三种红鲤生长性状的杂种优势与遗传相关分析

对兴国红鲤、荷包红鲤、瓯江彩鲤及其双列杂交种(F1)在成鱼阶段的体重和10个形态性状的杂种优势和遗传相关分析发现:(1)兴国红鲤×荷包红鲤杂交,表现出显著的平均杂种优势和超亲优势;兴国红鲤×瓯江彩鲤杂交、荷包红鲤×瓯江彩鲤杂交的平均杂种优势不明显,也未表现出超越瓯江彩鲤亲本的超亲杂种优势;(2)体重与全长、体长之间加性相关显著(rA>0.9),但显性相关不显著;全长与体长、全长与尾柄长、体长与尾柄长的加性相关及显性相关均显著(rA>0.9;rD>0.9);全长、体长与体高、尾柄高间均呈显著负加性相关(rA<-0.9);体高与尾柄长呈显著负加性相关(rA=-0.896),体高与尾柄高呈显著正加性相关(rD=0.970)。

红鲤4群体间主要组织相容性复合体的差异

应用鱼类主要组织相容性复合体(MHC)基因来探讨鱼类种群间遗传结构,寻找分子遗传标记。根据已报道的鲤鱼MHCⅠ类基因序列,设计了一对特异性引物,从兴国红鲤、荷包红鲤、玻璃红鲤及瓯江彩鲤基因组DNA中扩增了编码MHCⅠ类分子α2链的基因片段,并进行克隆、测序。结果表明,(1)编码MHCⅠ类分子α2链的基因多态性较为丰富,234bp长度中有106个变异位点,多态位点百分率达45.3%;荷包红鲤的基因序列与其它3群体红鲤有显著差异;(2)由编码MHCⅠ类分子α2链的基因和氨基酸序列构建的系统进化树一致,兴国红鲤与瓯江彩鲤关系较近,属于同一进化支,玻璃红鲤和荷包红鲤分别属于另外两个不同的进化支,荷包红鲤是较为特化的群体;(3)多态性丰富的编码MHCⅠ类分子α2链的基因,适宜作为鲤鱼不同群体的分子遗传标记。

铜和阿特拉津对瓯江彩鲤的联合毒性研究

以瓯江彩鲤为试验材料,采用联合指数相加法,研究了铜和阿特拉津对瓯江彩鲤的急性毒性和联合毒性效应.实验结果表明:Cu2+的毒性大于阿特拉津毒性;Cu2+对瓯江彩鲤24、48、72和96 h的LC50分别为0.74、0.40、0.34和0.29 mg.L-1,阿特拉津对瓯江彩鲤24、48、72和96 h的LC50分别为68.16、52.14、48.33和42.37 mg.L-1.联合毒性实验结果表明,24、48、72、96 h的相加指数分别为2.17、1.35、1.59、2.08,Cu2+和阿特拉津共存时对瓯江彩鲤的毒性为协同作用.

中国红鲤四群体线粒体DNA遗传多样性、起源及分化

用13种限制性内切酶对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤及瓯江彩鲤4种红鲤的线粒体DNA(mtDNA)进行RFLP分析。共产生17种限制性态型,其中5种酶为限制性片段长度多态性(RFLPs),归结为5种单倍型;兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤和瓯江彩鲤的核苷酸多样性(π)分别为0.0087、0.0059、0.0094、0.0286,瓯江彩鲤的遗传多样性最为丰富;瓯江彩鲤起源于单倍型II为主的母系祖先,推算分化时间分别约在11.5万年、9.5万年前;玻璃红鲤和荷包红鲤起源于单倍型I为主的母系祖先,推算分化时间分别约为5～5.6万年、2万年前。

贵州稻田养殖瓯江彩鲤肌肉生化成分分析

本研究分析了稻田养殖瓯江彩鲤的肌肉生化成分,旨在了解瓯江彩鲤在贵州省稻田养殖条件下的营养特点。试验采用常规营养成分分析方法以及生化方法测定了稻田养殖瓯江彩鲤肌肉中营养及生化成分。结果表明:稻田养殖瓯江彩鲤肌肉中水分含量为74.66%,粗蛋白质含量为18.06%,粗脂肪含量为4.26%,灰分含量为1.65%。粗脂肪中中性脂比例为84.45%,极性脂比例为15.55%。肌肉中所测到的15种氨基酸总量为70.57%,其中7种必需氨基酸占29.61%,非必需氨基酸占40.96%,鲜味氨基酸占27.83%。肌肉中含有21种脂肪酸,其中饱和脂肪酸占25.08%,单不饱和脂肪酸占41.89%,多不饱和脂肪酸占33.03%。矿质元素中钙、铁、锌含量较高,分别为350.33、58.13和46.27mg/kg。由此可知:相对于原产地瓯江彩鲤,稻田养殖瓯江彩鲤肌肉中干物质、粗脂肪和灰分含量较高,氨基酸组成接近FAO/WHO的理想模式,此外,不饱和脂肪酸和铁、锌含量亦较高。

瓯江彩鲤早期发育中两种脂酶活性及间甲酚对其活性的影响

采用生化和静态急性毒性实验方法,研究了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)早期发育过程中脂蛋白脂酶和肝脂酶活性变化及间甲酚对它们活性的影响。结果显示,脂酶在瓯江彩鲤成熟卵和受精卵中均有活性,脂蛋白脂酶和肝脂酶的活性在胚胎发育过程中总体上呈上升趋势,原肠胚期酶活性最高;在水温(20±2)℃条件下,经7 mg/L、13 mg/L和19 mg/L的间甲酚暴露,脂酶活性随着间甲酚的浓度升高先升高后下降,19 mg/L浓度组中肝脂酶活性在胚胎期与其他组均有显著差异(P<0.05);与对照组相比,7 mg/L浓度组脂蛋白脂酶活性在胚胎和仔鱼期均有显著差异(P<0.05)。

瓯江彩鲤配套选育系繁殖性状的配合力测定与杂交优势分析

以瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)5个配套选育系进行双列杂交产生的F1的数据为分析对象,利用统计学和数量遗传学方法对6个繁殖性状(雄鱼性腺指数、雌鱼性腺指数、绝对繁殖力、相对繁殖力、受精率和孵化率)进行了配合力测定和杂交优势分析。结果发现,不同组合间的繁殖性状存在较大差异,但以"麻花"作母本的交配组合的平均雌鱼性腺指数和孵化率最高,以"全红"作母本的交配组合的绝对繁殖力和相对繁殖力最高,以"粉花"作母本的交配组合的所有繁殖性状参数均较差;雌鱼性腺指数与绝对繁殖力、相对繁殖力之间均存在显著的表型相关(r=0.411～0.847,P=0.01～0.04),绝对繁殖力与相对繁殖力之间存在极显著的表型相关(r=0.847,P<0.01);雌鱼性腺指数、绝对繁殖力和相对繁殖力3个性状检测到显著的特殊配合力;通过遗传效应预测,10个杂交组合均存在特殊配合力与杂交优势预测值,其雄鱼性腺指数、雌鱼性腺指数、绝对繁殖力、相对繁殖力和孵化率的杂交优势与特殊配合力均呈极显著相关(r=0.959～0.985,P<0.01)。本研究结果为瓯江彩鲤配套系育种提供了参考数据。

“全红”瓯江彩鲤不同世代间的遗传结构及遗传分化初步分析

利用ISSR技术对"全红"瓯江彩鲤(Cyprinus car pio var. color)4个世代群体的遗传结构及其分化进行了分析。筛选的15个ISSR引物从4个世代群体中分别扩增到120、118、101和110条扩增谱带,全部扩增片段长度在200—2500bp之间。根据扩增结果,利用POPGENE version 1.31进行分析,结果表明:4个群体的多态位点比例(P)为51.49%—67.80%,Shannon信息指数(Ho)为0.2176—0.2745之间,并随着世代的增加,选育群体的遗传多样性呈现下降趋势。有70%的遗传变异来自于群体内;结合遗传分化指数Gst、UPGMA聚类分析,证实"全红"瓯江彩鲤4个世代间存在一定程度的遗传分化,即任意两个群体间的遗传分化达到较大的水平(Gst均为0.1588—0.2766)。

5种体色瓯江彩鲤线粒体COII基因的序列差异和遗传标记研究

利用PCR方法扩增获得瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)线粒体DNA的COII基因,测定该基因片段序列.分析了瓯江彩鲤"全红"、"粉玉"、"粉花"、"麻花"和"大花"共20只个体的序列核苷酸位点差异和遗传多态性.结果表明,"大花"和"全红"遗传多样性最为丰富,"粉花"的遗传多样性相对贫乏.在长度为604 bp的基因片段中,共检测到9个多态性核苷酸位点(占1.49%),20只个体具有4种基因型,5种体色各自的平均核苷酸位点差异分别为0.38%、0.2%、0、0.13%和0.47%.UPGMA分子系统聚类树显示,"粉花"、"麻花"和"粉玉"的遗传关系接近;"全红"相对独立成一支,与其他4种体色瓯江彩鲤的遗传关系较远.COII基因可以作为区分三分支群体的遗传标记.

瓯江彩鲤形态特征的两性异形和雌性个体生育力

研究了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)体重和形态特征等19个参数的两性异形及雌性个体生育力。结果表明:除特定体长1龄雌性个体的体高和体重显著小于雄性个体外,其它17个性状不存在显著的雌雄两性异型。在2龄鱼中,雌性个体的头长、头宽、头高、眼后头长、眼间距、尾鳍长、体重和躯干重显著大于雄性个体,而体高却显著小于雄性个体,其它性状也不存在显著的雌雄两性异型;对这9个差异显著的形态特征变量进行主成分分析发现,第一和第二主成分共解释67.6%的变异,体高、体重和躯干重在第一主成分有较高的正负载系数(解释42.9%变异),头宽和眼间距在第二主成分有较高的正负载系数(解释24.7%变异)。以年龄、性别为固定效应的两因素方差分析(Two-way ANOVA)显示,1龄鱼第一主成分的分值显著小于2龄鱼,雌性第二主成分的分值显著大于雄性,其它主成分的年龄、性别间无显著差异,两因素交互作用对第一、第二主成分的分值亦无显著影响。雌性个体的生育力结果表明,瓯江彩鲤的怀卵数量与体长和体重回归关系显著。偏相关分析表明,雌性怀卵数量与体重呈显著的正相关(P<0.004),而与体长的相关不显著(P=0.502)。生育力选择是瓯江彩鲤个体大小和局部特征两性异形的主要原因之一。

瓯江彩鲤红、白两种体色遗传关系的初步研究

相对于鲤的普通体色（青灰色）来说，红和白体色均为隐性基因控制。为分析红与白体色之间的遗传关系，通过各自能稳定遗传的红和白体色类型的瓯江彩鲤进行杂交，对4个F1家系和8个F2家系的体色进行了统计与分析，结果发现：无论是正交还是反交F1个体全为红色，F2中红色与白色个体的分离比例为2．75～3．00：1，符合孟德尔遗传规律；红色由显性基因控制，白色由隐性基因控制。研究表明鱼类体色间的显隐性关系是相对的，会随配对体色的不同而表现出显性或隐性关系。

江西3种红鲤血清转铁蛋白遗传多态性

采用不连续聚丙烯酰胺垂直电泳(PAGE)和不连续十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺垂直电泳(SDS-PAGE)对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤的血清转铁蛋白(Tf)进行研究。PAGE电泳结果表明3种红鲤的Tf图谱具有3条带,荷包红鲤与玻璃红鲤Tf表型由Tfb、Tfc组成,兴国红鲤Tf表型由Tfa、Tfb、Tfc组成;其中玻璃红鲤的Tfb和Tf c条带表达量最高,荷包红鲤的Tfb、Tfc条带表达量最低。不连续SDS-PAGE电泳结果显示3种红鲤Tf的分子量相近,为68 k Da^80 k Da。结果表明转铁蛋白可用于3种红鲤亲缘关系的分析,它们的表达存在一定差异,但三种红鲤鱼的亲缘关系较近。

“粉玉”体色瓯江彩鲤MHC class Ⅱ B基因多态性及其与鱼体抗病力的关系

利用1对特异性引物DABF和DABR,分别从30尾感病和13尾抗病"粉玉"体色瓯江彩鲤(Cyprinus carpiovar.color)的cDNA中扩增出长度为624 bp的MHC classⅡB基因片段。对210个有效克隆进行测序,获得84个不同的编码序列,分属13个不同的等位基因,其中Cyca-DAB3*17和Cyca-DAB3*18为新发现的2个等位基因。核苷酸、氨基酸变异位点总数为267、130,变异率较高(42.79%、62.50%)。MHCⅡB基因片段包括第1 4个外显子,分别编码信号肽、β1和β2结构域及跨膜区。β1结构域的变异明显大于β2结构域,表现为在长度为276 bp的β1结构域中,核苷酸、氨基酸变异位点分别为150个(54.35%)和72个(78.26%);而长度为282 bp的β2结构域的核苷酸、氨基酸变异位点较少,分别为105个(37.23%)和54个(57.45%)。在β1结构域的24个抗原结合位点(PBR)上,有22个发生了变异。β1结构域的PBR、非抗原结合位点(non-PBR)及β2结构域的非同义碱基替换率(dN)与同义碱基替换率(dS)的比值ω分别为1.366、0.992、0.792,表明"粉玉"体色瓯江彩鲤MHC classⅡB基因的β1结构域在进化过程中受到正向选择作用。基因Cyca-DAB3*09在抗病群体中出现的频率(7.81%)显著高于感病群体(1.37%,P<0.05),新等位基因Cyca-DAB3*18(频率为3.13%)只出现在抗病群体中,基因Cyca-DAB1*08、Cyca-DAB3*08和Cyca-DAB3*17为感病群体所特有。研究结果为抗病"粉玉"体色瓯江彩鲤的选育奠定了基础。

瓯江彩鲤生殖周期内卵巢成熟系数及脂类、脂肪酸的变化

采用生化方法测定了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)卵巢不同发育时期的成熟系数及卵巢脂类、脂肪酸含量与组成,旨在了解瓯江彩鲤卵巢中脂类、脂肪酸的变化与卵巢发育及卵细胞成熟之间的关系。结果显示:卵巢中总脂含量在产卵前最高,占干重17.62%,产卵后显著下降到12.84%(P<0.05),到快速生长期又出现稍微下降,之后在越冬期开始呈上升趋势。4个时期中,C16∶0(软脂酸)、C18∶1n-9c(油酸)、C18∶2n-6c(亚油酸)均是卵巢中的主导脂肪酸,其含量显著高于其它脂肪酸(P<0.05);产卵前,卵巢中脂肪酸含量高,但种类较少,产卵后,卵巢中脂肪酸含量低,但种类较多;随卵巢的发育,不饱和脂肪酸的比例增加,从快速生长期到产卵前,C20∶4n-6(ARA)与C22∶6n-3(DHA)的含量逐渐上升,最高分别达11.63 mg/g、17.80 mg/g。结果表明:不同时期卵巢中脂类含量与成熟系数呈正相关,卵巢成熟需积累较多脂类物质。不饱和脂肪酸尤其是DHA、ARA对卵巢的成熟具有重要作用。

瓯江彩鲤早期发育过程中磷酸酶活性及间甲酚对其活性的影响

为探究环境雌激素对鱼类早期发育的毒性作用,采用生化和静态急性毒性试验方法,研究了瓯江彩鲤早期发育过程中碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性的变化及间甲酚对瓯江彩鲤早期发育中磷酸酶活性的影响。试验结果表明,瓯江彩鲤受精卵中磷酸酶活性均低于成熟卵,卵裂期酶活性最低;在水温(20±2)℃条件下,经7、13、19mg/L的间甲酚暴露,各质量浓度组磷酸酶活性表现为良好的剂量—效应和发育时期—效应关系。总体来说,瓯江彩鲤从原肠胚期开始,磷酸酶活性随着发育时间的延长和暴露质量浓度的增加而升高。

瓯江彩鲤体色相关基因Sox10的分离与表达分析

为探明鱼类体色变异的相关调控因子，采用RT-PCR及RACE技术获得总长度为2830bp的瓯江彩鲤（Cyprinus carpio var．color）SoxlO基因eDNA序列。该基因序列的5’和3’非编码区分别为9bp和1375bp，开放阅读框1446bp，编码481个氨基酸。氨基酸序列的系统发育分析表明，瓯江彩鲤Soxl0基因的氨基酸序列与部分物种的相似性在59％～94％。RT-PCR分析表明，该基因在瓯江彩鲤皮肤、肌肉、眼睛和鳔表达量最高，鳃和心表达量次之，肾和肝没有表达。荧光定量PCR分析显示，Soxl0基因在体色类型为白色（“粉玉”体色）的表达量显著地高于其他体色（P〈0．05），“粉花”黑色皮肤中的表达量最低，显著低其他体色类型（P〈O．05），而其他体色类型的表达差异不显著俨〉0．05）。结果发现，SoxlO基因在瓯江彩鲤的体色变异中发挥着调控作用。

Cu^(2+)、Cd^(2+)对瓯江彩鲤(C. carpio var. color)的急性毒性研究

以瓯江彩鲤为试验对象,采用静水换水法研究了Cu2+、Cd2+对瓯江彩鲤的急性毒性效应.其目的在于评价水环境中Cu2+和Cd2+对瓯江彩鲤的影响,为瓯江彩鲤的养殖水质风险评价提供一定的参考依据.结果表明,Cu2+、Cd2+对瓯江彩鲤均具有潜在的毒性效应,Cu2+对瓯江彩鲤24,48,72和96h的LC50分别为0.18,0.13,0.09和0.08mg.L-1,Cd2+对瓯江彩鲤24,48,72和96h的LC50分别为6.23,5.48,4.71和4.56mg.L-1;Cu2+和Cd2+对瓯江彩鲤的毒性顺序为Cu2+>Cd2+;瓯江彩鲤死亡率与Cu2+、Cd2+浓度均呈二次曲线关系,Cu2+、Cd2+对瓯江彩鲤的安全浓度分别为0.008、0.46mg.L-1.

瓯江彩鲤体色与生长的遗传—环境互作分析

对五种体色的瓯江彩鲤进行稻田、网箱和水泥池生长对比试验,探讨体色与生长的遗传-环境互作。结果表明:瓯江彩鲤的体色与生长率存在一定程度的互作效应,在稻田中,“全红”和“麻花”彩鲤的生长率显著地高于其它三种体色(P<0.05);在网箱中,“大花”、“粉玉”和“粉花”彩鲤的生长率显著地高于“全红”和“麻花”彩鲤(P<0.05);在池塘中,“大花”彩鲤的生长率极显著高于其它四种体色彩鲤(P<0.01),而其它四种体色彩鲤的生长性能不存在显著差异(P>0.05)。由此认为,“全红”和“麻花”彩鲤比较适合稻田饲养,“大花”、“粉玉”和“粉花”彩鲤比较适合网箱或池塘饲养。“粉花”彩鲤与环境的互作效应最大。

不同体色瓯江彩鲤生长率和存活率的差异研究

采用同池比较法 ,研究了一龄和二龄阶段“全红”、“大花”、“麻花”、“粉玉”及“粉花”五种不同体色瓯江彩鲤生长率和存活率的差异 ,结果表明 :( 1 )在一、二龄阶段 ,“麻花”存活率均最高 ,分别是 98.8%和96.3% ,但各体色彩鲤间差异不显著 ( P>0 .0 5) ;( 2 )不同体色彩鲤的生长率在不同阶段表现不同。一龄阶段 ,不同体色彩鲤的绝对增重率、瞬时增重率均依次为“大花”>“麻花”>“粉花”>“全红”>“粉玉”,差异极显著 ( P<0 .0 1 ) ;二龄阶段 ,不同体色彩鲤的绝对增重率、瞬时增重率均有显著差异 ( P<0 .0 5) ,但次序和I龄阶段不完全相同 ;( 3)一龄阶段 ,“大花”和“麻花”始终保持较快的增长 ;二龄阶段 ,则是“粉玉”和“大花”