三氧化二砷和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞C/EBPεmRNA的表达

背景与目的:研究三氧化二砷+全反式维甲酸(As2O3+tRA)和As2O3对NB4细胞凋亡和分化的影响,NB4细胞CD11b、Annexin Ⅴ和C/EBP ε、PML-RAR α基因mRNA表达和相互调变关系。材料与方法:取106个NB4细胞,每孔中加入As2O3并同时在另外孔加入As2O3+tRA,分别在0、4、8、12、16、20、24、48、72 h时取出细胞,用流式细胞术检测细胞分化指标CD11b和凋亡指标Annexin Ⅴ,半定量RT-PCR检测C/EBPε和PML-RAR α基因的表达。结果:72 h内As2O3和As2O3+tRA均能诱导NB4细胞C/EBPε表达增强4倍,从而进一步诱导CD11b的表达。As2O3+tRA CD11b的表达增高更加明显,As2O3和As2O3+tRA两组药物均有显著的降解PML-RARα基因的作用,As2O3+tRA组PML-RAR α融合基因降解更为明显,凋亡发生在早期,在4-20 h之内Annexin Ⅴ表达较高,24 h后随时间的延长阳性率下降。结论:As2O3+tRA、As2O3均能诱导CD11b、C/EBPε表达增强,可使PML-RAR α融合基因降解,诱导NB4细胞凋亡。在一定剂量下As2O3+tRA具有协同作用,诱导NB4细胞分化和凋亡的能力比As2O3单独用药组更强。

C／EBP—a与细胞生物钟之间的相互调节作用

目的探讨CCAAT／增强子结合蛋白（C／EBPs）与生物钟基因表达之间的关系。方法构建C／EBP．a240，280，650，1300和Reverb—a启动子一荧光素酶报告基因表达载体，并建立相应报告基因稳定转染细胞株。通过检测生物荧光观察相应报告基因表达强度及节律。结果CLOCK／BMALl二聚体可通过E—box元件激活C／EBP．a；C／EBP-a呈现E—box依赖的节律性表达；C／EBP—a过表达可抑制Reverb—a转录；地塞米松（Dex）可抑制C／EBP—a转录。结论C／EBP—a作为一个关键转录因子与细胞内的定时机制存在相互的反馈调节。

大脑中动脉内促红细胞生成素或联合tPA注射对大鼠脑缺血再灌注的作用及机制

目的探讨大脑中动脉内低剂量促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)或联合组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,t PA)注射是否有神经保护作用及对内质网应激通路的影响。方法将60只成年雄性Sprague-Dawley大鼠采用数字表法随机分为5组,假手术(sham)组、大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型对照组、EPO组、t PA组及EPO联合t PA组,线栓法制备右侧大脑中动脉缺血2 h/再灌注24 h模型,在缺血2 h/再灌注即刻通过大脑中动脉单独注射EPO(800IU/kg)、t PA(10 mg/kg)以及联合注射EPO(800 IU/kg)及t PA(10 mg/kg)。再灌注24 h后评价神经功能缺损,测定梗死体积,检测C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)及磷酸化的真核起始因子(phosphorylated form of eukaryotic initiation factor2α,p-e IF2α)的表达。结果与MCAO模型组相比,EPO、t PA+EPO可以显著减小大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后的梗死体积,改善神经功能,并显著降低微血管和脑组织中p-e IF2α和CHOP的表达,但单独给予t PA没有作用;与t PA组相比,t PA+EPO可以显著减小梗死体积、改善神经功能,并显著降低微血管和脑组织中p-e IF2α和CHOP的表达。免疫荧光显示,CHOP与末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)有共定位。结论在再灌注即刻通过大脑中动脉内注射低剂量EPO或者低剂量EPO联合t PA可以减轻脑I/R损伤,可能与EPO抑制内质网应激,从而减少神经细胞凋亡有关。