槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制。方法用不同浓度槲皮素(空白对照、20、40、80μmol/L),顺铂(空白对照、5、10、15、20μg/mL)以及两者联合(槲皮素40μmol/L+顺铂10μg/mL)分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92±3.953)%(20μmol/L组)、(66.54±3.932)%(40μmol/L组)和(52.21±2.970)%(80μmol/L组),均低于空白对照组的(98.35±1.230)%;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为(65.19±7.071)%(20μmol/L组)、(47.04±8.881)%(40μmol/L组)和(29.71±6.505)%(80μmol/L组),均低于空白对照组的(96.97±1.788)%。;此外,槲皮素40μmol/L+顺铂10μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为(31.12±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86±3.182)%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,(31.12±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86±3.182)%(P<0.05)。细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G0/G1期数量,减少S期数量。Western blot结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结论槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡。

利用RNA干扰技术探讨STAT3对宫颈癌C33a细胞增殖的影响

目的为了探讨信号转导与转录活化因子3(STAT3)对宫颈癌细胞的作用,我们利用RNAi干扰其表达,检测其对C33a细胞增殖的影响。方法实验分组为对照组(即正常C33a细胞组)及干扰组(即RNA干扰STAT3组)。利用新型阳离子脂质体转染试剂Hilymax导入STAT3 RNA干扰序列,而后检测STAT3的表达,并利用CCK-8法检测C33a的细胞增殖水平改变。结果与对照组相比,干扰组STAT3 mRNA下降约75%,显示成功干扰STAT3的基因表达。与对照组相比,在1、2、3 d,干扰组细胞增殖水平较对照组抑制了约19.1%,31.2%,32.0%。结论本研究成功干扰C33a细胞STAT3的表达,且STAT3沉默可进一步抑制C33a细胞增殖。

HPV16 E6-G350基因表达促进宫颈癌C33A细胞增殖且抑制凋亡

目的分析HPV16 E6基因致病多态性位点的功能及其与宫颈癌发展的关系。方法在宫颈癌C33A细胞中分别稳定转染HPV16 E6原型T295/T350-GV230和HPV16 E6突变型T295/G350-GV230表达质粒,通过间接免疫荧光实验、CCK8增殖实验、细胞平板克隆实验、流式细胞仪检测HPV16 E6 T295/T350和T295/G350不同多态性位点对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。结果采用SPSS17.0统计软件进行数据的统计学处理,以P<0.05为差异有统计学意义。HPV16 E6 T295/T350和HPV16 E6 T295/G350突变促进宫颈癌C33A细胞的增殖,抑制凋亡,并且T295/G350突变型作用强于T295/T350原型,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV16 E6 T295/T350欧洲原型和HPV16 E6 T295/G350欧洲突变型均可以促进宫颈癌细胞的增殖,抑制凋亡,HPV16 E6 T295/G350欧洲突变型的促癌作用比HPV16 E6 T295/T350欧洲原型强。

蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬作用的机理研究

目的:探讨蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬的作用。方法:不同浓度梯度的蟾蜍灵处理人宫颈癌C33A细胞,选用CCK-8法检测蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的杀伤作用。透射电镜观察给药后C33A细胞的自噬现象。流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹法检测自噬LC3蛋白表达及相关信号通路JNK、p-JNK蛋白表达。结果:蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的生长抑制作用呈时间-剂量依赖性。蟾蜍灵给药后可诱导C33A细胞发生自噬,蛋白印迹实验结果表明LC3蛋白表达随药物浓度升高而增加。蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬发生与其促ROS水平升高激活了JNK信号通路有关。结论:蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬的机制可能与通过ROS/JNK通路促进细胞自噬有关,以此发挥其抗肿瘤的作用。

红景天苷通过JAK2/STAT3通路影响宫颈鳞癌C33A细胞的增殖、侵袭和凋亡

目的:观察红景天苷对宫颈鳞癌C33A细胞增殖、侵袭及凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法:将C33A细胞分为4组:对照组、低剂量组(红景天苷50μg/ml)、高剂量组(红景天苷150μg/ml)、抑制剂AG490组(JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG49050μmol/L),采用MTT法、EdU标记实验、Transwell实验、Rh123染色和流式细胞术分别检测红景天苷和AG490对C33A细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,Western blotting检测红景天苷和AG490对C33A细胞中JAK2/STAT3通路相关蛋白(pJAK2、p-STAT3)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3)表达的影响。结果:与对照组相比,低剂量组C33A细胞的增殖和DNA的合成明显受到抑制(均P<0.05)、侵袭能力明显降低(均P<0.05)、Rh123荧光强度明显减弱(均P<0.05)、线粒体膜结构受到破坏、细胞凋亡率明显增加(均P<0.05);p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2水平显著下降(均P<0.05)、Bax、caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组、抑制剂组对C33A细胞增殖、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的影响更为显著(P<0.05);而高剂量组、抑制剂组间无显著差异。结论:红景天苷可以抑制C33A细胞的增殖和侵袭、促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

宫颈癌细胞系Siha和C33a中RRM2表达水平与细胞对吉西他滨敏感性的相关分析

目的：研究宫颈癌细胞系C33a和Siha中核糖核苷酸还原酶小亚基M2（RRM2）表达与细胞对吉西他滨（Gem）敏感性的相关性。方法：以0.1-3.2μmol/L Gem处理C33a细胞,以0.5-512μmol/L Gem处理Siha细胞,72 h后用MTT法测定细胞活力,计算半数抑制浓度（IC50）;使用Western blot法和逆转录-聚合酶链反应检测各细胞中RRM2表达;采用浓度梯度倍增和大剂量冲击相结合的方法对Siha细胞进行Gem耐药诱导培养,构建Siha/Gem耐药细胞株;在Siha/Gem细胞中,使用RNA干扰技术敲低RRM2表达并检测敲低前后Gem对细胞的IC50。结果：Gem对C33a、Siha细胞的IC50分别为0.63、16.8μmol/L。与C33a细胞比较,Siha细胞中RRM2的表达较高。与Siha细胞相比,Siha/Gem耐药细胞（耐药指数为16.26）中RRM2表达增强。Gem对敲低RRM2表达的Siha/Gem耐药细胞的IC50降低,其逆转耐药倍数为4.24。结论：宫颈癌细胞系中RRM2表达可能与细胞对Gem的敏感性呈负相关,敲低RRM2表达可增加细胞对Gem的敏感性。

宫颈癌细胞C33a下调Raptor表达后对增殖及化疗敏感性的研究

目的:探讨通过反义RNA技术下调Raptor基因的表达,研究宫颈癌细胞株C33a中Raptor下调后宫颈癌细胞增殖及对化疗药物的敏感性。方法:C33a细胞分3组,实验组和阴性对照组分别转染Raptor siRNA和阴性对照siRNA,空白对照组不做任何处理。通过荧光实时定量PCR和蛋白印记法分别检测C33a转染siRNA后Raptor在mRNA和蛋白水平的表达,CCK-8法检测各组细胞的增殖和对顺铂敏感性的变化,流式细胞仪检测各组及加入顺铂后的凋亡情况。结果:转染siRNA 72 h后,Raptor分别在mRNA水平及蛋白水平较阴性对照下调为82%及78%(P<0.05),转染72 h后CCK-8法测细胞增殖,A值由空白对照组1.828±0.059、阴性对照组1.723±0.044明显降低为Raptor siRNA组的1.349±0.040(P<0.05),各组加入8μM顺铂后,Raptor siRNA组凋亡率为(40.14±1.57)%较空白对照组(21.76±1.23)%和阴性对照组(20.81±1.45)%明显增加(P<0.05)。结论:Raptor siRNA能显著下调C33a细胞中Raptor在mRNA和蛋白水平的表达,抑制C33a细胞的增殖,增加对化疗药物顺铂的敏感性和促凋亡作用。

羟喜树碱对HeLa和C33A细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的以不同浓度的羟喜树碱作用于宫颈癌HeLa和C33A细胞,观察羟喜树碱对两种细胞侵袭力及迁移能力的变化,比较两种细胞抑制作用的差异,并探讨其作用差异的可能途径。方法对数生长期HeLa细胞及C33A细胞,分别加入0、0.25、0.5、1.0和2.0μmol/L浓度的羟喜树碱,培养24 h。以MTS法检测细胞的增殖率,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,Western blott检测MMP-2、MMP-9、E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。结果 MTS检测显示,羟喜树碱对HeLa及C33A细胞的增殖率均有抑制作用,且抑制作用随羟喜树碱浓度的增加而增强,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);划痕实验结果显示,羟喜树碱可降低HeLa及C33A细胞的平面运动能力;Transwell侵袭小室实验结果显示,羟喜树碱对HeLa及C33A细胞的体外侵袭力具有很强的抑制作用;Western blott结果表明,羟喜树碱能够抑制HeLa及C33A细胞MMP-2、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达,而增加E-cadherin蛋白的表达;上述抑制及增强作用,HeLa细胞均明显高于C33A细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论羟喜树碱可靶向性抑制HeLa细胞的增殖,降低体外的细胞侵袭能力,其作用可能通过调控EMT相关蛋白的表达来实现。

稳定表达人乳头瘤病毒58型(HPV58)E6E7融合基因的人宫颈癌细胞株C33A的构建及验证

为构建稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的人宫颈癌C33A细胞系,将实验前期构建好并实现真核表达的重组慢病毒颗粒LV-HPV58E6E7转染入HPV(–)的人宫颈癌C33A细胞,经流式细胞仪分选出稳定转染的阳性克隆,利用四唑盐比色(MTT)法检测转染后细胞的生长情况以及流式细胞术检测细胞周期,并将稳定表达HPV58E6E7融合基因的C33A细胞LV-HPV58E6E7/C33A接种于裸鼠左腋下成瘤,用荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测瘤组织中HPV58型E6E7融合基因的转录和表达。结果显示HPV58E6E7融合基因可促进C33A细胞的增殖;LV-HPV58E6E7/C33A细胞株能在裸鼠体内稳定转录及表达HPV58型E6E7融合基因。这表明我们成功建立了能稳定表达HPV58E6E7融合基因的人宫颈癌C33A细胞系LV-HPV58E6E7/C33A,为HPV58型治疗性疫苗的免疫效果检测提供了抗原细胞来源。

宫颈癌组织及细胞株中长链非编码RNA CCAT1的表达水平及意义

目的:研究宫颈癌组织及细胞株中长链非编码RNA肠癌相关转录因子1(CCAT1)的表达水平及意义。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测2015年1月至2017年6月接受宫颈癌根治术的48例宫颈癌患者的癌组织、对应癌旁正常组织(距癌<3 cm)以及人正常宫颈鳞状细胞系ECT1/E6E7、宫颈癌细胞系Hela、C33A中CCAT1的表达,并分析其临床意义;应用小分子RNA(siRNA)分别转染人宫颈癌细胞系Hela、C33A,构建CCAT1低表达细胞系,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测CCAT1对人宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测各组细胞周期,蛋白印迹(Western blot)法检测CCAT1对人宫颈癌细胞中RAS相关区域家族1A蛋白(RASSF1A)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。结果:与癌旁正常组织相比,人宫颈癌组织中CCAT1的表达显著升高(P<0.05);与正常宫颈细胞ECT1/E6E7相比,宫颈癌细胞系Hela、C33A中CCAT1的表达显著升高(P<0.05);TMN分期较晚、肿瘤大、有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中CCAT1相对表达量更高(P<0.05);不同年龄、分化程度患者中CCAT1的表达无显著性差异(P>0.05);与siRNA-NC组相比,转染siRNA-CCAT1的Hela、C33A细胞中CCAT1、细胞增殖活性、cyclin D1蛋白的表达显著降低,RASSF1A蛋白的表达显著升高。结论:CCAT1的表达上调与宫颈癌发生发展密切相关,沉默CCAT1的表达会抑制宫颈癌细胞的增殖,可能与上调RASSF1A的表达、下调cyclin D1的表达有关。

miR-26b对宫颈癌细胞系迁移及上皮间质转化的影响

目的探讨miR-26b对宫颈癌细胞迁移及上皮间质转化的影响及其作用机制。方法通过脂质体介导将miR-26b mimic转染C33A宫颈癌细胞系,细胞分为阴性对照组、无义对照组和miR-26b mimic组。用实时荧光定量PCR检测miR-26b及其靶基因的mRNA表达,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,用双荧光素酶基因报告载体检测miR-26b靶基因的表达。结果与正常宫颈上皮细胞相比,miR-26b mRNA在He La、Si Ha、Caski和C33A 4种宫颈癌细胞系中均低表达,其中以C33A细胞系最为明显;转染miR-26b mimic后,C33A细胞中miR-26b mRNA表达水平明显上升;过表达miR-26b可明显抑制C33A细胞的迁移能力,上调E-cadherin蛋白的表达,下调N-cadherin蛋白的表达,抑制上皮间质转化过程的发生;通过Target Scan、Pic Tar和miRDB软件预测显示,CXCL14、Smad4、TRAF5和Eph A2可能为miR-26b潜在的靶基因。双荧光素酶实验证实miR-26b可直接调控Smad4的表达。结论 miR-26b可能通过作用于Smad4的表达调节宫颈癌细胞的迁移和上皮间质转化过程的发生。

miR-137通过靶向Wnt5a调控宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-137在宫颈癌组织和细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其机制。方法:选用2017年1月至2018年3月东莞市人民医院妇产科32例手术切除的宫颈癌组织及对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa及宫颈上皮永生化细胞株H8,用RT-PCR法检测宫颈癌组织和细胞系中miR-137的表达水平。将miR-137mimics、miR-137 NC质粒转染到C33A和HeLa细胞,用CCK-8法、Transwell迁移及侵袭实验观察上调miR-137表达对C33A和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。用荧光素酶报告基因及WB实验检测miR-137和Wnt5a在宫颈癌中的靶向调控关系。构建Wnt5a过表达载体,观察同时过表达Wnt5a和miR-137对宫颈癌细胞系C33A和HeLa增殖、迁移和侵袭的影响。结果:在宫颈癌组织和细胞系中miR-137表达水平明显低于癌旁组织和H8细胞(均P<0.05)。上调miR-137表达能够显著抑制C33A和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05)。萤光素酶报告基因实验确定Wnt5a与miR-137的靶向关系。过表达Wnt5a后,可以在一定程度上逆转miR-137对宫颈癌细胞系C33A和HeLa的增殖、迁移和侵袭能力。结论:miR-137通过靶向Wnt5a抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其可能是宫颈癌治疗的潜在靶点。

SPI模式下SD卡驱动的设计与实现

SD卡以其优越的性能在嵌入式设备上得到广泛的应用。介绍在S1C33L05处理器上利用SPI总线进行SD卡的功能扩展。首先介绍具体硬件接口电路的设计,然后介绍利用SD卡的R1应答模式和处理器进行SPI总线通信的通信协议,并在此基础上实现SD卡驱动程序,最后介绍利用S1C33L05处理器的硬件中断实现热插拔的方法。实验表明,该方案在实际的应用系统中运行可靠,实用性强,在其他需要进行SD卡硬件扩展的嵌入式系统中也有很好的参考价值。

慢性丙型病毒性肝炎患者肝组织HCVC33c检测

应用免疫组织化学检查了68例慢性丙型肝炎患者肝组织HCVC33c,阳性率为69.2％,其中CPH为41.18％(7/17),CAH71.42％(15/21),CAH.LC76.92％(10/13),LC86.66％(13/15),LC合并HCC100％(2/2)。HCVC33c抗原主要定位于肝细胞浆内,HCVC33c抗原阳性肝细胞呈散在、灶状及弥漫三种形式分布,与肝组织学类型和血清ALT无明显相关。HCVC33c阳性肝细胞周围见较多的淋巴细胞和单核细胞浸润,提示HCV在肝细胞浆内持续复制引起宿主免疫反应,在慢性丙型肝炎发病机理中起着重要的作用。

放疗对宫颈癌细胞系的增殖抑制及抑癌基因p16、MGMT表达的影响

目的研究放疗对宫颈癌细胞系的增殖抑制及抑癌基因p16、O6-甲基鸟嘌呤-DNA转移酶(MGMT)表达的影响。方法培养2种人宫颈癌细胞系Hela、C33A,分为对照组和辐照组,正常培养作对照组(Control),接受X射线辐照为辐照组,辐照剂量为4 Gy;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白印记(Western Blot)检测细胞中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)及抑癌基因p16、MGMT的表达。结果与对照组相比,辐照组宫颈癌Hela、C33A细胞增殖活性、Bcl-2/Bax的表达显著下降,凋亡率、p16、MGMT的表达显著上调(P <0. 05)。结论放疗可通过上调宫颈癌Hela、C33A细胞中p16、MGMT的表达,下调Bcl-2/Bax的表达,抑制细胞增殖,促进其凋亡。

嵌入式操作系统中USB双向通信的设计与实现

介绍了基于 S1C3 3 L 11芯片利用嵌入式操作系统的同步机制通过对循环队列及自定义控制包的操作来实现U SB双向通信的 USB设备固件程序、驱动程序、应用程序的设计与具体实现。

铕配合物[C_5H_5NC_(16)H_(33)][Eu(TTA)_4]在改性介孔材料Si-MCM-41孔道中的组装研究

It was proved by ICP, fluorescence spectra and N 2 adsorption that the rare earth complex [C 5H 5NC 16H 33] [Eu(TTA) 4] is in the channel of Si-MCM-41 in the course of assembly. The rare earth complex of 67.9% is in the channel, suggesting that the assembly of the complex molecular on the mesoporous MCM-41 was carried out mainly in the channel.

丙型肝炎病毒C33_c单克隆抗体的研制和鉴定

用丙型肝炎病毒重组蛋白Ｃ３３_ｃ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，运用杂交瘤技术成功地建立了７株能稳定分泌抗Ｃ３３_ｃ单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｈ６Ｄ２、２Ｇ１Ａ６、３Ａ４Ａ８、３Ｅ３Ｅ７、４Ｇ１２Ｃ１０、４Ａ１０Ｃ２、５Ｆ４Ｂ６．试验结果表明，７株ＭｃＡｂｓ具有良好的ＨＣＶ特异性，间接ＥＬＩＳＡ法测得小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１：１０￣４－１：４×１０￣４；竞争抑制实验和相加指数测定证实７株ＭｃＡｂｓ识别相关的抗原表位；７株ＭｃＡｂｓ中１株为ＩｇＭ（５Ｆ４Ｂ６），其它６株为ＩｇＧ（２ａ）。

S1C33L11在uC/OS-II嵌入式系统中的应用

本文详细介绍了如何把uC/OSII嵌入式操作系统移植到S1C33L11微处理器的方法,并简要介绍了基于S1C33L11的uC/OSII嵌入式应用程序的编程。

基于DSP的嵌入式系统的程序引导设计

作者对以DSP为核心的嵌入式系统的程序引导功能进行了深入的研究及分析,并以TI公司的TMS320C33芯片为实例,归纳了其实现流程及设计方案,从硬件和软件两个方面阐述了实现该功能的关键点和值得注意的地方。该设计已被应用于一个配电网环网柜智能终端装置。运行实践表明,是一种简便、可靠的方案。