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TpbA通过调节c-di-GMP抑制鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成
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作者 张玉英 黄菱 +1 位作者 赵建宁 师志云 《宁夏医学杂志》 CAS 2023年第1期1-4,共4页
目的分析生物膜形成相关的酪氨酸磷酸酶A(TpbA)经调节3,5-环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)影响鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成。方法通过上海生工合成TpbA基因序列,构建pET-28a-TpbA载体,原核重组表达目的蛋白TpbA经亲和层析纯化后并用weste... 目的分析生物膜形成相关的酪氨酸磷酸酶A(TpbA)经调节3,5-环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)影响鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成。方法通过上海生工合成TpbA基因序列,构建pET-28a-TpbA载体,原核重组表达目的蛋白TpbA经亲和层析纯化后并用western blot验证,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,采用western blot和磷酸酶活性实验鉴定TpbA表达及活性,分析c-di-GMP表达水平及生物膜形成情况。结果在成功构建pET-28a-TpbA载体并证实表达TpbA的基础上,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,western blot表明TpbA过表达(P<0.05),磷酸酶活性实验证实过表达的TpbA具有酶活性(P<0.05)。进一步分析发现,ATCC17978中TpbA过表达能够降低c-di-GMP的水平(P<0.05),表明TpbA能够有效调节鲍曼不动杆菌的c-di-GMP。ATCC17978中c-di-GMP相关的生物膜形成在TpbA过表达作用下能够被显著抑制(P<0.05)。结论本研究初步证实了TpbA通过调节c-di-GMP,可以抑制ATCC17978生物膜形成,为抑制鲍曼不动杆菌生物膜的形成提供了新的潜在靶点和实验数据。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 TpbA c-di-gmp 生物膜
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病原细菌受体介导的c-di-GMP信号传导及其调控机制 被引量:3
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作者 杨凤环 田芳 +1 位作者 陈华民 何晨阳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期9-14,共6页
细菌第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)信号网络系统主要涉及信号代谢、识别、接受、传递、功能表达和调控。c-di-GMP胞内水平受到鸟苷酸环化酶(DGC)和磷酸二酯酶(PDE)的控制。c-di-GMP信号受体类型多样,包括转录调控因子、PilZ结构域蛋白... 细菌第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)信号网络系统主要涉及信号代谢、识别、接受、传递、功能表达和调控。c-di-GMP胞内水平受到鸟苷酸环化酶(DGC)和磷酸二酯酶(PDE)的控制。c-di-GMP信号受体类型多样,包括转录调控因子、PilZ结构域蛋白、退化的GGDEF和EAL结构域蛋白、核糖体开关、多核苷酸磷酸化酶和新发现的蛋白激酶等。c-di-GMP受体接受信号后,可以在转录、翻译以及翻译后水平上对下游靶标进行调控,从而影响细菌的毒性、运动性、生物膜形成、细胞分裂等生理生化过程。本文结合本实验室对水稻白叶枯病菌的研究结果,综述了近年来国内外在c-di-GMP信号受体介导的调控机制等方面的研究进展。 展开更多
关键词 c-di-gmp 信号代谢 受体 传导 调控
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水稻白叶枯病菌第二信使c-di-GMP代谢酶基因的预测和分析 被引量:3
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作者 薛丁榕 田芳 +3 位作者 李海云 杨凤环 陈华民 何晨阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期131-138,共8页
旨在从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)中鉴定出含有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGC)和含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶(PDE)编码基因。预测分析了Xoo已测序菌株中的GGDEF、EAL和HD-GYP结构域蛋白的种类、数量及... 旨在从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)中鉴定出含有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGC)和含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶(PDE)编码基因。预测分析了Xoo已测序菌株中的GGDEF、EAL和HD-GYP结构域蛋白的种类、数量及其序列特征,鉴别了基序保守的DGC或PDE、基序退化的信号受体以及信号输入结构域,验证了部分不同类型结构域蛋白作为DGC/PDE、信号受体以及在细菌毒性调控等方面的功能。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 c-di-gmp信号途径 鸟苷酸环化酶 磷酸二酯酶
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美罗培南对胞内不同c-di-GMP浓度表型铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响 被引量:5
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作者 谢杰鹏 孔晋亮 +4 位作者 陈一强 王可 罗劲 张真强 刘冬梅 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第6期1001-1006,共6页
目的:探究美罗培南对胞内不同环二鸟苷酸(c-di-GMP)浓度表型铜绿假单胞菌(PA)生物被膜形成的影响。方法:两倍稀释法测定美罗培南对各菌株的抑菌浓度(MIC);设阴性对照组和3个美罗培南干预组(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)。用1/2MIC、1/4MIC、... 目的:探究美罗培南对胞内不同环二鸟苷酸(c-di-GMP)浓度表型铜绿假单胞菌(PA)生物被膜形成的影响。方法:两倍稀释法测定美罗培南对各菌株的抑菌浓度(MIC);设阴性对照组和3个美罗培南干预组(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)。用1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的美罗培南分别干预野生株PAO1、PA胞内c-di-GMP高表达株(PAO1ΔwspF)、PA胞内c-di-GMP低表达株(PAO1/Plac-yhjH),观察美罗培南对其运动能力的影响,用结晶紫染色法测定美罗培南对PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH菌株的生物被膜形成以及对生物被膜清除能力的影响。结果:在美罗培南的干预下,PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH的运动区域直径均比阴性对照组小(P<0.05),所形成的的生物被膜也均比阴性对照组少(P<0. 05),而破坏的生物被膜均比阴性对照组多(P<0. 05)。结论:美罗培南能抑制PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH的运动能力以及生物被膜形成,美罗培南能破坏PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH形成的生物被膜,美罗培南对PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH的抑制效果不同。 展开更多
关键词 美罗培南 c-di-gmp 铜绿假单胞菌 生物被膜
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外源性C-di-GMP对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响 被引量:3
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作者 闫文娟 吴补领 +4 位作者 屈铁军 高杰 赵红萍 苏凌云 余擎 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期510-512,共3页
目的:初步探讨外源性c-di-GMP对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。方法:外源性c-di-GMP与生理盐水分别加入至含变形链球菌UA159菌液的BHI培养基中,比较两组对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。结果:c-di-GMP处理组与生理盐水组相比,产... 目的:初步探讨外源性c-di-GMP对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。方法:外源性c-di-GMP与生理盐水分别加入至含变形链球菌UA159菌液的BHI培养基中,比较两组对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。结果:c-di-GMP处理组与生理盐水组相比,产酸、耐酸能力明显下降,差异有统计学意义,经t检验,P<0.05。结论:c-di-GMP可以抑制变形链球菌的产酸、耐酸能力,可以单独也可以与其它的抗龋制剂联合应用控制龋病。 展开更多
关键词 c—dj—GMP 变形链球菌 产酸 耐酸
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水稻白叶枯病菌c-di-GMP受体Clpxoo关键结合功能位点的确定
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作者 李建宇 李波 +3 位作者 陈华民 杨凤环 何晨阳 田芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期124-129,共6页
旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达... 旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达和产物纯化;通过等温滴定量热法(ITC),检测了Clpxoo及其点突变蛋白与c-di-GMP的结合作用。利用基因定点突变和桥接PCR方法,在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo点突变蛋白和与c-di-GMP不发生结合的Clpxoo点突变体。结果表明,Clpxoo蛋白第70位天冬氨酸和第99位谷氨酸是与c-di-GMP结合的关键功能位点。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 c-di-gmp 信号受体蛋白 点突变体 结合作用
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基于RNA适配体检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP
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作者 朱彦策 孔江南 +2 位作者 陈慧心 钟凯 张超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2145-2153,共9页
旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20aRNA适配体。... 旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20aRNA适配体。通过检测绿色荧光强度分析RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP的结合能力。结果表明,转录得到的RNA经过加热变性、缓慢退火后得到VC2RNA适配体和VC2/g20a RNA适配体,在125mmol·L^(-1 )KCl和30mmol·L^(-1 )MgCl_2溶液中孵育180min的优化结合条件下,VC2适配体与c-di-GMP特异性结合,VC2/g20a适配体与cGAMP特异性结合;c-di-GMP对VC2适配体的半数效应浓度(EC50)为(89±1.7)nmol·L^(-1),cGAMP对VC2/g20a适配体的半数效应浓度为(309±4.5)nmol·L^(-1);VC2和VC2/g20a能够分别检测低至5nmol·L^(-1)和20nmol·L^(-1)的c-di-GMP和cGAMP;并且发现转录的RNA混合物在未纯化的情况下同样能够检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP。这种方法可以简单快速的检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP,并且为研究其他c-di-GMP和cGAMP合成酶活性提供潜在可能。 展开更多
关键词 RNA适配体 c-di-gmp cGAMP 荧光检测
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WspR在大肠杆菌中的表达及其对c-di-GMP合成的影响
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作者 凡责艳 木佳 +1 位作者 毛自朝 官会林 《云南师范大学学报(自然科学版)》 2014年第5期68-73,共6页
可得胶是土壤农杆菌ATCC31749分泌的一种胞外多糖,大多数细菌胞外多糖的合成受控于新近发现的第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP).细胞内c-di-GMP的产生受二鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)合成和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)... 可得胶是土壤农杆菌ATCC31749分泌的一种胞外多糖,大多数细菌胞外多糖的合成受控于新近发现的第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP).细胞内c-di-GMP的产生受二鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)合成和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)降解两条途径调控.在结构上,通常DGC含有GGDEF结构域,PDE含有EAL结构域.研究表明从绿脓杆菌(P.aeruginosa)中得到的类趋化系统蛋白WspR具有GGDEF结构域,具有DGC活性.本实验将WspR转入大肠杆菌中得到了表达,并用颜色反应得到证实c-di-GMP在E.coli大量合成.为进一步研究ATCC31749中WspR的作用机制,促进可得胶的合成提供切实可行的依据. 展开更多
关键词 土壤农杆菌ATCC31749 c-di-gmp WspR表达
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c-di-GMP在低温好氧颗粒污泥形成过程中的作用
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作者 支丽玲 王玉莹 +3 位作者 马鑫欣 衣雪松 王硕 李激 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1560-1567,共8页
在低温条件下运行好氧颗粒污泥反应器,絮状污泥颗粒化过程中信号分子可通过传导作用引起各层物质之间的组分变化,通过研究胞外聚合物及污泥相关疏水性的变化规律,并观察此过程中微生物菌群的群落演替特点,揭示环二鸟苷酸(c-di-GMP)在低... 在低温条件下运行好氧颗粒污泥反应器,絮状污泥颗粒化过程中信号分子可通过传导作用引起各层物质之间的组分变化,通过研究胞外聚合物及污泥相关疏水性的变化规律,并观察此过程中微生物菌群的群落演替特点,揭示环二鸟苷酸(c-di-GMP)在低温好氧颗粒污泥形成过程中的变化规律与影响作用.结果表明:接种污泥在颗粒化过程中,胞外聚合物含量从48mg/gMLVSS增长至139mg/gMLVSS,其中以TB层蛋白质增长为主,在颗粒化过程中,c-di-GMP含量由62?g/gMLVSS增至600?g/gMLVSS,始终影响微生物运动及生物膜形成,促使具备胞外聚合物分泌功能的菌群加快分泌胞外聚合物,促进好氧颗粒污泥的形成.各个阶段污泥中微生物种群存在较大差异,在反应器运行初始阶段与c-di-GMP合成相关的菌群占据优势,同时在后期表现出较好的脱氮除磷能力,在低温条件下好氧颗粒污泥微生物菌群发生演替并最终形成稳定的菌群结构. 展开更多
关键词 c-di-gmp 低温 好氧颗粒污泥 胞外聚合物 群落演替
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环二鸟苷酸(c-di-GMP)作为潜在免疫佐剂的研究进展 被引量:1
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作者 丛晓燕 时建立 +6 位作者 孙文博 李俊 杜以军 吴家强 陈蕾 陈智 王金宝 《中国兽药杂志》 2014年第2期59-62,共4页
环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,近年来研究发现环二鸟苷酸作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生良好的免疫调节作用,实验研究表明其有可能成为具有潜力的疫苗佐剂。本... 环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,近年来研究发现环二鸟苷酸作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生良好的免疫调节作用,实验研究表明其有可能成为具有潜力的疫苗佐剂。本文综述了c-di-GMP的结构,生物学功能、免疫特性和作为疫苗佐剂研究等方面的最新研究进展。 展开更多
关键词 环二鸟苷酸 疫苗 佐剂 免疫
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H-NS Represses Biofilm Formation and c-di-GMP Synthesis in Vibrio parahaemolyticus 被引量:1
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作者 XUE Xing Fan ZHNAG Miao Miao +9 位作者 SUN Jun Fang LI Xue WU Qi Min YIN Zhe YANG Wen Hui NI Bin HU Ling Fei ZHOU Dong Sheng LU Ren Fei ZHANG Yi Quan 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2022年第9期821-829,共9页
Objective This study aimed to investigate the regulation of histone-like nucleoid structuring protein(H-NS)on biofilm formation and cyclic diguanylate(c-di-GMP)synthesis in Vibrio parahaemolyticus RIMD2210633.Methods ... Objective This study aimed to investigate the regulation of histone-like nucleoid structuring protein(H-NS)on biofilm formation and cyclic diguanylate(c-di-GMP)synthesis in Vibrio parahaemolyticus RIMD2210633.Methods Regulatory mechanisms were analyzed by the combined utilization of crystal violet staining,quantification of c-di-GMP,quantitative real-time polymerase chain reaction,LacZ fusion,and electrophoretic-mobility shift assay.Results The deletion of hns enhanced the biofilm formation and intracellular c-di-GMP levels in V.parahaemolyticus RIMD2210633.H-NS can bind the upstream promoter-proximal DNA regions of scrA,scrG,VP0117,VPA0198,VPA1176,VP0699,and VP2979 to repress their transcription.These genes encode a group of proteins with GGDEF and/or EAL domains associated with c-di-GMP metabolism.Conclusion One of the mechanisms by which H-NS represses the biofilm formation by V.parahaemolyticus RIMD2210633 may be via repression of the production of intracellular c-di-GMP. 展开更多
关键词 Vibrio parahaemolyticus BIOFILM H-NS c-di-gmp
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黄单胞菌中c-di-GMP二鸟苷酸环化酶和磷酸二酯酶的生物信息学分析
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作者 邹霞 黄良博 何进 《计算生物学》 2014年第4期68-82,共15页
黄单胞菌是一类重要的作物病原菌,其信号转导机制及其与寄主植物的相互作用一直是微生物学、植物病理学及植物学工作者研究的热点问题。c-di-GMP是一种广泛存在于细菌中的第二信使分子,参与细菌的粘附、胞外多糖的合成、生物膜形成、运... 黄单胞菌是一类重要的作物病原菌,其信号转导机制及其与寄主植物的相互作用一直是微生物学、植物病理学及植物学工作者研究的热点问题。c-di-GMP是一种广泛存在于细菌中的第二信使分子,参与细菌的粘附、胞外多糖的合成、生物膜形成、运动性及毒力等许多细菌生理过程的调节。c-di-GMP主要由含有GG(D/E)EF结构域的二鸟苷酸环化酶合成,由含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶降解,其在胞内的浓度受到二鸟苷酸环化酶与c-di-GMP特异性磷酸二酯酶的协同调节。本文对黄单胞菌属中十五株具有完整基因组序列的菌株中含有这三类结构域的蛋白进行了包括分布规律、进化树、COG及GO分析在内的生物信息学分析,揭示了GG(D/E)EF、EAL与HD-GYP结构域蛋白在黄单胞菌属中的进化差异及其与侵染对象的关联性;研究结果也表明这些结构域蛋白主要为信号转导蛋白,参与基因转录和细胞运动。这些结果为构建c-di-GMP介导的调控网络和寻找新的控制黄单胞菌的药物靶标奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 黄单胞菌 第二信使信号分子 c-di-gmp 二鸟苷酸环化酶 磷酸二酯酶 生物信息学
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外源性c-di-GMP影响口腔变形链球菌生物膜形成
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作者 康佳 付甜 +1 位作者 王一席 胡红梅 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期3028-3030,共3页
目的研究外源性环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)对口腔变形链球菌形成生物膜能力的影响。方法在含变形链球菌菌液的BHI肉汤培养基中分别加入一定量的外源性c-di-GMP(实验组)和生理盐水(对照组),经过一段时间的培养,比较两组变形链球菌数量及生... 目的研究外源性环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)对口腔变形链球菌形成生物膜能力的影响。方法在含变形链球菌菌液的BHI肉汤培养基中分别加入一定量的外源性c-di-GMP(实验组)和生理盐水(对照组),经过一段时间的培养,比较两组变形链球菌数量及生长情况,并对比不同浓度c-di-GMP对变形链球菌生物膜形成能力的影响。结果实验组对于变形链球菌生物膜的形成有影响并且具有效量关系。结论c-di-GMP对于变异链球菌的生物膜形成能力有明显抑制作用。 展开更多
关键词 环鸟苷二磷酸(c-di-gmp) 变形链球菌 生物膜
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氨基酸代谢变化引起的c-di-GMP稳态波动对大肠杆菌致病过程中菌毛合成的影响
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作者 孙敏 高兴 +4 位作者 任方勋 白乾坤 泮欣铭 马家乐 姚火春 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期113-123,共11页
[目的]细菌能够合成多种信号分子,调控自身在各种营养状态或应激条件下的生长代谢及毒力发挥。第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)在致病菌感应氨基酸饥饿(AAS)的过程中发挥重要作用,调控多种生理活动并显著影响其毒力发挥。本文旨在研究c-di... [目的]细菌能够合成多种信号分子,调控自身在各种营养状态或应激条件下的生长代谢及毒力发挥。第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)在致病菌感应氨基酸饥饿(AAS)的过程中发挥重要作用,调控多种生理活动并显著影响其毒力发挥。本文旨在研究c-di-GMP在尿道致病性大肠杆菌(UPEC)尿道定殖及毒力发挥过程中的作用。[方法]采用尿液培养UPEC,结合转座子突变技术筛选氨基酸代谢相关生长缺陷基因,采用基因敲除技术、特定氨基酸回补及小鼠尿道感染模型验证尿液生长及尿道定殖缺陷表型;借助表达谱数据、RT-qPCR及β-半乳糖苷酶活性测定法筛选并鉴定受氨基酸饥饿影响的毒力基因及c-di-GMP相关基因;通过多基因敲除及回补技术、凝胶阻滞试验(EMSA)鉴定c-di-GMP对毒力基因的调控机制。[结果]精氨酸、异亮氨酸及蛋氨酸代谢失衡引起UPEC在尿液中生长缺陷,尿道定殖能力显著下降及局部c-di-GMP稳态破坏;YciR及YcgF相关c-di-GMP体系失衡显著下调菌毛基因簇表达;YciR通过调节子MlrA直接调控P菌毛基因簇表达;YcgF通过下游配对调节子YcgE直接调控P菌毛基因簇表达。[结论]c-di-GMP感应尿道定殖过程中的特定氨基酸饥饿,调控菌毛等黏附因子合成,促进UPEC完整毒力发挥。 展开更多
关键词 第二信使环二鸟苷酸 尿道致病性大肠杆菌 P菌毛 I型菌毛 氨基酸代谢
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The global regulation of c-di-GMP and cAMP in bacteria
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作者 Cong Liu Rui Shi +5 位作者 Marcus S.Jensen Jingrong Zhu Jiawen Liu Xiaobo Liu Di Sun Weijie Liu 《mLife》 CSCD 2024年第1期42-56,共15页
Nucleotide second messengers are highly versatile signaling molecules that regulate a variety of key biological processes in bacteria.The best-studied examples are cyclic AMP(cAMP)and bis-(3'-5')-cyclic dimeri... Nucleotide second messengers are highly versatile signaling molecules that regulate a variety of key biological processes in bacteria.The best-studied examples are cyclic AMP(cAMP)and bis-(3'-5')-cyclic dimeric guanosine monophosphate(c-di-GMP),which both act as global regulators.Global regulatory frameworks of c-di-GMP and cAMP in bacteria show several parallels but also significant variances.In this review,we llustrate the global regulatory models of the two nucleotide second messengers,compare the different regulatory frameworks between c-di-GMP and cAMP,and discuss the mechanisms and physiological significance of cross-regulation between c-di-GMP and cAMP.c-di-GMP responds to numerous signals de-pendent on a great number of metabolic enzymes,and it regulates various signal transduction pathways through its huge number of effectors with varying activities.In contrast,due to the limited quantity,the cAMP metabolic enzymes and its major effector are regulated at different levels by diverse signals.cAMP performs its global regulatory function primarily by controlling the transcription of a large number of genes via cAMP receptor protein(CRP)in most bacteria.This review can help us understand how bacteria use the two typical nucleotide second messengers to effectively coordinate and integrate various physiological processes,providing theoretical guidelines for future research. 展开更多
关键词 BACTERIA CAMP c-di-gmp CROSS-REGULATION CRP
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铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA2072的生物学分析 被引量:1
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作者 席那仁 海娥 +2 位作者 张小敏 郭嘉义 黄卫东 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2113-2126,共14页
【背景】铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一。广泛存在于细菌中的第二信使分子环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)对细菌生理生化功能具有重要的调节作用。铜绿假单胞菌PAO1中存在参... 【背景】铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一。广泛存在于细菌中的第二信使分子环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)对细菌生理生化功能具有重要的调节作用。铜绿假单胞菌PAO1中存在参与c-di-GMP代谢的基因PA2072。【目的】探讨铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA2072的生物学功能。【方法】运用PCR及分子克隆技术构建PA2072基因及各结构域的自杀载体,运用基因敲除方法获取PA2072基因的3个突变株;利用泳动性(swimming)、蜂群运动(swarming)、蹭行运动(twitching)和生物膜定量实验对细菌进行初步的表型分析,进一步通过刚果红染色法对菌株进行分析。【结果】成功构建PA2072基因敲除突变菌株及回补菌株;生物膜定量结果发现基因PA2072的敲除会影响细菌生物膜的形成,PA2072蛋白的不同结构域对生物膜的合成也起到了重要作用;细菌运动能力检测中发现PA2072相关基因的敲除对细菌运动能力也有一定影响。刚果红平板检测结果显示,与野生型PAO1菌株相比,PA2072敲除菌株菌苔呈红色,提示其胞内c-di-GMP含量升高。【结论】基因PA2072的敲除影响了铜绿假单胞菌胞的表型,可能由于铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP水平变化引起,该结果为进一步研究基因PA2072的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌PAO1 环鸟苷二磷酸 PA2072敲除突变菌株
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检测大肠杆菌内c-di-GMP水平的双荧光素报告质粒的构建及应用
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作者 张贝贝 胡剑刚 +8 位作者 王欣宇 郭伟奇 姚澜 王芷洋 王帝 祁晶晶 田明星 鲍衍清 王少辉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4814-4822,共9页
细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调... 细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调控方式、荧光报告基因等设计引物,通过重叠聚合酶链反应(overlap polymerase chain reaction,overlap PCR)和同源重组酶构成基于核糖开关的双荧光素报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP(pACVcE),然后构建c-di-GMP代谢基因过表达菌株和缺失菌株,利用pACVcE检测大肠杆菌内c-di-GMP水平。【结果】Overlap PCR扩增产物与目的靶序列一致,测序结果证明pACVcE序列正确。表达c-di-GMP合成酶DgcZ的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著升高,而表达c-di-GMP降解酶PdeK的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著降低。禽致病性大肠杆菌的胞内c-di-GMP水平检测发现c-di-GMP降解酶基因pdeK缺失后胞内的c-di-GMP水平显著升高。【结论】本研究构建了基于核糖开关的双荧光素报告质粒,可方便、快速检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平。 展开更多
关键词 环二鸟苷酸 核糖开关 双荧光素报告质粒 检测
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SadC合成的c-di-GMP信号通过PilZ和FlgZ调节铜绿假单胞菌的泳动能力
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作者 董友明 林心铭 +6 位作者 付春情 王倩琪 吴玲娟 卢冰倩 林羲 包其郁 李科伟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1115-1127,共13页
【目的】探究铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)SadC合成的环二鸟苷酸(cyclic di-GMP,c-di-GMP)信号与PilZ结构域受体间的信号传递关系,分析鉴定出特定PilZ结构域受体的调控功能和机制。【方... 【目的】探究铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)SadC合成的环二鸟苷酸(cyclic di-GMP,c-di-GMP)信号与PilZ结构域受体间的信号传递关系,分析鉴定出特定PilZ结构域受体的调控功能和机制。【方法】SadC突变株和过表达菌株的构建及泳动能力分析;SadC过表达背景下,PilZ结构域受体突变各菌株的泳动表型分析和筛选;基因敲除和过表达解析筛选出的PilZ结构域受体功能;定点突变和遗传互补检测筛选出的PilZ结构域受体是否参与SadC合成c-di-GMP对泳动能力的调控。【结果】SadC通过影响鞭毛功能而非鞭毛形成抑制铜绿假单胞菌的泳动能力;PilZ结构域受体突变菌株筛选发现PilZ、FlgZ这2个受体参与了SadC介导的泳动能力抑制;功能分析发现ΔpilZ或ΔflgZ的泳动能力相比野生型PA14显著增强,而过表达PilZ或FlgZ则抑制了泳动能力;定点突变和回补实验发现PilZ第10位和FlgZ第140位氨基酸R对其介导SadC负调控泳动能力至关重要,多序列比对分析表明这些位点是其保守的c-di-GMP结合位点。【结论】SadC合成的c-di-GMP信号通过PilZ和FlgZ调控铜绿假单胞菌的泳动能力。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 SADC 环二鸟苷酸 PilZ结构域蛋白 PilZ FlgZ 泳动能力
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STM2503调控鼠伤寒沙门菌的生物被膜形成和压力适应性
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作者 王南威 李莉莉 +6 位作者 陈凯风 周洲平 潘鹏 关晋 徐成刚 廖明 张建民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第16期3294-3304,共11页
【目的】通过揭示c-di-GMP通路基因STM2503调控鼠伤寒沙门菌生物被膜形成,进而影响其环境应激能力的机制,以期挖掘调控鼠伤寒沙门菌压力适应性的关键因子,为防控策略的制定提供理论依据。【方法】以λ-Red同源重组方法构建STM2503缺失株... 【目的】通过揭示c-di-GMP通路基因STM2503调控鼠伤寒沙门菌生物被膜形成,进而影响其环境应激能力的机制,以期挖掘调控鼠伤寒沙门菌压力适应性的关键因子,为防控策略的制定提供理论依据。【方法】以λ-Red同源重组方法构建STM2503缺失株,并利用质粒PBAD表达STM2503来构建相应的基因回补株。然后通过检测不同STM2503表达水平菌株中信号分子c-di-GMP的含量揭示STM2503对菌株胞内c-di-GMP水平的影响。接下来,利用细菌运动性检测、结晶紫染色等试验检测了STM2503对菌株运动性和生物被膜形成能力的影响,并利用实时荧光定量PCR从基因层面揭示其对菌株运动性和生物被膜形成的调控机制。最后,通过抗生素处理、氧化应激、消毒剂应激等试验探究了STM2503对鼠伤寒沙门菌压力适应性的影响。【结果】与野生株(WT269)相比,STM2503的缺失使菌株胞内c-di-GMP含量升高了37.51%(P<0.001),且不影响菌株的正常生长。另外,STM2503的缺失提高了菌株各胞外基质合成基因的表达水平,使缺失株胞外多糖、胞外DNA和胞外蛋白质含量分别增加了10.30%(P<0.01)、33.59%(P<0.001)和27.60%(P<0.01),最终使菌株的生物被膜形成能力显著增强了1.63倍(P<0.01)。并且,269ΔSTM2503通过降低鞭毛合成相关基因fliA与flhC的表达使其在6 h的运动直径较野生株相比下降了17.22%(P<0.01)。这些变化最终导致269ΔSTM2503菌株对头孢噻肟、头孢吡肟、阿莫西林等β-内酰胺类抗生素的敏感性降低1—3倍,且在氧胁迫和SDS消毒剂胁迫下表现出了更强的适应能力。【结论】STM2503参与信号分子c-di-GMP的降解,并通过抑制胞外基质的合成降低鼠伤寒沙门菌的生物被膜形成能力,通过上调鞭毛合成基因的表达增强菌株的运动性,进而降低菌株的耐药性和环境压力适应能力,本研究为鼠伤寒沙门菌关键防控靶点的挖掘提供了理论基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 c-di-gmp STM2503 生物被膜 运动性
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ToxR负调控副溶血弧菌中c-di-GMP的合成
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作者 张苗苗 薛星帆 +6 位作者 孙君芳 吴齐敏 李雪 周冬生 倪斌 陆仁飞 张义全 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4719-4730,共12页
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是世界范围内引起海产品相关食物中毒的主要致病菌,具有很强的生物膜形成能力。ToxR是一种膜结合调控蛋白,对副溶血弧菌生物膜形成具有一定的调控作用,但具体机制尚未见报道。c-di-GMP是一种普遍存... 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是世界范围内引起海产品相关食物中毒的主要致病菌,具有很强的生物膜形成能力。ToxR是一种膜结合调控蛋白,对副溶血弧菌生物膜形成具有一定的调控作用,但具体机制尚未见报道。c-di-GMP是一种普遍存在于细菌中重要的第二信使,参与调控细菌的多种生物学行为包括生物膜的形成。本文探究ToxR对副溶血弧菌中c-di-GMP代谢的调控作用。利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定副溶血弧菌野生株(wild-type,WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中c-di-GMP水平的差异。挑选c-di-GMP代谢相关基因scrA、scrG和vpa0198为进一步研究的靶标,采用实时定量qPCR实验检测靶基因在WT和ΔtoxR中的转录水平差异;将靶基因调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒中无启动子的β半乳糖苷酶基因上游,采用lacZ报告基因融合实验进一步研究ToxR对靶基因的转录调控关系;将重组质粒分别导入含有pBAD33或pBAD33-toxR的EC100λpir中,采用lacZ报告基因融合实验研究ToxR是否能在异体宿主中调控靶基因的表达;PCR扩增靶基因上游调控区DNA序列,并纯化His-ToxR蛋白,用凝胶阻滞实验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)研究His-ToxR与靶基因启动子区DNA序列是否具有结合作用。ELISA结果显示ΔtoxR中c-di-GMP含量显著性高于WT中的,说明ToxR抑制c-di-GMP的产生;实时定量qPCR结果表明WT中scrA、scrG和vpa0198的转录水平显著性高于ΔtoxR中的,表明ToxR抑制它们的转录;lacZ报告基因融合实验结果表明ToxR可抑制副溶血弧菌和EC100λpir中scrA、scrG和vpa0198的启动子区活性;EMSA实验显示His-ToxR能特异性地结合到scrA和scrG的上游调控区DNA序列上,而对vpa0198的上游调控区DNA序列无结合作用。综上所述,ToxR通过直接调控相关酶蛋白基因的转录来抑制副溶血弧菌内c-di-GMP的合成,从而有助于精确调控生物膜形成等细菌行为。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 转录调控 ToxR c-di-gmp
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