BW.03等位基因的鉴定及序列分析——附1例报告

目的对1例Bw血型的血清学及分子生物学特性进行分析。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)和ABO等位基因第6、7外显子PCR产物直接测序方法进行ABO亚型基因分型。结果先证者红细胞未检测到B抗原,但血清中含有抗-A。PCR-SSP结果显示标本基因型为B/O2。直接测序分析发现c.297A>G、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.721C>T、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A 8个突变,可推断为BW.03/O.02.01基因型。该序列与B.01基因序列比对仅在721位发生C>T的突变导致多肽链R241S替换。结论B等位基因c.721C>T突变产生BW.03等位基因,导致B抗原表达减弱。

1例AB_w表型的血清学和基因型检测

目的鉴定对1例ABO疑难血型标本的表型和基因型。方法 1例ABO疑难血型标本用血清学方法做ABO表型检测,用PCR-SSP法做ABO基因鉴定,用直接测序法和克隆测序法对ABO基因的第6、7外显子做序列分析。结果血清学定型:ABw表型;PCR-SSP法鉴定:AB型;直接测序:A101/B101等位基因杂合,但伴有nt1055的G/A突变;克隆测序:G1055A突变发生在B101等位基因上,该突变产生Bw07等位基因。结论在中国人群中发现A101/Bw07基因型。

ABO基因278C〉T突变导致Bwl2一例

目的对1例ABO疑难血型样本进行血清型和基因型鉴定。方法用血清学方法对标本进行ABO血清型检测，根据血清型结果，选取AB0基因亚型检测试剂盒，用聚合酶链反应-序列特异性引物法进行基因亚型鉴定，用直接测序法对ABO基因的第6、7外显子进行序列测定。结果血清学结果显示，该样本的红细胞上具有高凝集强度的A抗原和中等凝集强度的B抗原，样本血浆中含有弱凝集强度的抗-B抗体，初步判定为ABw型；B亚型基因分型试剂的结果显示，该样本ABO基因为ABw12型；直接测序结果显示，该标本ABo基因第6外显子序列为278CT、297GA，第7外显子序列为467CT、526CG、657CT、703GA、796CA、803GC、930GA杂合，即在基因型A102／B101的基础上，该序列nt278位发生了C〉T杂合突变，经与血型抗原基因变异资料库的数据比对，确定突变的等位基因为Bw12，基因型为A102／Bwl2。结论中国人群中发现A102／Bw12基因型。

两例ABO变异型Bw亚型的分子遗传学分析

目的研究ABO变异型Bw亚型的分子生物学特性。方法通过标准血型血清学方法鉴定2例Bw亚型，采用聚合酶链反应一序列特异性（polymerasechainreactioIsequencespecificprimer，PCR-SsP）技术进行ABO基因分型，特异性扩增B基因第6～7外显子，PCR产物纯化后直接测序分析。结果血清学鉴定2例Bw亚型，PCR-SSP结果显示样本基因型为B／（）2。B基因直接测序结果发现1例与B101序列比对第7外显子存在721C〉T突变，导致多肽链R241S替换；另1例与B101比对第6外显子存在278C〉T突变，导致多肽链P93L替换。结论发现Bw03、Bw12亚型各1例，其表达B抗原的强弱存在差异。

三例罕见ABO变异型Bw亚型的基因鉴定及序列分析

目的对3例ABO变异型Bw亚型进行基因鉴定及序列分析。方法采用常规血清学检测ABO血型,并应用Sanger测序进行ABO基因鉴定。结果3例ABO血型鉴定均符合Bw亚型,基因分型分别为ABO*Bw.11/0.01.02、ABO*Bw.12/0.01.01、ABO*Bw.34/A1.02,测序发现分别存在c.695T>C变异致多肽链Leu232Pro替换,c.278C>T变异致多肽链Pro93Leu替换,c.889G>A变异致多肽链Glu297Lys替换。结论本研究分别发现了Bw11、Bw12、Bw34亚型各一例。基因检测可作为血清学结果的补充确定ABO血型的亚型。

ABO*BW.03等位基因的鉴定及特性研究

目的探讨1例ABO正反定型不符,B抗原表达减弱样本的血清学及分子生物学特性。方法使用常规血型血清学方法鉴定样本的ABO血型表型;PCR方法扩增ABO基因7个外显子及其侧翼内含子,对扩增产物进行直接测序和克隆测序进行分析。结果血清学定型:AB_(弱)表型;直接测序:ABO*A1.02/B.01杂合,伴c.721C/T突变;克隆测序:c.467C>T、c.297A>G、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.721C>T、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A 9个突变,判定为ABO*A1.02/BW.03基因型。该例ABO正反定型不符样本是由ABO*B_(W).03等位基因导致的。结论ABO*B.01等位基因上c.721C>T的突变可以产生ABO*BW.03等位基因,从而导致红细胞上B抗原的表达减弱。ABO亚型的鉴定分析要慎重,必要时应用血型基因分型技术辅助定型,保障输血安全。

一个B抗原减弱表型核心家系的分子遗传学分析

目的分析1例B抗原减弱表型核心家系的血清学和分子生物学特征。方法应用血型血清学方法进行血型鉴定;采用序列特异性引物聚合酶链反应进行ABO基因分型,之后对ABO基因第6、7外显子核苷酸序列进行测序分析。结果血清学鉴定先证者和其父亲均为B亚型(Bw),母亲是O型;ABO基因分型显示先证者和其父亲均为Bw12/O型,先证者母亲为O01/O01型;ABO基因第6、7外显子测序分析也发现先证者和其父亲的基因型为Bw12/O01型。与B101/O01基因序列比对,Bw12仅在278位发生了C>T的突变。结论ABO基因第278位碱基C>T突变为Bw亚型的分子基础,该突变可以稳定遗传并显性表达。

1例B亚型的血型鉴定及其输血策略探究

目的:研究1例正反定型不对照的B亚型患者的血清学和分子生物学特征。方法:取患者的静脉血进行正反定型、吸收放散实验、不规则抗体筛查及唾液物质检测等一系列血清学检验,并通过PCR-SSP方法基因分型,最终经DNA测序第6和第7外显子明确亚型种类。结果:血清学检测提示为弱B亚型,PCR-SSP分型为BO1,DNA测序显示与B101序列相比发生nt695位T/C点突变,232位亮氨酸突变为脯氨酸(L232P),国际命名为Bw11亚型。据此结果指导临床用血。结论:检测到1例Bw11亚型,加强围术期血液管理,减少血液丢失及异体血输入,为临床安全用血提供相应的经验参考。

ABO亚型分析及基因测序研究方法的建立

目的:建立一种ABO血型基因的测序检测方法,对ABO血型的基因突变位点进行分析,并对ABO亚型进行准确分型。方法:采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,选取特异性引物对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行扩增,并用PCR直接测序方法对该序列进行分析,在此基础之上,用该方法对经血清学鉴定为亚型的样本进行检测。结果:建立的PCR产物直接测序方法,能够准确的对ABO基因的第6、7外显子序列进行分析,并通过此方法鉴定了1例B亚型,其基因型为B/O杂合,其中α-1,3半乳糖基转移酶基因在第7外显子上发生第721位C>T突变,导致了多肽链Arg241Trp的替换。结论:建立了一种ABO血型基因产物的PCR直接测序方法,并对ABO亚型进行了分析,为以后血型鉴定及其亚型分子机制的研究奠定了基础。