长链非编码RNA CCAT2对肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响及其机制探讨

目的观察长链非编码RNA CCAT2(lncRNA CCAT2)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和侵袭迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的HCC细胞Hep G2随机分为A、B、C组,采用Lipofectamine3000分别瞬时转染对照质粒、小干扰RNA质粒(si-CCAT2)、si-CCAT2+多梳蛋白EZH2过表达质粒。采用Real-time PCR法检测细胞中的lncRNA CCAT2、EZH2 mRNA,Western blotting法检测细胞中的EZH2蛋白,MTT法观察培养24、48、72、96 h细胞增殖能力(OD490),细胞划痕及Transwell实验分别观察细胞的迁移、侵袭能力。结果与A组比较,B组细胞中lncRNA CCAT2和EZH2的mRNA和蛋白表达水平均下降(P均<0.05);与B组比较,C组胞中EZH2的mRNA和蛋白表达水平均增加(P均<0.05)。与A组同时点比较,B组细胞增殖的OD490值降低(P均<0.05);与B组同时点比较,C组细胞增殖的OD490值升高(P均<0.05)。与A组比较,B组细胞划痕愈合百分比、穿膜细胞数均下降(P均<0.05);与B组比较,C组细胞划痕愈合百分比、穿膜细胞数均增加(P均<0.05)。结论 lncRNA CCAT2可通过上调EZH2的表达促进HCC细胞的增殖、侵袭和迁移,进而促进HCC的发生发展。

长链非编码RNA CCAT2在肝癌中的作用及其机制

目的探讨长链非编码RNA CCAT2(LncRNA CCAT2)在肝癌中的作用及机制。方法选取我院2013年1-6月60例肝癌及其癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其组织中CCAT2的表达,同时培养正常肝细胞L02和人源性肝癌细胞系Hep G、H2P、SMMC和HLE细胞,采用qRT-PCR检测细胞中CCAT2的表达,采用siRNA干扰细胞CCAT2表达后,在24、48、72、96 h用CCK-8检测SMMC和HLE细胞增殖;Transwell实验分析细胞迁移和侵袭情况;采用流式细胞仪分析CCAT2对SMMC和HLE细胞周期分布和凋亡的影响;Western blot检测P53、Bcl-2、Caspase-8蛋白的表达。结果在肝癌组织和肝癌细胞中,CCAT2的表达显著升高(P均<0.05),CCAT2高表达的患者预后和生存率均较低(P均<0.05)。肝癌细胞中低表达的CCAT2能显著抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭(P均<0.05)。肝癌细胞中低表达的CCAT2也能使肝癌细胞周期停留在G0/G1期并促进细胞凋亡(P均<0.05)。采用siRNA干扰细胞CCAT2表达后,肝癌细胞中P53和Caspase-8蛋白的表达显著升高(P均<0.05),Bcl-2蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论 CCAT2在肝癌组织和细胞系中高表达,siRNA干扰CCAT2表达后能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭以及促进肝癌细胞的凋亡,其机制可能通过升高P53和Caspase-8蛋白的表达和降低Bcl-2蛋白的表达有关。

LncRNA CCAT2/miR-145/p70S6K1分子轴调控口腔鳞癌细胞侵袭转移

目的研究长链非编码RNA CCAT2(CCAT2)、microRNA-145(miR-145)和p70S6K1在口腔鳞细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中的表达水平,并探讨CCAT2/miR-145/p70S6K1分子轴对OSCC细胞侵袭迁移的影响。方法收集2018年1月~2019年6月在我院进行手术治疗的52对OSCC组织和癌旁正常组织,通过实时荧光定量PCR检测CCAT2、miR-145和p70S6K1的相对表达水平。敲低OSCC细胞中CCAT2和p70S6K1的表达,并通过Transwell实验检测OSCC细胞侵袭迁移的改变。结果CCAT2和p70S6K1在OSCC组织中表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05),而miR-145在OSCC组织中表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。双荧素酶基因报告实验显示,miR-145靶向抑制OSCC细胞中CCAT2和p70S6K1的表达。敲低CCAT2抑制OSCC细胞体外迁移和侵袭,抑制miR-145和促进p70S6K1的表达,而miR-145-inhibitor上调敲低CCAT2的OSCC细胞中p70S6K1的表达。此外,敲低p70S6K1抑制OSCC细胞体外迁移和侵袭。结论LncRNA CCAT2/miR-145/p70S6K1可以调控OSCC细胞侵袭迁移,在OSCC体内转移中发挥作用,是治疗OSCC的潜在靶点。

lncRNA CCAT2对宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)CCAT2对宫颈癌细胞增殖、周期的影响。方法:采用qPCR法检测3种宫颈癌细胞(HeLa、C-33A和CaSki)中CCAT2的表达水平,选择表达水平最高的细胞进行后续实验。设计合成CCAT2过表达及干扰载体,转染细胞后,qPCR检测转染效率。细胞分为5组:对照组、干扰空载(sh-EV)组、过表达空载(overExpEV)组、CCAT2干扰(sh-CCAT2)组和CCAT2过表达(overExp-CCAT2)组,MTT法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,WB法检测细胞中Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)表达水平。结果:在HeLa、C-33A和CaSki 3种细胞系中,选择CCAT2表达水平最高的CaSki细胞为研究对象。CCAT2过表达及干扰载体均成功转入细胞,转染效果明显。与对照组比较,sh-CCAT2组细胞增殖活力显著降低(P<0.01)、G1期细胞比例显著升高(P<0.01),Ki67、Cyclin D1及CDK4表达水平显著降低(均P<0.01);而overExp-CCAT2组与之相反,细胞增殖能力增强,且Ki67、Cyclin D1及CDK4表达水平显著升高(均P<0.01)。结论:CCAT2通过调控细胞增殖及周期相关蛋白的表达,进而影响宫颈癌CaSki细胞的增殖和周期。

shRNA沉默CCAT2通过抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549化疗敏感性的影响

目的:探究shRNA沉默CCAT2抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及机制。方法:细胞分为A549/DDP组、Scramble组、CCAT2 shRNA组,转染相应的shRNA处理细胞,RT-PCR检测CCAT2基因表达水平,CCK8检测A549/DDP的细胞活力,Hoeschst和流式细胞法检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶3(cl-caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果:与A549细胞株相比,A549/DDP细胞株中CCAT2表达水平显著升高。与A549/DDP组相比,CCAT2 shRNA组CCAT2表达水平显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Bax、cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平比率显著降低,Beclin1蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高。结论:沉默CCAT2可提高非小细胞肺癌细胞A549株化疗敏感性,作用机制可能与抑制自噬作用有关。

长链非编码RNA在膀胱癌中的研究概况

随着二代测序技术的广泛应用和基因层面上肿瘤学研究的深入,曾被忽略、被低估的lncRNA被揭示与人类肿瘤的发生发展密切相关,从不同的生物学途径影响肿瘤的发生、发展。研究发现,lncRNA与膀胱癌的增殖、浸润、转移、复发、耐药等密切相关。本文将对lncRNA在膀胱癌中的研究概况进行综述。

长链非编码RNACCAT2在结肠癌组织的表达及其意义

目的检测长链非编码RNACCAT2（1ncRNACCAT：）基因在结肠癌中的表达并探讨其表达差异与临床资料及预后的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ．PCR）的方法检测结肠癌及其癌旁正常组织中lncRNACCAT2的表达量，取中位数分为高表达组与低表达组，分析其与临床资料及病例特征的关系；应用Kaplan-Meier法分析lncRNACCAT2的表达差异与临床预后的相关性。FQ—PCR法检测结肠癌细胞中lncRNACCAT：的表达，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测干扰lncRNACCAT：表达后结肠癌细胞增殖的变化。结果lncRNACCAT2在结肠癌中的相对表达水平为10．438±2．415，高于癌旁肠正常组织的相对表达水平（P〈0．01）；FQ-PCR高表达与肿瘤的大小、分化、血管浸润及肿瘤分期密切相关（P〈0．05）；lncRNACCAT：高表达组的中位生存时间为26个月，低表达组的中位生存时间为39个月，差异有统计学意义（P〈0．05）。lncRNACCAT2在48、72h的吸光度（A）值为0．16±0．02、0．28±0．01，均低于对照组的0．35±0．03、0．41±0．02，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论lncRNACCAT：过表达参与了结肠癌的发生和发展。

长链非编码RNA结肠癌相关转录因子2在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肿瘤形成和进展中起重要作用,目前已成为继微小RNA(micro RNA,mi RNA)之后肿瘤研究领域的新热点。其中,结肠癌相关转录因子2(colon cancer associated transcript 2,CCAT2)在多种恶性肿瘤中被发现异常表达,扮演着癌基因的角色。CCAT2可影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、周期和凋亡过程,对肿瘤早期筛查、治疗及监测预后具有重要意义。本文总结国内外最新报道,对lnc RNA CCAT2在恶性肿瘤中的研究进展作一综述。