在人类胰腺癌细胞BxPC3全基因组中受Notch-1胞内结构域和CBF-1转录共调控的靶基因特征分析

目的在人类胰腺癌细胞BxPC3全基因组水平上寻找受Notch-1胞内结构域和CBF-1共同转录调控的靶基因;分析它们的类型、功能和在基因组中的分布等特征值;并以此为基础预测Notch信号通路的潜在生物学功能和调控模式。方法染色质免疫共沉淀联合基于Illumina/Solexa平台的高通量测序。结果 1)Notch-1胞内结构域和CBF-1两组样本有效read数分别为14 287 722和14 289 280个,与人类参考基因组唯一匹配的read数分别为11 782 027和11 711 920个;2)两组样本的peak数分别为385和492个,peak区域分别为318 344 bp和383 768 bp,都占全基因组的约0.01%;3)两组样本的peak区域几乎集中于基因间区和内含子区,只有不到5%位于外显子区;4)两组样本的peak对应基因数分别为150和287个,其中共有基因93个;5)通过基因聚类分析和数据库比对可以查到这些基因的名称、分类、基本功能和在基因组中的位置等具体信息。结论在人类胰腺癌细胞BxPC3全基因组范围内找到了更多在转录水平上受CBF-1和Notch-1胞内结构域共同调控的未知靶基因;初步明确了它们的类型、分布和功能等特征值;这些数据可以为进一步分析Notch信号通路潜在的生物学功能和调控模式奠定基础。

多肽突变体Cbf-14-2抗青霉素耐药细菌的活性研究

本研究主要探讨了新型多肽突变体Cbf-14-2对携带NDM-1基因重组菌(E.coli BL21(DE3)-NDM-1)的抗菌活性及机制。实验采用肉汤倍比稀释活菌计数法测定多肽对E.coli BL21(DE3)-NDM-1重组菌的MIC/MBC和杀菌曲线,评价多肽的体外抗菌活性;采用重组菌腹腔感染法建立小鼠败血症模型,评价多肽的体内抗菌活性;通过Zeta电位分析和流式细胞术探讨Cbf-14-2抗耐药细菌感染的作用机制。结果表明,多肽Cbf-14-2对携带NDM-1基因的耐药细菌具有良好的抗菌活性(MIC=16μg/m L),能在2 h内快速杀灭细菌;同时,多肽能显著降低感染小鼠肝、脾、肺和肾脏等组织的细菌负载量,对细菌显示出强效清除能力,将小鼠存活率由10%提高至70%。这主要由于Cbf-14-2能与细菌细胞膜表面负电荷发生静电结合,增加对膜的穿透能力。因此,Cbf-14-2有望成为治疗NDM-1耐药细菌诱发感染的潜在抗菌剂。

骨碎补提取物对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化Cbfα-1表达的影响及意义

目的体外实验研究中药骨碎补对大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化及对Cbfα-1表达的影响。方法采用中药干预培养细胞的方法,利用骨碎补单味药物与培养基联合培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过Ⅰ型胶原免疫组化染色检测其促BMSCs成骨分化能力,通过RT-PCR方法进行半定量分析Cbfα-1的表达,探讨中药骨碎补促成骨能力的机制。结果骨碎补药物各组Ⅰ型胶原免疫组化染色检测BMSCs成骨分化能力及RT-PCR检测Cbfα-1的表达均明显优于空白组及条件培养组(P<0.01),0.002 g/ml药物组优于0.02 g/ml及0.0002 g/ml药物组(P<0.05)。结论中药骨碎补可促进BMSCs增殖及成骨分化,使Cbfα1的表达加强。

益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织cbf α-1mNRA表达的影响

目的:分析成骨细胞分化因子cbf α-1基因在去卵巢骨质疏松(OP)大鼠的表达水平,观察益骨胶囊的调节作用。方法:将36只10月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组,相应干预后,留取股骨,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术测定cbf α-1 mRNA表达,以GAPDH基因为内参照,根据相对定量公式(2-ΔΔCt)分别计算模型组、药物组与假手术组表达差异倍数。结果:根据相对定量公式分析显示:与假手术组相比,模型组大鼠骨组织中cbf α-1 mRNA表达下降(P<0.01)。而药物组cbf α-1 mRNA表达相当于假手术组的0.19-0.92倍(P>0.05),明显高于模型组(P<0.05)。结论:结果表明去卵巢OP模型大鼠骨组织cbf α-1基因表达降低,而益骨胶囊可上调cbf α-1的基因表达水平,这可能与其诱导骨髓间质干细胞分化为成骨细胞发挥其防治OP的作用有关。

内皮素-1对离体豚鼠工作心脏的作用

在离体豚鼠工作心脏模型上,单次推注内皮素-1(ET-1·30,90,300pmol·L^(-1))能引起初始短暂的正性肌力作用及随后持续的负性肌力,负性频率作用。低剂量的ET-1(30,90,pmol·L^(-1))能使心脏各功能指标可逆性恢复.而高剂量的ET-1(300pmol·^(-1))则强烈收缩冠脉,造成心肌缺血,LDH值升高,最终导致心功能指标显著受抑。环氧化酶抑制剂In-domethacin 30 μmol·L^(-1)能显著增强ET-l收缩冠脉血管的作用,加重心肌缺血。上术结果表明:ET-1通过强烈收缩冠脉血管,造成心肌缺血而引起离体豚鼠工作心脏心功能的抑制。并提示PGI_2能显著拮抗ET-1的缩血管作用。

体外局部大剂量辐射对大鼠骨髓间充质干细胞分化的影响

介绍了30 Gyγ射线局部照射大鼠股骨头部位,观察辐射对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的影响。辐照2周后取股骨进行骨髓间充质干细胞培养,经细胞诱导液诱导后进行碱性磷酸酶染色,油红O染色,CD31免疫荧光鉴定,同时RT-PCR检测Cbf-α1、PPAR-γ、VEGF-a和KDR的表达。大剂量辐射抑制BMSCs向相关细胞的分化,降低其Cbf-α1、PPAR-γ、VEGF-a和KDR的表达。诱导可促进体外培养BMSCs向成骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞的分化,照射组Cbf-α1、PPAR-γ、VEGF-a和KDR mRNA水平明显上调,其中PPAR-γ和VEGF-a表达水平接近对照组。体外大剂量辐射抑制BMSCs向成骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞分化,给予一定诱导,辐射损伤的BMSCs体外分化能力可以部分恢复,其相关基因的表达恢复明显,但其向成熟成骨细胞、脂肪细胞和内皮细胞分化的数目依然较少。

糖尿病大鼠脑额叶皮层血流量的经时变化

目的探讨糖尿病大鼠脑额叶皮层血流量的动态变化,初步研究其与主要血管活性物质变化的关系,为进一步研究糖尿病认知障碍以及中枢神经系统功能变化提供前期基础。方法 34只♂Wistar大鼠随机分为空白对照组和糖尿病模型组。模型组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1复制糖尿病模型,葡萄糖氧化酶法测定72 h空腹血糖≥16.7 mmol·L^(-1)作为成模标准,血糖仪连续动态测定FBG,Morris水迷宫检测糖尿病大鼠学习记忆能力,双通道激光多普勒血流仪检测大鼠90 d额叶皮层血流量。另取34只♂Wistar大鼠分组造模同前,连续动态监测造模d 0、7、14、21、28、35、42、56、75额叶皮层血流量;ELISA法检测脑脊液中i NOS、c NOS和ET-1的浓度。结果 Morris水迷宫检测显示,糖尿病模型组大鼠从训练第6次逃避潜伏期明显延长(P<0.05),额叶皮层血流量/100 g体重明显降低(P<0.05);额叶皮层血流量动态监测结果显示,糖尿病大鼠造模d 21脑血流量/100 g体重下降(P<0.05),并在相似水平持续到成模d 75(P<0.01,P<0.05);与对照组相比,模型组脑脊液中i NOS和c NOS浓度明显升高(P<0.05),ET-1浓度明显下降(P<0.01)。结论糖尿病认知障碍大鼠额叶皮层血流量减少,提示脑血流量的减少可能是导致糖尿病发生认知障碍的因素之一。糖尿病动态脑血流量检测显示脑血流量减少发生在糖尿病早期,之后并无明显继续恶化。脑血流减少可能与NO、ET-1浓度变化无明显关系,但脑血流的变化趋势可能与二者变化有关。

CBF在植物低温胁迫响应中的激活与调控研究进展

低温不仅制约植物的生长与发育,也制约植物的种植分布。为了应对低温伤害,植物通过改变基因表达和细胞内环境稳态来维持机体存活。CBF(C-repeat binding transcription factor)在植物响应低温胁迫中发挥枢纽作用,通过调控下游冷响应基因COR(Cold regulated)等的表达,提高植物对低温的耐受能力。对CBF的功能及其调控的下游基因、调控CBF基因的上游基因、CBF与激素互作等方面进行综述,并展望了CBF在农业生产上的应用前景,为深入研究CBF的耐冷机制奠定基础,为利用基因工程技术培育耐冷作物品种提供参考。