血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体3、小窝蛋白-1、胱抑素C水平联合检测对高血压脑出血患者疾病转归的预测价值

目的观察高血压脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、小窝蛋白-1(caveolin-1)、胱抑素C(cystatin C,Cys C)水平,并探究其对疾病转归的预测价值。方法回顾性选取接受微创穿刺血肿引流术治疗的184例HICH患者作为研究组,另选取同期健康志愿者62例作为对照组。比较两组血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平。依据术后90 d疾病转归情况将研究组患者分为转归不良亚组89例,转归良好亚组95例;比较其术前、术后7d血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平。多因素Logistic回归分析疾病转归的影响因素。评价术后7d血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平对术后90d疾病转归的预测价值。结果研究组血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平高于对照组(P<0.05)。转归不良亚组术后7d血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平高于转归良好亚组(P<0.05)。血肿体积、血肿破入脑室及血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平为转归不良的危险因素(P<0.05)。术后7d血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C联合预测术后90d疾病转归不良的AUC大于单项指标预测(P<0.05)。结论HICH患者血清NLRP3、Caveolin-1、Cys C水平升高,其对疾病转归具有一定预测价值,联合检测其水平可提高预测效能。

B型肉毒毒素受体结合区C片段在大肠杆菌中的表达及免疫原性研究

目的:在大肠杆菌中表达、纯化B型肉毒毒素受体结合区C片段(BHc-C),研究其免疫原性。方法:将BHc-C基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达GST-BHc-C融合蛋白并通过亲和纯化;以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备免疫血清,采用ELISA检测免疫血清的效价并测定其抗B型肉毒毒素中和活性。结果:在大肠杆菌中表达了GST-BHc-C融合蛋白;以该融合蛋白免疫小鼠获得高效价免疫血清,且该免疫血清具有中和活性。结论:获得了GST-BHc-C融合蛋白,并证实其具有免疫原性。

线粒体细胞色素c释放抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤炎症反应的作用

目的:探讨线粒体细胞色素c抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注后脑损伤的作用,分析线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)和炎症反应在其中的机制。方法:通过四血管阻断法模拟大鼠全脑缺血再灌注损伤(I/R)模型,雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、I/R组、ALDH2激动剂Alda-1+I/R组、Bax介导的线粒体细胞色素c释放抑制剂(Bcb)+I/R组。HE染色观察海马CA1区细胞形态学的变化;免疫组织化学观察海马CA1区ALDH2及炎症小体关键蛋白NLRP3表达水平,Western blotting检测海马CA1区4-HNE、NLRP3、IL-1β、IL-18及ALDH2的蛋白水平变化。结果:与Sham组比较,I/R组再灌注7 d后,I/R组海马CA1区细胞存活率明显下降;与I/R组比较,Alda-1+I/R组、Bcb+I/R组的海马CA1区神经元存活率增高(P<0.01)。与I/R组相比,Bcb+I/R组、Alda-1+I/R组海马CA1区ALDH2蛋白表达增加,海马CA1区NLRP3、IL-1β、IL-18、4-HNE蛋白表达下降(P<0.01)。结论:大鼠全脑缺血再灌注损伤模型中,海马CA1区NLRP3表达增高;Bcb可以通过促进线粒体ALDH2的表达、降低炎症反应发挥保护作用。

模式识别受体基因多态性与输卵管沙眼衣原体感染

沙眼衣原体(CT)是最常见的性传播疾病的病原体之一。患者感染后常因无症状而未能及时接受治疗。持续性CT感染可引起输卵管损害,导致输卵管性不孕等严重后果。清除病原体的关键在于机体正常的免疫应答。Toll样受体(TLR)家族和核苷酸结合的寡聚结构域(NOD)家族是固有免疫系统的关键模式识别受体(PRRs),在CT感染识别和启动免疫应答中发挥重要作用。近年较多证据关注到CT感染后输卵管性不孕的遗传学特征,并发现部分PPRs、人类白细胞抗原和细胞因子的基因多态性与CT易感性和输卵管感染后结局相关。

模式识别受体与慢性牙周炎的研究进展

模式识别受体(PRR)是一类主要表达于先天免疫细胞表面,是病原微生物的感应器,可识别病原体相关的分子模式(PAMPs)或损伤相关的分子模式(DAMPs)。固有免疫系统通过利用模式识别受体识别牙周组织中的病原微生物,并及时向下游通路传导信号,从而引发免疫反应,然后将其清除。PRR具有多个家族成员,包括Toll样受体家族(TLRs),C型凝集素受体家族(CLRs),视黄酸诱导基因I(RIG‑I)样受体家族(RLRs)和核苷酸结合寡聚域(NOD)样受体家族(NLRs)。其中RLRs是从RNA病毒中识别dsRNA的细胞质受体,与慢性牙周炎的关联较少。因此,本文就模式受体(TLRs、CLRs、NLRs)的分类、结构以及信号传导通路在慢性牙周炎中的作用作一综述,以期丰富牙周炎发病发生机制,为治疗和预防慢性牙周炎提供新的思路。

新型冠状病毒受体结合域-Fc融合蛋白表达及小鼠免疫原性

目的表达制备新型冠状病毒刺突蛋白的受体结合域(receptor binding domain, RBD)-Fc融合蛋白, 并评价其在小鼠模型中的免疫原性。方法将新型冠状病毒RBD与小鼠免疫球蛋白Fc段融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中表达并制备融合蛋白。将不同剂量的RBD-Fc融合蛋白分别单独或辅以氢氧化铝佐剂免疫小鼠, 通过ELISA、假病毒中和试验、酶联免疫斑点试验检测诱导产生的体液和细胞免疫应答。结果 10 μg RBD-Fc融合蛋白辅以氢氧化铝佐剂能有效诱导小鼠产生良好的RBD特异性IgG抗体应答, 该抗体可阻断病毒RBD与细胞表面病毒受体的结合, 进一步研究表明该重组蛋白还诱导产生了针对原始毒株、Beta变异株和Delta变异株假病毒的中和抗体, 中和抗体滴度分别为1 566、336和270。结论制备的RBD-Fc融合蛋白具有较好的免疫原性, 可为开发COVID-19重组蛋白疫苗提供参考。

记忆T细胞在哮喘小鼠不同时间的表达量

目的研究哮喘模型小鼠肺脏和脾脏组织中记忆T细胞(Tm)不同时期的表达规律以及可能作用机制。方法将84只小鼠随机分为对照组和模型组,每组42只。模型组予以腹腔注射和雾化吸入卵清白蛋白,对照组则予以等量磷酸缓冲盐溶液。于激发前1日开始,每隔2 d处死2只小鼠,直至激发后20 d。收集小鼠脾脏和肺脏,用流式细胞术检测脾脏和肺脏中Tm的水平,实时定量聚合酶链式反应检测T盒子转录因子(T-bet)、维甲酸相关孤儿受体γ亚型(RORγt)mRNA的水平。结果激发后第7天肺脏中CD4^+Tm-(辅助T细胞)Th比例达到最大值为(46.20±2.18)%,第9天脾脏中CD4^+Tm-Th比例为(38.35±1.60)%;第3天肺脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(42.29±0.97)%,第7天脾脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(31.26±1.04)%。对照组和模型组肺组织中T-bet mRNA的表达量分别为1.00±0.01,0.73±0.07;RORγt mRNA表达量分别为1.02±0.01,2.65±0.33,模型组与对照组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 CD4^+Tm可能参与哮喘小鼠气道的持续炎症反应,CD8^+Tm可能表达于哮喘的急性发作时期,其作用机制可能与Th17、Th1细胞的分化有关。

人冠状病毒跨种传播的研究进展

冠状病毒(Coronavirus,CoV)是一类古老的、广泛存在的、对人类和其他动物健康构成严重威胁的传染病病原体。目前已鉴定能感染人的冠状病毒(human CoV,HCoV)共有7种。已证实:这些可感染人的冠状病毒均为动物源性的人畜共患病原体,通过跨越种间屏障,从自然宿主以直接或间接的方式"跳跃"到人群,并进一步造成人际间的传播和流行。冠状病毒刺突蛋白(Spike,S)S1亚基上的受体结合区(receptor binding domain,RBD)是决定冠状病毒跨种传播、侵入宿主的关键因素之一。本文就近年来7种HCoVs传播路径以及介导跨种传播的RBD结构研究进展进行总结和分析,以期获得对冠状病毒跨种传播机制的认识,为我们应对潜在的新型冠状病毒跨种传播事件,提供有效的防控和治疗策略。

核苷酸结合寡聚化结构域2—受体相互作用蛋白2—核因子-κB信号通路在肺曲霉病中的表达情况及意义

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)—受体相互作用蛋白2(RIP2)—核因子-κB(NF-κB)信号通路在肺曲霉病患者肺泡灌洗液中的表达水平及其作用机制。方法选取2016年1月至2018年12月福建省老年医院呼吸与危重症医学科收治的62例肺曲霉病患者,男34例,女28例,年龄(53.58±12.34)岁,年龄范围为41~68岁,根据2008年美国感染病学会曲霉病诊治临床实践指南的分级诊断标准中的组织病理、微生物结果、临床症状等资料,将患者分为侵袭性肺曲霉病(IPA)组(n=28)和非侵袭性肺曲霉病(NIPA)组(n=34),并选取20例健康志愿者为健康组,男12例,女8例,年龄(50.23±6.59)岁,年龄范围为43~62岁。采用荧光定量——聚合酶链式反应(PCR)法检测NOD2 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法检测NOD2、RIP2、NF-κB蛋白表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺泡灌洗液上清液超敏C反应蛋白(hs-CRP)与白细胞介素6(IL-6)表达水平,并探讨其相关性。结果IPA组NOD2 mRNA(7.46±1.86)、RIP2 mRNA(11.21±4.01)、NF-κB mRNA(58.80±14.23)和NIPA组NOD2 mRNA(3.38±0.97)、RIP2 mRNA(7.87±0.94)、NF-κB mRNA(39.10±9.84)的表达水平均高于健康组[(1.28±0.42)、(1.43±0.23)、(12.10±4.36)];IPA组NOD2(2.04±0.42)、RIP2(1.54±0.34)、NF-κB(1.33±0.31)和NIPA组NOD2(1.76±0.36)、RIP2(1.15±0.29)、NF-κB(1.03±0.31)蛋白的表达水平均高于健康组[(0.75±0.21)、(0.63±0.18)、(0.51±0.12)];IPA组IL-6[(23.72±6.54)μg/L]、hs-CRP[(17.38±4.42)mg/L]和NIPA组IL-6[(18.62±5.35)μg/L]、hs-CRP[(9.64±3.01)mg/L]均高于健康组[(5.02±1.64)μg/L、(3.63±1.61)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,NOD2 mRNA与NF-κB mRNA呈正相关(r=0.483);RIP2 mRNA与NOD2 mRNA呈正相关(r=0.655);hs-CRP与NOD2 mRNA呈正相关(r=0.572);NOD2 mRNA与IL-6呈正相关(r=0.347),差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺曲霉病患者支气管灌洗液中NOD2、RIP2、NF-κB mRNA和蛋白表达均升高,与hs-CRP、IL-6炎症指标呈正相关性,NOD2可能通过RIP2依赖的NF-κB信号通路介导肺曲霉病患者致炎过程。