β-榄香烯对人肺腺癌裸鼠移植瘤放疗增敏作用与HIF-1α CAⅨ的相关性研究

目的:建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型,研究β-榄香烯对移植瘤的放疗增敏效应,寻找最佳增敏剂量,并探讨放疗增敏机制是否与HIF-1α、CAⅨ具有相关性。方法:采用细胞悬液接种法建立裸鼠移植瘤模型,待移植瘤体积达0.8～1.0 cm^3时,将裸鼠随机分组,观测各组移植瘤的体积倍增时间。通过计算增敏系数,获得最佳增敏剂量。RT-PCR及免疫组化方法检测HIF-1α表达,免疫组化检测CAⅨ的表达。结果:成功建立裸鼠移植瘤模型。25、45、100mg/kg三种浓度β-榄香烯的增敏系数EF值分别为0.84、1.24、2.04,最佳增敏剂量为45 mg/kg。药物组、放疗组与空白组比较,HIF-1 αmRNA表达明显增强(P<0.01),药物组与放疗组之间HIF-lαmRNA表达没有差异(P>0.05),联合组与其他各组比较,HIF-1αmRNA表达明显降低(P<0.01)。各组HIF-1α的免疫组化情况:药物组与空白组比较HIF-1α表达略增强(P>0.05);放疗组与空白组比较HIF-1α表达明显增强(P<0.05),联合组与其他各组比较HIF-1α表达明显降低(P<0.01)。各组CAⅨ的免疫组化情况:放疗组与空白组比较CAⅨ表达略增强(P>0.05),药物组与空白组比较CAⅨ表达增强(P<0.05),联合组与其他各组比较,CAⅨ表达明显降低(P<0.05)。结论:本研究证实β-榄香烯的最佳增敏剂量为45 mg/kg,与放疗联合明显抑制HIF-1α、CAⅨ的表达,提示β-榄香烯通过改善乏氧状况达到放射增敏的作用,值得进一步研究。

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。

MN/CAⅨ在肾细胞癌诊断中的价值

目的探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照。采用免疫组化技术检测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本。结果 RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨmRNA阳性率在癌组织中为82.3%(51/62),在外周血中为54.8%(34/62),显著高于对照组(P<0.05),在肾透明细胞癌患者癌组织和外周血中MN/CAⅨmRNA阳性率分别为98%(49/50)和66%(33/50),显著高于其它类型肾癌结果(P<0.05)。免疫组化结果显示MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2%(35/36),明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织(P<0.05)。结论 MN/CAⅨ在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值。

CaⅨ-LuLⅩ(20≤Z≤71)离子3s^2 ~1S_0-3s3p ~1P_1的共振跃迁

在对CaⅨ-LuLⅩ(20≤Z≤71)离子3s3p1P1能级结构的多组态相互作用理论HFR方法计算的基础上,分析了各种效应对等电子序列离子能级结构的影响,找出了能级沿等电子序列变化的规律性.预测计算了CaⅨ-LuLⅩ(20≤Z≤71)离子3s3p1P1的组态能级,进一步计算了CaⅨ-LuLⅩ(20≤Z≤71)离子3s21S0-3s3p1P1的共振跃迁谱线波长、振子强度和跃迁概率,其中GaⅩⅩ,AsXXⅡ,TcXXXⅡ,PdXXXⅤ,TeXLⅠ和XeXLⅢ离子的3s21S0-3s3p1P1的共振跃迁谱线波长等有关数据为本文内插计算值,而BaXLⅤ-LuLⅩ的所有结果纯属本文外推预测计算结果.

被动吸烟对小鼠肺组织中CYP1A1、CYP1B1、VEGF和CAⅨ表达的影响

目的探讨被动吸烟对小鼠肺组织中CYP1A1、CYP1B1、VEGF和CAⅨ表达的影响。方法利用小动物口鼻单浓度动态暴露系统构建小鼠被动吸烟模型,观察被动吸烟对小鼠体重的影响。HE染色法观察被动吸烟对小鼠肺组织结构的影响。免疫组化法检测被动吸烟对小鼠肺组织中CYP1A1、CYP1B1、VEGF和CAⅨ表达的影响。结果被动吸烟对小鼠体重影响很大,与空白对照组比较,被动吸烟不同剂量组的小鼠体重增长缓慢;HE染色结果显示:被动吸烟烟雾浓度越大,对小鼠肺组织的损伤程度越大。免疫组化结果显示:与空白对照组比较,高剂量组CYP1A1、CYP1B1、CAⅨ的阳性表达差异均有统计学意义(P <0.05);中、高剂量组VEGF的阳性表达差异有统计学意义(P <0.05)。相关性分析结果显示:高剂量组小鼠肺组织中CYP1A1与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.316)。结论被动吸烟对小鼠的体重影响很大;同时被动吸烟会对肺组织造成一定的损伤;并且被动吸烟能够上调小鼠肺组织CYP1A1、CYP1B1、VEGF和CAⅨ的蛋白表达,并且随着被动吸烟剂量的增加各基因的阳性表达率增加。

肝细胞癌中CAⅨ表达与侵袭转移的关系

目的探讨碳酸酐酶Ⅸ(carbonic anhydraseⅨ,CAⅨ)在肝细胞癌和癌旁组织中的表达及与肝细胞癌侵袭、转移的关系。方法采用免疫组化LDP法检测67例肝细胞癌及癌旁组织中CAⅨ的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。将CAⅨ过表达载体及干扰表达的siRNA分别转染至人肝癌细胞株HepG2后,应用qRT-PCR法检测各组CAⅨ的表达,CCK-8实验检测CAⅨ对肝癌细胞增殖能力的影响,细胞迁移/侵袭实验检测其对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。从TCGA数据库中检索肝细胞癌CAⅨ表达与预后的资料,进行对比分析。结果CAⅨ在肝细胞癌中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05),且随着肝细胞癌分化程度的降低其阳性率逐渐升高(P<0.05)。随访中位时间17个月,Kaplan-Meier生存曲线显示,CAⅨ阳性者和阴性者的总生存率差异有统计学意义(P<0.05)。TCGA数据库中CAⅨmiRNA高表达的肝细胞癌患者总生存率显著低于低/中等表达者(P=0.00045)。细胞增殖实验及细胞迁移/侵袭实验显示,CAⅨ过表达能促进肝癌细胞HepG2的增殖及侵袭转移能力,siRNA干扰沉默HepG2细胞中CAⅨ的表达抑制其增殖及侵袭转移能力(P<0.05)。结论CAⅨ表达升高与肝细胞癌组织分化程度密切相关,且提示预后较差,其在肝癌组织的高表达可能具有促进肝癌细胞增殖及侵袭转移的能力。

CAⅨ在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的研究CAⅨ(碳酸酐酶9,carbonic anhydraseⅨ)在肾细胞癌(RCC)中的表达及临床意义。方法收集肾透明细胞癌根治术后病理标本60例,利用免疫组织化学(SP)法检测CAⅨ的阳性表达情况,以正常肾组织标本30例及其他少见类型肾癌标本20例作为实验对照。结果 60例透明细胞癌标本中CAⅨ阳性表达率为85.0%(51/60);30例正常肾组织中CAⅨ阳性表达率为0;20例少见类型肾癌中CAⅨ总阳性表达率为15.0%(3/20),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 CAⅨ对肾透明细胞癌及少见类型肾癌有特异性,但在正常肾组织中无表达,在肾细胞癌的诊断、靶向治疗及预后评估中具有潜在临床意义。

恩度联合紫杉醇对C57BL/6肺癌小鼠肿瘤生长及CAⅨ、HIF-1α表达的影响

目的探究恩度联合紫杉醇对C57BL/6肺癌小鼠肿瘤生长及CAⅨ、HIF-1α表达的影响。方法将300只C57BL/6肺癌小鼠分成5组,分别为空白对照组、正常对照组、紫杉醇低剂量组、紫杉醇中剂量组和紫杉醇高剂量组,正常对照组注射7.5 mg/m^2恩度进行治疗,空白对照组注射等量生理盐水,紫杉醇低剂量组、紫杉醇中剂量组和紫杉醇高剂量组在正常对照组的基础上分别注射30、100、170 mg/m^2的紫杉醇,测量小鼠肿瘤的生长情况,测定小鼠的瘤重和抑瘤率,检测各组小鼠肺癌组织以及血清中CAⅨ、HIF-1α的表达水平。结果紫杉醇组的肿瘤体积显著小于空白对照组和正常对照组(P<0.05),且随着紫杉醇剂量的增加,肿瘤体积的减小程度明显增加(P<0.05);持续治疗4周后,紫杉醇组的瘤重显著小于对照组,抑瘤率显著高于对照组(P<0.05),且随着紫杉醇剂量的增加,瘤重的减小程度及抑瘤率的升高程度明显增加(P<0.05);紫杉醇组小鼠CAⅨ和HIF-1α的表达水平显著低于对照组(P<0.05);且随着紫杉醇剂量增加,CAⅨ和HIF-1α的表达水平显著降低(P<0.05)。结论恩度联合紫杉醇治疗C57BL/6小鼠肺癌能显著调控肿瘤的生长,降低CAⅨ和HIF-1α的表达水平,为肺癌的临床治疗提供一定的参考依据。

HIF-1α及CAⅨ在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和缺氧相关蛋白碳酸酐酶-9(CAⅨ)的蛋白表达水平并分析与其它临床病理特征的关系及两者相关性。方法用免疫组织化学Evinson法检测88例乳腺癌组织中HIF-1α和CAⅨ的蛋白表达水平。结果 88例乳腺癌组织中,有68例检测到HIF-1α阳性表达,阳性率为77℅,其中31例呈低表达(35%),37例呈高表达(42%)。88例乳腺癌组织中,有51例检测到CAⅨ阳性表达,阳性率为58℅,其中32例呈低表达(36%),19例呈高表达(22%);HIF-1α、CAⅨ表达与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移密切相关,组织学分级越高,表达越强,与年龄无关,二者表达有明显相关性。结论 HIF-1α、CAⅨ在乳腺癌组织中的表达可能促进乳腺癌的发生发展,并且与低分化、预后不良有关。HIF-1α、CAⅨ可能共同促进乳腺癌侵袭转移。

肾癌相关抗原G250-MN/CAⅨ在肾癌疫苗和免疫治疗研究中的应用

肿瘤疫苗主要是通过肿瘤相关抗原,尤其是肿瘤特异性抗原,激活免疫系统产生针对肿瘤的特异性免疫反应来达到治疗目的。G250在肾细胞癌中的特异性表达使它成为肾癌疫苗潜在的靶抗原和肾癌免疫治疗的重要靶分子。本文主要针对以G250-MN/CAⅨ为特异性靶点的肾癌疫苗和免疫治疗研究进展作一综述。

五步蛇毒纤溶组分FⅨcaⅠ的分离纯化和生物活性的测定

目的从五步蛇(安徽产)毒分离纯化一种具有纤溶活性的组分FⅨcaⅠ,并研究其理化性质和生物活性。方法应用DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析、Chelating Sepharose Fast Flow金属离子螯合亲和层析和Sephadex G-50凝胶层析四步分离纯化目的组分FⅨcaⅠ;纤维蛋白平板法和SDS-PAGE测定FⅨcaⅠ的生物活性;通过小鼠皮下注射不同剂量的FⅨcaⅠ,测量皮下出血斑的面积并求出最小出血剂量。结果从五步蛇毒分离纯化的FⅨcaⅠ组分为单体蛋白,相对分子量23 ku,等电点为4.8。FⅨcaⅠ可降解纤维蛋白和纤维蛋白原,优先降解α链,呈时效、量效关系。蛇毒纤溶酶FⅨcaⅠ最小出血剂量为54.9μg,为非出血性蛇毒纤溶酶。结论从五步蛇(安徽产)毒分离纯化的FⅨcaⅠ是一种分子量较小,比较稳定,纤溶活性强,可直接降解纤维蛋白且非出血性的新蛇毒纤溶酶。

Carbonic Anhydrase IX在胃癌中的表达及对胃癌术后复发的影响

目的 探讨CAⅨ（Carbonic Anhydrase IX）在胃癌组织中的表达以及对胃癌术后复发的影响.方法 采用免疫组化染色法检测CAIX在56例术后胃癌病人组织中的表达,比较不同分期的胃癌组织中CAIX表达的差异以及对术后胃癌病人术后复发率的影响.结果 56例胃癌组织切片中CAIX阳性率为85.7％;在Ⅰ～Ⅳ期的阳性率分别为40.0％、66.7％、96.8％、100％,不同分期胃癌组织中CAIX阳性表达比较有显著差异（P＜0.05）;CAIX阳性者手术后1～3年的累计肿瘤复发率分别为35.4％、54.2％、66.7％,CAIX阴性者手术后1～3年的累计肿瘤复发率分别为0％、12.5％、25％,两组手术后1～3年的累计肿瘤复发率比较有显著差异（P＜0.05）.结论 CAIX在胃癌组织中的表达随着胃癌分期增加而增加,CAⅨ阳性者预后差且更容易出现术后的复发.

碳酸酐酶Ⅸ、桩蛋白与生长抑素受体在十二指肠乳头癌组织中的表达及意义

目的探讨十二指肠乳头癌组织中碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)、桩蛋白与生长抑素受体(SSTR)的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测87例十二指肠乳头癌组织中碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)、桩蛋白与生长抑素受体(SSTR)的表达。结果 87例十二指肠乳头癌中,CAⅨ阳性率达71.3%(62/87),桩蛋白阳性率达74.7%(65/87),显著高于其他两组(P<0.05)。而生长抑素受体阳性率48.2%(42/87),显著低于其他两组(P<0.05)。且低分化组的十二指肠乳头癌的CAⅨ阳性率、桩蛋白阳性率、SSTR阳性率与中、高分化组比较,差异显著(P<0.05)。而M1期的十二指肠乳头癌的CAⅨ阳性率、桩蛋白阳性率、SSTR阳性率与M0期比较,差异显著(P<0.05)。结论碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)、生长抑素受体(SSTR)及桩蛋白三者与十二指肠乳头癌的发生、发展及转移密切相关,可以作为诊断早期肿瘤的重要指标之一,也可以用于评价肿瘤的发展及预后。

CXCL9和碳酸酐酶Ⅸ在鼻咽癌患者血清中的表达及其临床意义

目的研究鼻咽癌患者血清趋化因子(CXCL)9和碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)水平与其临床病理因素的相关性。方法选择鼻咽癌患者共32例,结果统计过程中因资料遗失脱落2例,实际完成30例;检测鼻咽癌组和对照组血清CXCL9和CAⅨ水平;分析血清CXCL9和CAⅨ表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、病理类型及淋巴结转移等临床病理参数的相关性;所有患者均给予2年定期随访,比较死亡患者与存活患者血清CXCL9和CAⅨ水平。结果鼻咽癌组较对照组血清CXCL9和CAⅨ水平均明显增高(P<0.01);血清CXCL9和CAⅨ表达水平与鼻咽癌患者的性别、年龄、大小及病理类型无明显相关性(P>0.05),而与鼻咽癌患者TNM分期、淋巴结转移呈明显相关(P<0.01)。随访2年显示:6例死亡,24例存活;死亡患者入院时血清CXCL9和CAⅨ水平均明显高于存活者入院时(P<0.01)。结论鼻咽癌患者血清CXCL9和CAⅨ的表达水平明显升高,与鼻咽癌的恶性程度呈显著性相关,可能是评估鼻咽癌患者预后的重要指标。

碳酸酐酶Ⅸ联合TFE3对成人Xp11.2易位性肾癌的诊疗作用

目的研究免疫组织化学方法碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)联合TFE3在鉴别诊断Xp11.2易位性肾癌中的作用。方法纳入山东第一医科大学第二附属医院及上海交通大学医学院附属仁济医院2013年2月-2017年9月收治的24例成人Xp11.2易位性肾癌及24例成人肾透明细胞癌临床病理资料。所有患者均采用CAⅨ免疫组化染色。采用半定量计数方法,对比两组肾细胞癌中CAⅨ的表达情况。结果24例Xp11.2易位性肾癌患者中CAⅨ阳性者1例,且为弱阳性;24例透明细胞性肾细胞癌患者中CAⅨ阳性者22例,其中强阳性者19例,弱阳性者3例;两者CAⅨ阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。CAⅨ在6例TFE3高表达透明细胞性肾细胞癌中全部CAⅨ弥漫强阳性表达。TFE3高表达的透明细胞性肾细胞癌与TFE3高表达的Xp11.2易位性肾癌患者中的CAⅨ阳性率有显著性统计学差异(P<0.01)。结论在日常肾细胞癌诊疗工作中,常规采用免疫组化学CAⅨ联合TFE3有助于筛选透明细胞性肾细胞癌与Xp11.2易位性肾癌。

胃癌组织中碳酸酐酶Ⅸ表达的临床意义及分子机制

目的探讨胃癌(GC)组织中碳酸酐酶(CAⅨ)的临床意义及其分子机制。方法采用基因表达谱动态数据分析(GEPIA2)数据库预测GC组织中CAⅨ基因的差异性表达,利用癌症数据分析(UALCAN)数据库分析CAⅨ表达与GC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier Plotter分析CAⅨ对GC的预后价值;收集10例GC患者的癌患组织(GC组)及其癌旁组织标本(对照组),采用免疫组织化学法检测CAⅨ表达;采用交互式基因检索工具(STRING)和可视代综合发现(DAVID)数据库进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析预测CAⅨ的蛋白质互作关系及调控网络。结果GEPIA2数据库结果显示,与对照组比较,GC组CAⅨ的表达量降低(P<0.05);UALCAN数据库显示,CAⅨ的表达与种族、肿瘤分化等级、幽门螺杆菌感染有相关性(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示,低CAⅨ表达组与高CAⅨ表达组的5年无进展生存期(PFS)相比,差异有统计学意义(P<0.05);临床标本免疫组织化学结果显示,GC组标本中CAⅨ表达量较对照组降低(P<0.05),与数据库预测结果一致;STRING数据库分析显示,CAⅨ与缺氧诱导因子-1α(HIF1α)、溶质载体家族4成员4(SLC4A4)、芳烃受体核转位器(ARNT)等蛋白具有较强相互作用关系;GO分析显示,CAⅨ参与低氧反应下RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调节等过程;KEGG分析显示CAⅨ与癌症信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路的调节有关。结论CAⅨ在GC组织中呈低表达,其水平与GC患者肿瘤分化等级、PFS呈负相关,CAⅨ可能参与肿瘤代谢过程。

p-(18)FFSTC的合成和初步动物学评价

碳酸酐酶Ⅸ(CA Ⅸ)是一个非常有前景的肿瘤乏氧显像的靶点,而一些磺胺类化合物和CAⅨ有特异性结合。为研发一种用于CA Ⅸ检测的特异性正电子发射断层显像(PET)探针,应用点击化学(clickchem-istry)方法快速高效地合成了对CA Ⅸ有特异性结合的含氟磺胺类化合物1-(2-[18F]氟乙基)-N-(4-磺酰胺基苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-酰胺(p-[18F]FSTC),合成时间约60min,标记率为90%,标记物经高效液相分离后放化纯度大于98%。p-[18F]FSTC在体内外稳定,正常小鼠体内分布结果显示,在血液中的清除较慢,脾、肺、肾和胃中的摄取较高。本工作为进一步研究18F标记的磺胺类化合物作为一种肿瘤乏氧显像PET探针提供了实验依据。