c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织中c-Myc、细胞周期蛋白依赖性激酶12(CDK12)表达及其与患者临床特征及预后的关系。方法 收集80例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检测标本中的c-Myc、CDK12表达水平。比较胃癌组织和癌旁组织中c-Myc、CDK12阳性表达情况;分析胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与患者临床病理特征的关系;分析c-Myc与CDK12阳性表达的相关性,胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率(77.5%、87.5%)均明显高于癌旁组织(13.8%、15.0%)(P<0.05)。不同年龄、性别、肿瘤最大直径患者胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);中低分化、Ⅲ~Ⅳ期、侵犯浆膜、有淋巴结转移患者胃癌组织中c-Myc和CDK12阳性表达率分别为88.0%、87.0%、88.9%、90.0%和94.0%、92.6%、97.2%、100.0%,均明显高于高分化、Ⅰ~Ⅱ期、未侵犯浆膜、无淋巴结转移患者胃癌组织的60.0%、57.7%、68.2%、70.0%和76.7%、76.9%、79.5%、80.0%(P<0.05)。相关分析发现,c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达呈正相关性(r=0.487,P=0.016<0.05)。胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性患者的3年生存率分别为19.4%、21.4%,均明显低于c-Myc、CDK12阴性患者的55.6%、70.0%(P<0.05)。结论 c-Myc、CDK12在胃癌组织中异常高表达,两者呈正相关性,并与肿瘤的TNM分期、分化程度、肿瘤侵袭深度及淋巴结转移有关,对患者的预后有明显影响,通过检测两者水平可能评估胃癌患者的预后。

胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性

目的探讨胃癌模型大鼠胃黏膜组织细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性。方法选择48只健康成年雌性大鼠,按照随机数字表法将其分为对照组、研究1组、研究2组、研究3组,每组各12只。研究1组、研究2组、研究3组均制备成胃癌模型。对照组给予等量0.9%氯化钠溶液,第24周处死取材;研究1组、研究2组、研究3组制备成胃癌大鼠后分别于第8、16、24周取材。分析各组大鼠一般情况及胃黏膜组织病理切片,采用蛋白质印迹法检测胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA的表达,采用Spearman分析法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度相关性。结果对照组大鼠胃黏膜完整正常,外膜层、肌层、黏膜下层、黏膜层等结构清晰,且无炎症细胞浸润;研究1组大鼠胃黏膜组织与对照组大鼠接近,不存在炎症细胞,且黏膜腺体结构基本正常;研究2组大鼠胃黏膜组织存在破损,细胞核变大,基底部部分腺体细胞形态异常,存在轻度异型性,为早期胃癌;研究3组大鼠胃黏膜组织增加破损,核质比变大,细胞形态不规则,部分腺体存在扩张,黏膜下层及肌层存在炎症细胞浸润,为胃癌进展期。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。采用Spearman相关性结果分析显示,胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度呈正相关(r=0.382、0.781、0.993,均P<0.001)。结论胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT呈高表达,其与胃癌病变程度密切相关。

鳜弹状病毒N蛋白与鳜c-Myc互作调控谷氨酰胺代谢机制

为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc(Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制,本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白,初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白);Co-IP结果显示,SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc存在相互作用。通过PCR扩增获得了带有Flag标签序列的SCRV-N基因的ORF片段,并构建了SCRV-N蛋白过表达载体pcDNA-N-Flag;将pcDNA-N-Flag质粒转染鳜脑组织细胞系(CPB细胞系),荧光共定位结果显示,Sc-c-Myc与SCRV-N在细胞质内存在共定位现象;通过逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印记(Western blot)检测转染pcDNA-N-Flag的CPB细胞系中Sc-c-Myc及谷氨酰胺代谢通路关键酶(GLS1、GDH和IDH2)的表达变化,发现Sc-c-Myc、GLS1的转录水平和蛋白水平均显著上调。综上表明,SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc互作促进Sc-c-Myc的表达,进而调控宿主细胞谷氨酰胺代谢途径,为SCRV防控提供了新的靶点。

华蟾素通过调控MYH9/USP7/c-MYC通路抑制急性髓系白血病细胞免疫逃逸

【目的】探讨华蟾素调控肌球蛋白重链9(MYH9)/泛素特异性蛋白酶7(USP7)/骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-MYC)通路对急性髓系白血病(AML)细胞免疫逃逸的影响。【方法】(1)体内实验:建立裸鼠异种移植瘤模型,评估华蟾素对AML细胞在体内生长和免疫逃逸的影响。(2)体外实验:使用不同浓度的华蟾素处理人AML细胞株HL-60,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。将HL-60细胞与活化的CD8^(+)T细胞共培养,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞表面标志物CD25的表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测共培养上清液中细胞因子[白细胞介素2(IL-2)和干扰素(IFN-γ)]的水平,CytoTox96非放射性细胞毒性分析评估CD8^(+)T细胞对HL-60细胞的毒性。Western Blot法检测MYH9、USP7和c-MYC的蛋白表达,免疫共沉淀(Co-IP)法检测MYH9、USP7和泛素化之间的相互作用。转染MYH9过表质粒,验证华蟾素在AML中的作用机制。【结果】华蟾素抑制裸鼠移植瘤生长,增强CD8^(+)T细胞抗肿瘤的能力。华蟾素浓度依赖性地抑制HL-60细胞活力、侵袭。华蟾素处理后上调CD8^(+)T细胞表面标志物CD25的表达,同时还上调IL-2和IFN-γ水平。华蟾素增强CD8^(+)T细胞对HL-60细胞的毒性。华蟾素抑制HL-60细胞MYH9、USP7和c-MYC的蛋白表达,MYH9通过募集USP7促进c-MYC去泛素化,华蟾素抑制MYH9介导的c-MYC去泛素化。【结论】华蟾素可通过抑制MYH9的表达进而减少去泛素化酶USP7对c-MYC的募集,促进c-MYC泛素化降解,从而抑制AML细胞免疫逃逸。

芹菜素对MHCC97H源性球细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的影响

目的 研究芹菜素(API)对人肝细胞癌MHCC97H源性球细胞(MH-SFC)对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法 应用无血清干细胞培养基超低黏附培养获得MH-SFC。CCK-8检测5-FU或API抑制MH-SFC和MHCC97H细胞存活力的半数抑制浓度(IC_(50))。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析miR-34a-5p表达水平。API(10.0、40.0 μmol·L^(-1))预处理或API(40.0 μmol·L^(-1))联合miR-34a-5p抑制物(Anti-34a)共处理MH-SFC,随后测定5-FU的IC_(50)。Western blot分析MH-SFC的FoxM1及c-Myc蛋白表达水平。结果 与MHCC97H细胞相比,MH-SFC 的5-FU的IC_(50)增高。API优先抑制MH-SFC细胞存活力。API(10.0、40.0 μmol·L^(-1))预处理降低MH-SFC的5-FU的IC_(50)。与MHCC97H细胞相比,MH-SFC更低表达miR-34a-5p,同时,API上调miR-34a-5p表达。Anti-34a能消除API增强MH-SFC的5-FU敏感性和上调miR-34a-5p表达作用。此外,API(10.0、40.0 μmol·L^(-1))下调MH-SFC的FoxM1及c-Myc蛋白表达;Anti-34a能消除API下调FoxM1及c-Myc蛋白表达效应。结论 API增强MH-SFC的5-FU敏感性,其分子机制与上调miR-34a-5p表达,继而阻断FoxM1/c-Myc通路相关。

基于ERK介导C-Myc/PD-L1协同作用探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤机制

目的:探讨参芪抑瘤方联合顺铂经ERK介导C-Myc/PD-L1相协途径对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制。方法:60只SPF级雄性昆明小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其余50只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组[2.5×10^(-3) g/(kg·3 d)]、参芪抑瘤方低[13.515 g/(kg·d)]、中[27.030 g/(kg·d)]、高剂量[54.060 g/(kg·d)]联合顺铂[2.5×10^(-3) g/(kg·3 d)]组,每组10只,治疗13 d,末次给药24 h后,麻醉处死小鼠,测定小鼠肿瘤抑制率和脾指数、胸腺指数;HE染色观察小鼠肿瘤组织病理学变化;ELISA试剂盒检测肿瘤组织匀浆液中EGF、IFN-γ含量;IHC法和Western blot法检测肿瘤组织中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达;RT-PCR法检测肿瘤组织中ERK、C-Myc、PD-L1mRNA表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠平均体质量和脾脏指数均降低(P<0.05);与模型组相比,各治疗组肿瘤抑制效果明显,且参芪抑瘤方联合顺铂组以剂量依赖性方式抑制肝癌小鼠肿瘤生长,提高小鼠平均体质量和脾指数、胸腺指数,促进肿瘤细胞坏死,增加坏死面积,降低肿瘤组织中EGF和IFN-γ含量以及p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达(P<0.05);与顺铂组相比,参芪抑瘤方中、高剂量联合顺铂组治疗效果显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,显著下调肿瘤组织中C-Myc与PD-L1蛋白表达,该机制可能通过调控ERK信号通路相关蛋白表达发挥抑瘤作用。

在口腔表皮样癌细胞中c-myc对GS和GLS表达的调控以及对癌瘤生长的裸鼠体内实验研究

目的:用动物实验模型探讨人口腔表皮样癌细胞中c-myc与谷氨酰胺酶(GLS)、谷氨酰胺合成酶(GS)间的相关性。方法:免疫组化检测口腔癌临床样本中c-myc、GLS、GS表达。建立c-myc稳定高表达的KB细胞模型,并移植入裸鼠体内以建立裸鼠成瘤模型,细胞和裸鼠各分为3组(n=6),分别为正常对照组、空载体转染细胞组和c-myc过表达细胞组,观察肿瘤生长;免疫组化检测肿瘤中c-myc、 GLS、 GS的表达情况。结果:c-myc、 GLS、 GS在口腔癌临床样本中高表达;在c-myc高表达细胞模型中c-myc mRNA表达水平显著高于空载体对照组;在动物实验中,随着时间的延长,各组裸鼠成瘤模型均形成肿瘤,c-myc过表达组肿瘤体积及重量增加更为显著(P<0.01);c-myc过表达组瘤组织样本中GLS及GS表达显著高于空载体组和对照组(P<0.01)。结论:在口腔表皮样癌细胞中,c-myc高表达,并使GLS、GS表达升高。

猫CDH1基因在过表达c-MYC成纤维细胞中的表达变化及生物信息学分析

[目的]试验旨在研究骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(myelocytomatosis viral oncogene homolog, c-MYC)对猫成纤维细胞的影响及其与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因表达和分子特性的关系,为将其应用于猫肿瘤疾病防治和组织损伤修复提供依据。[方法]通过组织贴壁法对猫胎儿成纤维细胞进行分离培养,利用电转仪将PB-TRE-c-MYC质粒转染至细胞并观察细胞形态,利用实时荧光定量PCR检测CDH1基因的表达情况,并通过生物信息学软件分析CDH1蛋白的理化性质和结构特征。[结果]过表达c-MYC导致细胞形态发生变化,从间质细胞的长梭型向上皮细胞的鹅卵石状发生转变,且使上皮细胞标志基因CDH1的表达极显著上调(P<0.01)。生物信息学分析显示,猫CDH1蛋白有881个氨基酸,其中含量最多的是亮氨酸,定位于细胞膜,存在4个CA结构域,介导细胞与细胞的接触,属于亲水性的酸性蛋白,主要由无规则卷曲组成,可能存在由Sec易位子转运并被信号肽酶Ⅰ(Sec/SPⅠ)切割的信号肽位点。[结论]猫CDH1基因的表达可被外源性重编程因子c-MYC激活,其编码的钙黏蛋白可促进猫胎儿成纤维细胞的间质-上皮转化,以抑制细胞癌化。

基于网络药理学、分子对接及细胞实验验证探讨二至丸治疗多发性骨髓瘤的作用机制

【目的】基于网络药理学、分子对接及细胞实验验证探讨二至丸治疗多发性骨髓瘤(MM)的潜在作用机制。【方法】应用网络药理学、分子对接筛选药物-疾病-靶标-通路关键指标。培养多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226,给予二至丸干预,采用膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)染色法检测细胞凋亡,Transwell实验测定细胞侵袭能力,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测蛋白激酶B(Akt)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、c-MycmRNA表达,Western Blot法检测细胞Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、CCND1、c-Myc、GSK-3β、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达。【结果】获得二至丸14个有效成分。二至丸治疗MM涉及靶点142个,通路富集分析结果显示关键靶点可能主要集中在癌症通路、脂质与动脉粥样硬化等。分子对接结果显示,木樨草素和槲皮素与GSK-3β有较好的结合活性及稳定性。进一步细胞实验验证发现,与空白组比较,二至丸低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭数减少,GSK-3β的mRNA和蛋白水平显著升高,CCND1、Akt和c-Myc的mRNA和蛋白水平显著降低,呈剂量依赖性,其中,中、高剂量组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】二至丸对MM的治疗作用可能是通过木犀草素和槲皮素等关键活性成分,促进GSK-3β表达,并抑制Akt/GSK-3β/CCND1/c-Myc信号通路来实现的。

糖酵解参与调控楝酰胺抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖的研究

本研究旨在探讨糖酵解参与楝酰胺的抗慢性粒细胞白血病细胞活性及机制。研究发现,楝酰胺以时间和浓度依赖性抑制K562细胞的生长增殖,其作用于K562细胞3 d的IC 50为21.70±5.68 nmol/L。楝酰胺阻滞K562细胞于G2/M期,诱导出现凋亡。楝酰胺降低了K562细胞的葡萄糖消耗量和乳酸生成水平,抑制c-Myc和己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)的蛋白表达。K562细胞在进行去葡萄糖处理后生长减慢,乳酸生成水平降低,c-Myc蛋白表达下调。楝酰胺在无葡萄糖培养下K562细胞上的抑制率明显低于含葡萄糖培养下K562细胞上的抑制率。以上结果说明楝酰胺具有抗慢性粒细胞白血病细胞活性,其作用机制可能是抑制c-Myc和HK2介导的糖酵解。

芦荟大黄素联合靶向抑制FOXC1基因对胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨芦荟大黄素(AE)联合siRNA-FOXC1靶向沉默FOXC1基因调控Wnt/β-catenin通路对胶质瘤细胞U251增殖、凋亡、迁移的影响。方法研究时间为2022年6月至2023年12月,地点为滨州医学院附属医院医学实验中心。选择靶向沉默FOXC1基因效率最高的siRNA序列(FOXC1-siRNA-2102),采用脂质体法转染细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度AE对胶质瘤细胞U251增殖的影响,并计算半数抑制浓度值(IC50)。CCK8法检测转染后24 h、48 h、72 h、96 h细胞增殖能力变化。将细胞分为对照组、AE组、siRNA-FOXC1组、AE+siRNA-FOXC1组,采用Annexin V-PE/7-AAD染色-流式细胞仪检测各组细胞凋亡的影响,Transwell小室检测各组细胞的迁移能力,qPCR法检测各组FOXC1基因的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测各组FOXC1、β-catenin、C-myc蛋白表达水平。统计学方法采用F检验。结果随着AE剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖抑制率增高[对照组为(0.04±12.86)%,30μmol/L组为(24.45±6.96)%、60μmol/L组为(48.41±5.67)%、90μmol/L组为(60.63±9.96)%、120μmol/L组为(78.23±13.34)%],AE在U251细胞的IC50值为61.43μmol/L。随着时间延长,siRNA-FOXC1组、60μmol/L AE组、AE+siRNA-FOXC1组细胞增殖抑制率均高于对照组,其中AE+siRNA-FOXC1组最高;siRNA-FOXC1组、AE组、AE+siRNA-FOXC1组的凋亡率均高于对照组,其中AE+siRNA-FOXC1组的细胞凋亡率最高;siRNA-FOXC1组、AE组、AE+siRNA-FOXC1组的FOXC1 mRNA表达水平及β-catenin、C-myc、FOXC1蛋白表达均低于对照组,其中AE+siRNA-FOXC1组最低(均P<0.05)。siRNA-FOXC1组、AE组、AE+siRNA-FOXC1组细胞迁移能力均低于对照组,其中AE+siRNA-FOXC1组最低[对照组迁移细胞数为(193.00±14.17)个,AE组为(84.00±14.22)个,siRNA-FOXC1组为(80.67±5.69)个,AE+siRNA-FOXC1组为(36.33±11.59)个,差异有统计学意义(F=93.55,P<0.05)]。结论AE能抑制胶质瘤U251细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与FOXC1基因、Wnt/β-catenin通路有关。

c-Myc通过lnc-TBL1XR1-5影响口腔鳞状细胞癌的发生发展

目的研究c-Myc调节的长链非编码RNA TBL1XR1-5(lnc-TBL1XR1-5)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)进展的影响。方法根据c-Myc的表达对TCGA数据库中头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)样本进行生物信息学分析,筛选出c-Myc表达密切相关的lnc-TBL1XR1-5。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测c-Myc和lnc-TBL1XR1-5在OSCC癌组织和癌旁组织中的表达关系,分析其在HOK、HN6、CAL27细胞系中表达差异,c-Myc过表达和敲低对lnc-TBL1XR1-5的影响。双荧光素酶报告基因测定用于验证c-Myc与lnc-TBL1XR1-5启动子区的结合。RNA荧光原位杂交(RNA FISH)用于确定lnc-TBL1XR1-5在OSCC细胞系中的定位。通过qRT-PCR、细胞计数、CCK-8、集落形成等实验观察lnc-TBL1XR1-5的过表达或敲低对OSCC细胞增殖的影响,并通过划痕实验、Transwell实验等观察lnc-TBL1XR1-5的过表达或敲低对OSCC细胞迁移的影响,最后通过观察培养基颜色和pH变化观察lnc-TBL1XR1-5的过表达或敲低对OSCC细胞代谢的影响。结果c-Myc对lnc-TBL1XR1-5在OSCC细胞系和组织中的表达具有正调控作用。通过双荧光素酶报告基因测定验证了c-Myc与lnc-TBL1XR1-5启动子区的结合。RNA FISH显示lnc-TBL1XR1-5定位于OSCC细胞的细胞核。lnc-TBL1XR1-5的过表达促进了OSCC细胞系的迁移、代谢和增殖,而敲低则具有相反的作用。结论c-Myc在OSCC中正向调节lnc-TBL1XR1-5,lnc-TBL1XR1-5促进OSCC的迁移、增殖和代谢。

微小RNA-6768-5p在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨miR-6768-5p在肺癌组织中的表达及通过靶向调控羧肽酶A4(CPA4)对肺癌细胞增殖及侵袭的影响。方法 使用TCGA数据库分析肺癌组织和癌旁组织中miR-6768-5p的表达,使用实时定量PCR(qPCR)检测人肺癌细胞系(HCC1588、H1650、H1299、A549、HCC827)和正常肺泡上皮细胞(HPAEpiC细胞)中miR-6768-5p的表达。分别转染NC mimics、miR-6768-5p mimics至肺癌细胞,分别作为NC组和miR-6768-5p组。使用MTS实验、Matrigel侵袭实验分别检测各组细胞增殖和侵袭能力。使用RNAhybrid软件和双荧光素酶报告基因实验验证miR-6768-5p和CPA4的假定结合位点。qPCR检测各组细胞中CPA4 mRNA的表达。通过Western blot分析各组细胞中AKT/c-MYC信号通路蛋白的表达情况。结果 与癌旁组织比较,miR-6768-5p相对表达水平在肺癌组织中明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HPAEpiC细胞比较,miR-6768-5p相对表达水平在肺癌细胞系中明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,miR-6768-5p组细胞增殖率明显降低(P<0.05)。NC组和miR-6768-5p组侵袭细胞数分别为(131.30±12.55)个和(37.45±7.77)个,miR-6768-5p组侵袭细胞数明显低于NC组(P<0.05)。miR-6768-5p组H1299细胞内CPA4 mRNA相对表达水平明显低于NC组(t=4.93,P<0.05)。与NC组比较,miR-6768-5p组AKT/c-MYC信号通路蛋白p-AKT、p-mTORC1、XIAP、MDM2、c-MYC蛋白表达明显降低。结论 肺癌组织中miR-6768-5p表达降低,miR-6768-5p可能通过靶向CPA4,抑制AKT/c-MYC信号通路激活,降低肺癌H1299细胞的增殖和侵袭能力。

基于JAK/STAT信号通路的中药治疗慢性萎缩性胃炎药理机制研究进展

现关于中医药干预慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的临床研究和基础实验研究已成为消化系统疾病中的研究热点。Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)/信号转导子与激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号通路的状态与消化道疾病的发生与进展十分密切。诸多研究表明中药可通过多种机制调控该信号通路干预CAG的进展,大致可分为以下几个方面:通过抑制JAK2/STAT3、核转录因子-κB/STAT1通路激活或促使白介素-4(interleukin-4,IL-4)/STAT6激活达到干预CAG的目的;同时降低IL-6、IL-1β等相关炎症因子表达,不仅可抑制相关通路激活,亦可起到减轻胃黏膜炎症的作用;再者上调抑癌基因p21、下调原癌基因表达防止受损的胃黏膜进一步恶化;最后还可调节生存素、B淋巴细胞瘤2家族调控细胞凋亡/增殖平衡机制逆转胃黏膜萎缩及肠化生。

芪竹健胃方治疗慢性萎缩性胃炎及癌前病变临床研究

目的研究芪竹健胃方治疗脾虚湿热血瘀型慢性萎缩性胃炎及癌前病变的临床疗效,并探讨该方药的作用机制。方法采用自身前后对照研究方法,纳入符合中西医诊断标准的患者31例作为治疗组,予芪竹健胃方中药汤剂进行治疗,疗程12 w,对比治疗前后中医症状疗效、胃镜征象、粘膜病理、癌变风险,血清胃功能三项的变化。另外,用蛋白免疫印迹法检测20例治疗组患者治疗前、治疗后胃粘膜Lgr5、Wnt1、C-myc蛋白表达情况,进行对比分析,对该方的作用机制开展探索性研究。结果治疗12 w后,治疗组患者的中医证候评分、胃镜病理改善情况具有统计学意义(P<0.01),降低癌变风险,血清G17、PGⅠ值升高,有统计学差异(P<0.01),PGR有升高趋势,且具有统计学差异(P<0.05);PGⅡ方面,结果不具统计学差异(P>0.05)。20例治疗组患者治疗前后胃粘膜Lgr5、Wnt1、C-myc蛋白表达情况皆呈逐渐下降的趋势。结论芪竹健胃方能明显改善慢性萎缩性胃炎及胃癌前病变患者的中医证候,促进胃黏膜的修复,降低癌变风险的机制可能与调控Wnt/Lgr5信号通路,抑制Lgr5标记的胃干细胞异常增殖分化有关。

果糖对肝癌细胞增殖的影响

目的观察果糖摄入对肝癌细胞增殖的影响,并探讨对c-Myc/SLC1A5信号上调的机制。方法培养HepG2肝癌细胞,添加果糖进行干预,分别设置5、10mmol/L为低、高剂量果糖组,设置0mmol/L果糖为空白对照组;应用CCK-8进行细胞活性检测,克隆形成实验进行细胞增殖情况检测,流式细胞术进行细胞周期和细胞凋亡检测;应用荧光定量PCR检测c-Myc和SLC1A5的mRNA的转录情况,蛋白免疫印迹检测c-Myc和SLC1A5的蛋白表达情况,以明确其机制。结果CCK-8细胞增值率及克隆形成实验细胞增殖结果均显示果糖能促进肝癌细胞的体外增殖(高剂量组>低剂量组>空白组),且差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示果糖能抑制肝癌细胞的体外凋亡(高剂量组<低剂量组<空白组),然而G 2/M期的细胞所占比例结果为高剂量组>低剂量组>空白组。c-Myc和SLC1A5 mRNA的相对表达量及蛋白表达结果均为高剂量组>低剂量组>空白组。结论果糖摄入可以促进肝癌细胞的体外增殖,诱导c-Myc/SLC1A5的表达,该结果提示过多的果糖摄入具有促进肝癌发生与发展的潜在可能,其作用机制可能与c-Myc/SLC1A5的激活密切相关。

基于细胞系和类器官研究c-Myc在肝癌治疗和耐药中的作用

目的:基于肝癌细胞系与类器官的药物基因组学数据探讨骨髓细胞瘤癌基因(c-Myc)的潜在治疗效果。方法:收集肝癌细胞系的药敏、功能基因组和基因表达数据,评估c-Myc的表达与药敏的关联。统计c-Myc表达在肝癌测序队列中的差异和预后相关性。免疫组织化学染色验证c-Myc在肝癌患者的表达,检测其与类器官生物库类器官的药敏关联。选取三种不同的c-Myc抑制剂在肝癌细胞系和类器官上进行药物筛选,检测干预c-Myc对二维、三维水平的肿瘤杀伤作用。生物信息学分析探究c-Myc与靶向耐药的相关性。结果:生物信息学分析联合免疫组织化学鉴定c-Myc在肝癌中调控药敏的潜在作用。c-Myc在癌组织中的表达明显高于癌旁组织,而且c-Myc的表达在靶向药耐药患者中高于靶向药敏感患者(P<0.05)。药敏实验揭示了c-Myc抑制剂THZ1、ABBV-744、JQ1可杀伤肿瘤细胞及类器官,并且与仑伐替尼在细胞系SNU-739中显示出显著的协同致死作用(协同系数均>1)。进一步的类器官生物库数据分析显示,c-Myc与干性介导的靶向耐药显著正相关(R=0.87)。结论:c-Myc在在靶向治疗耐药患者中高表达,并且抑制c-Myc可在二维、三维体外模型中起到很好的肿瘤杀伤效果,肝癌中可作为一个新的靶点。

宫颈癌组织中EMC6、C-myc及BCL-2的表达和预后

目的通过生信分析,评估EMC6基因在泛癌及宫颈癌中的表达、免疫相关性及诊断价值,并探究EMC6、C-myc、BCL-2蛋白与宫颈癌的相关性及预后。方法分析TCGA和GTEx数据库中EMC6在泛癌和宫颈癌的表达,并利用SangerBox和Timer数据库评估EMC6与免疫相关性,以及ROC评估诊断潜力。通过免疫组化在68例宫颈癌及癌旁组织中检测EMC6、C-myc、BCL-2蛋白表达,分析其与临床病理特征的联系。使用Phi系数法分析相关性,并利用Kaplan-Meier法评估这些蛋白对预后的影响。结果宫颈癌中EMC6表达降低,对免疫浸润有显著影响,且诊断准确性较高(AUC=0.819)。免疫组化显示,与宫颈癌旁组织相比,EMC6蛋白表达下降、而C-myc和BCL-2蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。EMC6表达与临床病理特征无相关性(P>0.05),而C-myc与病理类型相关(P<0.05),BCL-2与年龄、病理类型、肿瘤大小、分化程度相关(P<0.05)。EMC6与C-myc、BCL-2表达在宫颈癌中呈负相关(Phi=-0.367,P=0.002;Phi=-0.284,P=0.019),且三者与患者总生存期显著相关(P<0.05)。结论宫颈癌中EMC6蛋白表达下降,与C-myc、BCL-2蛋白表达呈负相关,且这些蛋白的表达水平与患者的总生存期之间存在显著的相关性,提示它们可能作为宫颈癌治疗和预后评估的潜在生物标志物。

胃癌患者血清c-Myc和PD-L1水平与临床病理特征及预后的相关性

目的 探讨胃癌患者血清c-Myc和程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)水平与临床病理特征及预后的相关性。方法 收集2018年8月至2019年4月期间96例胃癌患者作为研究对象(观察组),另纳入健康体检者96例为对照组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清c-Myc和PD-L1水平。胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1表达的相关性采用Spearman相关分析;血清c-Myc和PD-L1表达与患者预后的关系采用Kaplan-Meier法分析;Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果 与对照组相比,观察组患者血清c-Myc、PD-L1水平显著升高(P<0.05)。Spearman法分析显示,胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1表达呈正相关(r=0.431,P<0.05);c-Myc、PD-L1表达与肿瘤直径、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05)。胃癌组织中c-Myc和PD-L1低表达患者3年累计生存率为88.89%(32/36)、86.67%(26/30),均显著高于高表达患者的76.67%(46/60)、78.79%(52/66)(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,c-Myc、PD-L1、TNM分期是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论 胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1高表达均呈现上调趋势,二者与胃癌患者临床病理特征及预后有关。

LncRNA CDC6通过抑制c-Myc表达调节肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化

目的探讨LncRNA CDC6(CDC6)对肺癌细胞增殖、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和凋亡的影响及其作用机制。方法RT-qPCR检测肺癌组织和细胞中CDC6和c-Myc的mRNA水平,并分析CDC6和c-Myc mRNA水平与患者临床指标的相关性。随后,通过CDC6-siRNA和pcDNA-CDC6转染,或CDC6-siRNA和pcDNA-c-Myc共转染肺癌细胞;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting检测增殖、凋亡及EMT相关蛋白的表达。结果LncRNA CDC6在肺癌组织和细胞系中高表达(P<0.05)。CDC6和c-Myc mRNA水平与肺癌的病理分型、TNM分期、分化程度以及淋巴结的转移密切相关。沉默CDC6抑制肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,降低增殖相关蛋白以及EMT相关蛋白表达水平,促进促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。过表达CDC6促进肺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调增殖相关蛋白以及EMT相关蛋白表达,减少促凋亡蛋白Bax水平,增加抗凋亡蛋白Bcl-2水平(P<0.05)。过表达c-Myc逆转了沉默CDC6对A549细胞增殖、凋亡以及EMT相关蛋白表达的影响。结论LncRNA CDC6通过调控c-Myc促进EMT过程及肺癌细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡。