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茶树春梢萌发早晚关联基因CsAL1的CAPS分子标记开发
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作者 黄梦迪 陈兰 +5 位作者 苏芹 胡锦瑜 刘桂芝 谭月萍 刘硕谦 田娜 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期207-218,共12页
茶树(Camelliasinensis)作为一种叶用型经济植物,春梢萌发时间是关系茶叶经济价值的重要生物学性状。因此,选育茶树早生品种,对提升茶叶品质和经济效益具有重要的现实意义。以铁观音为参考基因组,通过全基因组关联分析,筛选到一个与茶... 茶树(Camelliasinensis)作为一种叶用型经济植物,春梢萌发时间是关系茶叶经济价值的重要生物学性状。因此,选育茶树早生品种,对提升茶叶品质和经济效益具有重要的现实意义。以铁观音为参考基因组,通过全基因组关联分析,筛选到一个与茶树春梢萌发早晚高度相关的基因CsAL1(Auxilin-like 1,TGY040711)。运用SNP calling获得CsAL1各样本的SNPs,将SNPs与其春梢萌发表型进行关联分析,获得与早生性状显著相关的SNP位点。分析各SNPs的酶切位点,选择合适位点开发茶树早生性状相关CAPS分子标记。利用标记对12份茶树材料基因组DNA进行PCR扩增和酶切检测,随后在72份茶树材料中进一步验证,以期借助CAPS分子标记技术为探究CsAL1中单碱基位点突变与茶树早生性状的联系提供参考,为茶树早生品种的选育提供理论支撑。 展开更多
关键词 茶树 SNP capS分子标记 早生 分子标记育种
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猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立
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作者 张宝戈 黄雅琴 +2 位作者 蔡金双 朱晨光 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1170-1178,共9页
旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆... 旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清,计算阻断率(PI)的临界值,以此来确定该方法的判定标准:当PI≤28.30%时,判定结果为阴性;当PI≥35.05%时,判定结果为阳性;当28.30%<PI<35.05%时,判定为可疑,重复一次试验后如果结果仍为可疑,则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪瘟病毒(CSFV)的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验表明其检测效价可达到1:128;重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%;符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)比对的Kappa值达0.9,具有高度的一致性。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率,可用于后期进行PCV3抗体的检测,为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 cap重组蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
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猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达与鉴定
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作者 朱钰英 高翠翠 +6 位作者 唐青海 刘婷 赵婷芳 曾沛暄 赵铖 胡意 李小申 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期35-38,共4页
[目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋... [目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白鉴定。[结果]PCV3 Cap蛋白在p ET28a原核表达系统中无表达;Rosetta-p Cold-PCV3-Cap在诱导温度为15℃、IPTG浓度为1.0 mmo L/L、诱导4 h的条件下,能够表达分子量约为25 k Da的Cap蛋白,且为可溶性表达。[结论]试验成功制备了PCV3 Cap蛋白,为制备PCV3疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) cap蛋白 原核表达 鉴定
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Transparent cap adjusted the stent placed for stenosis after endoscopic injection of esophageal varices:A case report
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作者 Fu-Long Zhang Jing Xu +8 位作者 Yuan-Dong Zhu Qian-Neng Wu Yan Shi Lei Fang Dan Zhou Hai Wang Chao-JunHuang Chun-Hua Zhou Qun Zhu 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2024年第15期2614-2620,共7页
BACKGROUND The stent embedded in the esophageal mucosa is one of the complications after stenting for esophageal stricture.We present a case of stent adjustment with the aid of a transparent cap after endoscopic injec... BACKGROUND The stent embedded in the esophageal mucosa is one of the complications after stenting for esophageal stricture.We present a case of stent adjustment with the aid of a transparent cap after endoscopic injection of an esophageal varices stent.CASE SUMMARY A 61-year-old male patient came to the hospital with discomfort of the chest after the stent implanted for the stenosis because of endoscopic injection of esophageal varices.The gastroscopy was performed,and the stent embedded into the esophageal mucosa.At first,we pulled the recycling line for shrinking the stent,however,the mucosa could not be removed from the stent.Then a forceps was performed to remove the mucosa in the stent,nevertheless,the bleeding form the mucosa was obvious.And then,we used a transparent cap to scrape the mucosa along the stent,and the mucosa were removed successfully without bleeding.CONCLUSION A transparent cap helps gastroscopy to remove the mucosa embedded in the stent after endoscopic injection of the esophageal varices stent. 展开更多
关键词 STENT Transparent cap STENOSIS Endoscopic injection Esophageal varices Case report
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Evaluation of Hepatic Fibrosis and Hepatic Steatosis by Pulse Elastography (FIBROSCAN/CAP) in Asymptomatic Patients about 170 Cases at the Donka CHU National Hospital in Conakry
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作者 Mamadou Sarifou Diallo Oumarou Youssouf +8 位作者 Abdoulatif Yaogo Djenabou Diallo Kadiatou Diallo Thierno Amadou Wann Ahmed Tidiane Diallo Mamadou Lamine Yaya Bah Mamdou Diakhaby Mamadou Aliou Kanté Djibril Sylla 《Open Journal of Gastroenterology》 CAS 2024年第4期125-138,共14页
Introduction: Fibroscan is a recent, non-invasive and non-irradiating diagnostic method. It is based on the principle of ultrasound, which enables liver tissue elasticity to be quantified using a probe, and fibrosis t... Introduction: Fibroscan is a recent, non-invasive and non-irradiating diagnostic method. It is based on the principle of ultrasound, which enables liver tissue elasticity to be quantified using a probe, and fibrosis to be assessed. Fibroscan measures both elasticity correlated with hepatic fibrosis and CAP correlated with steatosis. The aim of this study was to evaluate hepatic fibrosis and steatosis using pulse elastometry (Fibroscan/CAP). Methods: This was a descriptive and analytical cross-sectional study in which 170 patients were included. It was conducted from October 1 2021 to December 31 2023, i.e. 27 months, in an outpatient clinic in the hepato-gastroenterology department of the Donka national hospital of the CHU Conakry. Results: Of the 170 patients identified, 87 were male (51%) and 83 female (49%), giving a M/F sex ratio of 1.04. The average age of our patients was 40. The 30 - 50 age group was the most affected, with a frequency of 58.23% (n = 99), followed by the 50 age group with a frequency of 29.41% (n = 50). Hepatomegaly, steatotic liver on ultrasonography, transaminase elevation and obesity were the main indications, respectively: (21.76%), (17.65%), (14.71%), and (13.53%). The examinations were requested by hepatogastroenterologists (47.06%), diabetologists (35.88%) and general practitioners (29%). Of the 170 patients, 100 patients (58.82%) had no significant fibrosis F0F1, 39 (22.94%) had moderate fibrosis F2, 20 patients (11.76%) had severe fibrosis F3 and 11 patients (6.47%) had fibrosis F4. Hepatic steatosis: 62 patients (36.47%) had no S0 steatosis;29.41% had S1 steatosis, 20% had S2 steatosis and 24 patients (14.11%) had S3 steatosis. Abdominal ultrasound revealed a normal liver in 67.05% of patients, hepatic steatosis in 29.41% and non-decompensated cirrhosis in 6 cases. Thus, 108 patients had the parameters required to calculate the Fatty Liver Index (FLI), steatosis was present in 20% of our patients, while 29.41% had an undetermined status and 24 14.11% had a normal FLI. Conclusion: Identifying subjects at risk of metabolic steatopathy, diagnosing and managing these patients is a public health issue and one of the future challenges of hepato-gastroenterology. Fibroscan is an increasingly popular screening tool for hepatic fibrosis and steatosis. The fight against obesity must be a priority. 展开更多
关键词 Cirrhosis Fibrosis Fibroscan/cap Non-Alcoholic Hepatic Steatosis STEATOSIS CHU Conakry
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血凝试验和反向间接血凝试验定量检测PCV2 Cap抗原的研究
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作者 李晶梅 谢红玲 +8 位作者 薛霜 李文静 黄涛 王焕君 刘项羽 张飞雁 朱薇 李婷婷 石宝兰 《中国兽药杂志》 2024年第1期1-5,共5页
为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血... 为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血凝效价(RIHA效价)。结果显示,用猪、鸡、绵羊红细胞在不同稀释液条件下测得的同一批次PCV2Cap抗原凝集效价为3log2~9log2,说明PCV2Cap抗原可凝集猪、鸡、绵羊红细胞,但红细胞不同、稀释液不同,测得的PCV2Cap抗原凝集效价也不同。使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,测得的PCV2Cap抗原RIHA效价为14log2,且纯化后和未纯化的PCV2Cap抗原的RIHA效价均与ELISA定量检测结果有平行关系;空杆状病毒、CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、TCEV的RIHA效价均小于1log2。说明反向间接血凝方法可定量检测重组杆状病毒表达的PCV2Cap抗原,该方法敏感、特异,适用于疫苗生产中的PCV2Cap抗原的定量检测。 展开更多
关键词 PCV2 cap抗原 反向间接血凝 血凝 红细胞
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Further Studies of the Cap Pushing Response in Honey Bees (Apis mellifera)
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作者 Riley J. Wincheski Kiri Li N. Stauch +3 位作者 Laura M. Grossner Maya B. Zepeda James W. Grice Charles I. Abramson 《Natural Science》 2024年第5期45-64,共20页
The Cap Pushing Response (CPR) is a free-flying technique used to study learning and memory in honey bees (Apis mellifera). The series of experiments outlined in this paper aimed to test whether honey bees exhibit the... The Cap Pushing Response (CPR) is a free-flying technique used to study learning and memory in honey bees (Apis mellifera). The series of experiments outlined in this paper aimed to test whether honey bees exhibit the cognitive concept of “expectancy” utilizing the CPR in a weight differentiation paradigm. Five previous experiments in our laboratory have explored whether the concept of expectancy can account for honey bee performance and have all failed to support the cognitive interpretation. The first experiment examined if bees could differentiate between the two caps in the amount of force they used to push the cap and the distance the cap was pushed when the caps were presented one at a time. The second experiment explored cap weight preference by presenting bees with a choice between the two caps. The third and fourth experiments tested the bee’s ability to expect reward or punishment based on cap weight. Results revealed that bees were found to have a strong preference for the light cap and therefore were not able to expect reward or punishment based on cap weight. These experiments contribute to the debate on whether bees have “cognitive” representations and continue to support the behaviorist interpretation. 展开更多
关键词 Apis mellifera cap Pushing Response COGNITION LEARNING
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CAP再生抗滑封层技术在沥青路面养护中的应用研究
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作者 罗礼明 《工程技术研究》 2024年第5期50-52,共3页
砂封层(CAP)再生抗滑封层技术的应用能有效提升公路沥青路面养护质量,公路沥青路面病害不同,CAP再生抗滑封层技术的实施内容也不同。基于此,文章结合工程案例,从作用机制和工艺解析两个方面入手,分别对CAP再生抗滑封层技术进行讨论,并... 砂封层(CAP)再生抗滑封层技术的应用能有效提升公路沥青路面养护质量,公路沥青路面病害不同,CAP再生抗滑封层技术的实施内容也不同。基于此,文章结合工程案例,从作用机制和工艺解析两个方面入手,分别对CAP再生抗滑封层技术进行讨论,并根据该路段的养护方案和工作经验,探究在沥青路面养护作业中使用CAP再生抗滑封层技术开展养护作业的具体路径,以供相关人员参考、借鉴。 展开更多
关键词 cap再生抗滑封层 沥青路面 道路养护
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CAP在钦东高速公路预防性养护中的应用研究
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作者 王靖 兰姣艳 +1 位作者 曾庆华 杜洪良 《西部交通科技》 2024年第4期37-39,66,共4页
为提升老化沥青路面的性能,提升废弃路面材料的回收利用率,文章依托G7511部分路段实施魁道沥青还原剂(CAP)试验段,持续跟踪实施后的抗滑性能和抗车辙性能。结果表明:路面实施CAP再生沥青抗滑封层时,需对前期准备工作、CAP和抗磨砂洒铺... 为提升老化沥青路面的性能,提升废弃路面材料的回收利用率,文章依托G7511部分路段实施魁道沥青还原剂(CAP)试验段,持续跟踪实施后的抗滑性能和抗车辙性能。结果表明:路面实施CAP再生沥青抗滑封层时,需对前期准备工作、CAP和抗磨砂洒铺、养生、碾压等施工工艺进行严格控制;实施CAP再生沥青抗滑封层后,车辙深度指数RDI和抗滑性能指数SRI大幅提升,路面性能得到很好的改善,能够做到原有路面材料全利用。该试验段实施CAP再生沥青抗滑封层后两年与交工时相比,车辙深度指数RDI和抗滑性能指数SRI衰减较小,展现出优异的抗滑耐久性能和抗车辙耐久性能,因此CAP再生沥青抗滑封层技术值得进一步推广。 展开更多
关键词 高速公路 cap 路面车辙 路面抗滑 预防性养护
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利用CAP方法和瑞利面波振幅谱联合反演宁强5.3级地震震源深度
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作者 赵韬 王莹 +2 位作者 徐一斐 刘盼 刘春 《中国地震》 北大核心 2023年第4期893-901,共9页
2018年9月12日19时6分,陕西省汉中市宁强县发生5.3级地震,不同机构给出的震源深度结果相差较大。为进一步确定宁强5.3级地震的震源深度,基于区域速度模型,首先利用CAP方法反演得到该地震的震源机制解,然后采用瑞利面波振幅谱和CAP深度... 2018年9月12日19时6分,陕西省汉中市宁强县发生5.3级地震,不同机构给出的震源深度结果相差较大。为进一步确定宁强5.3级地震的震源深度,基于区域速度模型,首先利用CAP方法反演得到该地震的震源机制解,然后采用瑞利面波振幅谱和CAP深度误差函数联合反演,进一步测定了此次地震的矩心深度。结果显示:CAP方法得到的陕西宁强5.3级地震矩心深度约为12km,瑞利面波振幅谱测定的矩心深度为13km,结合引入的误差函数联合反演,最终确定陕西宁强5.3级地震的矩心深度为13km左右,表明此次地震仍属于发生于上地壳的地震。 展开更多
关键词 震源深度 cap 瑞利面波振幅谱 宁强5.3级地震
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利用Capped核范数正则化的人体运动捕获数据恢复
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作者 胡文玉 朱雪芳 易云 《计算机辅助设计与图形学学报》 EI CSCD 北大核心 2023年第8期1184-1196,共13页
结合人体运动数据的低秩性、噪声稀疏性和时序稳定性,将人体运动捕获数据恢复问题建模为低秩矩阵填充问题.不同于传统方法采用核范数作为矩阵秩函数的凸松弛,引入了非凸的矩阵Capped核范数(CaNN).首先,建立基于CaNN正则化的人体运动捕... 结合人体运动数据的低秩性、噪声稀疏性和时序稳定性,将人体运动捕获数据恢复问题建模为低秩矩阵填充问题.不同于传统方法采用核范数作为矩阵秩函数的凸松弛,引入了非凸的矩阵Capped核范数(CaNN).首先,建立基于CaNN正则化的人体运动捕获数据恢复模型;其次,利用交替方向乘子法,结合截断参数自适应学习与(逆)离散余弦傅里叶变换对模型进行快速求解;最后,在CMU数据集和HDM05数据集上,将CaNN模型与经典的TSMC,TrNN,IRNN-Lp和TSPN模型进行对比实验.恢复误差和视觉效果比较结果表明,CaNN能够有效地对失真数据进行恢复,且恢复后的运动序列与真实运动序列逼近度较高. 展开更多
关键词 运动捕获 低秩结构 矩阵填充 capped核范数 交替方向乘子法
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CAP核电机组高压水过滤器壳体研制
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作者 孔海霞 景旭斌 +3 位作者 李源 卞向南 乔太飞 王佳 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期634-641,共8页
放射性水过滤器是保障核电机组冷却剂回路良好水质控制、降低辐射剂量的重要设备。研制的适用于第三代CAP系列核电机组的非核级高压过滤器壳体,严格按照ASME BPVC-Ⅷ进行壳体和功能部件的设计;采用ANSYS 14.0分析软件建立壳体的有限元模... 放射性水过滤器是保障核电机组冷却剂回路良好水质控制、降低辐射剂量的重要设备。研制的适用于第三代CAP系列核电机组的非核级高压过滤器壳体,严格按照ASME BPVC-Ⅷ进行壳体和功能部件的设计;采用ANSYS 14.0分析软件建立壳体的有限元模型,通过各种载荷条件下的力学性能分析,各部件完全满足结构完整性和Ⅱ级抗震要求;生产制造的壳体通过约1.25倍设计压力下的水压试验,焊缝处无任何泄漏和变形,可以替代进口产品。 展开更多
关键词 冷却剂回路 cap核电机组 高压水过滤器 壳体
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猪圆环病毒2型山西流行株Cap蛋白可溶性表达与免疫原性分析
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作者 薛翼鹏 赵岳 +4 位作者 程景 孟帆 樊振华 米瑞娟 吴忻 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第1期28-35,共8页
为建立猪圆环病毒2型(PCV2)山西流行毒株Cap蛋白的原核可溶性表达体系,并分析比较重组蛋白与2种商品化基因工程Cap亚单位疫苗在小鼠体内不同阶段的免疫原性,本试验以PCV2e SXJX株(GenBank登录号:MH922991.1)的ORF 2基因为基础,根据大肠... 为建立猪圆环病毒2型(PCV2)山西流行毒株Cap蛋白的原核可溶性表达体系,并分析比较重组蛋白与2种商品化基因工程Cap亚单位疫苗在小鼠体内不同阶段的免疫原性,本试验以PCV2e SXJX株(GenBank登录号:MH922991.1)的ORF 2基因为基础,根据大肠埃希菌密码子偏性优化序列,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)中,鉴定为阳性后转入宿主菌BL21(DE3)中,经优化表达条件后,对超声破碎后的菌体上清进行纯化,分析纯化后产物的纯度和抗原性,并利用负染透射电镜观察重组Cap蛋白体外自组装成病毒样颗粒(VLPs)。分别将同等免疫剂量的PCV2e重组Cap蛋白和2种商品化PCV2基因工程亚单位疫苗免疫健康BALB/c雌鼠,应用ELISA方法检测不同阶段小鼠体内特异性抗体的水平。结果显示:重组Cap蛋白可在大肠埃希菌中表达,以完全可溶性形式存在于菌体超声波破碎后的上清中,表达产物纯化效果良好,并能被PCV2单克隆抗体识别;透射电镜观察结果发现,表达的重组Cap蛋白可以自组装成约20 mm大小的VLPs;动物免疫试验结果显示,在首免后第21天PCV2e Cap试验组抗体水平显著高于勃林格疫苗组(P<0.05),但极显著低于普莱柯疫苗组(P<0.01),首免后第42天3个免疫组的抗体水平差异不显著(P>0.05),表明重组蛋白在小鼠体内免疫原性良好。本试验成功构建了PCV2e Cap蛋白原核可溶性表达体系,其重组蛋白具有较好的免疫原性,为PCV2的诊断检测和亚单位基因工程疫苗的研制提供了候选抗原,并为该蛋白功能的深入研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 PCV2 cap蛋白 可溶性表达 免疫原性
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PCV3吉林野毒株全基因组序列分析及其Cap蛋白的亚细胞定位
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作者 刘东旭 刘宏莹 +5 位作者 苏诺 葛桂阳 麻宝艺 盛陈艳 李东丽 刘艺 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期27-32,共6页
为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实... 为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实验室已构建的兔源PCV3-Cap多克隆抗体,通过激光共聚焦检测Cap蛋白在PAM中的定位。序列分析结果显示,10株PCV3吉林野毒株与国内外参考株之间的全基因组核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,处于PCV3a和PCV3b两个亚群;基因重组分析结果显示,仅中国参考株MF589102(2016年)、MH445396(2019年)和分离株JL-2在80~303 nt、840~1196 nt和1885~2001 nt处发生3处重组。激光共聚焦检测结果显示,Cap蛋白大部分定位于细胞核,少部分定位于细胞质。结果表明,目前吉林省PCV3比较保守,没有出现较大变异,Cap蛋白在PAM的细胞核和细胞质中均有分布。 展开更多
关键词 野毒株 猪圆环病毒3型 cap蛋白 亚细胞定位
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猪圆环病毒2型全基因组序列分析及Cap蛋白CTL表位预测 被引量:2
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作者 周文锋 张英婕 +6 位作者 白一涵 张露华 麦金辉 王乃东 杨毅 湛洋 王东亮 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期656-665,共10页
【目的】监测当前湖南省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株及其衣壳蛋白(capsid protein,Cap)变异情况,并预测Cap蛋白细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为新型PCV2疫苗研制和病毒净化提供参考... 【目的】监测当前湖南省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株及其衣壳蛋白(capsid protein,Cap)变异情况,并预测Cap蛋白细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为新型PCV2疫苗研制和病毒净化提供参考依据。【方法】本研究对2019-2021年于湖南省6个地区收集的17份PCV2阳性组织样品进行PCV2全基因组序列扩增及测序分析,绘制系统进化树,利用生物信息学方法分析Cap蛋白氨基酸变异情况,并预测CTL表位。【结果】系统进化树显示,获得的17株PCV2全基因组序列中,1株PCV2a、7株PCV2b和9株PCV2d。Cap蛋白氨基酸序列比对分析发现,共有16个氨基酸残基突变位点位于病毒Cap蛋白表面,且有11个突变位点参与构象型表位的形成。此外,共预测出9个PCV2 Cap蛋白潜在的CTL表位,其中4个表位(16-24、28-36、136-144和179-187位氨基酸)在GenBank的1610株PCV2不同基因型毒株中高度保守。通过TCR-pMHC复合物3D结构对4个保守性表位进一步分析,结果显示,这4个肽段均能与MHCⅠ分子和TCR形成稳定的TCR-pMHC复合物。【结论】本研究结果表明,PCV2b和PCV2d为当前湖南省主要流行的基因型,且表现出高度变异;预测的CTL表位可作为候选抗原表位。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) cap蛋白 CTL表位
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表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组链球菌的构建及其免疫原性分析 被引量:1
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作者 宗雪晴 赵贤杰 +8 位作者 胡俊冶 余肇锋 李国潮 何颍欣 黄云飞 马春全 李舜 李亚娟 付强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期611-620,共10页
猪圆环病毒2型(PCV2)常与马链球菌兽疫亚种(SEZ)混合感染。为构建表达PCV2 Cap蛋白的重组SEZ并分析其免疫原性,本研究通过PCR扩增PCV2 Cap基因和SEZ疫苗株ST171 Szp基因的上下游同源臂基因(Szp-up、Szp-down),将上述PCR产物分别与pMD19-... 猪圆环病毒2型(PCV2)常与马链球菌兽疫亚种(SEZ)混合感染。为构建表达PCV2 Cap蛋白的重组SEZ并分析其免疫原性,本研究通过PCR扩增PCV2 Cap基因和SEZ疫苗株ST171 Szp基因的上下游同源臂基因(Szp-up、Szp-down),将上述PCR产物分别与pMD19-T载体连接,分别构建重组质粒pMD19-T-Cap、pMD19-T-Szp-up和pMD19-T-Szp-down。将pMD19-T-Szp-up与pG+host5分别双酶切后构建重组质粒pG+host5-Szp-up;将pMD19-T-Szp-down与pG+host5-Szp-up分别经双酶切后构建重组质粒pG+host5-Szp。上述重组质粒均经酶切和测序鉴定正确后分别经BamH I酶切pG+host5-Szp载体和pMD19-T-Cap载体后构建重组载体pG+host5-PCV2-Cap-Szp,并使PCV2 Cap基因替换Szp基因的166 bp~783 bp。经酶切和测序鉴定正确后将该质粒电转化ST171感受态细胞,通过红霉素抗性板筛选重组SEZ PCV2-Cap-Szp/ST171株。通过菌落计数分别绘制PCV2-Cap-Szp/ST171及其亲本菌株ST171的生长曲线;分别采用荧光定量PCR(qPCR)检测重组菌株Cap基因以及亲本菌株ST171 Szp基因的转录水平;通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)鉴定重组菌株Cap蛋白的表达。结果显示,亲本菌株和重组菌株的生长曲线基本一致,重组菌株中Cap基因的转录水平与亲本菌株中Szp基因的转录水平相当,且其中的蛋白肽段与PCV2 Cap蛋白的肽段相符,表明插入Szp基因不影响ST171的生长特性,且重组菌中的Cap基因可以正常转录并能够表达Cap蛋白。分别经小鼠腹腔接种不同剂量的重组菌株及亲本菌株,并采用改良寇氏法(Karber氏法)计算两株菌对小鼠的半数致死量(LD50)。结果显示,重组菌株及亲本菌株对小鼠的LD50分别为3.21×108 cfu/mL及2.0×10^(7) cfu/mL,虽然前者对小鼠的LD50有所升高,但其对小鼠的致病性并未增强。将重组菌株及亲本菌株灭活乳化后与商品化的PCV2灭活疫苗分别免疫小鼠,0.5 mL/只,二免后14 d采用间接ELISA检测各组小鼠血清中的Cap蛋白抗体水平,结果显示,免疫亲本菌株及PBS对照小鼠均未产生PCV2 Cap蛋白特异性抗体,而重组菌株刺激小鼠产生的Cap蛋白抗体水平极显著高于PCV2商品化疫苗(P<0.001)。将上述3株菌按照上述方法分别经腹腔免疫小鼠。二免后14 d经腹腔以0.5 mL 1×106 cfu/mL的SEZ C55138株攻击,观察记录小鼠的死亡情况,并绘制生存曲线;将重组菌株和亲本菌株按照上述方法免疫小鼠,二免14 d后经腹腔接种0.2 mL 1×108拷贝/mL的PCV2。分别于攻毒后不同时间采血,采用qPCR检测各组小鼠血清中的病毒载量。SEZ C55138株攻毒结果显示,免疫ST171与PCV2-Cap-Szp/ST171的小鼠均未出现临床症状和死亡,存活率达100%;而两个阴性对照组小鼠攻菌后均表现出相应临床症状,并相继死亡,死亡率分别为70%和80%。PCV2攻毒实验结果显示,与免疫ST171组小鼠相比,免疫重组菌株的小鼠在攻击PCV2后1 d、3 d和5 d小鼠血清中的病毒载量均有所降低。上述结果表明,本实验构建的重组菌株PCV2-Cap-Szp/ST171能够诱导免疫小鼠产生高水平的体液免疫反应,并保护小鼠免受致病性SEZ的伤害及减少PCV2攻毒后小鼠血清中的病毒载量,本研究为细菌活载体疫苗及PCV2和SEZ二联疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 cap蛋白 马链球菌兽疫亚种 重组菌株
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非均匀入流对CAP1400核主泵内流及性能的影响研究 被引量:3
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作者 张恒 刘雷 刘立军 《西安交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第2期39-48,共10页
针对CAP1400反应堆冷却剂系统中,由于蒸发器下腔室和核主泵直接相连导致核主泵入口产生非均匀入流,从而影响核主泵内部流场的问题,通过基于剪切应力运输模型的全三维CFD模拟方法,对蒸发器下腔室和核主泵联合模型进行数值模拟,分析了蒸... 针对CAP1400反应堆冷却剂系统中,由于蒸发器下腔室和核主泵直接相连导致核主泵入口产生非均匀入流,从而影响核主泵内部流场的问题,通过基于剪切应力运输模型的全三维CFD模拟方法,对蒸发器下腔室和核主泵联合模型进行数值模拟,分析了蒸发器下腔室致非均匀流动的形成机理,研究了非均匀入流对核主泵内部流动和水力性能的影响。结果表明:下腔室非对称结构和突缩截面的流动分离是非均匀流动的主要成因。在额定工况下,非均匀入流导致左侧和右侧核主泵扬程分别下降6.0%、5.1%,效率分别下降7.2%、6.6%;在0.5~1.2倍额定流量工况范围内,性能下降幅度与流量呈正相关。非均匀入流呈现轴向速度分布不均匀并伴随二次流动的稳定结构,并且左右两侧叶轮内非均匀入流的旋流畸变特性和轴向速度分布不同。叶轮入口旋流畸变引起入口冲角发生变化,与均匀入流相比,左右两侧叶轮叶高中部的冲角变化相反,而叶顶部分冲角均增加、叶根部分冲角均减小;叶轮入口轴向速度不均匀引起左右两侧叶轮各流道的流量波动分别增大3倍和2倍,降低了核主泵的运行稳定性。 展开更多
关键词 cap1400 核主泵 非均匀入流 水力性能 旋流畸变
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猪圆环病毒3型Cap重组鞭毛蛋白融合表达及其免疫原性研究
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作者 姜海军 王丹 +5 位作者 郭禹 韦莉 侯磊 王菁 朱珊珊 刘爵 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2044-2052,共9页
【目的】利用重组杆状病毒系统表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)Cap重组鞭毛蛋白并研究该蛋白的反应原性和免疫原性,为开发PCV3亚单位疫苗提供数据支持。【方法】通过对Cap基因进行最适密码子优化并与鼠伤寒沙门氏菌... 【目的】利用重组杆状病毒系统表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)Cap重组鞭毛蛋白并研究该蛋白的反应原性和免疫原性,为开发PCV3亚单位疫苗提供数据支持。【方法】通过对Cap基因进行最适密码子优化并与鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因Flagellin进行融合后克隆到pFastBac TMⅠ载体。通过Bac-to-Bac系统,筛选获得重组Cap-Flagellin杆状病毒,利用SDS-PAGE、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blotting鉴定重组杆状病毒,将重组Cap-Flagellin杆状病毒免疫小鼠评价其免疫原性。【结果】重组Cap-Flagellin杆状病毒在Sf9细胞中能有效表达重组蛋白,SDS-PAGE检测可见68 ku的目的条带。IFA结果显示,重组Cap-Flagellin杆状病毒感染后72 h在Sf9细胞膜及胞浆中均出现绿色特异性荧光;Western blotting分析表明,重组蛋白能与PCV3阳性血清发生特异性反应,表明重组Cap-Flagellin蛋白具有良好的反应原性。小鼠免疫试验结果表明,与Cap杆状病毒组相比,重组Cap-Flagellin杆状病毒免疫小鼠2l和28 d后可诱导产生更高水平的Cap特异性抗体(P<0.05;P<0.01),且Cap-Flagellin杆状病毒组小鼠脾细胞白细胞介素-8(IL-8)细胞因子水平显著或极显著高于其他组(P<0.05;P<0.01),表明重组Cap-Flagellin蛋白具有良好的免疫原性。【结论】本研究利用杆状病毒表达系统成功表达了PCV3 Cap重组鞭毛蛋白,并证实其具有良好的生物学活性,为PCV3亚单位疫苗的开发研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 重组杆状病毒 cap蛋白 鞭毛蛋白 免疫特性
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PCV2 Cap蛋白原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
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作者 李钰昌 郑亮 +3 位作者 张华 吴志军 肖莉杰 曹宏伟 《黑龙江八一农垦大学学报》 2023年第1期78-83,130,共7页
猪圆环病毒2型是一种常见的猪感染性病毒,Cap蛋白为猪圆环病毒2型的核衣壳蛋白,也是该病毒最主要的结构蛋白,是目前猪圆环病毒2型基因工程疫苗研制的关键蛋白。研究构建了Cap蛋白原核表达质粒pET28a-His-Cap,转化Transetta(DE3)表达菌株... 猪圆环病毒2型是一种常见的猪感染性病毒,Cap蛋白为猪圆环病毒2型的核衣壳蛋白,也是该病毒最主要的结构蛋白,是目前猪圆环病毒2型基因工程疫苗研制的关键蛋白。研究构建了Cap蛋白原核表达质粒pET28a-His-Cap,转化Transetta(DE3)表达菌株,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE及蛋白免疫印迹试验验证,重组蛋白主要以可溶性形式表达,少数为包涵体蛋白。以Ni-NTA树脂进行蛋白纯化,纯化后蛋白浓度为629μg·mL^(-1),采用透析袋浓缩将重组蛋白浓缩,浓缩后蛋白终浓度为1.8 mg·mL^(-1)。将重组蛋白与弗氏佐剂等体积混合,充分乳化后制备抗原,免疫兔子采集全血,分离血清。经蛋白免疫印迹试验,该多抗与重组蛋白存在免疫反应性,ELISA检测抗体效价可达1∶32000,IFA试验证明该多抗能够特异性识别猪圆环病毒2型。Cap蛋白多克隆抗体的成功制备,为后续猪圆环病毒2型基因工程疫苗制备过程中验证Cap体外蛋白表达提供了材料。 展开更多
关键词 PCV2 cap蛋白 原核表达 多克隆抗体
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基于Drucker-Prager/Cap模型的Ti-30Cu粉末轧制过程模拟
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作者 孙振振 彭文飞(导师) +2 位作者 MOLIAR Oleksandr 李贺 邵熠羽 《机械工程材料》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期92-97,102,共7页
对钛和铜质量比为7∶3的Ti-30Cu混合粉末进行单轴压缩、巴西圆盘和模压试验,获得该粉末Drucker-Prager/Cap本构参数与相对密度的关系;利用Abaqus软件建立粉末轧制模型,研究喂料高度对板料相对密度的影响,并进行了试验验证;采用该模型研... 对钛和铜质量比为7∶3的Ti-30Cu混合粉末进行单轴压缩、巴西圆盘和模压试验,获得该粉末Drucker-Prager/Cap本构参数与相对密度的关系;利用Abaqus软件建立粉末轧制模型,研究喂料高度对板料相对密度的影响,并进行了试验验证;采用该模型研究了辊缝宽度、轧速对Ti-30Cu合金板料相对密度的影响。结果表明:在辊缝宽度为1 mm、轧速为10 mm·s^(-1)条件下,随着喂料高度由150 mm增加到300 mm,板料的相对密度增大,模拟结果与试验结果基本吻合,最大相对误差为2.15%,验证了轧制模型的有效性;随着喂料高度的增加、辊缝宽度或轧速的减小,板料的相对密度增大。 展开更多
关键词 Ti-30Cu粉末 Drucker-Prager/cap本构模型 粉末轧制模型 相对密度
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