牦牛CAPN4基因启动子区突变对胴体及肉质性状的影响

为检测CAPN4基因在牦牛群体中的多态性,分析CAPN4基因启动子区突变对甘南牦牛胴体及肉质性状的影响,寻找与牦牛此类性状相关的分子遗传标记。采用PCR-SSCP技术检测830头甘南牦牛、大通牦牛和天祝白牦牛CAPN4基因启动子区突变并分析其多态性,运用SPSS 19.0软件中的GLM模型分析基因突变对甘南牦牛胴体及肉质性状的影响。牦牛CAPN4基因启动子区存在a.-1222G>A的单碱基突变,检测到AA、AB和BB 3种基因型。相关性分析结果表明,a.-1222G>A的突变对不同年龄甘南牦牛胴体和肉质性状有一定影响,其中4,6岁牦牛BB型个体熟肉率显著高于AA型或AB型(P<0.05);3,6岁牦牛AB型个体失水率显著高于BB型或AA型(P<0.05),而5岁牦牛BB型个体肌肉失水率显著高于AA型(P<0.05);3,5岁牦牛BB型个体的眼肌面积显著高于AA和AB型(P<0.05)。等位基因A对4,6岁牦牛熟肉率、各龄牦牛肌肉保水性和眼肌面积均存在不利影响;除5岁牦牛携带等位基因A个体的胴体重显著低于未携带者外,该突变对其他年龄段牦牛胴体重及全部牦牛个体的肌肉嫩度无显著影响。CAPN4基因启动子区a.-1222G>A突变影响不同年龄段甘南牦牛部分胴体及肉质性状,可作为甘南牦牛此类性状的遗传标记。

杂种牛CAPN4基因第六内含子的遗传变异与牛肉嫩度的关联分析

以CAPN4基因作为肉牛肉品质嫩度性状的候选基因,利用PCR-RFLP方法在牛CAPN4基因内发现了1个变异酶切位点,为intron6上的HhaI-RFLP。对此多态性片段进行克隆测序分析,结果表明此酶切位点是由于488位的碱基T→C的突变引起。此多态位点有A、B两个等位基因,其频率分别为0.7和0.3,在所研究的群体中,该位点处于Hardy-Weiberg平衡状态。利用最小二乘法拟合线性模型对不同分子标记基因型效应值间肉品质嫩度性状差异显著性检验,结果表明差异不显著(P>0.05)。

钙调蛋白小亚基Capn4在鼻咽癌细胞中的表达及对CNE2细胞增殖的影响

目的研究钙调蛋白小亚基Capn4在鼻咽癌病理组织及鼻咽癌细胞CNE2中的表达,并观察Capn4对顺铂作用后细胞增殖的改变。方法收集153例鼻咽癌组织及30例非癌鼻咽组织的石蜡标本,所有患者均未进行放化疗,免疫组化法检测Capn4在鼻咽癌组织及非鼻咽癌组织中的表达;选取鼻咽癌细胞CNE2与293T细胞在37℃、5%CO_2条件下培养,Western blot法检测不同细胞中Capn4蛋白表达水平;构建shRNA下调Capn4表达的CNE2细胞并以Western blot法验证;MTT法检测顺铂作用下,shRNA下调Capn4的鼻咽癌细胞增殖改变。结果 Capn4在鼻咽癌组织中的表达显著高于正常鼻咽组织(P<0.001),在鼻咽癌细胞系中表达明显高于293T细胞;shRNA确实下调Capn4在鼻咽癌细胞中的表达;DNA损伤药物顺铂作用下,下调Capn4表达的鼻咽癌细胞CNE2较之未下调的CNE2细胞增殖受抑制(P<0.05)结论 Capn4在鼻咽癌组织和细胞中高表达,下调Capn4表达能抑制顺铂作用后的细胞增殖。

miR-124通过靶向Capn4抑制Wnt/β-catenin信号通路调节胃肠道间质瘤(GIST-T1)细胞生物学功能

目的:探讨miR-124对人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响以及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR检测30例胃肠道间质瘤患者的肿瘤和癌旁对照组织中的miR-124表达;利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miR-124 mimic、miR-124 inhibitor及其对应的阴性对照分别转入GIST-T1细胞,并且设置空白对照;qRT-PCR检测细胞中miR-124的表达情况;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞模拟物或抑制剂处理后的细胞凋亡情况;Western blot检测Capn4蛋白表达情况。结果:miR-124在肿瘤组织中显著低于癌旁对照组织;过表达miR-124后,CCK-8实验及Transwell实验结果显示GIST-T1细胞增殖、迁移能力和侵袭能力均显著下降;流式细胞术结果显示GIST-T1细胞晚期凋亡降低,早期凋亡增加;Western blot结果显示过表达miR-124后,GIST-T1细胞中Capn4蛋白表达明显降低,当抑制miR-124后,GIST-T1细胞中Capn4蛋白表达明显上升;抑制miR-124后GIST-T1细胞中β-catenin蛋白表达增加。结论:miR-124通过靶向Capn4抑制GIST-T1细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,与其抑制Wn/tβ-catenin信号通路有关。

结肠癌组织中Capn4和Ki-67的表达及临床意义

目的探讨钙蛋白酶小亚基-1(Capn4)和细胞核增殖指数(Ki-67)在结肠癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测70例结肠癌及35例癌旁正常组织中Capn4和Ki-67的表达,并分析Capn4和Ki-67的表达与结肠癌临床病理特征的关系。结果 Capn4和Ki-67在结肠癌组织中的阳性表达率分别为74.3%(52/70)和84.3%(59/70),明显高于癌旁正常组织的22.9%(8/35)和17.1%(6/35),差异有统计学意义(P<0.05)。Capn4、Ki-67在结肠癌中的表达与浸润深度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与年龄、性别、分化程度无关(P>0.05)。Capn4与Ki-67在结肠癌中的表达呈正相关(r=0.734,P<0.05)。结论 Capn4和Ki-67在结肠癌组织中高表达,可能与结肠癌的发生发展有关。

钙调蛋白小亚基Capn4对依托铂甙诱导的鼻咽癌细胞CNE2 DNA损伤修复的作用

目的研究钙调蛋白小亚基Capn4对依托铂甙(VP-16)诱导的鼻咽癌细胞CNE2 DNA损伤修复中的作用及可能影响的修复通路。方法构建shRNA下调Capn4表达的CNE2细胞并以Western blot法验证;高内涵检测γ-H2AX在CNE2细胞及下调Capn4表达的CNE2细胞中的平均荧光强度,分析下调Capn4对VP-16诱导的CNE2细胞DNA损伤修复的作用;NHEJ(非同源重组修复)通路特异性的质粒EJ5-GFP用Fugen6 HD转入CNE2细胞及下调Capn4的CNE2细胞,用高内涵仪检测GFP的阳性率,观察下调Canp4对VP-16诱导的鼻咽癌细胞DNA损伤NHEJ修复通路的影响。结果 shRNA确实下调Capn4在鼻咽癌细胞中的表达。2.5μmol/L VP-16处理CNE2^(Vector)细胞和CNE2^(Capn4(-))细胞后6 h和12 h,CNE2^(Capn4(-))的损伤都较空载体的CNE2^(Vector)细胞高;下调Capn4表达对VP-16造成的CNE2细胞DNA损伤修复有抑制作用(P<0.01)。2.5μmol/L VP-16作用后,CNE2^(Capn4(-))细胞与CNE2^(Vector)细胞相比较GFP平均荧光强度明显更低;下调CNE2表达能够抑制DNA损伤后NHEJ通路的修复(P<0.01)。结论在鼻咽癌细胞中下调Capn4的表达能抑制VP-16所致的DNA损伤修复,这种作用可能是通过抑制NHEJ通路实现的。

钙调蛋白小亚基Capn4对依托铂甙诱导的鼻咽癌细胞CNE2 DNA损伤修复NHEJ通路相关蛋白的作用

目的研究钙调蛋白小亚基Capn4对依托铂甙(VP-16)诱导的鼻咽癌细胞CNE2 DNA损伤修复NHEJ通路相关蛋白Ku80及DNApks的作用,以及对裸鼠体内成瘤的影响。方法高内涵分析仪检测空载的CNE2细胞及下调Capn4的CNE2细胞中非同源重组NHEJ修复通路的特异性质粒EJ5-GFP的阳性率;检测空载的CNE2细胞及下调Capn4表达的CNE2细胞在VP16诱导后Ku80的表达;实时荧光定量PCR检测空载的CNE2细胞及下调Capn4表达的CNE2细胞的Ku80转录水平的变化;体内异种移植空载的CNE2细胞及下调Capn4的CNE2细胞后观察VP-16对鼻咽癌肿瘤质量大小的影响及抑瘤率。结果高内涵分析显示下调Capn4的表达能够抑制CNE2细胞DNA损伤后NHEJ修复通路的GFP阳性率(P<0.01);下调Capn4表达后VP16诱导的CNE2细胞NHEJ通路相关蛋白Ku80、DNApks的表达下降(P<0.01);下调Capn4表达能下调裸鼠成瘤后肿瘤的体积与质量(P<0.01)。结论Capn4对NHEJ通路的抑制与通路相关蛋白Ku80、DNApks有关;下调Capn4的表达能够抑制鼻咽癌肿瘤生长、增加鼻咽癌对放化疗的敏感。

钙蛋白酶小亚基Capn4在鼻咽癌细胞CNE2中DNA损伤修复的作用

目的研究钙蛋白酶小亚基Capn4对放射所致的鼻咽癌细胞CNE2在DNA损伤修复中的作用及可能影响的修复通路。方法选取鼻咽癌细胞CNE2与293T细胞在37℃、5%CO_2条件下培养,Western blot法检测Capn4在不同细胞中蛋白表达水平;构建sh RNA下调Capn4表达的CNE2细胞并以Western blot法验证;高内涵细胞成像分析仪分析γ-H2AX在放射后的CNE2细胞及下调Capn4表达的CNE2细胞中的平均荧光强度;非同源末端连接(NHEJ)通路特异性的质粒EJ5-GFP用Fugen6 HD转入空载的CNE2细胞及下调Capn4的CNE2细胞,用高内涵细胞成像分析仪检测GFP的阳性率,观察下调Capn4对放射诱导的鼻咽癌细胞DNA损伤NHEJ修复通路的影响。结果 Capn4在鼻咽癌细胞系中表达明显高于正常细胞(P<0.01);sh RNA确实下调Capn4在鼻咽癌细胞中的表达;下调Capn4表达对放射造成的CNE2细胞DNA损伤修复有抑制作用(P<0.01);下调Capn4表达能够抑制CNE2细胞DNA损伤后NHEJ通路的修复(P<0.01)。结论 Capn4在鼻咽癌细胞CNE2中高表达,下调Capn4的表达能抑制放射所致的DNA损伤修复,这种作用可能是通过抑制NHEJ通路实现的。

CAPN4在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的研究CAPN4(calpain small subunit 1)在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法免疫组织化学法检测10对结直肠癌组织和相应的癌旁非瘤组织中CAPN4的表达,并检测74例结直肠癌组织中CAPN4的表达,结合临床随访资料探讨其表达与临床病理因素和预后的相关性。结果结直肠癌组织中CAPN4的表达均高于相应的癌旁非瘤组织。CAPN4的表达强度与结直肠癌患者的Dukes分期(P=0.000),TNM分期(P=0.000),病理分级(P=0.021)和生存预后(P=0.040)显著相关,而与患者的年龄和性别无相关性。Kaplan-Meier分析显示,CAPN4高表达病例组生存时间明显少于CAPN4低表达病例组,经Log-rank检验,差异有统计学意义。结论 CAPN4在结直肠癌中表达上调,其表达差异与结直肠癌Dukes分期、TNM分期、病理分级和患者生存预后呈显著负相关,提示其可能与结直肠癌的发生、发展相关。

胃肠胰神经内分泌肿瘤中miR-124和Capn4的水平及其与化疗敏感性及预后

目的探讨miR-124和Capn4在胃肠道胰腺神经内分泌肿瘤(GEP-NENs)组织中表达及其与预后的关系,为临床护理、诊断和治疗提供指导。方法收集2009年1月至2015年1月郑州第二人民医院收治的91例GEP-NENs患者的癌组织及癌旁组织(距癌灶>3 cm以上)。采用定量反转录PCR(qRT-PCR)检测miR-124、Capn4 mRNA的表达,链霉卵白素-过氧化物酶(S-P)免疫组化染色法检测Capn4蛋白表达,分析miR-124和Capn4 mRNA表达与临床病理参数的关系,MTT法分析胃肠胰神经内分泌肿瘤对顺铂、5-氟尿嘧啶、阿霉素、丝裂霉素敏感性,Pearson分析GEP-NENs组织中miR-124和Capn4表达相关性,采用Kaplan-Meier法建立生存曲线,多因素Cox回归分析影响GEP-NENs患者预后的因素。结果与癌旁组织比较,GEP-NENs组织中miR-124相对表达水平降低(P<0.001),Capn4 mRNA表达水平增加(P<0.001)。Capn4蛋白主要表达于细胞浆,癌组织Capn4蛋白的阳性表达率(68.13%)明显高于癌旁组织(6.59%)(P<0.01)。miR-124的低表达和Capn4 mRNA高表达与GEP-NENs的淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关(P<0.05)。药敏试验显示,miR-124和Capn4 mRNA表达与胃肠胰神经内分泌肿瘤对顺铂、5-氟尿嘧啶敏感性有关。miR-124低表达和Capn4高表达的患者总生存较差(P<0.05),Cox逐步多因素分析显示,miR-124和Capn4均是GEP-NENs患者预后的独立影响指标。结论 GEP-NENs组织中miR-124表达下调,Capan蛋白水平上调,miR-124、Capan与肿瘤细胞对化疗药物敏感性及预后有关,因此可用作GEP-NENs的诊断、治疗和预后的生物标志物。

牦牛和普通牛CAPN4基因内含子6多态性分析

本研究采用PCR-SSCP技术和DNA测序法对大通牦牛、天祝白牦牛、甘南牦牛、普通牛4个群体CAPN4基因第6内含子的SNP多态性进行检测,并研究该基因在牦牛和普通牛群体中的遗传特征。试验所得表明:牦牛和普通牛CAPN4基因第6内含子表现出丰富的遗传多样性。CAPN4基因第6内含子检测到5种等位基因A-E,其中等位基因D和E仅存在于普通牛群体中。除天祝白牦牛外,等位基因B频率在其他3个牛群体中均在43%以上为优势等位基因。普通牛PIC<0.25为低度多态外,3个牦牛群体PIC>0.5为高度多态。

Capn4和P52在结肠癌中的表达及意义

目的:探讨钙蛋白酶小亚基-1(Capn4)和核转录因子-κB2(p52)在结肠癌中的表达及临床意义,以及两者在结肠癌发生、发展过程中的相关性。方法:应用免疫组织化学方法检测70例结肠癌组织及35例癌旁正常结肠组织中Capn 4和p52的表达情况,并分析Capn 4和p52的表达与结肠癌临床病理特征的关系。结果:Capn 4及p52在结肠癌(74.3%、70.0%)中的表达明显高于癌旁正常结肠组织(22.9%、31.4%)(P<0.05),两者在结肠癌组织中表达与结肠癌的浸润深度、TNM分期以及有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者年龄、性别、分化程度无关(P>0.05),并且两者在结肠癌的发生发展中可能存在相关性(r=0.869,P<0.05)。结论:Capn 4和p52在结肠癌组织中高表达,提示两者可能与结肠癌的浸润、转移有关。两者的表达呈正相关,提示Capn 4可能通过NF-κB通路的非经典途径起作用。

miR-124和Capn4在喉癌组织中表达及其与预后的关系

目的探讨miR-124和Capn4在喉癌组织中表达及其与预后的关系。方法收集2012年1月—2015年1月驻马店市第一人民医院收治的91例喉癌患者的癌组织及癌旁组织(距癌灶>3cm以上)。采用qRT-PCR检测miR-124、Capn4 mRNA的表达,链霉卵白素-过氧化物酶(S-P)免疫组化染色法检测Capn4蛋白表达,分析miR-124和Capn4 mRNA表达与临床病理参数的关系,Pearson分析喉癌组织中miR-124和Capn4表达相关性,采用Kaplan-Meier法建立生存曲线,多因素Cox回归分析影响喉癌患者预后的因素。结果与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-124相对表达水平显著降低(P<0.001),Capn4 mRNA表达水平显著增加(P<0.001)。Capn4蛋白主要表达于细胞浆,癌组织Capn4蛋白的阳性表达率(68.13%)明显高于癌旁组织(6.59%)(P<0.01)。miR-124的低表达和Capn4 mRNA高表达与喉癌的淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关(P<0.05)。miR-124低表达和Capn4高表达的患者总生存较差(P<0.05),Cox逐步多因素分析显示,miR-124和Capn4均是喉癌患者预后的独立影响指标。结论喉癌组织中miR-124表达下调,Capan蛋白水平上调,miR-124负向调控Capan蛋白的表达以促进喉癌的发生和进展,是潜在的治疗靶点和预后标记物。

乙肝病毒X蛋白突变体(HBxΔ127)通过ERK上调钙蛋白酶小亚基1促进肝癌细胞迁移

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.我们前期研究发现,HBx突变体(HBxΔ127)与肝癌的增殖和迁移有密切的关系.钙蛋白酶小亚基1(calpain small subunit 1,Capn4)具有促进细胞迁移、增殖和分化的作用.本研究对HBx突变体(HBxΔ127)促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了研究.实验结果显示,HBxΔ127可明显激活Capn4的启动子活性和上调Capn4蛋白表达.应用ERK抑制剂PD98059作用肝癌细胞后,可明显抑制HBxΔ127对Capn4的上调作用,提示HBxΔ127可通过磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)上调Capn4.应用伤口愈合实验进一步证实,HBxΔ127促进肝癌细胞迁移的作用与Capn4和p-ERK1/2有关.本研究结果表明,HBxΔ127促进肝癌细胞迁移的作用是通过p-ERK1/2上调Capn4实现的.这一发现对进一步揭示HBx突变体HBxΔ127促进肝癌细胞转移的分子机制具有重要意义.

骨桥蛋白通过NF-κB上调钙蛋白酶小亚基1促进肝癌细胞迁移

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)参与调控多种信号途径激活转移相关基因,进而促进细胞迁移.钙蛋白酶小亚基1(calpain small subunit1,Capn4)与肿瘤转移密切相关,在许多肿瘤及其转移组织中高表达.为了探讨OPN促进肝癌细胞迁移的分子机制,应用报告基因检测、RT-PCR、免疫印迹及"伤口愈合"等方法检测了肝癌细胞中OPN对Capn4的调控作用及其对肝癌细胞迁移的影响.结果显示,在HepG2细胞中过表达OPN后,Capn4的启动子转录活性显著增强,同时mRNA及蛋白质表达水平也明显上调.在HepG2细胞中应用siRNA干扰OPN的表达可导致Capn4启动子转录活性受到明显抑制,同时mRNA及蛋白质表达水平也显著下调.应用核转录因子-κB(NF-κB)的抑制剂PDTC可抑制由过表达OPN导致的HepG2细胞中Capn4的上调."伤口愈合"实验显示,OPN可以通过上调Capn4促进肝癌细胞迁移.因此,研究发现,OPN通过NF-κB上调Capn4的表达,进而促进肝癌细胞的迁移,这一发现对进一步阐明肝癌细胞迁移的分子机制具有重要意义.

钙蛋白酶小亚基1和程序性死亡配体1及骨桥蛋白在多中心性乳腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨钙蛋白酶小亚基1(CAPN4)、程序性死亡配体1(PD-L1)和骨桥蛋白(OPN)在多中心性乳腺癌组织中的表达及意义。方法 选取2020年1月至2021年2月间上海市崇明区第三人民医院收治的71例多中心性乳腺癌患者,收集患者的癌组织及癌旁组织,比较两者蛋白表达情况,分析CAPN4、PD-L1和OPN与多中心性乳腺癌病理特征的关系,分析患者预后的影响因素。结果 CAPN4阳性染色表达主要集中在细胞质,呈淡黄色至棕黄色;PD-L1蛋白阳性表达主要集中在细胞浆及细胞膜,呈棕黄色;OPN蛋白阳性表达主要集中在细胞质,呈棕黄色及黄色颗粒。多中心性乳腺癌组织的CAPN4、PD-L1和OPN蛋白表达均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CAPN4、PD-L1和OPN与患者年龄、淋巴转移和分子分型无相关性(P>0.05),与患者组织学分级、肿瘤直径、组织学类型和Ki-67增殖指数有相关性(均P<0.05)。以多中心性乳腺癌患者预后为因变量,将CAPN4、PD-L1和OPN、组织学分级、肿瘤直径、组织学类型和Ki-67增殖指数作为自变量,多因素Logistics回归分析显示,CAPN4、PD-L1、OPN、组织学分级、肿瘤直径、组织学类型和Ki-67增殖指数是多中心性乳腺癌患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。结论 CAPN4、PD-L1和OPN在多中心性乳腺癌患者中呈高表达,且与患者的组织学分级、肿瘤直径、组织学类型及Ki-67增殖指数密切相关,在多中心性乳腺癌患者中具有重要意义。