组织蛋白酶B抑制剂CA-074Me对小鼠病毒性心肌炎的干预作用

目的观察组织蛋白酶B(cathepsinB)抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠的干预作用。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(N组,n=10)、心肌炎对照组(V组,n=15)、低剂量干预组(L组,n=15)及高剂量干预组(H组,n=15)。后三组经腹腔接种柯萨奇病毒(CVB3m)诱发急性心肌炎,L组和H组于病毒接种后第2d分别腹腔注射CA-074Me0.4mg/kg和4mg/kg,均连续使用7d(2～8d),第15d处死全部存活小鼠并取其心脏,采用RT-PCR和免疫组化等方法半定量分析各组小鼠心肌组织中cathepsinB基因转录及蛋白表达水平。结果V组与N组比较,心肌中cathepsinBmRNA及蛋白表达水均明显增加(P<0.05);L组与V组比较,心肌中cathepsinBmRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),小鼠生存率虽然有所升高,但差异无显著性(P>0.05);H组与V组相比,心肌组织中cathepsinBmRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01),心肌损害减轻,小鼠生存率明显升高,差异有高度统计学意义(P<0.05)。结论CA-074Me通过抑制cathepsinB的表达,减轻心肌损害,提高感染小鼠的存活率,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。

溶酶体酶B抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠心肌保护作用的研究

目的：观察溶酶体酶B（Cathepsin B）抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠的干预作用，并探讨其对心肌保护的作用机制。方法：55只4周龄雄性BALB／c小鼠随机分为正常对照组（N组，n=10）、病毒模型组（V组，n=15）、低剂量干预组（L组，n=15）及高剂量干预组（H组，n=15）。后3组经腹腔接种柯萨奇病毒B3（CVB3）成功诱发急性病毒性心肌炎，L组和H组于病毒接种后第2天分别腹腔注射CA074Me0．4mg·kg^-1和4mg·kg^-1，均连续用7d（第2～8天），第15天处死全部存活小鼠，并采血检测血清cTnI以及收集小鼠心脏标本作组织学检测。结果：小鼠感染CVB后，其心肌组织中Cathepsin B蛋白表达水平及血清cTnI明显增加；经CA-074Me干预后，Cathepsin B表达以及cTnI降低，心肌损害减轻，小鼠生存率升高，尤其以H组最明显。结论：CA-074Me通过抑制Cathepsin B的表达，减轻心肌损害、提高感染小鼠的存活率，起到保护性的作用，并且对心肌细胞的保护存在明显的量效关系，可为今后临床治疗病毒性心肌炎的研究提供参考。

CA-074Me对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨CA-074Me对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用。方法将90只SD大鼠随机分为假手术组(n=10),脑缺血再灌注模型组(n=40),CA-074Me治疗组(n=40)。线栓法制备大脑中动脉梗死(MCAO)模型,TTC染色检测脑梗死体积,TUNEL法原位检测神经细胞凋亡。结果模型组大鼠脑缺血再灌注后1 h后TTC染色即可显示梗死灶,同时神经细胞凋亡计数明显增多(P<0.05),CA-074Me 治疗可明显减少大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积(P<0.05),及其神经细胞凋亡计数(P<0.05)。结论 CA-074Me 治疗能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。

高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中CA-074 Me对JAK2/STAT3信号通路的影响

目的研究高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中CA-074Me对JAK2/STAT3信号通路的影响。方法将44只健康的7日龄C57BL/6J小鼠应用随机数字表法随机分为:正常对照组(11只22眼)和高氧处理组(33只66眼)。正常对照组小鼠在自然环境中与母鼠共同喂养;高氧处理组小鼠与母鼠共同置于氧体积分数为(75±2)%的密闭氧箱内5d后出氧箱,返回到自然环境中。应用随机数字表法将成模的12日龄小鼠随机分为模型组、实验对照组和实验组,每组11只22眼。正常对照组和模型组不予任何药物干预,实验对照组和实验组分别给予玻璃体腔注射DMSO和溶于DMSO的CA-074Me1μl,继而在自然环境中饲养5d。17日龄小鼠采用心腔注射荧光素标记葡聚糖,视网膜铺片法观察新生血管生成的情况;real-timePCR法和Westernblot法检测小鼠视网膜组织中JAK2、STAT3的mRNA及蛋白表达水平。结果在荧光显微镜下,实验组较模型组和实验对照组视网膜血管走行相对清晰,未见明显的缺血无灌注区。四组JAK2、STAT3mRNA及蛋白的相对表达量总体存在差异(P<0.001)。与正常对照组相比,模型组和实验对照组中JAK2、STAT3mRNA及蛋白的表达量均明显增高(P<0.05);与模型组和实验对照组相比,实验组中JAK2、STAT3mRNA及蛋白的表达量显著降低(P<0.05);实验组与正常对照组间,实验对照组与模型组间JAK2、STAT3mRNA及蛋白的表达无显著差别(P>0.05)。结论高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成中JAK2和STAT3表达均增高,CA-074Me可下调JAK2/STAT3信号通路,对视网膜新生血管形成起到抑制作用。

CTSB和bFGF在高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达

目的研究组织蛋白酶B(CTSB)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)在高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及其相关性。方法7日龄C57BL/6J小鼠56只被随机分为对照组、高氧诱导组、DMSO组和CA-074Me组。对照组小鼠在普通环境下饲养;高氧诱导组、DMSO组和CA-074Me组在高氧环境中饲养5 d建立氧诱导视网膜病变模型;DMSO组和CA-074Me组小鼠玻璃体腔分别注射1μl DMSO和1μl CA-074Me,各1次。各组处理后的小鼠转至标准环境饲养5 d后,采用q PCR和Western blot法分别检测各组小鼠视网膜组织中CTSB和b FGF mRNA和蛋白相对表达水平。结果正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和CA-074Me组间小鼠视网膜中b FGF和CTSB mRNA相对表达量总体比较,差异有统计学意义(b FGF:F=226.89,P=0.000;CTSB:F=25.23,P<0.05)。四组小鼠视网膜中b FGF和CTSB蛋白相对表达量总体比较,差异有统计学意义(b FGF:F=121.84,P<0.05;CTSB:F=30.69,P=0.000)。与正常对照组相比较,高氧诱导组和DMSO组中CTSB与b FGF的mRNA和蛋白表达量显著增高;与高氧诱导组相比较,CA-074Me组中CTSB与b FGF的mRNA和蛋白表达量则降低(均P<0.05)。正常对照组和CA-074Me组比较,高氧诱导组和DMSO组比较,CTSB与b FGF的mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CA-074 Me抑制高氧诱导小鼠视网膜组织中CTSB的表达,同时下调b FGF表达。这一机制可能是,CA-074 Me通过抑制CTSB抑制b FGF的表达;也可能是CA-074 Me直接作用于b FGF,其具体机制需要在后期的实验中进一步验证。