CASP8AP2基因表达调控、功能与临床价值研究进展

我们系统总结了有关CASP8AP2基因的表达调控、生物学功能及其临床预后价值的研究报告。现有研究显示,CASP8AP2基因的表达受到同源盒蛋白和DNA甲基化的调控,miRNA-210能够使其表达沉默。CASP8AP2的生物学功能包括:参与FAS和TNFα介导的细胞凋亡、TNFα介导的NF-κB活化、糖皮质激素和盐皮质激素受体介导的基因转录调控、组成Cajal体和组蛋白位点体、复制依赖性组蛋白的转录和前体mRNA的3'端加工成熟、调控细胞周期S期进展,还能作为转录因子c-Myb、p73的辅助激活因子参与调控多种基因的转录。同时,CASP8AP2基因低表达与儿童ALL的复发相关;在儿童T-ALL和T淋巴母细胞淋巴瘤中,CASP8AP2基因的缺失较为常见,与患儿的较差预后相关。另外,在CASP8AP2基因序列中的3个单核苷酸多态性位点可能与弥漫性大B细胞淋巴瘤和白血病的发生有关。结论:CASP8AP2是一个多功能蛋白,具有调控细胞增殖、凋亡、基因表达等多种生物学功能,在儿童血液系统恶性肿瘤中,CASP8AP2基因还是一个有价值的预后标志物,部分单核苷酸多态性可能与白血病、淋巴瘤的发病相关。

儿童急性淋巴细胞白血病CASP8AP2基因启动子甲基化水平及其临床意义

目的:研究半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶8相关蛋白2(Caspase 8 associated protein 2,CASP8AP2)基因在儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)初诊和缓解时的启动子区Cp G位点的甲基化水平,及其与儿童ALL临床特征、预后的关系。方法:收集2007年8月到2010年3月于我院就诊的109例ALL患儿的初诊DNA样本,及其中94例患儿的缓解期DNA标本。DNA样本经硫化处理后,用本研究组建立的甲基化荧光法,测定CASP8AP2基因转录起始点上游的两个关键Cp G位点(-1189和-1176)的甲基化水平。结果:初诊患儿CASP8AP2基因启动子区上述2个位点的平均甲基化水平为(71.1±1.7)%,高于缓解患儿的样本(64.2±21.2%)(P=0.008)。受试者工作特征曲线下面积为0.687(P=0.024),说明这2个位点的甲基化水平具有一定的预测复发的能力。以76.9%为分界点,将初诊患儿分为高甲基化组(49例)和低甲基化组(60例)。高甲基化患儿更容易出现复发(20.4%vs 6.7%)(P=0.044),5年无复发生存率明显低于低甲基化组(Log rank,P=0.033)。初诊高甲基化与巩固治疗前微小残留病(minimal residual disease,MRD)高水平相关(P=0.011)。诱导缓解治疗后MRD≥10-4的34例患儿中,高甲基化患儿的复发率明显高于低甲基化患儿(8/16例vs 3/18例,P=0.038)。结论:CASP8AP2基因启动子区-1189和-1176两个Cp G位点的异常高甲基化可能与儿童ALL的发病相关,且高甲基化患儿的预后较差;将上述位点的甲基化水平与诱导缓解治疗结束时MRD水平相结合,能够更好地预测复发。

CASP8AP2功能域缺失对细胞柔红霉素敏感性影响的实验研究

目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶8相关蛋白2(caspase 8 associated protein 2,CASP8AP2)的4个功能域与细胞柔红霉素(daunorubicin,DNR)敏感性的关系。方法将CASP8AP2的野生型及4种缺失突变体分别转入293T细胞,同时转染空载质粒作为阴性对照。4种突变体分别缺失卷曲螺旋域(coiled coil,CC)、FLASH-ARS2结合域(FLASHARS2 binding region,FARB)、死亡效应区募集域(death effector domain-recruiting domain,DRD)、转录因子NF-κB激活域(NF-κB activation domain,NAD)。在CASP8AP2表达到峰值时,经不同浓度DNR作用36 h,采用MTS方法检测细胞存活率和半数抑制浓度(IC50)值。结果高表达CASP8AP2野生型以及4种缺失突变体的293T细胞经DNR作用后,存活率明显低于转染空载质粒的细胞,IC50值显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与WT-CASP8AP2相比,过表达CASP8AP2-ΔDRD细胞的存活率明显提高(P=0.025),IC50值也显著增高(0.236μg/ml比0.283μg/ml,P<0.01);而过表达突变体ΔCC、ΔFARB和ΔNAD的细胞存活率与WT-CASP8AP2无明显差异;而突变体ΔDRD细胞存活率及IC50值均明显高于其他3种突变体(P<0.05)。结论高表达野生型及4种缺失突变体的CASP8AP2可以提高293T细胞对DNR的敏感性。CASP8AP2-DRD功能域的缺失可下调293T细胞对DNR的敏感性。

联合检测E2F3a和CASP8AP2表达水平在儿童急性淋巴细胞白血病预后中的意义

目的探讨联合检测E2F3a和CASP8AP2的表达水平在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）预后判断中的意义。方法选取2008年3月至2010年7月首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心收治的初诊ALL患儿141例，其中男97例，女44例；确诊时年龄1.2～15.5岁，中位数5.2岁。采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测141例ALL患儿的E2F3a和CASP8AP2的基因表达水平。利用受试者工作特征（ROC）曲线确定E2F3a和CASP8AP2表达水平的最佳分界点，将患儿分为高表达组和低表达组，比较其预后差异。Cox回归方法分析E2F3a和CASP8AP2的联合表达水平的预后意义。结果E2F3a和CASP8AP2双低表达组儿童ALL的5年无复发生存（RFS）率、无病生存（EFS）率和总生存（OS）率分别为（58.9±10.0）%、（56.0±9.9）%和（72.0±9.0）%，均明显低于双高表达组[（94.9±2.5）%、（93.7±2.7）%和（96.2±2.2）%]，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。E2F3a和CASP8AP2 2个基因均低表达的患儿与其他患儿相比，其预后很差；2个基因均低表达与MLL重排、诱导治疗结束时微小残留病水平是儿童ALL的独立预后因素。结论初诊E2F3a和CASP8AP2低表达的ALL患儿预后差，联合分析E2F3a与CASP8AP2 2个基因的表达水平能更准确地判断预后、预测复发。

间充质干细胞来源外泌体通过microRNA-210发挥对H2O2诱导的心肌损伤的保护作用

目的研究间充质干细胞(MSC)外泌体经通过microRNA-210发挥H2O2诱导的心肌损伤的保护作用及其机制。方法应用H2O2溶液诱导建立H9c2心肌细胞的氧化应激损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)检测其对H9c2细胞生存率的影响。应用实时定量PCR检测不同浓度H2O2溶液对MSC外泌体中microRNA-210表达水平的影响。应用慢病毒感染建立microRNA-210 precursor、microRNA-210 inhibitor组,检测microRNA-210对H2O2诱导的H9c2心肌细胞存活率的影响。分别采用0.5 mmol/L的H2O2处理和不用H2O2处理处理microRNA-210 precursor组、microRNA-210 inhibitor组和H9c2对照组细胞24 h,再应用聚合酶链式反应(PCR)法检测各组细胞中的CASP8AP2、caspase-8和caspase-3基因的mRNA的相对表达。结果H2O2可降低H9c2心肌细胞的生存率并诱导MSC外泌体中microRNA-210表达水平增加,其作用强度均呈浓度依赖性(P<0.05)。microRNA-210 precursor组的H9c2心肌细胞生存率[(0.66±0.16)%]较未转染组H9c2细胞对照组[(0.41±0.10)%]显著增加(P<0.01),microRNA-210 inhibitor组的生存率[(0.29±0.07)%]较H9c2细胞对照组显著降低(P<0.001)。与H9c2细胞对照组(2.93±0.56、2.22±0.27、2.10±0.36)相比,microRNA-210-precursor组CASP8AP2、caspase-8和caspase-3 mRNA的相对表达(1.01±0.13、1.00±0.11、1.01±0.12)均显著降低,H9c2细胞+H2O2组以上指标[(7.22±1.32、6.10±1.03、5.98±0.44)]均表达均显著增加,H9c2细胞+H2O2组也较microRNA-210-precursor组显著升高(P<0.05);与H9c2+H2O2组相比,microRNA-210-precursor+H2O2组(3.09±0.60、2.25±0.29、2.12±0.31)CASP8AP2、caspase-8和caspase-3 mRNA的相对表达均显著降低(P<0.05)。结论H2O2可诱导H9c2心肌细胞损伤,并促进外泌体中microRNA-210表达的增加,而过表达microRNA-210可抑制H2O2诱导的心肌细胞的损伤,因此microRNA-210发挥抗心肌细胞损伤作用的可能机制是通过抑制CASP8AP2通路相关基因的表达而实现的。