C3SP1-PGL3重组质粒的构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建含有SP1结合位点的C3启动子的荧光素酶重组质粒。通过瞬时转染证明导入载体的目的基因具有高效的启动子活性。方法:以SF级雄性大鼠的大脑总DNA为模板,根据Genbank中含有SP1结合位点的C3启动子的核苷酸序列设计引物,对大鼠C3基因的启动子进行特异性扩增。以原始质粒p GL3为载体,利用Gibson Assembly连接目的片段和酶切质粒进行分子重组,通过PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该重组质粒通过脂质体介导,转染PC12细胞。活体成像检测和双荧光素酶活性检测得重组质粒的萤火虫荧光素酶活性。结果:PCR鉴定、酶切鉴定表明表达载体p GL-3中插入了含有SP1结合位点的C3启动子基因片断,测序结果表明编码框正确。在PC12细胞中表达出高效的启动子活性。结论:获得能够在PC12细胞内高效表达萤火虫荧光素酶的重组质粒C3SP1-p GL3。

典型水污染区环境样品的去甲基化表观遗传毒性初步研究

摘要：从去甲基化能力方面研究地表水、地下水、土壤等环境样品综合表观遗传毒性。将pEGFP—C3质粒通过人工甲基化处理获得荧光蛋白基因启动子区处于高甲基化状态的c3质粒，并将其转染进人类HepG一2肝癌细胞株，随后以该改造细胞株（EGF—PHepG2）为主要工具载体，与样品提取液进行共培养，依据细胞绿色荧光强度来定量评价样品的去甲基化功能的强弱（简称EGFP方法）。同时通过电感耦合等离子体质谱法（ICP／MS）对样品提取液的成分进行扫描检测分析。结果表明，在9个测试样中，有7个显示出可以观察到的去甲基化表观遗传毒性，占测试样品的78％。其去甲基化表观遗传毒性当量介于0．065～0257m01·L。的5-Aza．CdR之间。在4个存在超标的土壤或底泥样品中，有3个被检测出具有可以观察到的去甲基化表观遗传毒性，环境样品表观遗传毒性检测结果也与环境分析结果具有基本一致的趋势。结果初步显示，部分环境样品去甲基化能力较强，具有不容忽视的表观遗传毒性。

Chitosan-DNA介导关节基因转移的体外研究

目的 :探索体外Chitosan对关节软骨细胞、滑膜细胞的转染。方法 :分离培养兔正常滑膜细胞、软骨细胞 ,使用荧光质粒 pEGFP -C3作为报道基因 ,制备Chitosan -DNA超微颗粒转染兔正常软骨细胞、滑膜细胞 ,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果 :Chitosan能将DNA带入胞内 ,该DNA超微颗粒随时间的延长可缓慢进入胞内 ,其包被的DNA也可以被缓慢释放 ,且对软骨细胞的转染能力强。结论 :Chitosan在体外可介导关节软骨细胞、滑膜细胞基因转移 ,为今后关节疾病非病毒基因转移的研究提供实验依据。