单纯C3沉积的感染后肾小球肾炎与C3肾小球肾炎比较

目的:分析单纯C3沉积的感染后肾小球肾炎(C3-PIGN)的临床、病理和肾脏预后特点,并和C3肾小球肾炎(C3GN)进行比较。方法:回顾性分析2009年至2015行肾活检诊断为感染后肾小球肾炎(PIGN)和C3肾小球肾炎(C3GN)患者的临床、病理及随访资料,分别对C3-PIGN和免疫球蛋白合并补体沉积的感染后肾小球肾炎(Ig+C3-PIGN)、C3-PIGN和C3肾小球肾炎(C3GN)的患者进行比较。结果:(1)共纳入89例PIGN和52例C3GN,PIGN患者中43例(48.3%)为C3-PIGN,46例(51.7%)Ig+C3-PIGN。(2)与Ig+C3-PIGN相比,C3-PIGN肾病范围的蛋白尿和低白蛋白血症比例、新月体比例、肾小管萎缩间质纤维化(IFTA)的比例及系膜区和内皮下的电子致密物沉积的比例较低。(3)与C3GN比较,C3-PIGN患者未成年人比例更高,病程更短,尿红细胞计数更多,肾病范围蛋白尿比例和低白蛋白血症发生率更低;C3-PIGN患者球性硬化、IFTA、动脉透明变性、肾小球系膜区和内皮下电子致密物沉积的比例更低,而驼峰比例更高。C3-PIGN和C3GN患者肾小球均存在C3b、C3c和C3g沉积。(4)C3-PIGN患者的临床转归总体预后良好,39例患者随访>1年,其中32例患者1年内尿检转阴,7例患者尿检持续阳性>1年,其中5例患者尿检逐渐转阴,而2例患者尿检持续不缓解,提示可能存在补体旁路途径活化失衡,符合C3GN的诊断。结论:与Ig+C3-PIGN和C3GN相比,C3-PIGN的临床和组织形态学病变较轻,但是C3-PIGN和C3GN肾小球内有相同的补体片段沉积,提示两者肾小球局部的补体活化和裂解失活过程有相似之处。对C3-PIGN患者要进行长期追踪随访,以便发现这些以感染为诱因,临床诊断为"C3-PIGN",而实际是C3GN患者。

载脂蛋白C3基因多态性-482C>T与血浆脂质的关系

目的研究载脂蛋白C3基因上游调控区内-482C>T多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系。方法应用聚合酶链反应—限制片长多态性方法逐个鉴定每个个体的基因型,并测定其血浆脂质和载脂蛋白水平。结果-482T等位基因携带者具有较高的甘油三酯水平(P=0.044);同时该等位基因的携带者也具有较高的载脂蛋白C2水平(P=0.017)。结论载脂蛋白C3基因-482C>T位点和血浆甘油三酯以及其它几种脂蛋白密切相关。

嵌合锚定融合分子在T淋巴细胞的荧光表达及检测

目的构建含有由抗肿瘤相关糖蛋白72(anti-TAG72)单链抗体片段(single chain variable fragment,scFv)及CD28胞内区及跨膜区的融合基因anti-TAG72 scFv-CD28的重组绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28,并转染获得嵌合锚定T淋巴细胞。方法将anti-TAG72单链抗体及CD28胞内区及跨膜区基因的嵌合锚定融合分子克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C3,获得pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28表达载体。用卡那霉素筛选阳性克隆,经酶切和测序鉴定。将上述重组质粒pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28以脂质体法瞬时转染外周血单核细胞(PBMC),以获得嵌合锚定T淋巴细胞,用荧光显微镜检测嵌合分子anti-TAG72 scFv-CD28在PBMC中的表达,并检验嵌合锚定融合分子anti-TAG72 scFv-CD28的表达。结果重组绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28中anti-TAG72 scFv-CD28片段为1 002 bp,与已知的序列相符。酶切、测序结果表明,嵌合锚定融合分子基因片段anti-TAG72 scFv-CD28被正确插入pEGFP-C3载体;转染后anti-TAG72 scFv-CD28片段及绿色荧光物质表达于嵌合锚定T淋巴细胞胞膜表面及胞浆中,为绿色荧光显色。结论完成了绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28的构建,并成功在PBMC瞬时表达。

补体调节蛋白CD46在聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏小鼠肝损伤中的表达规律

[目的]研究补体调节蛋白CD46在聚肌胞苷酸(poly I∶C)加重三氯乙烯(TCE)致敏小鼠免疫性肝损伤中的表达和转录水平。[方法]6~8周的雌性BALB/c小鼠36只,随机分为空白对照组(4只),溶剂对照组(4只),TCE组(15只),TCE+poly I∶C组(13只),适应性喂养1周,于第1、4、7、10天作致敏处理,第17、19天作激发处理,TCE+poly I∶C组于末次激发前3 h腹腔注射100μL含50μg poly I∶C的液体。末次激发24 h后进行皮肤评分,48 h后取小鼠血清及肝脏,试剂盒检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),HE染色法观察小鼠肝脏病理,免疫组化法检测小鼠肝脏CD46和C3片段的表达,RT-PCR法检测肝脏CD46 m RNA表达水平。[结果]空白对照组与溶剂对照组小鼠背部皮肤无水肿与红斑,TCE处理组致敏率33.3%(5/15),TCE+poly I∶C处理组致敏率38.5%(5/13),差异无统计学意义。与溶剂对照组比较,TCE致敏组和TCE+poly I∶C致敏组肝脏系数升高,差异有统计学意义(P<0.01)。血清ALT和AST值在空白对照组、溶剂对照组以及未致敏组之间的差异均无统计学意义;与溶剂对照组相比,TCE致敏组和TCE+poly I∶C致敏组ALT和AST值升高,TCE+poly I∶C致敏组ALT和AST值相对TCE致敏组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。肝脏病理检测发现TCE致敏组小鼠细胞形态异常,部分区域出现细胞水肿,而TCE+poly I∶C致敏小鼠肝脏出现大面积的细胞空泡样变性,肝细胞浆疏松且伊红染色变浅。小鼠肝脏免疫组化显示TCE致敏组C3片段少量沉积,TCE+poly I∶C组C3片段大量沉积,空白对照组、溶剂对照组与未致敏组则未发现。小鼠肝脏免疫组化显示CD46在肝脏细胞膜部位表达,空白对照组、溶剂对照组以及未致敏组高表达,TCE致敏组表达减少,而TCE+poly I∶C致敏组CD46表达极少。肝脏CD46转录水平在空白对照组、溶剂对照组以及未致敏组之间差异均无统计学意义;与溶剂对照组相比,TCE致敏组和TCE+poly I∶C致敏组CD46转录水平下降,TCE+poly I∶C致敏组CD46的转录水平较TCE致敏组下降,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]CD46可能在poly I∶C加重TCE致敏小鼠免疫性肝损伤中发挥重要作用。