皮素1(ET-1)、ET-3、黑素细胞刺激素(MSH)、干细胞因子(SCF)、碱性纤维细胞生长因子(bFGF)的含量。结果:与空白对照比较,0.1~5.0 μg/mL紫铆素作用48 h后细胞存活率均有不同程度升高,而10.0 μg/mL紫铆素作用后细胞存活率降低;0.5、1.0、5.0 μg/mL紫铆素作用48 h后培养液中ET-1、SCF、bFGF含量均显著增加(P<0.01),1.0、5.0 μg/mL紫铆素作用48 h后培养液中ET-3、MSH含量显著增加(P<0.01)。结论:紫铆素可促进HaCaT细胞的增殖,其作用机制可能与促进细胞分泌因子ET-1、ET-3、MSH、SCF、bFGF的分泌有关。

马来酸曲美布汀分散片联合聚乙二醇4000散治疗便秘型肠易激综合征的临床效果

目的探究马来酸曲美布汀分散片联合聚乙二醇4000散治疗便秘型肠易激综合征(irritable bowel syndrome-constipation,IBS-C)临床疗效.方法选取2015-09/2016-09浙江中医药大学附属第三医院收治的96例IBS-C患者,采取随机数表法将患者分成对照组和实验组;对照组患者采用马来酸曲美布汀分散片进行治疗,实验组患者采用马来酸曲美布汀分散片联合聚乙二醇4000散进行治疗;治疗4 wk后,比较两组患者的疗效、不良反应以及复发率.结果实验组患者的总有效率高于对照组(93.75%vs 79.17%,P<0.05);实验组和对照组不良反应的总发生率比较,差异不具有统计学意义(8.33%vs 10.42%,P>0.05);实验组复发2例,对照组复发8例,实验组复发率低于对照组(4.17%vs 16.7%,P=0.032,χ~2=5.457).结论马来酸曲美布汀分散片联合聚乙二醇4000散治疗IBS-C能够显著改善患者单项临床症状,临床疗效显著,安全性较高,复发率较低,值得临床推广.

美长安联合曲美布汀或和赛乐特治疗腹泻型肠易激综合征对照研究

目的:研究美长安联合曲美布汀或和赛乐特治疗腹泻型肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)的随机对照性情况,为临床治疗腹泻型IBS选择合适方案。方法:选择2010年1月至2013年12月接受治疗的腹泻型IBS患者191例作为研究对象。根据随机数字法对患者进行分组,其中A组(美长安)46例,B组(美长安+曲美布汀)51例,C组(美长安+赛乐特)45例,D组(美长安+曲美布汀+赛乐特)49例。分别对各组进行药物治疗,3周后对比各组整体疗效情况以及治疗前后单项症状情况。结果:B组、C组和D组的总有效率均显著高于A组,D组的总有效率显著高于B组和C组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后B组、C组和D组的排便次数、大便性状以及腹痛情况症状分值均显著低于A组;同时,D组的排便次数、大便性状以及腹痛情况症状分值显著低于B组和C组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:采用美长安联合曲美布汀及赛乐特治疗中重度的IBS患者可获得较好疗效,对于症状轻微者则可尝试美长安二联疗法,值得重视。

HPLC法测定驱虫斑鸠菊中紫铆素的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定驱虫斑鸠菊中紫铆素含量的方法。方法:色谱柱为HypersilODS(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液(40∶60),检测波长为280nm。结果:紫铆素进样量在0.01～0.5mg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999);平均回收率为93.6%,RSD=2.89%(n=9)。结论:本法简单、准确,可用于驱虫斑鸠菊的质量控制。

马来酸曲美布汀联合香砂平胃颗粒治疗功能性消化不良的效果及对胃肠激素的影响

目的 探讨马来酸曲美布汀联合香砂平胃颗粒治疗功能性消化不良的临床效果以及对胃肠激素的影响.方法 120例功能性消化不良患者应用随机数字表分为对照组和观察组,每组60例.对照组给予马来酸曲美布汀口服,0.2 g,3次/d;观察组在对照组的基础上加用香砂平胃颗粒口服,10 g,2次/d.两组均4周为1个疗程.比较两组患者的临床疗效以及对胃肠激素水平的影响.结果 两组患者治疗后症状积分均显著下降,观察组餐后饱胀,早饱,上腹痛积分显著低于对照组t值分别为34.36、27.62、33.87,P〈0.05）.观察组总有效率90.00%（54/60）显著高于对照组73.33%（44/60）,差异有统计学意义（χ2=5.57,P〈0.05）.两组患者治疗后胃动素（MOT）和促胃激素（GAS）水平均显著升高,观察组MOT和GAS水平均显著高于对照组MOT：（355.2±78.1） ng/L与（288.7±82.4） ng/L;GAS：（96.5±17.6） ng/L与（88.4±16.0） ng/L,t值分别为4.54、2.64,P〈0.05;两组患者治疗后生长抑素（SS）水平均显著下降,观察组SS水平显著低于对照组（41.1±11.1） ng/L与（48.9±12.9） ng/L,t=3.55,P〈0.05.结论 马来酸曲美布汀联合香砂平胃颗粒可明显改善功能性消化不良患者的临床症状和胃肠激素水平.

紫铆素人工抗原的合成与鉴定

目的人工合成紫铆素(butin)的完全抗原并进行鉴定。方法采用氯乙酸钠(SMCA)与紫铆素中的羟基反应形成羧甲基醚衍生物(紫铆素-SMCA),再通过羧基与载体蛋白(BSA、OVA)偶联形成完全抗原,以TLC法鉴别是否偶联产生新的大分子化合物,并以紫外扫描分析完全抗原的偶联比率,将得到的免疫原紫铆素-BSA按免疫程序免疫Balb/c小鼠。结果 TLC显示已经形成新的大分子化合物;紫外扫描法测定紫铆素-BSA的偶联比为6∶1,紫铆素-OVA的偶联比为5∶1。采用间接酶联免疫测定,产生的抗血清的稀释度可以达到1∶4 000。结论经过TLC法、紫外扫描法和免疫方法鉴定,成功合成了紫铆素人工抗原。

紫铆素通过免疫抑制功能改善莫诺苯宗诱导白癜风小鼠毛发脱色的研究

目的探讨紫铆素通过免疫抑制功能对莫诺苯宗诱导白癜风小鼠毛发脱色的改善作用。方法 40%莫诺苯宗乳膏诱导小鼠脱色构建白癜风模型,48只C57BL/6小鼠按体质量随机分对照组、模型组、他克莫司组和紫铆素组,每组12只。模型组涂抹40%莫诺苯宗乳膏50 mg,1次/d,他克莫司组在模型组的基础上7 h后涂抹0.1%他克莫司乳膏30 mg,1次/d;紫铆素组在模型组的基础上7 h后0.1%紫铆素乳膏10 mg,1次/d,连续用药50 d。观察并记录小鼠的毛发脱色情况;分离小鼠脾脏淋巴细胞,CFSE法检测T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖情况;采用ELISA法检测各组小鼠血清中IgM、IgA和IgG水平;3H-TdR标记法检测IL-2分泌活性;流式细胞仪检测表面抗原CD19活性。结果与模型组比较,紫铆素能显著改善白癜风小鼠毛发脱色现象,显著降低脱色发生率、显著减小脱色面积,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,紫铆素能显著抑制淋巴细胞增殖活性,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,紫铆素能显著降低小鼠血清中IgM、IgG、IgA水平(P<0.05),上调IL-2分泌活性和增强表面抗原CD19活性(P<0.05)。结论紫铆素可以改善白癜风小鼠毛发脱色的现象,其作用机制可能是通过抑制小鼠自身免疫反应。

两色金鸡菊黄酮类化学成分研究

目的研究两色金鸡菊Coreopsis tinctoria头状花序的水提取物化学成分。方法采用常规硅胶、反相ODS及半制备高效液相色谱等进行分离制备,利用各种谱学技术鉴定化合物结构。结果从两色金鸡菊头状花序的水提物中分离得到13个化合物。依据其波谱数据和理化性质,分别鉴定为8,3′,4′-trihydroxyflavone-7-O-β-D-glucopyranoside(1)、6-hydroxyluteolin-7-O-β-D-glucoside(2)、山柰酚(3)、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(4)、(2S)-3′,4′,5,8-tetrahydroxyflavanone-7-O-β-D-glucoside(5)、(2S)-eriodictyol-5-O-β-D-glucoside(6)、紫铆黄素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、plathymenin(8)、(Z)-6-O-β-Dglucopyranosyl-6,3′,4′-trihydroxyaurone(9)、5,6,3′,4′-tetrahydroxyaurone(10)、6,3′,4′-trihydroxyaurone(11)、奥卡宁-5′-O-β-D-葡萄糖苷(12)和4′-O-β-D-glucopyranosyl-3,4,2′,4′,5′-pentahydroxychalcon(13)。结论 13个化合物均为首次从该植物中分离得到。

驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素的分离及其对人A375黑素瘤细胞黑素合成作用的影响

目的分离纯化驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素,初步探讨这两种化合物对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成作用的影响。方法采用硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析分离纯化紫铆素、紫铆花素;分别采用MTT法、酶学法及NaOH法测定这两种化合物对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果分离得到化合物紫铆素、紫铆花素,在0.50~10.00μg·mL-1内紫铆素、紫铆花素促进A375细胞增殖,且紫铆花素促增殖作用强于紫铆素(P<0.05);在0.10~1.00μg·mL-1内两种化合物均上调酪氨酸酶活性;在0.50~5.00μg·mL-1内,紫铆花素促进黑素合成,紫铆素抑制黑素合成。结论紫铆素、紫铆花素可能是驱虫斑鸠菊的药效成分;紫铆花素促进A375细胞的增殖,且使A375细胞黑素合成增加,紫铆素轻度抑制黑素合成。