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大鼠IL-6基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其与C/EBP β结合位点的鉴定 被引量:1
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作者 庞蓉蓉 李妍 +5 位作者 张婧 单锴 邱文 何风霞 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期722-727,共6页
目的 :构建大鼠IL-6基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒并予鉴定,观察人胚肾细胞(HEK293)中过表达CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)对该质粒基因启动子活性的影响。同时,筛选C/EBPβ与IL-6基因... 目的 :构建大鼠IL-6基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒并予鉴定,观察人胚肾细胞(HEK293)中过表达CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)对该质粒基因启动子活性的影响。同时,筛选C/EBPβ与IL-6基因启动子区的结合位点。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠IL-6基因启动子全长序列(-1 791~+30 nt),将IL-6基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。将IL-6基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-IL-6-1)和大鼠野生型C/EBPβ表达质粒(pIRES2-EGFP-C/EBPβ)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定C/EBPβ对IL-6基因的启动作用。另用生物信息学软件预测IL-6基因启动子上C/EBPβ潜在的结合位点,并构建IL-6基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-IL-6-2~5)。将上述IL-6基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和C/EBPβ过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选出C/EBPβ的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将pGL3-IL-6-1和pIRES2-EGFP-C/EBPβ共转染HEK293细胞发现,IL-6基因启动子活性显著增加。另将pGL3-IL-6-1、pGL3-IL-6-2~5和pIRES2-EGFP-C/EBPβ共转染HEK293细胞后发现,pGL3-IL-6-5的启动活性显著低于其他组。提示C/EBPβ可能结合在IL-6基因启动子的-618 bp~-126 bp区域。结论:成功构建了大鼠IL-6基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出了C/EBPβ在IL-6基因启动子上的结合部位。 展开更多
关键词 IL-6 ccaat 增强子结合蛋白β(c ebpβ) 荧光素酶报告质粒 启动子活性
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磷酸化蛋白激酶样内质网激酶、C/EBP同源蛋白在慢性间歇低氧大鼠肺组织中的表达变化及意义 被引量:5
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作者 张嘉宾 张盼盼 +2 位作者 王红阳 寇育乐 王玲 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第15期38-43,共6页
目的探讨慢性间歇低氧(CIH)大鼠肺组织中磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)表达变化及意义。方法将60只大鼠随机分成正常组(UC组)、CIH组,每组各自分成3、7、14、21和28 d 5个时间亚组... 目的探讨慢性间歇低氧(CIH)大鼠肺组织中磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)表达变化及意义。方法将60只大鼠随机分成正常组(UC组)、CIH组,每组各自分成3、7、14、21和28 d 5个时间亚组。采用HE法观察UC组和CIH组大鼠肺组织病理形态变化;采用免疫组织化学法检测p-PERK、CHOP蛋白表达及两者的相关性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两组大鼠肺组织CHOP mRNA表达。结果 1CIH组肺泡壁及间质轻度水肿,少量炎症细胞浸润,肺泡结构紊乱,部分肺泡融合;UC组大鼠肺组织无明显病理变化。2CIH组肺组织p-PERK、CHOP蛋白表达高于UC组,于21 d表达最高。3CIH组肺组织CHOP mRNA表达高于UC组,于21 d表达最高。4P-PERK、CHOP表达的上调呈正相关。结论慢性间歇低氧可引起肺组织损伤,而p-PERK、CHOP蛋白的活化表达在慢性间歇低氧大鼠肺组织的损伤中可能存在一定的作用。 展开更多
关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 慢性间歇低氧 磷酸化蛋白激酶样内质网激酶 c/ebp同源蛋白 肺损伤
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腺病毒载体介导C/ebp delta改善小鼠心脏缺血性损伤
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作者 王丹丹 陶贵周 +1 位作者 黄建华 刘华 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第2期131-135,共5页
目的探讨腺病毒载体介导C/ebp delta对缺血性心脏病的治疗作用。方法构建腺病毒C/ebp delta增强型绿色荧光蛋白(Ad C/ebp delta-EGFP)载体,局部注射小鼠心脏左心室前壁,观察其对心肌细胞的转染效率。取C57BL/6小鼠,以腺病毒空载体局部... 目的探讨腺病毒载体介导C/ebp delta对缺血性心脏病的治疗作用。方法构建腺病毒C/ebp delta增强型绿色荧光蛋白(Ad C/ebp delta-EGFP)载体,局部注射小鼠心脏左心室前壁,观察其对心肌细胞的转染效率。取C57BL/6小鼠,以腺病毒空载体局部注射心肌为对照组,Ad C/ebp delta-EGFP载体局部注射心肌为实验组。2组小鼠心肌局部注射腺病毒载体后行冠状动脉左前降支结扎,用心脏超声检测C/ebp delta对心脏功能的影响。无痛苦处死小鼠,收获心脏,TUNEL染色观察C/ebp delta对心肌细胞凋亡的影响;CD31免疫组化观察C/ebp delta对心肌梗死后梗死交界区毛细血管密度的影响;蛋白免疫印迹检测C/ebp delta对心肌梗死后心脏低氧诱导因子-1(HIF-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。结果成功构建Ad C/ebp delta-EGFP载体。超声显示实验组小鼠心肌梗死后心脏左室短轴缩短分数(LVFS,0.323±0.031)和心脏左室射血分数(LVEF,0.605±0.085)较对照组(0.221±0.031和0.464±0.071)显著改善(P<0.05);心肌细胞凋亡率较对照组明显减少(20.36%±3.07%vs. 44.26%±6.25%,P<0.01);心肌梗死交界区毛细血管密度(毛细血管数目/每个视野)较对照组显著增加(145.41±15.52 vs. 77.60±5.19,P<0.01);HIF-1、HO-1和VEGF蛋白的表达较对照组均显著增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的C/ebp delta可能通过激活HIF-1信号通路增加HO-1和VEGF表达,进而通过保护心肌细胞及促进心脏血管新生治疗缺血性心脏病。 展开更多
关键词 心肌缺血 ccaat增强子结合蛋白质δ 缺氧诱导因子1 血红素加氧酶-1 血管内皮生长因子A c/ebpdelta 血管新生 心肌保护
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IMMUNOHISTOCHEMICAL DEMONSTRATION OF CCAAT/ENHANCER BINDING PROTEIN (C/EBP) IN HUMAN LIVER TISSUES OF VARIOUS ORIGIN
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作者 徐砺新 随延仿 +2 位作者 王文亮 刘彦仿 顾建人 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 1994年第8期38-41,共4页
C / EBP is a sequence-specific DNA-binding protein. In order to indentify its distribution and localization, immunohistochemical technique (ABC method) was done using anti-C / EBP polypeptide antibodies 1103#, 425# in... C / EBP is a sequence-specific DNA-binding protein. In order to indentify its distribution and localization, immunohistochemical technique (ABC method) was done using anti-C / EBP polypeptide antibodies 1103#, 425# in liver specimens from 20 normal adults, 5 neonates, 6 patients with hepatitis, 25 with liver cirrhosis, 80 with hepatocellular carcinoma (40 cases were associated with surrounding nontumorous tissues) and 26 patients with cholangiocarcinoma (15 cases were associated with surrounding nontumorous tissues). The results showed that C / EBP was diffusely distributed in nuclei and cytoplasm of differentiated liver cells and very low or undetectable in liver cancer cells. The manifestation of C / EBP correlated with degree of differentiation of tumour cells, and was obviously weaker than that in surrounding nontumorous tussues. C / EBP positive staining has also been found in regenerating epithelial cells of bile ductules. The results suggested that C / EBP should play an important role in establishing and maintaining the differentiation of liver cells. 展开更多
关键词 ccaat IN HUMAN LIVER TISSUES OF VARIOUS ORIGIN IMMUNOHISTOcHEMIcAL DEMONSTRATION OF ccaat/ENHANcER BINDING protein c/ebp
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吸烟对甲状腺相关眼病患者眶脂肪分化的影响 被引量:3
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作者 周哲 高玉 +2 位作者 孙琰 景明 胡佳丽 《眼科》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期334-338,共5页
目的确定吸烟对甲状腺相关眼病(TAO)患者眶脂肪分化的影响。设计回顾性病例系列。研究对象2012年6-12月在上海长征医院眼科行眶减压术的TAO患者40例,男性27例,女性13例。方法 40例TAO患者中,21例吸烟、8例曾吸烟但已戒烟,5例被动吸烟,6... 目的确定吸烟对甲状腺相关眼病(TAO)患者眶脂肪分化的影响。设计回顾性病例系列。研究对象2012年6-12月在上海长征医院眼科行眶减压术的TAO患者40例,男性27例,女性13例。方法 40例TAO患者中,21例吸烟、8例曾吸烟但已戒烟,5例被动吸烟,6例非吸烟。运用RT-PCR检测所有患者眶脂肪CCAAT/增强结合蛋白(C/EBP)和过氧化物酶体增生物激活受体(PPARγ)mRNA表达量。用△Ct法进行其各基因表达的相对定量。多组间的总体比较采用单因素方差分析,随后用SNK-q检验进行两两比较。主要指标C/EBP和PPARγmRNA表达量。结果吸烟组患者的C/EBP(12.04±4.26)和PPARγmRNA表达量(4.82±1.41)明显高于非吸烟组(C/EBP:2.32±0.92;PPARγ:1.37±0.25)(P<0.001)。同时,曾吸烟组和被动吸烟组的C/EBP(4.29±1.26,5.76±1.03)和PPARγmRNA表达量(2.91±1.23,3.22±0.50)对比非吸烟组的差异也具有统计学意义(曾吸烟组C/EBP P=0.039,PPARγP=0.047;被动吸烟组C/EBP P=0.002,PPARγP=0.002)。吸烟指数≥100年支的TAO患者眶脂肪C/EBP(14.28±3.61)和PPARγmRNA(5.65±1.02)高于吸烟指数<100年支的患者(C/EBP:8.42±2.30;PPARγ:3.48±0.74)(P均<0.01)。结论眶脂肪C/EBP和PPARγmRNA的表达量与吸烟史有关。 展开更多
关键词 吸烟 甲状腺相关眼病 ccaat/增强结合蛋白 过氧化物酶体增生物激活受体
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