金丝桃苷通过miR-155/c-MYB通路抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及迁移作用

目的探讨金丝桃苷通过miR-155/c-MYB通路抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及迁移的作用。方法将人神经胶质瘤细胞系U251分为U251细胞组、紫衫醇组(300μmol/mL)、金丝桃苷低剂量组(300μmol/mL)和金丝桃苷高剂量组(600μmol/mL),每组设置6个平行孔,继续培养72 h。细胞培养结束后,采用CCK-8法测定细胞增殖水平,Transwell法评估细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及蛋白质印迹法测定miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平。结果与U251细胞组比较,紫衫醇组、金丝桃苷低、高剂量组吸光度(A)值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与紫衫醇组比较,金丝桃苷低剂量组A值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA蛋白表达水平升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),而金丝桃苷高剂量组A值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与金丝桃苷低剂量组比较,金丝桃苷高剂量组A值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金丝桃苷可降低胶质瘤U251细胞的活力、增殖和侵袭能力,并促进其凋亡,相关机制可能与金丝桃苷抑制miR-155、c-MYB表达进而抑制miR-155/c-MYB通路激活有关。

原癌基因c-erbB2和c-myb经丝裂原活化蛋白激酶和成熟促进因子途径调节卵母细胞的成熟

本研究探讨了原癌基因c-erbB2和c-myb对小鼠卵母细胞成熟的影响及其在调控卵母细胞成熟中与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)的上下游关系。c-erbB2反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)和c-mybASODN均呈剂量依赖方式抑制卵母细胞的生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)率和第一极体(first polar body,PB1)排放率,并显著延迟其成熟时间。小鼠卵母细胞显微注射重组人c-erbB2蛋白和c-myb蛋白后,培养6h其GVBD率分别比对照组上升了23.1%(P<0.05)和32.2%(P<0.05),培养12h其PB1排放率分别比对照组上升了17.3%(P<0.05)和23.5%(P<0.05)。RT-PCR结果显示,小鼠卵母细胞中存在c-erbB2mRNA和c-mybmRNA表达;c-erbB2ASODN能明显抑制卵母细胞中c-erbB2mRNA和c-mybmRNA的表达,c-mybASODN能明显抑制卵母细胞中c-mybmRNA的表达,对c-erbB2mRNA无明显影响;MAPK抑制剂PD98059以及MPF抑制剂roscovitine在抑制卵母细胞成熟的同时,均能阻断显微注射重组人c-erbB2蛋白和重组人c-myb蛋白对卵母细胞成熟的促进作用,但对卵母细胞中c-erbB2mRNA和c-mybmRNA表达无明显影响。Westernblot结果显示,c-erbB2ASODN、c-mybASODN、PD98059、roscovitine均使卵母细胞中MAPK磷酸化水平和cyclinB1含量下降。结果提示,原癌基因c-erbB2、c-myb在卵母细胞成熟中起重要作用,可能是调控卵母细胞成熟中关键蛋白激酶如MAPK、MPF的上游激活物。

c-myb对大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的影响

本文观察了反义ｃ－ｍｙｂＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ。产生的影响，并探讨了与二了酰ｃＡＭＰ和ｖｅｒａｐａｍｉｌ的关系。结果发现，反义０．ｍｙｂＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和民的产生，同时使ｃ．ｍｙｂ蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降：而无义ｔａｔＯＤＮ没有相应的作用。当１０４ｍｏｌｌＬ二丁酰ｃＡＭＰ与反义ｃ．ｍｙｂＯＤＮ共同作用时能明显逆转反义Ｃ．ｍｙｂＯＤＮ对产生和ｃ．ｍｙｂ表达的抑制作用。而１０‘ｍｏｌｌＬｖｅｒａｐｍｉｌ与反义０．ｍｙｂＯＤＮ共同作用时，对反义０．ｍｙｂＯＤＮ对产生和０．ｍｙｂ表达的抑制作用具有协同效应。表明，０．ｍｙｂ与黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和产生密切相关；ｃＡＭＰ和Ｃａ２”能通过调节ｃ。

Mda-7/IL-24与C-myb在Burkitt淋巴瘤中的表达及其相关性研究

目的深入探讨Burkitt淋巴瘤患者瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb的表达水平、相关性及其临床意义。方法收集65例Burkitt淋巴瘤患者的瘤组织及33例正常淋巴结组织;通过免疫组化及Western blot技术检测各组织中Mda-7/IL-24与C-myb蛋白的表达水平,并对Mda-7/IL-24与C-myb表达水平进行相关性分析;收集患者临床资料,分析瘤组织Mda-7/IL-24及C-myb蛋白表达水平与患者年龄、性别、临床分期、是否骨髓浸润、Ecog评分及IPI指数之间的关系;分析瘤组织Mda-7/IL-24及C-myb蛋白表达水平与患者生存期之间的关系,并制作生存曲线。结果与正常淋巴结组织相比,Burkitt淋巴瘤组织中Mda-7/IL-24的表达水平明显降低,而C-myb的表达水平则明显增高;65例Burkitt淋巴瘤患者瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb蛋白表达水平呈明显的负相关(r=-0.474 9);瘤组织低表达Mda-7/IL-24、高表达C-myb的患者其临床分期晚、易骨髓转移、瘤细胞增殖活性强、IPI积分较高,同时患者生存期较短(P<0.05)。结论 Burkitt淋巴瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb的表达水平呈明显负相关,低表达Mda-7/IL-24或高表达C-myb是Burkitt淋巴瘤患者临床预后较差的指标。

大鼠动情周期及妊娠期卵巢c-myb表达的变化

观察大鼠卵巢于不同的功能阶段时c myb表达的变化以及与血清E2 和P含量变化的相关关系。结果 :未成年大鼠用激素促卵泡发育至窦前期时卵巢中未发现有c myb的表达 ,促卵泡发育至排卵前期时卵巢的间质腺和基质中出现c myb染色阳性颗粒 ,形成的早期黄体化卵巢在黄体细胞和基质中有表达且表达的范围和强度升高 ,而形成的晚期黄体化卵巢c myb表达下降 ,这种变化与血清E2 和P含量的变化呈明显的正相关关系 ;成年大鼠c myb的表达范围和表达强度于动情前期和妊娠期卵巢较大 ,动情期和动情间期卵巢较低 ,这种变化也与血清E2 和P含量的变化呈明显的正相关关系。提示 ,c

反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌黏膜组织中c-myb的表达

目的探讨反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌黏膜组织中原癌基因c-myb mRNA水平的表达及意义。方法经胃镜取材,采用荧光定量RT-PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌组织中c-myb基因mRNA水平的表达。结果 c-myb mRNA在正常对照和反流性食管炎组食管黏膜中呈低表达(1±0.13,1.207±0.1),在Barrett食管与食管腺癌组织中呈明显的高表达(1.389±0.1;2.364±0.12),且从正常食管黏膜→反流性食管炎→Barrett食管→食管腺癌的发生、发展过程中c-myb mRNA的表达呈现渐进性增强。结论 c-myb基因的异常表达与反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌的发生、发展密切相关,c-myb mRNA的表达水平可用作监测Barrett食管和食管腺癌早期发生及干预治疗措施实施的有用指标。

原癌基因c-erbB_2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨原癌基因c-erbB2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法:建立小鼠卵 母细胞体外培养模型,用不同浓度反义c-erbB2寡脱氧核苷酸(c-erbB2ASODN)和反义c-myb寡脱氧 核苷酸(c-myb ASODN)分别与未成熟卵母细胞共孵育,观察c-erbB2ASODN和c-myb ASODN对 卵母细胞体外成熟的影响。结果:c-erbB2ASODN和c-myb ASODN均能呈剂量依赖方式抑制24h 卵母细胞的GVBD率和PB1排出率,并显著延迟其成熟的时间,而无义tat寡脱氧核苷酸则无此 作用。结论:原癌基因c-erbB2和c-myb均在卵母细胞成熟过程中起着重要的作用。

c-myb和bcl-2蛋白在C6脑胶质瘤中的表达及其意义

为探讨c-myb和bcl-2基因在C6脑胶质瘤细胞中的表达及其作用,作者采用c－myb反义硫代寡核苷酸（AON）进行裸鼠的体内试验。在裸鼠接种C6脑胶质瘤细胞株后10天，随机将动物分成正义治疗组(c－myb SON组)、反义治疗组(c－myb AON组)和对照组，每组12只。分别于治疗后第4、8、12、16天各处死动物3只，切取脑胶质瘤标本，用S－P免疫组化法观察c－myb和bcl－2蛋白的表达情况。结果：c－myb AON组c－myb蛋白和bcl－2蛋白阳性表达率与c－myb SON组和对照组比较，均有显著性差异（P<0.05）。从而提示c－myb蛋白和bcl－2蛋白可能与C6脑胶质瘤的发生、发展有关。

c-myc与c-myb基因在白血病中的研究进展

引言c-myc与c-myb是近年来研究最为广泛的两个癌基因,他们的异常表达与多种肿瘤细胞的增殖与分化相关,特别是在白血病中发现c-myc和c-myb均有高表达并与白血病的发生、发展及预后有关。1 c-myc和c-myb基因的结构和功能人类c-myc原癌基因定位于8q24区。

c-myb在人脑胶质瘤中阳性表达的意义及相关因素分析

目的 探讨 c- myb癌基因在人脑活体胶质瘤中的作用和地位。方法 用免疫组化法检测 6 1例活体胶质瘤标本以及正常和胎儿脑组织中 c- myb癌基因的表达水平 ,并分析其表达与胶质瘤恶性级别和其它临床因素的相关性。结果 c- myb癌基因在恶性胶质瘤中有高水平表达 ,其表达水平与肿瘤级别和年龄有关 (P<0 .0 5 ) ,与性别、病程无关 (P>0 .0 5 )。 c- m yb的表达水平在 、 级明显高于 级 (P<0 .0 5 ) , 、 级之间无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,在 级毛发细胞型星形细胞胶质瘤表达极低 ,在正常胶质细胞内未见表达 ,在胎儿脑组织内有高水平表达。结论 c- myb在胶质瘤的发生、发展过程中具有重要意义 ,可作为判断胶质瘤的恶性程度的一项生化指标。

c-myb对小鼠体外受精的影响及作用机制的分析

目的 :本文采用免疫组织化学方法观察Myb转录因子家族成员c myb蛋白在小鼠精子和卵母细胞 卵丘复合物中的分布。方法 :建立小鼠体外受精模型 ,用不同浓度反义c myb寡脱氧核苷酸 (c mybASODNs)与精子、卵母 卵丘细胞复合物共孵育观察其对小鼠体外受精率的影响 ,并进一步探讨c mybASODNs对小鼠体外受精率的影响机制。结果 :在颗粒细胞胞核和精子的头部有c myb蛋白分布。c mybASODNs呈剂量依赖性抑制小鼠体外受精率 (小鼠体外受精率在空白组、低、中、高浓度c mybASODNs组、无义tatODNs组分别为 34.97%、30 .89%、2 0 .14 %、16 .6 8%、34.4 7% )。GABA、P4、Verapamil和dbcAMP与c mybASODNs共同作用时 ,GABA、P4、dbcAMP三者均逆转c mybASODNs对受精的抑制作用 ,(小鼠体外受精率在空白组、中浓度c mybASODNs组、GABA、P4、Verapamil和dbcAMP组、分别为 34.81%、2 2 .96 %、4 0 .83%、39.12 %、7.4 6 3%、4 0 .6 1% ) ,GABA、P4、和dbcAMP三者对精子中的c myb蛋白免疫组化染色阳性的细胞百分率无明显影响。Verapamil能抑制小鼠体外受精 ,并协同c mybASODNs的抑制作用 ,且使精子中的c myb蛋白免疫组化染色阳性的细胞百分率明显下降。结论 :c mybA SODNs与受精密切相关 ,Verapamila可能通过调节精子中的c

阳离子脂质体介导的反义c-myb寡核苷酸对脑胶质瘤生长的抑制作用研究

目的 观察阳离子脂质体 lipofect AMINE介导的反义 c- myb寡核苷酸 (L ipo AON)对肿瘤生长的影响。方法 取雄性 Wistar大鼠 48只 ,行脑内 C6胶质瘤接种 ,术后 6天 ,将携瘤大鼠随机分成 L ipo AON组、反义 c- myb寡核苷酸组 (AON组 )、阳离子脂质体 lipofect AMINE组 (L ipo组 )和生理盐水对照组 (NS组 ) ,每组各 12只。经大鼠右股静脉给药 ,间隔 1天后 ,再次用同法经大鼠左股静脉等量给药。给药后严密观察各组大鼠饮食、四肢活动及体重变化情况 ,并于给药后第 4天和第 10天每组分别处死 6只大鼠 ,进行肿瘤的生长情况和大体形态学观察。结果 L ipo AON组在静脉给药期间及停药后的短期内其肿瘤生长被明显抑制 ,c- m yb表达下调 ;而 AON组、L ipo组与 NS组相比 ,其肿瘤生长未见抑制现象 ,c- myb表达亦未见下调。但随着停药时间的延长 ,L ipo AON对肿瘤的抑制作用下降。结论 1阳离子脂质体 L ipofect AMINE作为 c- m yb AON转移载体 ,使水溶性 c- myb AON容易透过 BBTB进入瘤内发挥治疗作用 ,且具有操作简单、安全、转染率高等特点 ;2 L ipo AON对 C6胶质瘤生长有明显抑制作用 ,用反义技术抑制 c- myb的表达在胶质瘤的治疗中具有研究前景 ;3 L ipo AON对胶质瘤生长的抑制作用随时间延长而下降 。

C-myb在宫颈癌组织中的表达及意义

目的研究C-myb在宫颈癌组织中的表达,探讨其在宫颈癌发病机制中的意义。方法选择56例因宫颈浸润癌行扩大子宫全切加盆腔淋巴结清扫、20例因子宫肌瘤行子宫全切及72例因宫颈上皮内瘤样病变行宫颈锥切或子宫全切的患者,年龄均在35岁以下,所有标本术后经HE方法染色诊断并分组,运用免疫组织化学方法(En vision法)检测患者宫颈组织中C-myb的表达。结果C-myb在宫颈浸润癌、CIN、和正常宫颈组织中主要表达在癌细胞、异型上皮细胞、正常上皮细胞的胞质内。在宫颈浸润癌,阳性表达率76.8%(43/56),与正常宫颈组间比较差异有显著性(P<0.05);CINlll/原位癌组与正常宫颈组间比较差异有显著性(P<0.05);C-myb在宫颈浸润癌病理分级Ⅲ级中表达阳性率94.1%,1级中表达阳性率50.0%,两组间比较差异有显著性(P<0.05)。结论C-myb参与肿瘤细胞的增殖分化调节,可作为判断宫颈癌的恶性行为的一项指标,以及早期宫颈癌诊断的辅助指标,对临床具有一定的指导意义。

c-myc、c-myb基因在白血病骨髓基质细胞中的表达及相关性研究

本研究检测分析c-myc、c-myb原癌基因在白血病细胞和骨髓基质细胞(BMSC)中的表达及其相关性。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术定量分析原癌基因c-myc、c-myb的表达水平,通过流式细胞术分析白血病细胞和BMSC的膜表面抗原,同时采用染色体显带技术分析细胞核型。结果表明:①c-myc、c-myb基因在白血病细胞及其BMSC中均有一定的表达,尤其是在染色体异常的白血病细胞中高表达,其均值分别为1.15±0.38和1.03±0.48,与对照组比较均具有统计学差异(P<0.05);在染色体异常的BMSC中其均值分别为2.08±0.82(P<0.05)和1.46±0.29(P<0.05);②在白血病细胞和BMSC中,c-myc mRNA、c-myb mRNA的表达水平均与血小板计数具有相关性;③在不同预后组中,c-myc mRNA、c-myb mRNA表达呈线性相关;④在白血病细胞及急性组BMSC中原癌基因c-myc、c-myb的表达存在正相关;⑤白血病细胞中c-myc的表达量分别与BMSC中c-myc、c-myb的表达量有相关性。结论:在白血病中降低c-myc或c-myb原癌基因的表达水平可能成为治疗白血病的一种治疗方案。

结肠癌组织中PUMA和C-myb表达及其临床病理意义

目的研究结肠癌及其癌旁组织中PUMA和C-myb表达水平及其临床病理意义。方法 54例结肠癌和30例癌旁组织手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,PUMA和C-myb染色方法为免疫组化法。结果结肠癌PUMA和C-myb表达阳性率及其评分明显高于癌旁组织(P<0.01)。PUMA和(或)C-myb表达阳性的癌旁组织呈中至重度不典型增生。无淋巴结转移、未侵犯浆膜层及临床分期A+B的病例PUMA和C-myb表达阳性率明显低于低分化、淋巴结转移和侵犯浆膜层及临床分期C+D的病例(P<0.05或P<0.01);高分化腺癌PUMA表达阳性率及其评分明显低于中分化或低分化腺癌(P<0.05);结肠癌中PUMA和C-myb表达水平呈正相关(r=0.59,P=0.000)。结论 PUMA和C-myb表达与结肠腺癌发生、临床生物学行为有密切关系。

转录调节因子c-Myb通过炎症因子Ccl2抑制乳腺癌肺转移的实验研究

目的:研究乳腺癌细胞中转录调节因子c-Myb的表达对肺转移的影响及其分子机制。方法:构建c-Myb高表达的4T1乳腺癌细胞株,种植小鼠构建乳腺癌动物模型,检测实验动物肺转移情况,通过荷瘤抑制试验检测肺转移抑制效果。提取组织进行荧光PCR检测相关炎症因子的表达。利用Medisapiens数据库的生物信息学资源,对c-Myb和Ccl2的表达与乳腺癌患者的预后进行分析。结果:高表达c-Myb的荷瘤小鼠肺部转移灶明显减少,其中炎症相关因子表达受限。由数据库分析得出,c-Myb高表达患者生存期得以延长。结论:乳腺癌中c-Myb的表达能够通过炎症因子Ccl2抑制肺转移从而延长患者生存期。

c-myb反义RNA重组载体构建及其包装细胞株的建立

【目的】构建反义c myb重组逆转录病毒载体并建立其包装细胞株。【方法】采用RT PCR方法 ,获取目的基因 ,通过TA克隆方法克隆入 pUC19,再反向亚克隆入逆转录病毒载体 pDOR中。采用DOTAP法将重组逆转录病毒载体转入包装细胞 ,以NIH3T3细胞为靶细胞测定产病毒滴度。【结果】序列测定结果与GenBank中序列一致。c myb基因片段已定向克隆入 pDOR。细胞转染表明 ,已形成稳定的包装细胞株PA317/pDOR myb ,产病毒滴度达 5 2× 10 4 ～ 9 5× 10 4 CFU/mL。【结论】成功构建了含有反义c myb的重组逆转录病毒质粒 。

miR-150通过调节c-Myb抑制人慢性髓系白血病细胞系K562增殖

目的探讨miR-150在人慢性髓系白血病细胞系K562中的功能和作用机制。方法以临床收集的慢性髓系白血病患者、和健康人外周血中的单个核细胞为实验材料;实时定量PCR检测miR-150和c-Myb mRNA的表达水平;使用miR-150模拟物转染K562细胞;通过CCK-8法检测K562细胞增殖;通过流式细胞计量术检测K562细胞周期;荧光素酶报告基因实验结合Western blot检测miR-150对其下游靶基因c-Myb的调控作用。结果慢性髓系白血病患者与健康人相比,miR-150表达降低,而c-Myb表达升高;过量表达miR-150可以抑制K562细胞的增殖(P<0.05),同时,阻滞K562细胞周期的运行;miR-150可以下调靶基因c-Myb的表达。结论miR-150在慢性髓系白血病中表达下调,其作用机制是通过抑制癌基因c-Myb的表达抑制白血病细胞的增殖。

血小板疾病中原癌基因c-myc、c-myb的研究进展

原癌基因c-myc和c-myb对造血系统有重要的调节作用。c-myc基因表达的变化与细胞增殖、分化状态有关,其表达产物在调节细胞生长、分化或恶性转化中发挥作用。c-myb参与转录,影响细胞增殖、分化、凋亡。近年来,随着分子生物学、分子免疫学、细胞生物学等相关技术的日趋成熟,原癌基因c-myc、c-myb在造血调控中的研究逐渐增多。研究发现,巨核-红系祖细胞的定向分化及血小板的异常与其表达水平有关。常见的血小板疾病见于血小板减少症、血小板增多症等,此类疾病的病因和发病机制尚未明了。本文就c-myc和c-myb基因的结构、功能及其在血小板疾病中的表达水平与意义作一综述。

原癌基因c-myb在体外孕酮诱导小鼠卵母细胞成熟中的作用

目的本文采用体外培养技术观察原癌基因c-myb对孕酮诱导的生发泡(GV)期小鼠裸卵体外成熟的影响。方法建立小鼠裸卵体外培养模型,用不同浓度反义c-myb寡脱氧核苷酸(c-myb ASODNs)与GV期小鼠裸卵共孵育观察其对孕酮诱导的小鼠裸卵体外成熟的影响并探讨其机制。结果在M199培养液中体外培养GV期小鼠裸卵24h,10μmol/L孕酮组与5μmol/L孕酮组比较有显著性差别(2hGVBD%P<0.05,8hPBⅠ%P<0.05),与20μmol/L孕酮组比较无显著性差别。16μmol/Lc-myb ASODNs能抑制孕酮(10μmol/L)诱导的小鼠裸卵体外成熟(2hGVBD%P<0.05,8hPBI%P<0.01)。1×10-4μmol/LdbcAMP、100μg/ml肝素钠可分别单独抑制孕酮诱导的GV期小鼠卵母细胞体外成熟(2hGVBD%均P<0.01,8hPBⅠ%均P<0.01),也可和反义c-myb ODN协同抑制孕酮诱导的卵母细胞体外成熟(2hGVBD%均P<0.01,8hPBI%均P<0.01)。结论孕酮、原癌基因c-myb和cAMP、Ca2+参与了GV期小鼠卵母细胞的体外成熟,孕酮、cAMP和Ca2+调控卵母细胞成熟的机理可能与原癌基因c-myb表达有关。