氧化苦参碱对人卵巢癌CAOV3细胞的生长抑制作用及机制研究

目的:探讨氧化苦参碱对人卵巢癌CAOV3细胞的生长抑制作用及机制。方法:体外培养人卵巢上皮浆液性癌细胞系CAOV3细胞,氧化苦参碱给药剂量按照0 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml,8 mg/ml作用于CAOV3细胞24 h,48 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,筛选药物最佳作用浓度与药物作用时间;选用4 mg/ml的氧化苦参碱溶液作用于CAOV3细胞,采用划痕实验,检测细胞迁移率;采用Western blotting法检测Caspase3、Bax以及Bcl-2蛋白表达水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与空白组相比,氧化苦参碱可以明显降低CAOV3细胞的细胞活力,且抑制作用具有时间依赖性及剂量依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05);同时筛选出4 mg/ml氧化苦参碱作用于CAOV3细胞48 h为最佳有效条件。与空白组相比,氧化苦参碱可以抑制CAOV3细胞的迁移,且作用具有时间依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05);氧化苦参碱作用于CAOV3细胞后明显升高Caspase3以及Bax蛋白的表达,明显降低Bcl-2蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);氧化苦参碱可以促进CAOV3细胞的早期凋亡。结论:氧化苦参碱可能通过促进细胞的早期凋亡来抑制CAOV3细胞的生长以及迁移,其作用可能与促进Caspase3、Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达有关。

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclin D1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclin D1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化; RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclin D1 mRNA的表达; Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclin D1的蛋白表达。结论淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。

AM及其抑制剂对人卵巢癌细胞株(CAOV3)PKB活性的影响

目的探讨肾上腺髓质素(Adrenom edullin,AM)及AM受体阻断剂(AM22-52)对人卵巢癌细胞株CAOV3蛋白激酶B(PKB)活性的影响。方法以不同浓度的AM和AM22-52诱导CAOV3细胞,利用Western印迹方法,测定PKB活性的变化。结果AM和AM受体阻断剂AM22-52对t-PKB(total-PKB)的表达量均无明显影响;随着AM浓度(1×10-9～1×10-6mol/L)的增加,CAOV3细胞p-PKB活性随之升高,呈剂量依赖关系;AM受体阻断剂AM22-52(1×10-9～1×10-6mol/L)抑制CAOV3细胞内p-PKB活性,也呈剂量依赖效应。结论AM激活CAOV3细胞内的PKB信号通路,AM22-52可有效阻滞此传导途径,为卵巢癌的生物治疗提供新的思路。

喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞的抑制作用研究

目的探讨喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞的抑制作用。方法用比色实验法检测不同浓度喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞抑制作用。结果低浓度喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞有轻微抑制作用;高浓度喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞抑制作用明显,且与作用时间密切相关。结论经不同浓度的喷他脒处理后,卵巢癌CAOV3细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10!mol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺人外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化。结果 bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著。结论 bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖。

甲磺酸甲酯对CAOV3细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨卵巢癌细胞CAOV3经烷化剂甲磺酸甲酯(MMS)作用后端粒酶活性变化与生长状态之间的关系。方法:台盼蓝拒染法计数活细胞,噻唑蓝(MTT)法测定药物作用浓度,流式细胞术观察细胞凋亡,端粒重复扩增法(TRAP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法检测端粒酶活性。结果:用药组与未用药组活细胞百分率无显著差异。MMS主要使CAOV3细胞受阻于S期,未见凋亡峰。用药组与对照组相比较端粒酶活性增强。结论:MMS对CAOV3细胞端粒酶活性有上调作用。CAOVB细胞对MMS的抗凋亡效应可能与端粒酶活性上调有关。

蛋白激酶CK2抑制剂四溴苯三唑可促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡

目的观察蛋白激酶CK2抑制剂四溴苯三唑(4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole,TBB)对卵巢癌CAOV3细胞增殖、凋亡及细胞凋亡调控因子Bcl-2、Bax表达的影响,进一步探讨TBB促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡的作用机制。方法体外培养CAOV3细胞,将其分为对照组、DMSO组和TBB组(终浓度为12.5、25、50、75μmol/L)。MTT测定各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组卵巢癌CAOV3细胞凋亡;Western blot检测各组CAOV3细胞CK2α及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达。结果与对照组[(92.00±4.36)%]比较,TTB各浓度组细胞增殖率分别为(73.00±2.76)%、(67.00±3.51)%、(52.00±2.83)%和(40.00±1.75)%,随着TBB浓度的增加,其对CAOV3细胞增殖的抑制呈剂量依赖性增强(P<0.01);细胞凋亡比例也呈剂量依赖性增加;与对照组比较,CK2α的表达逐渐降低,Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加(P<0.01)。结论 TBB可通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和促进促凋亡蛋白Bax的表达而促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡。

支架蛋白RACK1小干扰RNA抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭

目的观察支架蛋白RACK1小干扰RNA(siRNA)对卵巢癌CAOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达变化。方法体外培养CAOV3细胞,实验分scramble siRNA组和RACK1 siRNA组;Lipofectamine 2000转染CAOV3细胞,Western印迹检测RACK1的干涉效能;MTT法测定CAOV3细胞的增殖率;划痕实验和transwell迁移和侵袭实验研究RACK1对细胞体外增殖、迁移和侵袭运动能力的影响;Western印迹检测CAOV3细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果与scramble siRNA组比较,RACK1 siRNA组RACK1的蛋白表达水平降低,明显抑制CAOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,降低MMP-2和MMP-9蛋白表达。结论下调RACK1表达可抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与改变MMP-2和MMP-9蛋白表达相关。

SIRT1对卵巢癌CAOV3细胞增殖的影响及可能机制

目的分析沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)对人卵巢癌CAOV3细胞增殖的影响,并探讨可能的作用机制。方法利用Lipofectamine 2000转染体外培养的卵巢癌CAOV3细胞,分为正常对照组、阴性对照组和SIRT1-siRNA转染组。RT-PCR和Western blot检测SIRT1的mRNA和蛋白表达水平;MTT检测RNA干扰SIRT1后24、48、72h CAOV3细胞增殖情况;流式细胞术检测RNA干扰SIRT1后CAOV3细胞周期分布;Western blot检测RNA干扰SIRT1后CAOV3细胞SIRT1、p53、p21蛋白表达水平和p53乙酰化状态;免疫共沉淀检测SIRT1蛋白和p53蛋白的相互作用。结果与阴性对照组相比,SIRT1-siRNA转染组72 h后SIRT1的mRNA和蛋白表达水平减少(P<0.05);SIRT1-siRNA转染组48、72 h后的细胞增殖率明显降低(P<0.01);SIRT1-siRNA转染组S期细胞在细胞周期中所占比例显著减少(P<0.01),G1期细胞则明显增加(P<0.01);SIRT1-siRNA转染组p53和p21蛋白表达水平显著升高,p53处于高乙酰化状态(P<0.01);在卵巢癌CAOV3细胞中SIRT1蛋白与p53蛋白存在相互作用。结论通过特异性干涉SIRT1的表达能够抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖,其机制可能为RNA干扰下调SIRT1的表达后,p53蛋白处于高乙酰化状态,继而增强了p53蛋白依赖的p21蛋白的转录激活,从而阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。

肾上腺髓质素对CAOV3细胞增殖的影响

目的观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对体外培养的人上皮性浆液性卵巢癌细胞株(CAOV3细胞)增殖的影响。方法将CAOV3细胞进行体外培养,以不同浓度的AM(1-52)(1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)分别处理CAOV3细胞24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖率。结果在AM(1-52)浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L时均可促进CAOV3细胞增殖(P<0.05),随着AM(1-52)浓度的增高细胞的增殖率逐渐增高。结论AM能显著促进CAOV3细胞的增殖。

卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivin mRNA表达的变化

目的 探讨卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivinmRNA表达的变化。方法 采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂对CAOV3细胞体外生长的抑制作用。应用RT PCR技术检测高浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0 0、5 0 0mg/L)处理 1d ,低浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0、5 0mg/L)处理 1、3、5d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达水平 ,同时利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂作用后CAOV3细胞的抑制率分别为 94 %、88%、34%、2 2 %、13%或 97%、4 6 %、14 %、9%、7% ,随着药物浓度的下降 ,细胞受抑制程度明显减弱 (P <0 0 5 )。低浓度紫杉醇处理1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 15 %、2 3%和 2 9% ;高浓度紫杉醇处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 4 3%。低浓度卡铂处理 1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 14 %、2 2 %和 2 6 % ;高浓度卡铂处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 19%。紫杉醇或卡铂低浓度处理 3d及高浓度处理 1d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量均明显高于未加药的对照 (P <0 0 1) 。

NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3和OVCAR3生长抑制作用的研究

目的 观察环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )选择性抑制剂———氮 2 ,环己氧 4 ,硝基苯 甲基磺胺 (NS398) ,对人卵巢癌细胞系CAOV3和OVCAR3生长的抑制作用。方法 应用免疫组织化学 (免疫组化 )链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶连接 (SP)法 ,在蛋白水平 ,对人卵巢上皮浆液性癌细胞系CAOV3、OVCAR3的COX 2表达情况进行检测 ;采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)快速比色法 ,观察NS398对CAOV3、OVCAR3生长的抑制作用 ,并通过倒置相差显微镜及电子显微镜观察细胞形态学的变化 ;通过DNA梯形电泳和末端脱氧核苷转移酶 (TdT)介导的脱氧尿嘧啶三磷酸(dUTP)缺口末端标记 (TUNEL)实验 ,对细胞凋亡情况进行检测。结果 CAOV3、OVCAR3的COX 2蛋白表达均为阳性。NS398对CAOV3、OVCAR3增殖的抑制率 ,均随着作用时间的延长和药物浓度的增加而增加。NS398作用后 ,CAOV3、OVCAR3细胞胞浆空泡化 ,可见凋亡小体 ,细胞表面的微绒毛消失。DNA梯形电泳显示特征性的梯形谱带 ,TUNEL实验可见凋亡细胞。结论 COX 2很可能成为卵巢癌化学药物治疗 (化疗 )的有效靶点 ,COX

芹菜素抑制人卵巢癌CAOV3细胞增殖的研究

目的探讨芹菜素对人卵巢癌CAOV3细胞增殖的抑制作用。方法2006年10月至12月在中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测芹菜素对CAOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析芹菜素对CAOV3细胞增殖周期的影响。结果20～160μmol/L芹菜素均能抑制CAOV3细胞的生长,且呈明显的时间、剂量依赖性关系。细胞周期分析显示芹菜素组G2/M期细胞比例明显增多,呈量效关系。结论芹菜素抑制CAOV3细胞增殖,可能通过使CAOV3细胞停滞在G2/M期而诱导其凋亡。

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。

膜相关环指蛋白7在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及作用机制研究

目的:探究膜相关环指蛋白7(MARCH7)在上皮性卵巢癌(EOC)组织和细胞中的表达及作用机制。方法:选取就诊且经手术治疗的患者32例,包括EOC患者16例和卵巢组织正常患者16例,收集EOC患者和卵巢组织正常患者的卵巢组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MARCH7 mRNA表达水平。构建过/低表达MARCH7的上皮性卵巢癌细胞(SKOV3、CAOV3)后,采用Transwell实验观察MARCH7对EOC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blot检测过/低表达MARCH7的EOC细胞上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、锌指转录因子1(Snail1)、锌指转录因子2(Slug)蛋白表达。结果:卵巢癌组织MARCH7 mRNA表达水平高于正常卵巢组(P<0.05)。在SKOV3和CAOV3细胞中,正常对照组与低表达对照组和过表达对照组细胞迁移和侵袭能力,以及MARCH7和EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达比较无统计学差异(均P>0.05);与低表达对照组比较,沉默MARCH7的细胞迁移和侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达降低(均P<0.01);与过表达对照组比较,过表达MARCH7的细胞迁移和侵袭能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达升高(均P<0.01)。结论:MARCH7在EOC组织和细胞中呈高表达,可能通过促进EOC细胞的EMT过程,增强EOC细胞的侵袭和迁移能力。

桦木醇对卵巢癌细胞CAOV3增殖及凋亡的影响

目的:研究桦木醇对人卵巢癌细胞CAOV3的细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定不同浓度的桦木醇对CAOV3细胞生长的抑制效果,DAPI染色后观察细胞产生凋亡的形态学变化,流式细胞技术分析细胞凋亡,体外caspase活力测定凋亡相关蛋白caspase-3/-8/-9的激活情况,蛋白质免疫印迹技术检测caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂的情况。结果:桦木醇可有效地抑制CAOV3细胞的增殖并呈量-效关系,IC50值为8μg/mL;DAPI染色呈现典型的细胞凋亡特征,流式结果显示12 h后细胞凋亡率明显增加,caspase-3/-9活性显著上升,免疫印迹检测结果显示PARP断裂。结论:桦木醇抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖并诱导caspase参与的细胞凋亡,并且这种细胞凋亡涉及线粒体通路。

人参皂苷代谢产物CK诱导卵巢癌细胞CAOV3的凋亡机制

目的探讨人参皂苷代谢产物CK对卵巢癌细胞CAOV3的增殖抑制作用,及其诱导细胞凋亡的机制。方法采用MTT比色法测定不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、50.0μg/ml)CK对卵巢癌细胞CAOV3增殖的抑制作用。流式细胞术检测不同浓度(0、2.5、5.0μg/ml)CK诱导CAOV3细胞凋亡的情况;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察细胞凋亡过程中形态变化;体外Caspase活力测定凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的激活情况;Western blot分析Caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的断裂情况。结果 CK可明显抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖,CK浓度与其对细胞的增殖抑制作用呈剂量-效应关系,IC50值为3.6μg/ml。随着CK浓度的增加,发生凋亡的细胞数增加,出现典型的凋亡形态特征的细胞逐渐增多。Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均被激活。随着CK浓度的增加,酶活性增加,Caspase-3底物PARP断裂的条带逐渐加深。结论 CK对卵巢癌细胞CAOV3有毒性作用,能够抑制细胞增殖,且CK浓度与这种抑制作用呈剂量-效应关系;CK抑制CAOV3细胞的增殖作用是通过促进细胞凋亡来实现的,且这种细胞凋亡涉及内源及外源型途径。

全反式维甲酸诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察全反式维甲酸(All-transretinoicacid,ATRA)诱导人卵巢癌细胞CAOV3产生凋亡。方法:应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3凋亡。结果:ATRA作用后电镜下细胞逐渐变圆,细胞表面微绒毛消失,核染色质更加致密,浓缩分块,胞质中有空泡形成,细胞表面出泡,脱落形成膜包裹的凋亡小体。流式细胞术不同浓度ATRA对CAOV3细胞凋亡作用的结果显示在DNA直方图上均出现低于G1期二倍体DNA含量的亚二倍体峰,随药物浓度增加,亚二倍体细胞从10-8mol/LATRA时的18.7%增加到10-6mol/L的37.4%;10-6mol/LATRA作用24h即诱导CAOV3细胞产生典型的梯形DNA条带(DNAladder),大小约180bp的整数倍递增,随ATRA作用时间延长而逐渐加强。结论:ATRA可以诱导卵巢癌细胞产生细胞凋亡,呈时间和浓度依赖性。