姜黄素对鼻咽癌C666-1细胞增殖的抑制作用及其可能机制

目的:观察姜黄素对鼻咽癌细胞株C666-1增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法:0、10、25、50及100μmol/L姜黄素作用24 h或50μmol/L姜黄素不同时间(0、6、12及24 h)后,CCK-8法检测C666-1细胞的增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测不同浓度姜黄素作用24 h后细胞内AMPK、S6K1及S6蛋白磷酸化情况。结果:与0μmol/L组比,50、100μmol/L姜黄素作用24 h后,对C666-1细胞增殖的抑制作用显著增强[(38.33±6.53)%、(21.14±5.36)%vs(100±0.00)%,均P<0.05];50μmol/L姜黄素作用6、12、24 h后,对C666-1细胞增殖的抑制作用显著增强[(49.6±5.67)%、(47.7±6.65)%、(46.86±9.4)%vs(100±0.00)%,均P<0.05]。50、100μmol/L姜黄素作用后细胞的凋亡率显著增加[(43±12.53)%、(48±8.54)%vs(2.87±1.03)%,均P<0.05],50μmol/L姜黄素作用12、24 h后,细胞凋亡率随作用时间延长而增加[(35.33±5.86)%、(47.33±13.01)%vs(4.33±3.21)%,均P<0.05]。50、100μmol/L姜黄素可促进细胞内AMPK磷酸化,抑制其下游mTOR信号通路中S6K及S6蛋白的磷酸化活化[(3.87±1.38)、(0.19±0.16)、(0.39±0.24)vs 1;(4.34±1.34)、(0.059±0.043)、(0.11±0.095)vs 1,均P<0.05]。结论:姜黄素可显著抑制鼻咽癌C666-1细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与影响AMPK、S6K1及S6蛋白磷酸化有关。

AMPK信号通路在ECG诱导人鼻咽癌细胞株C666-1凋亡中的作用研究

目的研究AMPK信号通路在ECG诱导人鼻咽癌细胞株C666-1凋亡中的作用。方法人鼻咽癌C666-1细胞给予AMPK特异性抑制剂compound C或不同浓度ECG处理后,分别采用CCK-8法和TUNEL染色法检测细胞增殖情况和凋亡;采用Western blotting法检测AMPK、p70S6K、S6等相关蛋白磷酸化水平。结果 ECG可剂量依赖性地增加C666-1细胞中AMPK的磷酸化水平并抑制p70S6K和S6的磷酸化;给予compound C预处理之后可显著逆转ECG对C666-1细胞增殖和凋亡的影响,并逆转ECG对AMPK、p70S6K和S6等磷酸化水平的影响。结论ECG通过调控AMPK依赖的通路抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导其凋亡。

鼻咽癌C666-1细胞中EBV miRNA的表达情况及其功能研究

目的观察鼻咽癌C666-1细胞中EB病毒(EBV)所编码的44个miRNA的表达情况(即BART、BHRT家族的表达情况)及BART-15对EBV的即刻早期基因(BZLF-1)表达的影响。方法培养C666-1细胞,取对数生长期的细胞,提取RNA,采用polyA加尾PCR法对EBV miRNA进行扩增,观察BHRF和BART家族的表达情况。将BART-15抑制剂转染C666-1细胞,转染成功后,用real-time PCR法检测BZLF-1的表达。结果在EBV编码的44个miRNA中,BHRF家族的表达普遍低于BART家族。BART-15抑制剂转染C666-1细胞后,转染率为77.0%,BART-15的表达降低了87%。抑制C666-1细胞中BART-15的表达后,BZLF-1的表达增高了2.54倍。结论鼻咽癌C666-1细胞中EBV的miRNA表达谱存在家族性差异,其中的BART-15可能直接或间接作用于EBV的BZLF-1,影响EBV的感染状态。

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用，并初步探讨其机制．人鼻咽癌C666—1细胞给予不同浓度ECG（0—100μmol／L）处理48h后，采用CCK-8法检测细胞增殖水平，使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率，利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化．结果表明，25μmol／L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖，诱导细胞凋亡；并且ECG可浓度依赖性增加Bax／Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平．以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖，并诱导细胞凋亡．ECG的作用与其增加Bax／Bel-2相对蛋白比值进而激活easpase-3有关．

放射后鼻咽癌细胞株C666-1存活亚克隆高表达miR-181a

目的:初步分析miR-181a与鼻咽癌细胞系C666-1放射敏感的相关性。方法:首先使用大剂量8Gy的X射线照射C666-1,挑选三个大的存活亚克隆并命名为C666-1-R1,C666-1-R2和C666-1-R3,然后应用MTT等技术分析亚克隆及对照母本C666-1细胞系放射敏感性的差异,最后采用实时荧光定量PCR法,分析三个存活亚克隆及对照C666-1的miR-181a表达水平。结果:通过MTT比色法检测细胞增殖:6Gy照射后,三个亚克隆C666-1-R1,C666-1-R2和C666-1-R3的细胞存活率均高于对照细胞C666-1,尤其C666-1-R2在48、72和96h的存活率增高均有显著性差异(P<0.05),提示C666-1-R2具有放射抗拒性。另一方面,各亚克隆及对照细胞的miR-181a的2-△△Ct值如下:C666-1-R1=0.693,C666-1-R2=0.486,C666-1-R3=0.762,C666-1=1。提示放射后存活的三个亚克隆均高表达miR-181a,尤其放射抗拒亚克隆C666-1-R2的miR-181a表达更高。结论:miR-181a与鼻咽癌存活亚克隆的放射抗拒性密切相关。miR-181a可能是评估鼻咽癌放射敏感性的一个新分子,miR-181a与鼻咽癌放射抗拒的相关性值得深入研究。

丙泊酚通过抑制JNK/ERK1/2通路抑制鼻咽癌C666-1细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨丙泊酚对鼻咽癌C666-1细胞的作用及机制。方法C666-1细胞分为4组:对照组、丙泊酚22、33、44μmol/L组。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡、侵袭和迁移能力;Western印迹检测凋亡和侵袭相关蛋白表达。JNK抑制剂SP600125或ERK1/2抑制剂U0126与丙泊酚(44μmol/L)单独或联合处理细胞后,Western印迹检测JNK和ERK1/2蛋白磷酸化,CCK-8检测细胞活性。构建裸鼠移植瘤,免疫组化检测瘤组织中p-JNK、p-ERK1/2和Ki67的表达,TUNEL检测瘤组织细胞凋亡。结果与0μmol/L组比较,丙泊酚33μmol/L及以上浓度明显抑制C666-1细胞活力(P<0.05)。与对照组比较,丙泊酚33和44μmol/L组C666-1细胞中凋亡相关蛋白表达升高(P<0.05),细胞凋亡数增加(P<0.05);细胞侵袭和迁移数减少(P<0.05),侵袭相关蛋白及JNK和ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05),SP600125或U0126与丙泊酚单独或联合组均降低细胞存活率(P<0.05)。丙泊酚显著抑制移植瘤生长并促进凋亡(P<0.05)。结论丙泊酚通过抑制JNK/ERK1/2通路诱导鼻咽癌C666-1细胞凋亡,抑制增殖、侵袭和移植瘤生长。

叶黄素对鼻咽癌C666-1细胞的抑制作用及其机制

目的:研究叶黄素对鼻咽癌C666-1细胞的抑制作用及其机制。方法:以0(空白对照)、20、40、80、160 mg/L的叶黄素培养C666-1细胞0、12、24、48 h,以CCK-8法测定细胞增殖率,以TUNEL法测定细胞凋亡率,以Western blot法测定细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和m TOR通路中核糖体蛋白S6激酶(S6K)、S6蛋白的磷酸化程度。结果:与空白对照比较,80、160 mg/L叶黄素作用48 h及160 mg/L叶黄素作用12、24、48 h的细胞增殖率均降低(P<0.05);80、160 mg/L叶黄素作用48 h及160 mg/L叶黄素作用24、48 h的细胞凋亡率增加(P<0.05);80、160 mg/L叶黄素作用48 h的细胞内磷酸化AMPK增加,磷酸化S6K、S6蛋白减少(P<0.05)。结论:叶黄素能有效抑制C666-1细胞增殖,可能通过促进AMPK磷酸化,抑制S6K、S6蛋白磷酸化诱导其凋亡。

穿心莲内酯通过影响SIRT3-p53信号通路诱导鼻咽癌C666-1细胞凋亡的机制研究

在前期研究工作中发现穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)可以抑制鼻咽癌C666-1细胞活力并诱导其凋亡,但相关的分子机制并不清楚.为了明确穿心莲内酯调控C666-1细胞活力的具体机制,本课题组在体外培养的C666-1细胞中给予穿心莲内酯处理,并通过Real-time PCR检测Sirutins家族成员(SIRT1-7)的mRNA表达进行初步筛选;通过siRNA干扰的方法沉默SIRT3之后进一步检测穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;采用Western Blotting的方法检测沉默SIRT3之后穿心莲内酯对C666-1细胞中SIRT3/p53表达的影响.结果表明:穿心莲内酯能够显著增加SIRT3的mRNA表达,而对其它亚型的影响较小;沉默SIRT3能够部分逆转穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;穿心莲内酯可通过影响SIRT3的蛋白表达调控其下游凋亡相关蛋白p53的水平进而诱导细胞凋亡.本实验为进一步研究穿心莲内酯抑制鼻咽癌的机制奠定了基础.

二甲双胍对鼻咽癌细胞C666-1放射敏感性的影响

目的研究二甲双胍对人鼻咽癌细胞C666-1是否具有放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度二甲双胍(0、1、2、4、8、16、32和64 mmol/L)对鼻咽癌细胞C666-1增殖的影响。将对数生长期的鼻咽癌细胞分为对照组(Con组)、二甲双胍组(Met组)、放疗组(IR组)和放疗联合二甲双胍组(IR+Met组)。细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,拟合存活曲线,并计算放射增敏比(SER);碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期时相分布;蛋白质印迹法检测Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡相关蛋白表达水平。结果各浓度二甲双胍预处理24和48 h后的细胞增殖率均低于对照组,差异有统计学意义,F=404.934,P<0.001;F=523.843,P<0.001。浓度-时间因素交互作用分析结果显示,二甲双胍对C666-1细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性,F=4.561,P=0.001。C666-1细胞SER_(D0)=1.452,SER_(Dq)=1.302, IR+Met组存活分数(SF)低于IR组(F=1.413,P=0.020),二甲双胍对C666-1细胞有放射增敏作用。IR+Met组与Met组和IR组比较,G_(2)/M期细胞比例增加,F_(1R+Met)=1.318,P=0.003。放疗后12 h Caspase-3和Bcl-2以及放疗后24 h Caspase-3和Caspase-9蛋白表达经放疗和二甲双胍交互作用结果显示差异有统计学意义,均P<0.05;放疗后12和24 h,IR+Met组与Met组和IR组比较,Caspase-3和Caspase-9表达水平上调(均P<0.01), Bcl-2/Bax表达水平降低(均P<0.05),提示细胞凋亡增多。结论二甲双胍对鼻咽癌C666-1细胞具有放射增敏作用,其作用机制可能通过影响Bcl-2/Bax/Caspase-9/Caspase-3细胞凋亡信号通路,从而促进细胞凋亡。

顺铂增加BCL-2蛋白高表达的鼻咽癌细胞凋亡

目的:通过对3种不同鼻咽癌细胞的BCL-2蛋白表达、细胞存活率和凋亡率的观察,探讨提高顺铂治疗鼻咽癌疗效的新方法。方法:采用Western blot技术检测3种不同鼻咽癌细胞CNE1、C666-1及SUNE1的BCL-2蛋白的表达情况;采用MTT法及流式细胞技术,检测并比较顺铂对3种鼻咽癌细胞的细胞存活率和凋亡率的影响。结果:BCL-2蛋白在CNE1及C666-1细胞上高表达,在SUNE1上几乎无表达(P<0.05);经顺铂干预后,CNE1及C666-1细胞的细胞凋亡率明显升高,存活率明显低于对照组(P<0.05);SUNE1细胞的细胞凋亡作用较弱(P<0.05)。结论:BCL-2蛋白在不同类型的鼻咽癌细胞上表达量不同,提示顺铂对BCL-2蛋白高表达的鼻咽癌细胞的杀伤作用更强。

鼻咽癌细胞系抗失巢凋亡特性的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞系的抗失巢凋亡特性。方法:采用鼻咽癌细胞系CNE-2、C666-1、TW03以及正常鼻咽上皮细胞系NP69作为正常对照,用软琼脂实验、悬浮培养等方法诱导失巢凋亡,并用AnnexinV-PI双染色流式细胞计观察凋亡情况。结果:鼻咽癌细胞株CNE-2、C666-1、TW03均具有抵抗失巢凋亡的特性。3种鼻咽癌细胞均能在软琼脂上形成集落,并在培养24h后即可出现,1周内形成的集落速度较快。悬浮培养的鼻咽癌细胞同样出现细胞集落,而NP69细胞未见细胞集落出现。悬浮培养的鼻咽癌细胞在培养48h后凋亡率并没有升高。而NP69细胞则出现了凋亡。结论:鼻咽癌细胞系CNE-2、C666-1、TW03均具有抵抗失巢凋亡的特性。