A Sensitive Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography Method for the Quantitative Determination of Milk Xanthine Oxidase Activity

A new reversed-phase high performance liquid chromatography method was developed to quantitate the activity of xanthine oxidase involved in milk fat globule membrane with xanthine as the substrate and the separation of product (uric acid). The increment of uric acid in the reaction system was used to calculate the total activity of XO. The optimized assay conditions, linearity of detection, recovery of uric acid and chromatogram were developed in text, indicating this method is simple, rapid and efficient. It is an alternative potential method for the determination of the activity of XO in milk.

高效液相色谱法测定菜用大豆鲜籽粒VC含量

为建立菜用大豆鲜籽粒VC含量的高效液相色谱测定方法,采用30 g/L偏磷酸溶液低温提取样品后,进行高效液相色谱分析,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm×5μm),流动相为1 g/L偏磷酸溶液∶甲醇=96∶4(V/V),流速0.8 mL/min,检测波长243 nm,柱温25℃,以保留时间定性,外标法定量。结果表明:VC质量浓度范围为2~40μg/mL时,其与峰面积呈良好的线性关系(R2=1.000),平均加标回收率为108.14%,相对标准偏差为1.70%。所建立的方法操作简便,灵敏度高,分离度好,结果准确,重复性也比较好,适用于测定菜用大豆鲜籽粒VC含量,为优质菜用大豆的选育和生产提供技术支持。

维生素C片含量测定的HPLC法及溶出度方法的研究

目的建立测定维生素C片含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法,并通过新建的维生素C片溶出度的测定方法提高其质量控制标准。方法HPLC测定法:色谱柱为菲罗门C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(92∶8),流速为0.8 mL·min^(−1),检测波长为243 nm,柱温为30℃,进样量为10μL;溶出度测定法:按照溶出度与释放度测定法(《中华人民共和国药典》2020年版四部附录0931第一法),以0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液1000 mL为溶剂,转速为50 r·min^(−1),20 min时取样。结果维生素C在20~140μg·m L^(-1)范围内与其峰面积线性关系良好,y=37487.239x−6860.622(r=0.99996),平均回收率为100.16%,RSD值为0.48%(n=9);其在水、0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液各1000 mL的溶出介质中的溶出曲线差异明显,选择0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液为溶出介质对5个企业的样品进行测定,均在10 min全部溶出并进入平台。结论所建立的方法使检测的准确性更高、专属性更强、重复性更好,具有可信、精准的优势,能更有效地对维生素C片进行质量控制。

高效液相色谱法测定莱芜鸡腿葱不同食用部位中维生素C含量的方法优化

本文采用高效液相色谱法测定莱芜鸡腿葱葱茎及葱叶中的维生素C(L-抗坏血酸)含量,并进行了方法优化研究。样品采用1.0%的草酸溶液作为提取液超声提取2次,经Kromasil C_(18)柱分离后,用紫外检测器在254 nm波长处检测,以保留时间定性,外标法定量。结果显示,维生素C质量浓度在2.0~100.0 mg·L^(-1)时的线性关系较好(R=0.9995),精密度试验的相对标准偏差为1.33%(n=6),加标回收率为94.9%~96.1%,方法检出限为2.0×10^(-3)g·kg^(-1)。该测试方法简便快速,能准确测定莱芜鸡腿葱葱茎及葱叶中维生素C含量。

PEAK IDENTIFICATION FROM INTERACTION INDEX IN REVERSED-PHASE HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

The interaction index c which was derived from the fundamental retention equationlogk’ =a + cC_B in reversed--phase high--performancc liquid chromatography (RP-HPLC) quan-titatively describes the difference in the interaction between solute--strong. solvent andsolute--weak solvent; it has shown to be a constant for a specific solute even when columnsystems with different C18 packings are used. The theoretical basis for peak identificationby using interaction index has been proposed, which was based on the a,c values on stan-dard C18 column by utilizing linear a-a plots on column pairs and the linear relationship be-tween parameters a and c for the structural related compounds. Through the establishmentof parameters a,c data based on the standard C18 column for a certain type of compounds,the retention of thesc compounds on various C18 columns can be predicted. Typical exam-ples have been given to verify the correctness of this method.

反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNA G+C mol%含量

目的:使用反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNAG+Cmol%含量。方法:以Escherichia coli DH5α为标准菌株,采用90%重蒸水10%甲醇为流动相,检测波长260nm,流速1ml.min-1,在VenusilM P C18柱上对四种碱基进行分离。结果:DNA碱基分离效果好,以外标法计算得到标准菌株DH5α的DNAG+Cmol%含量为50.3%,待测菌株ST307的DNAG+Cmol%含量为60.5%。结论:采用反向高效液相色谱法测定色盐杆菌的DNAG+Cmol%含量准确可靠。

茵陈蒿中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的确认及含量测定

目的 确认我国内地产茵陈蒿中存在芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷,并建立测定其含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法鉴定,色谱柱为Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为200~400 nm;采用超快液相色谱-三重四极杆飞行时间串联质谱(UFLC-Triple-Q-TOF-MS/MS)法鉴别,电喷雾电离负离子模式下采集数据,PeakView 1.6软件提取总离子流图;采用对照品比对,比较对照品溶液和供试品溶液色谱图中色谱峰的保留时间、紫外吸收光谱及总离子流图中相同保留时间分子离子峰的一级和二级质谱数据,鉴定茵陈蒿中的芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷;同时,采用HPLC法,于270 nm波长处测定35批茵陈蒿样品中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的含量。结果 对照品溶液和供试品溶液色谱图中相同保留时间色谱峰的紫外吸收光谱基本相同,总离子流图中相同保留时间分子离子峰的一级和二级质谱数据基本一致。芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷质量浓度在0.082 3~16.640μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=8);定量限和检测限分别为36.67 ng/mL和20 ng/mL;日内精密度、日间精密度、稳定性和重复性试验的RSD均小于4.10%(n=6);平均加样回收率为96.37%,RSD为1.40%(n=6)。35批茵陈蒿样品中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷含量在0.037~0.339 mg/g之间,其中产地为河南的平均含量最高(0.144 mg/g)。结论 确认了我国内地产茵陈蒿中存在黄酮二糖碳苷类成分芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷。所建立方法操作简单、重复性好,可用于茵陈蒿中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的含量测定。

pH值对水果中维生素C及有机酸含量测定的影响

本研究建立了高效液相色谱法测定水果中维生素C及有机酸含量的方法,研究了不同pH值条件下测定水果中维生素C及有机酸含量的变化情况,并分析了水果中有机酸含量与维生素C含量的关系。结果表明,在pH 2.5时,水果中维生素C和有机酸含量均为最高,有机酸含量与维生素C含量不成正比关系。

HPLC法同时测定金银花露中的维生素C和山梨酸

建立了高效液相色谱法同时测定金银花露中维生素C和山梨酸含量的方法,并进行了回收率实验。样品液体直接过0.22μm微孔滤膜过滤,采用C_(18)柱,流动相为甲醇+乙酸铵(5∶95),检测波长230mm,液相色谱洗脱的方法分离测定。结果表明,该法简便,测定结果准确,可直接用于金银花露中维生素C和山梨酸含量的同时测定。

食品中维生素C含量检测研究进展

综述了滴定法、光度分析法、高效液相色谱法和电化学法检测食品中维生素C含量的最新研究进展,并比较了各种方法的优缺点。

高效液相色谱法同时测定枣果实中的有机酸和VC含量

目的:建立枣果实中有机酸含量的高效液相色谱测定方法。方法:采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法,水浴超声、离心、膜过滤提取枣果实中的有机酸。色谱条件:色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为0.04 mol/m L KH_2PO_4溶液,流速0.5 m L/min,柱温30℃,检测波长210 nm。结果:在此色谱条件下,草酸、酒石酸、奎宁酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸和VC在30 min之内得到基线分离。7种有机酸和VC标准曲线的相关系数(R2)均在0.998 9以上;精密度检测,相对标准偏差为0.98%~4.77%(n=5);重复性检测,相对标准偏差为0.88%~2.19%(n=5);回收率在91.35%~105.74%之间。结论:本方法准确、高效、便捷,适于枣果实中有机酸的测定。

HPLC法同时测定淫羊藿中朝藿定A、B、C与淫羊藿苷的含量

建立了同时测定淫羊藿中朝藿定A、B、C与淫羊藿苷含量的高效液相色谱方法.淫羊藿样品经超声波提取,以50%（ψ）乙醇溶液为溶剂,在温度50℃、料液比1∶60条件下超声波提取30 min,共提取2次.色谱条件：ZORBAX SB-C8色谱柱（5 μm,4.6×250 mm）;流动相A为乙腈,B为1%乙酸溶液;梯度洗脱;紫外检测波长为270 nm.上述4种类黄酮的标准曲线在6.6～33.0 mg/L（朝藿定A、淫羊藿苷）或6.6～55.0mg/L（朝藿定B、C）范围内呈良好的线性关系（r＞0.99）;加标回收率在97%～102%之间;相对标准偏差小于2%（n=5）.测得不同产地心叶淫羊藿叶片中4种类黄酮的质量分数差异较大;朝藿定A广泛分布于淫羊藿属中.本方法在淫羊藿药材质量控制中具有一定的参考价值.

HPLC法测定新鲜草莓中水溶性维生素

采用反相高效液相色谱法测定草莓中水溶性维生素Ｃ、Ｂ１、Ｂ２和烟酸。四种维生素在ＯＤＳ－５μｍ反相色谱柱上分离，ＰＨ５．６６磷酸缓部液－甲醇（７５：２５ＶＶ）为流动相洗脱，流速为１ｍｌ／ｍｉｎ，ＵＶ２５４ｎｍ，９ｍｉｎ内实现良好分离，其回收率为１０７．７％￣９６．１％，变异系数为１．５６％￣０．９１２％。样品提取液（经０．４５μｍ滤膜过滤后）可直接上机进样。

茶叶中维生素C和嘌呤碱的高效液相色谱测定法的研究

报道了采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对茶叶中维生素Ｃ、可可碱、茶碱和咖啡碱同时分离检测的方法。碳十八柱为分离柱，柱温４０℃，检测波长２３０ｎｍ，甲醇－水（１０∶９０）为流动相，在１２ｍｉｎ内可全部出峰。方法操作简便，分离效果、重现性和线性范围均令人满意。

尿毒症患者血浆及透析液中维生素C的测定(英文)

应用高效液相色谱结合电化学检测技术建立了尿毒症病人血浆及透析液中抗坏血酸 (AA)及脱氢抗坏血酸(DHAA)的测定方法。采用 0 8g/L偏磷酸与 18% (体积分数 )高氯酸的混合溶液作为生物样本中的蛋白沉淀剂及AA的提取剂 ,可大大提高AA在血浆中的稳定性。该方法已成功地应用于临床维生素C的常规检验。AA浓度为2 μmol/L～ 40μmol/L时 ,其峰面积与浓度的相关系数大于 0 99。AA与DHAA的日内相对标准偏差 (RSD)分别小于 8 9%和 10 5 %。AA在血浆及透析液中的回收率分别大于 95 %和 78%。

高效液相色谱法快速测定保健食品和果蔬中的VitC

目的 :建立保健食品和果蔬中维生素C (VitC)含量的快速测定方法。方法 :样品用 5g/L草酸超声提取 ,采用高效液相色谱法 ,以 0 . 0 10mol/LNH4Ac -HAc缓冲溶液 (pH4 . 5 )作流动相 ,经C18色谱柱分离 ,用紫外检测器 ,在2 6 2nm波长下测定维生素C的吸光度值 ,并与标准系列比较 ,以保留时间定性 ,峰面积定量。结果 :本方法的线性范围为0 . 5 0～ 10 0 0 μg/ml,检出限为 5 0ng/ml,样品的加标回收率为 88 .5 7%～ 99. 12 % ,相对标准偏差为 1 .31～ 2. 82 %。 结论 :本方法灵敏度高 ,选择性好 ,操作简便、快速 ,5min即可完成定量检测 ,具有实用价值。

自动电位滴定法和高效液相色谱法测定深颜色果蔬中维生素C浓度的比较

目的：探讨应用自动电位滴定法和高效液相色谱（HPLC）法定量测定深颜色果蔬中维生素C（Vc）浓度的可行性，为少量或批量果蔬样品Vc浓度的测定提供方法依据。方法：选取市售的15种蔬菜和15种水果的可食部分，加入一定量的草酸做Vc保护剂进行匀浆、过滤、离心处理，取一定量的上清液分别对其中的Vc浓度进行自动电位滴定和HPLC分析，对于同一红柿椒样品，分别用2种分析法对样品的Vc浓度进行准确度和精确度的测定。结果：2种分析法检测30种果蔬中Vc的浓度差异无统计学意义（P〉0．05），电位法对红柿椒中Vc浓度测定的回收率为98．34％～103．98％，HPLC法对Vc浓度测定的回收率为99．66％～101．49％；电位法测定红柿椒中Vc的相对标准偏差（RSD）为1.77％～2．88％，HPLC法测定Vc的RSD为0．15％～0．32％，且HPLC法线性关系良好（R^2=0．9999）。结论：2种分析法对深颜色果蔬样品中Vc浓度测定的准确度和精密度均能满足定量分析的要求，均为较理想的测试方法。

番石榴中VC的高效液相色谱分析

采用高效液相色谱法,以0．1%的磷酸作为流动相,采用三种不同的提取液(3%的偏磷酸、3%的偏磷酸+8%乙酸、0．1%的草酸)对番石榴不同的果实部位的VC(L-抗坏血酸)含量进行了测定,结果表明:3%的偏磷酸+8%乙酸作为浸提液效果最好,对于三次取样的结果相对标准偏差最低(RSD=1．6%),回收率最高为98．5%;3%的偏磷酸提取效果次之;0．1%的草酸溶液提取效果最差,RSD=28．4%,回收率也很低(72．5%)。此外,不同部位的番石榴果肉VC含量也不一致,以靠近果皮的果肉含量最高,其次为果心,中部果肉含量最低。

高效液相色谱双波长检测法测定维C银翘片中4种组分的含量

建立了高效液相色谱测定维C银翘片中维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和绿原酸4种组分含量的方法。研究优化了样品提取的溶剂与超声提取条件、色谱分离条件和检测波长等,采用了SinochromODS-BP(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱,以0.05mol/LKH2PO4(pH3.0,含1%三乙胺)-乙腈(75:25,v/v)为流动相,双检测波长260nm和326nm等分离检测条件。结果表明,维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和绿原酸的测定线性范围均比较宽,方法平均回收率大于99.4%,相对标准偏差(RSD)小于1.8%(n=5),而且测定方法快速、简便、准确,非常适合维C银翘片类药物的质量控制。

高效液相色谱法测定彩色马铃薯中维生素C含量

建立高效液相色谱法快速测定彩色马铃薯黑美人、红宝石中维生素C含量的方法。样品采用2%草酸提取,利用高效液相色谱技术,以0.05 mol/L,pH2.5的磷酸-甲醇(90∶10)缓冲液为流动相,通过C_(18)色谱柱分离,采用紫外检测器,在245 nm波长下测定维生素C的吸光值,将吸光值与标准品进行比较,保留时间可以对其进行定性,以峰面积进行定量。结果表明,方法的线性范围0.02 g/L^0.1 g/L,检出限为0.002 g/L,线性回归方程为yb=5 622 000x+69 538,相关系数为0.999 9。通过回收实验,黑美人与红宝石马铃薯V_C测定回收率分别为97.61%~99.81%,97.28%~99.82%,相对标准偏差分别为0.90%、1.02%。用高效液相色谱法、紫外分光光度法、碘滴定法分别测定黑美人中V_C含量分别为(21.27±0.19)、(19.92±0.13)、(23.31±0.11)mg/100 g,红宝石中V_C含量分别为(18.28±0.19)、(17.68±0.14)、(21.76±0.09)mg/100 g。与甘肃省农业科学院农业测试中心检测结果相比较(黑美人21.73 mg/100 g;红宝石18.74 mg/100 g),表明高效液相色谱法获得结果更准确可靠。本研究所建立的高效液相色谱法可快速、灵敏、准确、稳定的对彩色马铃薯中的维生素C进行测定,同时适用于其它同类果蔬(草莓、刺梨、青菜等)中V_C含量的测定。