SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达较脂多糖组显著上调。④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预。

骨髓间充质干细胞来源的外泌体抑制地塞米松诱导的C2C12肌管萎缩

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的外泌体(exsomes,EXOs)对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的C2C12肌管萎缩的影响。方法(1)分离提取培养C57BL/6J小鼠BMSCs。(2)提取并鉴定BMSCs-EXOs。(3)C2C12细胞成肌分化。(4)将肌管细胞分为对照组(Control,2%马血清培养基培养48 h)、地塞米松组(DEX、浓度为10μmol·L^(-1)的DEX干预肌管48 h)、外泌体组(EXOs、外泌体干预肌管48 h)、外泌体抑制剂组(GW4869、10μmol的GW4869干预BMSCs后提取的外泌体干预肌管48 h)。48 h后测量各组肌管直径,CCK-8法检测各组细胞活力,Western blot检测各组肌肉萎缩及成肌分化相关蛋白的表达量。结果BMSCs呈长梭形,BMSCs-EXOs在透射电镜下为圆形的双层膜结构,直径约200 nm,且高表达CD9、CD63和CD81。相比于Control组,DEX组细胞活性降低(P<0.01),肌管细胞直径减少(P<0.01),atrogin-1(P<0.05)和MuRF-1(P<0.01)的表达明显上调,MYOD(P<0.01)蛋白表达降低;相比于DEX组,BMSCs-EXOs组细胞活性升高(P<0.01),肌管细胞直径增加(P<0.01),atrogin-1(P<0.05)和MuRF-1(P<0.01)的表达明显下调,MYOD(P<0.01)蛋白表达升高;相比于BMSCs-EXOs组,BMSCs-EXOs(GW4869)组细胞活性降低(P<0.05),肌管细胞直径减少(P<0.01),atrogin-1(P<0.05)和MuRF-1(P<0.05)的表达上调,MYOD(P<0.01)蛋白表达降低。结论骨髓间充质干细胞来源的外泌体(BMSCs-EXOs)可抑制地塞米松诱导的C2C12肌管萎缩。

c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织中c-Myc、细胞周期蛋白依赖性激酶12(CDK12)表达及其与患者临床特征及预后的关系。方法 收集80例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检测标本中的c-Myc、CDK12表达水平。比较胃癌组织和癌旁组织中c-Myc、CDK12阳性表达情况;分析胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与患者临床病理特征的关系;分析c-Myc与CDK12阳性表达的相关性,胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率(77.5%、87.5%)均明显高于癌旁组织(13.8%、15.0%)(P<0.05)。不同年龄、性别、肿瘤最大直径患者胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);中低分化、Ⅲ~Ⅳ期、侵犯浆膜、有淋巴结转移患者胃癌组织中c-Myc和CDK12阳性表达率分别为88.0%、87.0%、88.9%、90.0%和94.0%、92.6%、97.2%、100.0%,均明显高于高分化、Ⅰ~Ⅱ期、未侵犯浆膜、无淋巴结转移患者胃癌组织的60.0%、57.7%、68.2%、70.0%和76.7%、76.9%、79.5%、80.0%(P<0.05)。相关分析发现,c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达呈正相关性(r=0.487,P=0.016<0.05)。胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性患者的3年生存率分别为19.4%、21.4%,均明显低于c-Myc、CDK12阴性患者的55.6%、70.0%(P<0.05)。结论 c-Myc、CDK12在胃癌组织中异常高表达,两者呈正相关性,并与肿瘤的TNM分期、分化程度、肿瘤侵袭深度及淋巴结转移有关,对患者的预后有明显影响,通过检测两者水平可能评估胃癌患者的预后。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

妊娠期糖尿病患者血清Xenin-25、CTRP12水平及对妊娠结局的影响

目的分析妊娠期糖尿病(GDM)患者血清神经降压素相关肽(Xenin-25)、C1q肿瘤坏死因子相关蛋白12(CTRP12)与妊娠结局的关系。方法选取2021年2月—2022年2月川北医学院附属医院生殖医学科诊治的GDM患者92例为GDM组,再根据是否发生不良妊娠结局,分为预后不良亚组(n=34)和预后良好亚组(n=58)。以同期健康妊娠妇女50例为正常妊娠组。采用酶联免疫吸附法检测血清Xenin-25、CTRP12水平;Pearson相关性分析血清Xenin-25、CTRP12与糖代谢指标的相关性;多因素Logistic回归分析影响GDM患者不良妊娠结局的因素;受试者工作特征曲线评价血清Xenin-25、CTRP12对妊娠结局的预测价值。结果GDM组血清Xenin-25、CTRP12低于正常妊娠组,而空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA_(1c))、空腹胰岛素(FINS)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平均高于正常妊娠组(t/P=16.046/<0.001,22.114/<0.001,11.510/<0.001,13.666/<0.001,12.101/<0.001,14.413/<0.001);GDM组血清Xenin-25、CTRP12表达与FPG、FINS、HbA_(1c)及HOMA-IR呈显著负相关(Xenin-25:r/P=-0.665/<0.001,-0.598/<0.001,-0.567/<0.001,-0.702/<0.001;CTRP12:r/P=-0.579/<0.001,-0.622/<0.001,-0.667/<0.001,-0.725/<0.001);预后不良亚组血清Xenin-25、CTRP12低于预后良好亚组,HOMA-IR高于预后良好亚组(t/P=6.783/<0.001,17.997/<0.001,15.146/<0.001);血清CTRP12升高、Xenin-25升高是影响GDM患者不良妊娠结局的独立保护因素[OR(95%CI)=0.646(0.499~0.837),0.619(0.465~0.824)],HOMA-IR升高是危险因素[OR(95%CI)=1.353(1.110~1.649)]。血清Xenin-25、CTRP12及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的AUC分别为0.828、0.815、0.870,二者联合优于各自单独预测效能(Z=4.113、4.327,P=0.003、0.001)。结论GDM孕妇血清Xenin-25、CTRP12水平降低,均参与GDM的疾病过程,二者联合对GDM患者不良妊娠结局具有较高的评估价值。

小麦肽对小鼠成肌细胞C2C12凋亡的影响及机制研究

目的:采用小鼠成肌细胞C2C12探究小麦肽对其增殖和凋亡的影响,并探明可能的作用机制。方法:CCK-8法检测小麦肽组C2C12和对照组C2C12的增殖和凋亡指数,采用高通量转录组测序进行差异表达分析,通过STRING分析构建差异基因的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,经Cytoscape可视化,探究C2C12中受小麦肽影响的潜在靶标基因及其功能。结果:5mg/mL小麦肽组抑制细胞凋亡较对照组差异显著(T>1.67,P<0.05)。相较对照组,小麦肽组C2C12中鉴定出370个差异基因,上调基因表达109个、下调基因表达261个,FC≥3/2or≤2/3。经分析,上调基因表达主要富集于炎症响应、免疫响应、TNF信号通路和IL-17信号通路等相关通路,下调基因表达主要富集于氧化还原过程等相关通路,PPI互作参数interactionscore≥0.7。从PPI的差异基因中得到前10个hub基因,并筛选到趋化因子CXCL1、CCL5、CCL2、CXCL5、CXCR4、Il6、MMP3。经分析,hub基因倾向于在趋化因子介导的信号通路、细胞对趋化因子的反应和趋化因子的反应作为生物学过程方面富集,其中趋化因子CXCL1、CCL2、CCL5基因与C2C12相关。结论:本研究揭示小麦肽可促进C2C12增殖,抑制细胞凋亡。并且小麦肽通过调节CXCL1、CCL5、CCL2、CXCL5、CXCR4等趋化因子表达,抑制成肌细胞的凋亡。

自拟安胎饮联合黄体酮注射液治疗对黄体功能不足致复发性流产患者子宫动脉血流指标、血清PLGF和CTRP12表达的影响

目的探讨自拟安胎饮联合黄体酮注射液治疗对黄体功能不足致复发性流产(RSA)患者子宫动脉血流指标、血清胎盘生长因子(PLGF)和C1q肿瘤坏死因子相关蛋白12(CTRP12)表达的影响。方法选取2020年1月至2023年8月安徽医科大学附属巢湖医院收治的80例黄体功能不足致RSA患者作为研究对象,随机分为研究组和对照组,每组40例。对照组采用黄体酮注射液治疗,研究组在对照组基础上联合自拟安胎饮治疗,两组均治疗10周。比较两组临床疗效、治疗前后中医肾虚证候积分、子宫动脉血流指标、血清PLGF和CTRP12水平、不良发应发生率。结果研究组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组各项中医肾虚证候积分均降低,且研究组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血管指数(VI)降低,血流指数(FI)、血管化血流指数(VFI)升高,且研究组VI低于对照组,FI、VFI高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组PLGF和CTRP12水平均升高,且研究组PLGF和CTRP12水平均高于对照组(P<0.05)。研究组不良反应总发生率低于对照组(P<0.05)。结论黄体功能不足致RSA患者采用自拟安胎饮联合黄体酮注射液治疗,可提高临床疗效,改善子宫动脉血流、血清PLGF和CTRP12表达水平。

基于STC12C5A60S2单片机显示模块的实验研究

以常用的STC12C5A60S2单片机为主控芯片,以实验室单片机平台为载体,分别对数码管、LCD1602、LCD12864、OLED以及TFT五种显示屏进行DS18B20温度传感器采集与显示实验。实验测试结果表明五种显示模块均能有效采集并显示当前温度值,对比分析各种显示模块的性能,为不同应用场景下的显示需求提供了参考和借鉴,具有重要的实际应用价值。

基于STC12C5A60S2的温湿度控制系统设计

文章针对环境温湿度对纺织生产影响很大的情况,设计温湿度控制系统。系统采用STC12C5A60S2为控制核心,由DHT11进行数据采集,并且采用直观的1602LCD数字显示模块,以实现温度和湿度实时显示,高温时启动外部负载降温,低温时外部负载停止工作的控制,以将温湿度控制在一定的范围内,可以帮助纺织厂生产区域控制环境温湿度,确保纺织厂的温湿度符合要求。

急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术前后血清CTRP12水平变化及其与支架内再狭窄的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)前后血清补体C1肿瘤坏死因子相关蛋白家族12(CTRP12)水平的变化及与对支架内再狭窄(ISR)的关系。方法选取2021年1月至2023年6月江苏省丹阳市人民医院确诊为AMI并行PCI的患者104例,统计术后12个月内ISR发生率,并根据复查冠脉造影结果将其分为ISR组和非ISR组。比较两组患者PCI术前和出院前日血清CTRP12水平。Logistic回归分析AMI患者PCI术后ISR的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析CTRP12对AMI患者PCI术后ISR的预测价值。结果104例AMI患者PCI术后12个月ISR发生率为14.4%(15/104)。ISR组术前TIMI血流≤1比例、白细胞计数、中性粒细胞计数、TC、LDL-C较非ISR组显著升高,出院前日血清CTRP12水平低于非ISR组(P<0.05)。非ISR组中,出院前日血清CTRP12水平较术前升高(P<0.05)。ISR组中,出院前日血清CTRP12水平较术前降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示,出院前日血清CTRP12水平降低是AMI患者PCI术后ISR的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,出院前日血清CTRP12对AMI患者PCI术后ISR预测的最佳截断点为3.89 ng/mL(敏感度93.3%,特异度73.0%),ROC曲线下面积(AUC)为0.849。结论出院前日血清CTRP12水平对AMI患者PCI术后ISR发生具有一定预测价值,CTRP12可能是AMI患者PCI术后ISR的治疗靶分子。

归芪益元膏对12C6+束辐射旁效应大鼠免疫功能的影响

目的 观察归芪益元膏对12C6+束辐射旁效应大鼠免疫功能的影响及作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和中药低、中、高剂量组,每组10只。中药低、中、高剂量组予归芪益元膏1.2、2.4、4.8 g/kg灌胃,空白组、模型组、阳性对照组予等量生理盐水灌胃,共14 d;阳性对照组造模前30 min腹腔注射氨磷汀。第15日除空白组外,其余各组右肺予4 Gy12C6+束单次照射,照射后各组继续灌胃3 d。观察大鼠一般状况,检测外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)水平,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)含量,计算肺、脾脏器指数,HE染色观察左肺、脾组织病理形态,流式细胞仪检测脾CD4+、CD8+T淋巴细胞比例,qPCR检测左肺、脾组织T-bet、GATA-3 mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠外周血WBC降低,RBC、Hb、PLT升高,血清IL-4、IFN-γ含量降低;左肺、脾脏器指数明显降低,肺泡变形,肺泡壁变厚,肺泡腔缩小,肺组织明显出血,脾组织结构破坏严重,脾窦腔变窄,脾索出现纤维性增生;模型组脾CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值降低、CD8+T淋巴细胞比例升高,左肺、脾组织T-bet mRNA表达降低,GATA-3 mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和中药中、高剂量组大鼠外周血WBC升高,RBC、Hb、PLT降低,血清IL-4、IFN-γ含量升高;中药高剂量组左肺、脾脏器指数上升;各给药组肺、脾组织病理损伤均有不同程度减轻,阳性对照组和中药高剂量组脾CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值升高,CD8+T淋巴细胞比例降低,左肺、脾组织T-bet mRNA表达升高,GATA-3 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 归芪益元膏对12C6+束辐射旁效应大鼠肺、脾损伤有一定改善作用,其机制与调节CD4+、CD8+T淋巴细胞比例及T-bet、GATA-3表达,恢复细胞免疫功能有关。

血清IL-12、IL-18、CRP联合检测对肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎患者预后的评估价值

目的探讨血清白细胞介素12(interleukin 12,IL-12)、白细胞介素18(interleukin 18,IL-18)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)联合检测对肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis,SBP)患者的预后评估价值。方法选择2021年8月至2022年8月在承德医学院附属医院确诊并接受治疗的120例肝硬化并发SBP患者为研究对象,均给予相应的对症治疗,分别于入院当天和治疗14 d后采集患者空腹肘静脉血5 ml,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清IL-12、IL-18水平,采用速率散射免疫比浊法检测血清CRP水平,分析治疗前后患者血清IL-12、IL-18、CRP水平变化情况。治疗结束后随访90 d,根据预后将患者分为存活组和死亡组,比较两组患者各项临床资料并采用Cox回归分析影响肝硬化并发SBP患者90 d内死亡的危险因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估血清IL-12、IL-18、CRP联合检测对肝硬化并发SBP患者预后的预测价值。结果120例患者均完成治疗,随访期间死亡21例,存活99例。治疗后患者血清IL-12[(36.67±4.57)ng/L比(67.53±8.16)ng/L]、IL-18[(60.19±7.04)ng/L比(111.06±12.58)ng/L]、CRP[(19.56±2.24)mg/L比(42.65±5.53)mg/L]水平均较治疗前显著降低(P均<0.05)。死亡组患者肝性脑病[33.33%(7/21)比14.14%(14/99)]、肝肾综合征[42.86%(9/21)比18.18%(18/99)]比例以及白蛋白[(22.34±2.52)g/L比(25.53±2.64)g/L]、总胆红素[(47.56±4.90)μmol/L比(33.34±3.58)μmol/L]、治疗后IL-12[(40.01±4.16)ng/L比(35.96±4.02)ng/L]、治疗后IL-18[(65.28±7.02)ng/L比(59.11±6.31)ng/L]、治疗后CRP[(23.19±3.34)mg/L比(18.79±2.36)mg/L]水平均高于存活组(P均<0.05)。Cox回归分析显示,肝性脑病(HR=1.893,95%CI:1.379~2.406,P<0.001)、肝肾综合征(HR=1.749,95%CI:1.225~2.273,P<0.001)、低白蛋白(HR=1.756,95%CI:1.108~2.404,P<0.001)、治疗后IL-12(HR=1.996,95%CI:1.226~2.765,P<0.001)、IL-18(HR=1.564,95%CI:1.117~2.010,P<0.001)、CRP(HR=2.385,95%CI:1.856~2.913,P<0.001)水平高均是导致肝硬化并发SBP患者90 d内死亡的危险因素。治疗后血清IL-12、IL-18、CRP水平联合预测肝硬化并发SBP患者90 d内死亡的ROC曲线下面积为0.906,约登指数为0.638,高于治疗后单独血清IL-12、IL-18、CRP预测的ROC曲线下面积(0.791、0.805、0.802;z值分别为2.996、2.819、2.847,P值分别为0.022、0.031、0.027)。结论血清IL-12、IL-18、CRP水平升高与肝硬化并发SBP患者90 d内死亡有关,可用于预测肝硬化并发SBP患者的死亡风险,三者联合的预测价值更高。

叶酸对C2C12细胞增殖分化的影响

本试验旨在通过细胞培养验证叶酸对成肌细胞系(C2C12)细胞增殖分化的影响。研究以小鼠C2C12细胞为试验材料,共分为5个处理组,每组6个重复,细胞接种贴壁培养6 h,更换叶酸添加浓度为0、10、20、40、80 mg/L的处理培养基(含10%FBS的DMEM完全培养基),分别在处理24 h和48 h后进行细胞活力测定。分化试验中,当C2C12细胞生长达80%~90%融合时,分别用对照组和最佳叶酸浓度组的分化培养基培养5 d。结果表明:与对照组相比,10、20 mg/L叶酸可促进C2C12细胞增殖,但40、80 mg/L时出现抑制现象;基因表达分析检测显示,与对照组相比,20 mg/L叶酸组增加了C2C12细胞增殖代表性标记物——增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CCND1)和成肌分化抗原(MYOD)的表达,增加了分化过程中MYOD和肌细胞生成素(MYOG)的表达水平(P<0.05),降低了分化过程中肌肉生成抑素(MSTN)的表达水平(P<0.05)。由此可见,叶酸对C2C12细胞的增殖和分化具有促进作用。

^(12)C^(16)O_(2)分子位于1.57μm的饱和吸收光谱

本文展示了基于光梳锁频-光腔衰荡光谱装置测量的^(12)C^(16)O_(2)分子位于1.57μm附近的30012←00001振动带中转动量子数最高为68的共计37根振转跃迁的饱和吸收光谱,其频率确定至kHz水平;文献和CDSD2019数据库中的多普勒光谱确定的30012振动态的振转能级与本工作确定的数值存在超过1 MHz的偏差.

左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖引起的C2C12细胞凋亡

目的探讨左西孟旦通过PTEN/Akt通路抑制脂多糖(LPS)引起C2C12细胞凋亡的机制。方法CCK-8法检测不同浓度左西孟旦对C2C12细胞存活率的影响,选择有保护作用的左西孟旦浓度。将C2C12细胞随机分为4组:空白对照组(CON组)、左西孟旦预处理后的对照组(CON+L组)、LPS处理组(LPS组)、左西孟旦预处理后的LPS处理组(LPS+L组)。采用CCK-8法检测C2C12细胞的存活率;hoechst33342染色细胞核观察细胞的凋亡情况;采用实时PCR、Western blotting检测C2C12细胞PTEN/Akt通路凋亡指标的mRNA及蛋白表达水平。siRNA-PTEN转染C2C12细胞,敲除PTEN基因,检测其对凋亡通路蛋白表达的影响。结果左西孟旦能够提高LPS损伤后C2C12细胞的存活率,降低凋亡率。siRNA-PTEN抑制了PTEN基因的表达,PTEN/Akt信号通路相关mRNA与蛋白发生相应改变,导致C2C12细胞凋亡率下降。结论左西孟旦可以通过PTEN/Akt通路抑制LPS引起的C2C12细胞凋亡。

Novel thick-target inverse kinematics method for the astrophysical ^(12)C+^(12)C fusion reaction

The ^(12)C+^(12)C fusion is one of the most important reactions in modern nuclear astrophysics.The trend and magnitude of the reaction rate within the Gamow window strongly influence various astrophysical processes.However,direct measurement of this reaction is extremely difficult,which makes it necessary to develop indirect methods.In this study,the ^(23)Na+p reaction system was used to study the compound nucleus ^(24)Mg.We employed a thick-target inverse kinematics method combined with theγ-charged-particle coincidence technique to measure the proton andα exit channels of ^(24)Mg.Technical details of the ^(23)Na+p thick-target inverse kinematics experiment and analysis are presented herein.

小麦肽及其与大豆肽、豌豆肽复配肽的体外组合对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响

通过细胞实验探讨小麦肽、大豆肽、豌豆肽复合物对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响,并初步探明作用通路。采用终质量浓度为25 ng/mL的TNF-α处理C2C12细胞4 d建立TNF-α刺激模型,CCK-8法确定小麦肽、大豆肽、豌豆肽对C1C12细胞的安全剂量;检测不同复配比例的小麦肽、大豆肽、豌豆肽实验组的肌球蛋白相关指标(MyoD、MyoG、MyHC)、泛素-蛋白酶体系统肌肉萎缩相关指标(TRIM63和MAFbx)的蛋白表达、Akt、mTOR和其磷酸化蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,TNF-α刺激的C2C12细胞中MyoD、MyoG和MyHC的蛋白表达量均有下降,其中MyHC显著降低;MAFbx和TRIM63表达量显著升高;Akt和mTOR的磷酸化水平显著降低,而经过肽样品处理后,各指标均有缓解,且以小麦肽与大豆肽+豌豆肽质量比1∶3效果最好。小麦肽与大豆肽+豌豆肽以1∶3的质量比进行复配在几种配比中可以最有效地改善由TNF-α造成的C2C12细胞肌蛋白含量降低,可通过调节E3泛素连接酶的表达和提高Akt/mTOR的蛋白磷酸化水平的通路,从而降低细胞中蛋白降解和促进蛋白合成。

稳定表达Cas9蛋白的C2C12细胞株构建

【目的】优化慢病毒包装体系并建立能稳定表达Cas9蛋白的小鼠成肌细胞系(C2C12),为基因编辑技术研究提供细胞模型和理论参考。【方法】以C2C12细胞为研究对象,设对照组和试验组,调整三质粒(pmd2.g、pspax2和Cas9)用量配比以优化慢病毒包装体系。利用优化后的慢病毒包装体系将表达Cas9蛋白的质粒(lenti-Cas9-puro和lenti-Cas9-Blast)包装成慢病毒感染C2C12细胞。采用药物筛选富集和单克隆分选获得稳定表达Cas9蛋白的C2C12单克隆细胞株。利用基因组鉴定、免疫荧光染色、sgRNA检测等试验验证细胞株构建情况。【结果】慢病毒包装体系优化后,试验组质粒转染效率达90%以上,极显著高于对照组(80%)(P<0.01);试验组慢病毒滴度提高至1.8×10^(7) TU/mL,极显著高于对照组(6.2×10^(6) TU/mL)(P<0.001)。PCR结果显示,C2C12-Cas9稳转细胞株成功扩增出Cas9、puro和BSD序列,外源Cas9序列成功整合到C2C12细胞基因组中,而野生型的C2C12细胞不存在Cas9序列。免疫荧光染色结果表明,C2C12-Cas9稳转细胞株能表达Cas9蛋白。T7E1酶切和Sanger测序结果表明,整合的Cas9蛋白具有切割活性。【结论】通过调整三质粒用量配比成功优化慢病毒包装体系,提高质粒转染效率和慢病毒滴度。成功构建能稳定表达Cas9蛋白的C2C12细胞株,建立了构建稳转细胞株的相对成熟体系。

急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术治疗前后血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-12水平变化及意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)治疗前后血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-12(CTRP12)水平的变化及意义。方法纳入2021年11月至2022年10月于丹阳市人民医院行急诊PCI术的AMI患者50例和同期住院行冠脉造影结果正常的患者35例,比较两组外周静脉血清CTRP12水平。PCI术前、术中及术后第3、5、7天检测血清CTRP12水平,比较罪犯冠脉口、外周静脉血清CTRP12水平和外周静脉PCI术后不同时间点的变化。采用SYNTAX评分系统评估冠脉病变严重程度,将其分为SYNTAX评分≤22分和SYNTAX评分>22分两组,比较两组外周静脉血清CTRP12水平和PCI术治疗前后不同时间点的变化。分析CTRP12与年龄、体质指数(BMI)、空腹血糖、血脂等因素的相关性。Logistic回归分析冠脉病变严重程度的影响因素。结果AMI患者外周静脉血清CTRP12水平低于正常对照组(P<0.05)。术前外周静脉与术中罪犯冠脉口血清CTRP12水平差异无统计学意义(P>0.05)。与PCI术前相比,术后第3天血清CTRP12水平降低(P<0.05),术后第5天和第7天血清CTRP12水平升高,但差异均无统计学意义(P均>0.05)。与PCI术后第3天相比,术后第5天和第7天血清CTRP12水平升高,但差异均无统计学意义(P均>0.05)。与SYNTAX≤22分组相比,SYNTAX>22分组患者PCI术前和术后第3天血清CTRP12水平降低(P均<0.05),而术后第5天和第7天血清CTRP12水平差异无统计学意义(P均>0.05)。CTRP12与总胆固醇(TC)呈负相关,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈正相关。单因素Logistic回归分析示CTRP12是AMI患者冠脉病变严重程度的独立影响因素(β=-1.671,OR=0.188,P<0.05);在校正年龄、性别、BMI、吸烟、高血压、糖尿病、空腹血糖、TC、三酰甘油(TG)、HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)后,CTRP12仍是AMI患者冠脉病变严重程度的独立影响因素(β=-3.441,OR=0.032,P<0.05)。结论AMI患者PCI术前外周静脉血清CTRP12水平显著降低,术后第3天继续下降,术后第5天和第7天呈上升趋势。CTRP12是AMI患者冠脉严重程度的独立相关因素。

山柰酚对TNF-α/INF-γ诱导C2C12细胞炎症及成肌分化的作用

目的探讨山柰酚对TNF-α/INF-γ诱导C2C12细胞炎症及成肌分化的作用。方法采用生长培养基培养C2C12成肌细胞,用山柰酚(10、20、30、40、50、60μmol/L)处理24 h,CCK8法检测细胞活力。10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL IFN-γ与山柰酚(30、50μmol/L)共处理C2C12细胞24 h,RT-qPCR法检测炎性因子mRNA表达。采用分化培养基诱导C2C12细胞肌分化,在分化第5天,加入TNF-α/INF-γ与山柰酚共处理细胞24 h,RT-qPCR法检测生肌调节因子(MRFs)mRNA表达,免疫荧光观察肌管细胞形态,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPKs相关功能蛋白表达。结果与刺激组比较,山柰酚组成肌细胞促炎因子(IL-1β、IL-6),α趋化因子(CCL 2~5)、β趋化因子(CCL 9~11)mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01);肌管细胞形态萎缩得到改善,Myogenin、Myf 6 mRNA表达和p-PI3K、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论山柰酚通过降低促炎因子和α、β趋化因子mRNA表达抑制TNF-α/INF-γ诱导C2C12细胞炎症进程;山柰酚促进肌源性分化,其机制可能与上调PI3K和ERK1/2有关。