二氧化碳通气当量截距、C3a和炎症因子水平对COPD患者疾病加重风险的预测价值

【目的】探讨二氧化碳通气当量截距、C3a和炎症因子水平对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者疾病加重风险的预测价值。【方法】选取2020年2月至2023年2月在本院首次被诊断为COPD的100例患者,随访1年,根据疾病加重次数将COPD患者分为加重组(疾病加重次数≥2次/年,n=65)和稳定组(疾病加重次数<2次/年,n=35)。比较两组二氧化碳通气当量截距、C3a水平、炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)]水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线和Logistic回归分析二氧化碳通气当量截距、C3a及炎症因子水平对COPD疾病加重风险的预测价值。【结果】加重组吸烟占比、二氧化碳通气当量截距及IL-6、TNF-α、CRP水平均高于稳定组,血清C3a水平低于稳定组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:二氧化碳通气当量截距、C3a、IL-6、TNF-α、CRP及联合预测COPD疾病加重风险的曲线下面积(AUC)分别为0.786、0.746、0.851、0.848、0.833、0.975。Logistic回归模型分析结果显示:二氧化碳通气当量截距高、血清C3a水平低及炎症因子水平高是导致COPD疾病加重的独立危险因素(P<0.05)。【结论】二氧化碳通气当量截距、血清C3a和炎症因子水平对COPD疾病加重风险具有一定的预测价值。

血清Endocan、补体C3a与重症肺炎患儿病情和预后转归的关系分析

目的探讨血清内皮细胞特异性分子(Endocan)-1、补体C3a与重症肺炎患儿病情和预后转归的关系。方法选择2018年3月至2023年3月中国人民解放军联勤保障部队第961医院及齐齐哈尔市第一医院儿科收治的190例重症肺炎患儿(肺炎组)和95例年龄性别匹配的健康儿童(对照组)为研究对象。根据改良易感性、感染、反应和器官功能衰竭(PIRO)量表将重症肺炎患儿分为低风险组(59例)、中高风险组(76例)、极高风险组(55例)。检测血清Endocan、补体C3a水平,统计重症肺炎患儿不良临床结局,分析影响重症肺炎患儿预后的因素及Endocan、补体C3a预测重症肺炎患儿发展结局的价值。结果肺炎组血清Endocan、补体C3a水平均高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为40.775、37.808,P<0.05);极高风险组血清Endocan、补体C3a水平高于中高风险组和低风险组,中高风险组血清Endocan、补体C3a水平高于低风险组,差异有统计学意义(F值分别为109.352、78.293,P<0.05);预后不良组改良极高风险、入住重症监护病房、呼吸衰竭比例高于预后良好组,血清Endocan、补体C3a水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(t/χ^(2)值介于5.435~33.346之间,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示改良PIRO分级极高风险、高水平Endocan、高水平补体C3a是重症肺炎患儿预后不良的危险因素,其OR值及95%CI分别为2.186(1.177~4.061)、1.868(1.092~3.196)、1.667(1.120~2.482),P<0.05;联合Endocan、补体C3a、改良PIRO评分预测重症肺炎患儿发展结局的曲线下面积(AUC)为0.900,高于单独指标预测(Z值分别为3.542、6.317、2.627,P<0.05)。结论重症肺炎患儿血清Endocan、补体C3a水平增高与病情加重、预后不良有关,可作为重症肺炎病情和预后评估的潜在标志物。

C3a在糖尿病肾病中的研究进展

糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)最常见的并发症之一,患病人数逐年上升,预计到2040年,将增加至6.42亿,最终有30%~40%的患者将进展为终末期肾脏病(Endstagerenal disease,ESRD)[1]。目前临床相关治疗措施仅能延缓DKD进展,早诊断、早预防、早干预将减轻经济负担,提高患者的生活质量并延长生存时间。

补体C3a受体在盲肠结扎穿孔致脓毒症大鼠认知障碍中的作用及机制

目的探讨补体C3a受体(C3aR)在盲肠结扎穿孔(CLP)致脓毒症大鼠认知障碍中的作用及潜在的作用机制。方法132只大鼠随机分为假手术组(sham组)和脓毒症组(CLP组),每组的初始数量为66只动物,每个时间点设置22只动物。构建SD大鼠CLP动物模型,于术后1、15和30 d取血清和脑(海马和前额叶皮质),采用ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6水平。Western blotting检测脑标本中Tau蛋白(Tau)、磷酸化Tau(p-Tau)和C3aR蛋白表达。将66只大鼠随机分为3组:sham组、CLP组和C3aR拮抗剂(C3aRa)干预组。于CLP后第15、17和19天,C3aRa干预大鼠于CLP术后第30天接受抑制性回避测试和物体识别测试,并采用免疫荧光法检测海马中C3aR、离子钙接头蛋白分子1(Iba1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和p-Tau表达。结果与sham组相比,CLP组大鼠血清及脑组织中TNFα、IL-1β和IL-6在CLP后30 d内先增加后减少。在CLP组海马组织和前额叶皮层中分别观察到术后30 d和术后1、15 d Tau磷酸化显著增强(P<0.05)。与sham组相比,CLP组术后15 d和30 d在大鼠海马和前额叶皮层中均观察到C3aR蛋白水平显著增加(P<0.05)。与CLP组相比,C3aRa干预后大鼠海马内源性C3aR含量明显降低(P<0.05),Iba1、GFAP和p-Tau免疫染色明显抑制(P<0.05)。C3aRa干预CLP大鼠可逆转认知功能损伤。结论C3aR在脓毒症诱导神经退行性过程中相关生物化学和行为学变化发展中发挥重要作用。通过在海马注射C3aRa能够改善由脓毒症引发的神经退化过程。

补体C3a受体在尿路感染小鼠膀胱和肾脏中的表达及意义分析

目的:研究补体C3a受体(C3aR)在尿路感染模型小鼠膀胱和肾脏的表达与分布。方法:将雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组,以及3、6、24和48 h感染组,每组8~10只。采用逆行推注人型大肠杆菌J96建立小鼠尿路感染模型。平板涂布计数法检测小鼠膀胱和肾脏细菌负荷量;HE染色评估膀胱和肾脏病理损伤程度;ELISA检测肾组织肾脏损伤分子1(KIM-1)和尿液中C3a水平;蛋白印迹和免疫荧光检测C3aR在膀胱和肾脏的表达与分布。结果:感染24 h时小鼠膀胱细菌负荷量达到峰值,48 h时细菌量下降;感染6 h时小鼠肾脏中细菌负荷量最高,随着感染时间延长逐渐减少。感染后,膀胱病理表现为移行上皮细胞脱落,黏膜和固有层炎症细胞浸润;肾脏病理表现为肾小球萎缩,肾小管上皮细胞损伤,肾小管间质炎症细胞浸润及肾盂处组织脱落。感染后肾脏KIM-1显著增加,尿液中C3a水平升高。蛋白印迹结果显示,感染后膀胱和肾脏C3aR蛋白水平升高。免疫荧光分析显示,C3aR在正常膀胱上皮细胞有少量表达,感染后在上皮细胞大量表达,在深层肌肉组织有少量表达;C3aR在正常肾皮质的肾小球和髓质的实质细胞有少量表达,感染后在肾小球、肾小管间质以及髓质的炎症浸润细胞中大量表达。结论:小鼠尿路感染过程中C3a-C3aR信号激活,C3a在尿液中表达升高,C3aR在膀胱和肾脏中表达上调,炎症细胞表达的C3aR参与小鼠尿路感染进程并发挥作用。

空气细颗粒物通过补体C3a/C3aR轴诱导上皮细胞炎症

目的探讨空气细颗粒物(PM2.5)诱导上皮细胞炎症反应的潜在机制。方法人正常肺支气管上皮细胞Beas-2b细胞暴露于不同剂量PM2.5(0、25、50、100μg/ml)24 h后,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)、白细胞介素6(IL-6)、IL-8、IL-1β和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF),以及补体C3(complement component 3)、C3a及其受体C3aR表达水平。并利用C3aR拮抗剂处理Beas-2b细胞验证其对PM2.5诱导的炎症水平的抑制作用。结果PM2.5暴露诱导上皮细胞中TSLP、IL-6、IL-8、IL-1β和GMCSF表达显著上调,并诱导细胞中补体C3、C3a和C3aR的基因和蛋白水平显著增加。而C3aR拮抗剂处理可显著抑制PM2.5诱导的Beas-2b细胞中TSLP、IL-6、IL-8和IL-1β的增加。C3aRA也可下调PM2.5诱导的GMCSF表达增加,但差异无统计学意义。结论PM2.5可能通过补体C3a/C3aR轴诱导上皮细胞炎症反应。

外周血C3aR1及NETs表达水平对脓毒症性凝血病的预测价值

目的研究补体C3a受体1(complement-3a receptor1,C3aR1)及中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对脓毒症性凝血病(sepsis-induced coagulopathy,SIC)的临床预测价值。方法前瞻性纳入2022年6月—2023年6月于徐州医科大学附属徐州儿童医院就诊的脓毒症患儿78例为研究对象,根据是否发生SIC分为SIC组(36例)和非SIC组(42例)。比较两组临床资料、C3aR1和NETs水平,分析SIC发生的相关因素。应用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估C3aR1及NETs对SIC的预测效能。结果SIC组C反应蛋白、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、C3aR1及NETs水平高于非SIC组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,C3aR1、NETs及IL-6升高与SIC发生密切相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,C3aR1联合NETs预测SIC的曲线下面积为0.913(P<0.05),高于C3aR1、IL-6的曲线下面积(P<0.05),与NETs的曲线下面积比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论SIC患儿外周血中C3aR1及NETs表达水平显著升高,二者表达水平对预测SIC发生具有较高的临床价值。

血清BATF、C3AR1在肺炎继发脓毒血症患者的病情严重程度及预后评价中的价值

目的探讨肺炎继发脓毒症患者血清碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子(BATF),补体C3A受体1(C3AR1)水平与病情严重程度的关系及预后评估价值。方法选取2019年3月至2021年3月诊治的112例肺炎继发脓毒症患者为脓毒症组,根据28 d预后情况分为生存组(77例)和死亡组(35例),以同期诊治的60例无脓毒症肺炎患者为肺炎对照组,60例健康体检的健康人为健康对照组。应用酶联免疫吸附试验检测血清BATF、C3AR1水平。比较不同预后肺炎继发脓毒症患者临床资料及血清BATF、C3AR1水平。Spearman秩相关分析血清BATF、C3AR1水平与序贯器官衰竭评分(SOFA)的相关性。多因素Logistic回归分析影响肺炎继发脓毒症患者28 d死亡预后的因素。受试者工作特征曲线分析各指标对肺炎继发脓毒症患者28 d死亡预后的预测价值。结果脓毒症组患者血清BATF[(2.26±0.41)μg/L],C3AR1[(40.41±7.08)mg/L,]水平高于肺炎对照组[(1.02±0.29)μg/L,(31.84±6.12)mg/L]和健康对照组[(0.53±0.12)μg/L,(23.79±6.39)mg/L],差异有统计学意义(t=10.199~57.009,均P<0.05)。死亡组患者血清BATF[(2.96±0.48)μg/L vs.(1.94±0.36)μg/L],C3AR1[(44.26±7.35)mg/L vs.(38.66±6.78)mg/L],PCT,SOFA评分高于生存组,差异有统计学意义(t=3.946~35.388,均P<0.05)。PCT、BATF、C3AR1和SOFA评分升高是影响肺炎继发脓毒症患者28 d死亡预后的独立危险因素。血清PCT、BATF、C3AR1和SOFA评分联合对肺炎继发脓毒症患者28日死亡预后预测的曲线下面积为0.945,大于血清PCT、BATF、C3AR1和SOFA单项指标0.836、0.830、0.772、0.896,差异有统计学意义(Z=8.417,8.366,9.050,2.384,均P<0.05)。结论肺炎继发脓毒症患者血清BATF、C3AR1水平升高,两者疾病严重程度有关,血清PCT、BATF、C3AR1和SOFA评分联合对肺炎继发脓毒症患者预后具有较高的预测效能。

C3aR过度活化与糖尿病肾病肾组织损伤的关系

C3aR是补体C3裂解产物C3a的受体.最近的一些研究提示C3aR通路可能参与了糖尿病肾病(DN)的病理过程,但有关C3aR通路在DN中的确切病理作用及有关机制远未清楚.需要特别指出的是,现有的有关C3aR参与DN肾组织损伤的证据主要来自一些动物模型的研究,临床上尚缺乏较为系统全面的对DN患者肾组织C3aR通路与肾组织损伤关系的观察分析.为此,本文首次以较大的样本量分析了不同病理时期DN患者肾组织C3aR和C3a的表达变化情况及其与DN患者肾组织损伤的相关性.在此基础上,进而利用体外细胞模型,对高糖环境下C3aR活化致肾小球足细胞损伤的作用及机制进行了探讨.结果显示:a.与正常对照组相比,DN患者肾组织C3a和C3aR的表达水平随DN的进展而升高,C3aR在DN患者肾组织中的表达上调主要见于肾小管上皮细胞和肾小球足细胞;b.DN患者肾组织C3aR和C3a水平与患者肾组织损伤程度,特别是小管和小管间质损伤程度、肾小球足细胞损伤程度具有显著相关性;c.外加C3a激活C3aR可使高糖环境中的足细胞的细胞骨架发生明显改变、足细胞标记分子表达下调、足细胞通透性增加.这些结果说明:a.DN患者肾组织中确实存在C3a/C3aR轴过度活化的现象;b.C3a/C3aR轴的过度活化很可能在DN患者肾组织损伤,特别是小管和小管间质损伤、肾小球足细胞损伤中具有重要作用;c.可能通过破坏成熟足细胞特有的细胞骨架,改变足细胞标记分子表达,增加足细胞的通透性,C3a/C3aR轴过度活化参与DN足细胞损伤过程.本文不仅为C3a/C3aR通路参与DN病理过程提供了新的必不可少的临床证据,也增加了对C3a/C3aR通路过度活化致DN患者肾组织损伤机制,特别是肾小球足细胞损伤机制的了解,这对于拓展对DN病理机制的认识,发展DN防治新思路,无疑都是有益的.

C3a分泌性表达载体及过表达C3a肾小管上皮细胞株的构建

目的已有的研究表明包括糖尿病肾病在内的多种肾病患者肾小管上皮细胞存在C3a/C3aR轴过度活化现象,但有关C3a/C3aR轴过度活化在肾小管上皮细胞中的病理意义未知。文中构建分泌性过表达C3a的肾小肾小管上皮细胞株,为探讨各种病理情况下C3a/C3aR轴过度活化的病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3a分泌性表达单元,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;将p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞,包装成C3a表达重组慢病毒LV-C3a;以LV-C3a感染人肾小管上皮细胞系HK2,根据LV-C3a上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点,以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆;利用荧光定量PCR和ELISA方法对稳定转染细胞克隆的C3a表达水平和分泌情况进行分析,从中鉴定出稳定分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株。结果 1成功构建了序列完全正确的C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;2成功进行了重组慢病毒包装,得到了高滴度(5×108个/m L)的C3a表达重组慢病毒LV-C3a;3成功进行了LV-C3a对HK2细胞的转染,得到了稳定转染LV-C3a的HK2细胞株;基于荧光定量PCR和ELISA的分析证实,与HK2细胞比较,HK2-C3a细胞株中C3a mRNA表达水平显著升高[(1.0±0.5)vs(1 321.0±18.0),P<0.01],分泌的C3a水平显著升高[(0.3±0.2)ng/m L vs(249.0±37.0)ng/m L,P<0.01]。结论成功构建的C3a分泌性慢病毒表达载体和分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株为进一步研究各种病理情景中C3a/C3aR过度活化在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3a/C3aR过度活化在其他细胞中的病理意义创造了条件。

补体C3a及其受体在马兜铃酸Ⅰ致人源性肾小管上皮细胞损伤中的表达分析

目的研究补体C3a(Complement 3a)及其受体C3aR(Complement 3a receptor)在马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid Ⅰ,AAⅠ)诱导的人源性肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的作用。方法将不同浓度的AAⅠ作用于HK-2细胞后,收集细胞上清以酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C3a含量;免疫荧光观察AAⅠ作用后HK-2细胞C3aR蛋白表达变化;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测AAⅠ作用后HK-2细胞中C3aR表达情况;RT-PCR法检测细胞内C3a、C3aR mRNA的表达。结果AAⅠ可致HK-2细胞上清中IL-6、TNF-α、C3a含量显著升高,且呈剂量依赖性;AAⅠ可增加HK-2细胞中C3aR蛋白表达及C3a、C3aR mRNA表达。结论补体C3a及其受体C3aR参与了AAⅠ致人源性肾小管上皮细胞的损伤过程,补体系统可能通过诱导炎症损伤促进马兜铃酸肾病的发生发展。

白蛋白过载对阿霉素肾病小鼠肾脏C3a-C3aR信号通路及IL-17的影响

目的研究白蛋白过载对阿霉素肾病小鼠肾脏局部补体C3a-C3a受体(C3a R)信号通路及白细胞介素17(IL-17)的影响,初探白蛋白过载致肾脏损害的免疫学机制。方法 SPF级雄性Balb/c健康小鼠随机分为对照组、阿霉素肾病组(ADR组)、白蛋白过载组(ADR+BSA组)。所有小鼠行左肾切除术,第2周末构建阿霉素肾病模型,第6周末白蛋白过载组腹腔注射牛血清白蛋白(10 mg/g,5次/周,共4周)。第6、10周末检测24小时尿蛋白、血清生化指标、肾脏组织病理、Real-time PCR及免疫组化法检测肾脏C3a、C3a R、TGF-β1表达,ELISA及免疫组化法检测肾脏IL-17表达。结果第10周末ADR组肾脏C3a、C3a R、TGF-β1、IL-17表达均较对照组增高(P均<0.05)。第10周末ADR+BSA组尿蛋白、血清尿素氮水平较对照组及ADR组升高(P均<0.05);肾脏组织病理发现肾小球呈局灶节段性硬化及肾小管损害加重;肾脏C3a、C3a R、TGF-β1、IL-17表达较对照组及ADR组增高(P均<0.05)。结论阿霉素肾病小鼠肾脏局部C3a-C3a R信号通路活化,白蛋白过载致持续大量蛋白尿可进一步活化C3a-C3a R信号通路,同时上调TGF-β1、IL-17表达进而加重肾脏损害。

C3a-C3aR轴通过巨噬细胞向M1型极化对慢性牙周炎模型小鼠炎症反应和组织损伤的影响

目的:探讨补体C3a在体外对巨噬细胞极化状态的影响和C3a受体(C3aR)敲除对慢性牙周炎模型小鼠牙周组织中巨噬细胞极化状态、牙周组织炎症和软硬组织破坏程度的影响,阐明C3a-C3aR轴在慢性牙周炎发生发展过程中的作用及其可能机制。方法:根据基因型鉴定筛选出18只8周龄C57BL/6雌性小鼠,以基因型分为C3ar^(+/+)、C3a^(+/-)和C3ar^(-/-)3组,每组6只。以4-0丝线结扎小鼠上颌左侧第二磨牙建立慢性牙周炎模型,以上颌右侧第二磨牙作为自身对照;于结扎后第11天,通过显微计算机断层扫描(Micro-CT)检测各组小鼠釉牙骨质界(CEJ)至牙槽嵴顶(ABC)的距离,评价牙槽骨吸收情况;HE染色观察各组小鼠牙周组织病理形态表现;免疫组织化学染色检测各组小鼠牙周组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)蛋白表达水平。体外采用细菌脂多糖(LPS)作用RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型。实验分为空白组、LPS组、C3a组和LPS+C3a组,光镜下观察巨噬细胞的极化状态,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中M1型巨噬细胞相关因子iNOS、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平。结果:与C3ar^(+/+)和C3a^(+/-)组比较,C3ar^(-/-)组小鼠CEJ至ABC的距离明显缩短(P<0.01),炎症细胞浸润减少,附着丧失水平降低,牙槽骨吸收减少,iNOS蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Arg1蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。体外研究中,空白组细胞形态呈圆形,C3a组、LPS组和LPS+C3a组细胞多伸出伪足呈梭形,且LPS+C3a组细胞呈聚集性生长;与空白组比较,LPS组、C3a组和LPS+C3a组细胞中iNOS和TNF-αmRNA表达水平均明显升高(P<0.05),LPS和LPS+C3a组细胞中IL-1βmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:在慢性牙周炎小鼠模型中,C3a-C3aR轴可能通过巨噬细胞向M1型极化,促进慢性牙周炎的炎症反应和组织损伤。

C3a-C3aR信号通路对正常儿童Treg/Th17免疫平衡的影响

目的探讨补体C3a-C3a受体(C3aR)信号通路对正常儿童外周血Treg/Th17免疫平衡的影响,以期为进一步研究该通路在相关疾病中的作用提供实验依据。方法健康体检儿童17例,其中男性10例,女性7例,平均年龄6.8岁。收取空腹外周血3 ml,提取外周血单个核细胞(PBMC),分为3组:1)正常对照组;2)人重组C3a处理组(C3a组);3)人重组C3a及C3a受体拮抗剂处理组(C3a+C3aRA组)。经过培养后应用流式细胞术分别检测各组中Treg细胞和Th17细胞占CD4+T细胞的百分比,并比较各组间Treg/Th17的比值。结果与正常对照组比较,C3a组Th17细胞比例升高(P<0.01),Treg/Th17的比值明显降低(P<0.01),Treg细胞比例有下降趋势,但无明显统计学差异(P>0.05);与C3a组比较,C3a+C3aRA组Th17细胞比例降低(P<0.05),Treg/Th17的比值明显升高(P<0.05),Treg细胞比例有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05);而C3a+C3aRA组较正常对照组Th17细胞、Treg细胞比例以及Treg/Th17的比值均无统计学差异(P>0.05)。结论 C3a-C3aR信号通路可能介导正常生理状态下儿童外周血中Th17细胞活化,同时参与调控正常儿童Treg/Th17细胞免疫平衡。

过敏毒素受体(C3aR)在db/db糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达及病理意义分析

利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western blotting的方法,同时从mRNA水平和蛋白质水平对过敏毒素受体(C3aR)在不同病理阶段的2型糖尿病肾病模型小鼠——db/db小鼠肾脏中的表达情况进行了较为系统的分析.结果发现:a.在糖尿病前的db/db小鼠(4周龄的db/db小鼠),C3aR与作为正常对照的db/m小鼠相比没有明显差异.随着肥胖的加剧,高血糖、蛋白尿的发生和发展,C3aR在db/db小鼠肾脏中的表达显著升高.b.免疫组化分析显示,C3aR广泛地表达于db/m和db/db小鼠肾脏的皮质和髓质,分布于肾脏的上皮细胞中(包括肾小管上皮细胞、肾小球中的脏层上皮细胞(足细胞)和壁层上皮细胞).从部位来看,皮髓交界处的肾小管中C3aR表达量明显要比其他部位的多.在肾小球,C3aR特异地存在于足细胞部位.在db/m小鼠,不同周龄小鼠肾脏中C3aR的表达量并没有明显变化,但在db/db小鼠,从8周龄开始,分布在db/db小鼠肾小管上皮细胞和小球足细胞中的C3aR均随小鼠周龄的增加而增加,至少在时间上,与小鼠糖尿病肾病的发生发展相关,其中尤以足细胞中和皮髓交界处肾小管上皮细胞中的变化最为明显.c.在糖尿病肾病小鼠中高表达C3aR的肾小管上皮细胞常有空泡变性的情况.上述工作印证了先前对2型糖尿病肾病患者肾小球基因表达谱的分析结果,更加明确了C3aR与糖尿病肾病的相关性,同时揭示了C3aR在正常小鼠和糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达、分布和变化规律,有利于进一步揭示C3aR的功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用,探讨糖尿病肾病的分子机制。

高表达C3aR的肥大细胞在糖尿病肾病患者肾组织中的分布及病理意义分析

选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例,分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组,利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色,分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点,及其与DN发生、发展的关系,利用连续切片、免疫荧光双套色染色、免疫电镜、及甲苯胺蓝染色等方法对DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞进行细胞类型鉴定.结果表明:a.光镜和免疫电镜的形态学分析显示DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点,免疫荧光双套色染色的分析显示,C3aR浸润细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白酶阳性,与肥大细胞的情况一致,甲苯胺蓝特殊染色进一步证实这是一种肥大细胞.b.正常移植供肾组织中虽有肥大细胞分布,但数量很少;从DN早期组到DN中期组,再到DN晚期组,肾组织中肥大细胞的数量有一种不断增加的趋势;DN患者肾组织肥大细胞的数量与24 h尿蛋白和血肌酐水平均具有很好的线性相关性.上述工作不仅揭示了在DN发生发展过程中肥大细胞在DN患者肾组织中的数量及分布情况,提示肥大细胞很可能参与了DN的发生发展过程,同时,DN患者肾组织肥大细胞高表达过敏毒素C3a受体C3aR的发现,提示C3a/C3aR通路很可能在DN患者肥大细胞的招募和激活过程中有重要作用.

C3a、C5a及其受体在IgA肾病发病中的作用

目的:探讨C3a、C5a及其受体C3aR、C5aR在IgA肾病(IgAN)发病中的作用。方法:选取病理分级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级(n=30、30、23)IgAN患者的肾组织标本83例作为病例组,同时选取肾脏肿瘤患者手术切除的正常肾组织10例作为对照,采用免疫组化方法分别检测C3a、C5a、C3aR及C5aR在肾组织中的表达;收集83例IgAN患者血清、尿液标本作为病例组,同时收集10例健康成人血清、尿液标本作为阴性对照,10例脓毒血症患者血清、尿液标本作为阳性对照,采用ELISA法检测各组血清、尿液中C3a、C5a水平。结果:C3a、C3aR在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级IgAN患者肾组织中阳性细胞百分比分别为(16.0±5.7)%、(12.3±3.5)%,(19.9±6.3)%、(20.9±3.7)%,(38.3±17.3)%、(30.6±4.3)%,高于正常对照组的(3.4±1.6)%、(1.7±1.6)%(F=32.606和190.792,P均<0.001)。C5a、C5aR在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级IgAN患者肾组织中阳性细胞百分比分别为(14.4±2.6)%、(14.8±3.6)%,(22.0±3.9)%、(20.2±5.0)%,(31.1±4.3)%、(41.4±8.5)%,高于正常对照组的(7.8±2.8)%、(6.1±1.6)%(F=143.992和140.237,P均<0.001)。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级IgAN、脓毒血症患者和健康人血清中C3a、C5a水平分别为(2.20±0.30)、(3.60±0.70),(1.90±0.50)、(3.80±0.70),(1.90±0.80)、(3.40±0.70),(2.30±0.50)、(3.20±1.10),(0.90±0.50)、(0.06±0.04)μg/L(F=6.033和27.383,P均<0.05);尿液中C3a、C5a水平分别为(1.80±0.80)、(2.60±1.30),(4.80±2.00)、(4.80±1.50),(7.00±3.00)、(7.00±4.90),(3.30±1.90)、(3.00±0.90),(0.03±0.01)、(0.07±0.07)μg/L(F=20.913和11.892,P均<0.001)。结论:C3a、C5a参与IgAN的发生与发展,在IgAN病理损伤过程中起重要作用。

补体C3a及其受体在马兜铃酸Ⅰ肾损伤大鼠体内表达分析

目的分析补体C3a(complement 3a)及其受体C3aR(complement 3a receptor)在马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid I,AAI)肾损伤大鼠体内的表达情况,初步探究其在马兜铃酸肾病中的作用。方法 SD大鼠按体质量完全随机分为溶媒对照组,AAI低、高剂量(2.25,9.00 mg·kg^(-1))组,连续腹腔注射给药14 d,取血清,检测肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、补体C3、C3a;用HE法染色观察肾脏病理组织学变化;用蛋白免疫印迹(Western Blot)法分析肾脏组织C3aR蛋白的表达;用免疫组织化学方法分析肾脏组织C3aR的表达变化。结果与溶媒对照组比较,AAI低、高剂量组Cr、BUN水平显著升高(P<0.05,P<0.01);补体C3水平显著降低(P<0.01),而C3a水平显著升高(P<0.05,P<0.01);肾脏病理学检查显示AAI低、高剂量组肾脏有明显病变;Western Blot结果显示,与溶媒对照组比较,AAI低、高剂量组大鼠肾脏中C3aR蛋白表达水平明显升高,且呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.01);免疫组化分析显示,溶媒对照组肾组织中可在肾小管上皮细胞见C3aR少量表达,AAI低、高剂量组的大鼠肾组织中C3aR主要表达在肾小管上皮细胞和间质细胞等,且C3aR表达显著高于溶媒对照组(P<0.01),随病理损伤程度增加而增多。结论C3aR在AAI致肾损伤大鼠肾脏组织中有表达,通过与其配体结合可能引起肾组织的损伤。补体C3a及其受体在马兜铃酸肾病中发挥一定的作用。

C3a及C5a在45例儿童紫癜性肾炎诊断中的应用价值

目的:探讨C3a及C5a在紫癜性肾炎诊断中的应用价值。方法:选择2018年5月至2018年12月河南中医药大学第一附属医院儿科肾脏病区45例HSPN患儿、15例HSP患儿及同期体检15例健康儿童为研究对象。留取健康儿童、HSP及HSPN患儿急性期及恢复期的外周血,采用ELISA检测血清中C3a及C5a的水平,并采集HSPN患儿24 h尿蛋白定量、肌酐及肾脏病理分级的临床数据。结果:HSPN患儿急性期血清中C3a及C5a水平高于健康儿童及HSP患儿(P<0.05),且恢复期出现下降(P<0.001);HSPN患儿急性期血清中C3a与24 h尿蛋白相关,但与肌酐不相关,血清中C5a与尿蛋白及肌酐均不相关,肾穿患儿血清中C3a及C5a与肾脏病理分级呈正相关;血清中C3a在HSPN诊断中的敏感性为0.822,特异性为0.722,截点为7 621.94 ng/ml,C5a在诊断HSPN的敏感性为0.756,特异性为0.611,截点为73 423 pg/ml,C3a联合C5a在诊断HSPN的敏感性为0.822,特异性为0.867。结论:C3a及C5a可能参与HSP发病,且与肾脏损伤及病情活动相关。

乙型肝炎肝硬化患者肝功能分级与过敏毒素C3a水平的相关性

目的研究乙型肝炎肝硬化患者肝功能分级与过敏毒素C3a水平的相关性,并绘制ROC曲线测定界值,来探索过敏毒素C3a在乙型肝炎肝硬化诊治中的意义。方法共纳入195例患者,检查血液过敏毒素C3a值、总胆红素值、白蛋白值、凝血酶原时间及腹水与肝性脑病情况,采用Child-Pugh改良分级法评估患者肝功能。另取20例乙肝病毒携带者作为对照组。结果肝功能C级组C3a水平较B级组降低(P<0.01);两组均较肝功能A级组及对照组降低(均P<0.01)。肝功能受损程度越重,乙型肝炎肝硬化患者血液中C3a浓度越低。结论乙型肝炎肝硬化患者肝功能Child-Pugh分级与其血液中过敏毒素C3a水平呈负相关性,血液中C3a水平可用于乙型肝炎肝硬化患者肝功能水平的评估。