基于CCL2-CCR2信号轴探索松萝酸对胃癌细胞恶性行为的影响

目的:探讨松萝酸(UA)调节CC趋化因子配体2-CCL2受体(CCR2)信号轴对胃癌细胞恶性行为的影响。方法:以生长良好的人胃癌细胞系SGC-7901细胞为研究对象,通过不同浓度的UA处理,设为UA低浓度(UA-L)组(62.5μmol/L UA)、UA中浓度(UA-M)组(125μmol/L UA)、UA高浓度(UA-H)组(250μmol/L UA);同时对细胞转染CCL2过表达载体(pc DNA3.1 CCL2)、空载体(pc DNA3.1)、沉默CCL2(si CCL2)及阴性对照(si control),并采用250μmol/L UA处理SGC-7901细胞,标记为UA-H+pc DNA3.1 CCL2组、UA-H+pc DNA3.1组、UA-H+si CCL2组、UA-H+si control组,另取未处理的SGC-7901细胞作为对照组。流式细胞术、MTT及qRT-PCR检测细胞凋亡、增殖及CCL2、CCR2 mRNA表达水平;Western blot检测PD-L1、凋亡蛋白(Bax)、增殖蛋白(CyclinD1、CCL2、CCR2)、免疫逃逸相关蛋白(B7H1)表达水平;与体外分离培养的CD8+T细胞共培养后,ELISA检测上清液中IL-4、IFN-γ、IL-10水平。将各组细胞与活化的外周血单个核细胞(PBMC)1∶1共培养72 h,比较各组胃癌细胞对T细胞介导的杀伤敏感性。结果:与对照组相比,UA-L组、UA-M组、UA-H组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2、B7H1蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与UA-H+pc DNA3.1组相比,UA-H+pc DNA3.1 CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PDL1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著增加,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);与UA-H+si control组相比,UA-H+si CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:UA可抑制胃癌细胞增殖、免疫逃逸,诱导其凋亡,可能与抑制CCL2-CCR2信号轴有关。

IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润

目的探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激;流式细胞术检测免疫细胞表型;迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用;乳酸脱氢酶(LDH)及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-γ的分泌数量;ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况;体内实验中,将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊,构建斑马鱼移植瘤模型,24 h后将免疫细胞注射至同样部位,体式荧光显微镜拍摄荧光。结果NKP30配体(B7H6)在正常组织及血液细胞不表达,在肺癌细胞上高表达(90%以上)。IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比,具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成(P<0.001),免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低(P<0.005),对肺癌细胞具有更强的杀伤能力(P<0.001),伴随IFN-γ数量明显增加(P<0.001)。IL-21-CCL19 CAR-T细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL‑21(3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL)。体内实验中,CAR-T细胞和普通T细胞比较,具有较强的杀伤能力和增殖能力,但2种CAR-T细胞无明显差异(P>0.05)。结论IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部,有效杀伤肿瘤细胞,同时产生更多的记忆T细胞。

甲基莲心碱调节CCL2-CCR2信号轴对心力衰竭大鼠心肌炎症的影响

目的:探讨甲基莲心碱(NeF)调节趋化因子CCL2/受体CCR2(CCL2-CCR2)信号轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌炎症的影响。方法:通过结扎左前降支构建HF大鼠模型,随机分为HF组、不同剂量(5、10、20 mg/kg)NeF组以及20 mg/kg NeF^(+)CCL2组,并选取不结扎左前降支的10只大鼠作为假手术组,治疗结束后进行心脏功能[左室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(EF)、左心室射血分数(LVEF)]评估;检测血清指标[脑钠肽(BNP)、IL-1β、N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)、TNF-α];分离心肌组织,检测组织中TNF-α、IL-1β表达、病理损伤、胶原沉积以及CCL2、CCR2蛋白表达。结果:HF组大鼠心肌细胞减少,炎症细胞浸润,胶原纤维沉积严重,LVESD、血清中BNP、NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平、心肌组织中TNF-α、IL-1β表达、胶原面积比、CCL2、CCR2蛋白表达较假手术组显著升高,LVEF、EF显著降低(P<0.05);不同剂量NeF组大鼠心肌组织损伤、胶原纤维沉积减轻,LVESD、血清中BNP、NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平、心肌组织中TNF-α、IL-1β表达、胶原面积比、CCL2、CCR2蛋白表达较HF组显著降低,LVEF、EF显著升高,且组间差异具有统计学意义(P<0.05);CCL2干预后,心肌组织损伤、胶原纤维沉积加重,LVESD、血清中BNP、NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平、心肌组织中TNF-α、IL-1β表达、胶原面积比、CCL2、CCR2蛋白表达较20 mg/kg NeF组显著升高,LVEF、EF显著降低(P<0.05)。结论:NeF调节CCL2-CCR2信号轴抑制HF大鼠心肌炎症,改善心功能。

乌司他丁调节CCL2-CCR2信号轴对胃癌细胞上皮-间质转化和免疫逃逸的影响分析

目的:探讨乌司他丁(UTI)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-C-C趋化因子受体2(CCR2)信号轴对胃癌(GC)细胞上皮-间质转化(EMT)和免疫逃逸的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测GC组织/细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平;以不同浓度的UTI(0、100、200、400、800 U/ml)干预细胞,MTT法检测细胞增殖情况;将AGS细胞分为control组、UTI组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组,平板克隆和Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移、侵袭。AGS细胞和CD8+T细胞共培养后,将CD8+T分为T细胞组、共培养组、UTI组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组,流式细胞仪检测CD8+T细胞凋亡,ELISA检测CD8+T细胞上清中IFN-γ、IL-2、TNF-α水平;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、程序性死亡配体1(PD-L1)及CCL2-CCR2信号通路蛋白表达。结果:在GC组织/细胞中,CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);UTI显著抑制AGS细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT,降低AGS细胞中MMP-2、Vimentin、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达(P<0.05);过表达CCL2可逆转UTI对细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制作用;与T细胞组比较,共培养组CD8+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α水平降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);与共培养组比较,UTI组CD8+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-CCL2组CD8+T细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论:UTI可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路抑制AGS细胞的EMT和免疫逃逸。

CCL4在肿瘤微环境中影响免疫逃逸的研究进展

免疫治疗已成为当下恶性肿瘤治疗的基石。然而,不同患者对免疫治疗的反应具有较大异质性,并非都能从中获益。当下亟需寻找能高效预测免疫治疗疗效的生物标志物。C-C趋化因子配体4(C-C chemokine ligand4,CCL4)是一种细胞因子,隶属于炎症性CCL亚家族,主要由免疫细胞、肿瘤细胞分泌,在正常组织中不表达或者弱表达,在多种恶性肿瘤组织中异常高表达。CCL4与其受体C-C趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)结合后可招募并介导免疫细胞迁移,破坏肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)的稳定性,参与致癌并促进肿瘤发展。在肿瘤免疫微环境中,CCL4可介导并募集单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、T细胞等关键免疫细胞定向迁移,成为影响免疫治疗疗效的潜在重要元素,而具有特定的价值。本文就CCL4在TME中影响免疫逃逸的研究进展进行综述,以期为基础研究及临床诊疗提供线索和参考。

基于CCL2/CCR2信号轴的肿瘤免疫治疗药物的研究进展

趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)及其受体CCR2与肿瘤的发生、发展密切相关。CCL2/CCR2信号轴通过多种机制促进肿瘤进展,一方面CCL2与肿瘤细胞表面的CCR2结合促进肿瘤的生长/存活和转移;更为重要的是CCL2可以招募多种免疫抑制细胞在肿瘤微环境中聚集,抑制免疫细胞的功能和活性,促进肿瘤进展。本文综述了CCL2/CCR2信号轴以及其在肿瘤及肿瘤微环境中的作用,并重点介绍了靶向CCL2/CCR2信号轴药物的临床研究进展,以期深入并全面了解CCL2/CCR2信号轴在肿瘤进展中的作用机制,开发更有效的肿瘤免疫治疗药物。

CC chemokines CCL2, CCL3, CCL4 and CCL5 are elevated in osteoporosis patients

Osteoporosis is defined as a disorder associated withlow bone mineral density （BMD）. Evidence indicatesthat the immune system is strongly related to bonemetabolism in terms of osteoimmunology, noticeably,interplay between the skeletal and immune system likecellular and non-cellular components, including innateand adaptive immune responses and cytokines andchemokines. Very few studies are available thatinvestigated the role of chemokines in osteoporosis.

CCL11在大疱性类天疱疮中表达水平差异与中医证素相关性分析

目的通过检测大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid,BP)患者皮损的嗜酸性粒细胞趋化因子11(CCL11)水平,探讨CCL11在BP不同中医证素间的水平差异,为BP的辨证分型及治疗提供有价值的分子靶标。方法纳入天津市中医药研究院附属医院2019年1月—2021年1月共65例BP患者作为研究组及24例有美容需求的健康人群作为对照组,通过免疫组织化学对皮损组织中的CCL11进行染色,应用Image-pro Plus 6.0图像分析软件对阳性表达区域平均光密度值(average optical density,AOD)进行定量分析,应用SPSS26.0统计软件分析不同中医证素及健康对照组间CCL11的统计学差异。结果热毒证素、湿热证素、脾虚证素皮损的CCL11表达AOD值分别为0.34±0.12、0.29±0.13、0.25±0.12,较健康对照组0.09±0.09差异均有统计学意义(P<0.001),热毒证素与脾虚证素两组间差异有统计学意义(P=0.042),其余证素相互间差异无统计学意义。结论皮损中CCL11表达水平在不同中医证素中从高至低依次为热毒、湿热、脾虚,且热毒证素与脾虚证素的CCL11表达水平有统计学差异。

牙龈卟啉单胞菌上调CCL20的表达对口腔鳞状细胞表型的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)通过诱导CCL20的表达对人口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,进一步明确CCL20对口腔癌细胞表型的影响。方法 收集2021-2023年就诊于本院颌面肿瘤外科44例患者的临床资料、外周血和OSCC组织标本,另收集22例健康志愿者外周血作为对照组。通过免疫组化和ELISA检测人口腔鳞癌组织和血清中CCL20的表达。通过体外培养人口腔鳞状细胞癌CAL27和SCC25细胞,建立细胞细菌共培养模型,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CAL27、SCC25细胞和P.g组中CCL20表达情况;运用CCK-8、划痕和Transwell实验检测P.g和CCL20对各组细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 人口腔鳞状细胞癌组织中CCL20的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);与control组相比,感染P.g的CAL27和SCC25细胞中CCL20的mRNA和蛋白水平明显上调(P<0.05)。在P.g感染下,CAL27和SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力均得到增强(P<0.05),而阻断CCL20表达后,P.g对口腔癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力减弱(P<0.05)。结论 P.g通过上调CAL27和SCC25细胞中CCL20的表达来促进口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

基线水平CCL19^(+)树突状细胞可有效预测肺腺癌患者免疫治疗的敏感性

目的探讨肺腺癌微环境基线水平CCL19^(+)树突状细胞(CCL19^(+)DC)与肺腺癌患者接受免疫治疗疗效及肺腺癌患者CD8^(+)T细胞浸润的相关性。方法回顾性分析2020年1月~2023年12月在河南科技大学第一附属医院住院的肺腺癌患者资料,并收集行免疫治疗的肺腺癌患者组织标本96例。应用免疫荧光法检测96例肺腺癌组织中CCL19^(+)DC及CD8^(+)T细胞的浸润状况。受试者工作特征(ROC)曲线评估基线水平CCL19^(+)DC对肺腺癌免疫治疗疗效预测价值,并进行敏感性分析。采用卡方检验分析肺腺癌组织中基线水平CCL19^(+)DC与免疫疗效及CD8^(+)T细胞浸润的相关性。采用Pearson相关性分析评价基线水平CCL19^(+)DC表达与细胞毒性T细胞(CTL)浸润相关性。将PC9肺腺癌细胞、CD8^(+)T细胞及DC(过表达CCL19和/或抗Pd^(-1)处理)进行分组体外共培养,采用流式细胞学方法检测T细胞各表面分子(GranzymeB、Perforin、IFN-γ、Ki-67)表达情况。结果免疫荧光结果显示,PR/CR组(Respond)的患者肺腺癌组织中CCL19^(+)DC浸润高于PD/SD组(Unrespond)患者,表现出更好的免疫治疗疗效,ROC曲线下面积为0.785,敏感度为75.6%,特异度为62.8%。CCL19^(+)DC高表达患者肺腺癌组CD8^(+)T细胞表面分子Granzyme B(P<0.01)、Perforin(P<0.01)、IFN-γ(P<0.01)及Ki-67(P<0.001)表达均高于CCL19^(+)DC低表达患者。肺腺癌组织基线水平CCL19^(+)DC的表达与免疫治疗疗效具有显著的相关性(P=0.003),与CTL细胞浸润呈正相关(r=0.6657,P<0.001),CCL19^(+)DC丰富度与CD8^(+)T细胞的浸润具有显著的相关性(P=0.007)。与对照组相比,转染过表达CCL19质粒及单独使用anti-PD1处理组中CD8^(+)T淋巴细胞杀伤及增殖功能标志物增加(P<0.01)。使用anti-PD1联合转染过表达CCL19质粒处理组中CD8^(+)T淋巴细胞杀伤及增殖功能标志物水平显著增加(P<0.001)。结论在免疫治疗背景下,肺腺癌微环境中基线水平CCL19^(+)DC的表达与肺腺癌患者免疫治疗疗效及CTL细胞浸润呈正相关,并且肺腺癌微环境中CCL19^(+)DC可以提升CD8^(+)T细胞杀伤及增殖功能标志物水平,发挥潜在抗肿瘤免疫作用。因此,肺腺癌微环境中基线水平CCL19^(+)DC可以有效预测肺腺癌免疫治疗的敏感性。

超低介电损耗、超低CTE的高耐热CCL的开发

运用全碳氢结构树脂,通过配方设计,制备了具有超低低介损耗,超低CTE(X/Y/Z)、高耐热特性的高速覆铜板。测试了粘结片的固化反应性及流变特性,并对覆铜板的各项性能进行了测试。结果表明,所制备的覆铜板具有良好的综合性能,玻璃化温度Tg为252℃、10GHz频率下介电损耗角正切Df为0.00094、Z-CTE的50~260℃尺寸变化率为0.86%,Y-CTE为15ppm/℃,插损为-0.65dB/inch,能够满足单通道数据传输速率为112Gbps的材料需求。

肝郁化火型迟发性痤疮女性病人血清趋化因子CCL5、CXCL10表达与病人病情的关系

目的:通过检测肝郁化火型迟发性痤疮女性病人血清趋化因子CCL5、CXCL10表达水平,分析其与病人病情关系。方法:收集80例肝郁化火型迟发性痤疮女性病人作为痤疮组,根据痤疮Pillsbury国际改良分级法分为轻组(n=23)、中组(n=32)、重组(n=25)。以同时段一般资料有可比性的80名女性体检健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CCL5、CXCL10表达水平以及炎性因子白细胞介素(IL)-1β、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2水平,并分析其在各组中表达差异。Pearson法分析CCL5、CXCL10与IL-1β、IFN-γ、IL-2的相关性。结果:痤疮组血清CCL5、CXCL10、IL-1β、IFN-γ、IL-2表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血清CCL5、CXCL10表达水平与痤疮组病人年龄、体质量指数、经期状态无关(P>0.05);月经前加重病人血清CCL5、CXCL10表达水平高于月经前无加重者,差异有统计学意义(P<0.01)。重组、中组及轻组血清CCL5、CXCL10、IL-1β、IFN-γ、IL-2表达水平逐次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性显示,CCL5、CXCL10均与IL-1β、IFN-γ、IL-2存在正相关关系(P<0.05~P<0.01)。结论:肝郁化火型迟发性痤疮女性病人血清中CCL5、CXCL10呈上调表达,病情越重,其表达水平越高,可为临床评估和治疗迟发性痤疮病情严重度提供参考。

细胞外基质刚度诱导CCL5合成以提高非小细胞肺癌免疫治疗响应

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞外基质刚度调控趋化因子配体5(C-C motif chemokine ligand 5,CCL5)的机制,揭示CCL5对NSCLC的免疫治疗响应的影响。方法通过TCGA数据库分析NSCLC细胞外基质刚度与CCL5表达的相关性;根据NSCLC细胞外基质刚度设计不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶,获得响应水凝胶基质刚度力学加载的H1299细胞并对其进行转录组测序,利用q-PCR验证高基质刚度对CCL5表达的影响;进一步利用NSCLC患者转录组数据探究CCL5与免疫治疗响应的相关性。结果高细胞外基质刚度可以上调CCL5的表达,并且干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)介导的信号通路可能参与了该过程;CCL5高表达的NSCLC患者,肿瘤组织中细胞毒性T细胞的丰度更高,与抗程序性死亡受体-1(programmed cell death protein 1,PD-1)治疗响应性有关。结论细胞外基质刚度增加可促进CCL5合成,CCL5可通过增加肿瘤组织中细胞毒性T细胞浸润提升NSCLC的免疫治疗响应性。

SUV39H1通过表观遗传调控促进宫颈癌中CCL22-CCR4表达

目的 探索宫颈癌中C-C基序趋化因子配体22(CCL22)和CC趋化因子受体4(CCR4)的表观遗传调控机制及在宫颈癌发生中的作用。方法 收集宫颈癌组织标本16例,正常宫颈组织标本16例,RT-qPCR法和MS-PCR法分别检测宫颈癌及正常宫颈组织中CCL22和CCR4 mRNA表达水平及其基因启动子DNA甲基化水平。SiHa和HeLa细胞使用不同浓度的5-Aza(DNA甲基转移酶抑制剂,0,2.5,5μmol/L)处理后,RT-qPCR法检测细胞中CCL22和CCR4 mRNA水平。宫颈癌SiHa和HeLa细胞分别转染过表达组蛋白甲基转移酶SUV39H1的慢病毒表达载体及对照质粒,命名为SUV39H1-OE组和SUV39H1-NC组;并转染SUV39H1特异性siRNA和对照siRNA,命名为siSUV39H1组和siNC组。RT-qPCR法检测SiHa和HeLa细胞中CCL22和CCR4 mRNA表达改变,MS-PCR法检测CCL22和CCR4基因启动子甲基化程度,染色质免疫共沉淀法检测SUV39H1介导的H3K9me3在CCL22和CCR4基因启动子处的富集程度。结果 与正常宫颈组织相比,CCL22和CCR4 mRNA在宫颈癌组织中高表达(P<0.05),其编码基因启动子处呈低甲基化状态(P<0.05)。SiHa和HeLa细胞中CCL22和CCR4基因启动子处呈现部分甲基化状态,细胞经去甲基化处理后CCL22和CCR4 mRNA表达水平随浓度增加(P<0.05)。与SUV39H1-NC组相比,SUV39H1-OE组宫颈癌细胞中CCL22和CCR4 mRNA表达增加(P<0.05),基因启动子甲基化程度降低(P<0.05)。与siNC组相比,siSUV39H1组CCL22和CCR4 mRNA表达降低(P<0.05),基因启动子甲基化程度升高(P<0.05)。染色质免疫共沉淀结果显示,SiHa和HeLa细胞中CCL22-CCR4基因启动子区域均有H3K9me3富集(P<0.05)。结论 宫颈癌中SUV39H1-H3K9me3参与趋化因子CCL22及其受体CCR4的表观遗传调控。

川黄方抑制IL-17/p38 MAPK/CCL2炎症通路活化减轻三价砷诱导的急性肾损伤

目的:从IL-17/p38 MAPK/CCL2炎症通路探讨川黄方抑制临床剂量三价砷诱导的急性肾损伤(trivalent arsenic-induced acute kidney injury,AI-AKI)的作用机制。方法:24只成年雄性Wistar大鼠随机分为四组(n=6):对照组(CON)、三价砷组(AS)、三价砷+川黄方组(AS+CHF)和三价砷+N-乙酰半胱氨酸组(AS+NAC);川黄方和NAC预处理5 d后,每天腹腔注射10 mg/kg亚砷酸钠(NaAsO 2)连续10 d建立AI-AKI大鼠模型。检测大鼠血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平,HE染色观察肾脏病理形态改变,免疫蛋白印记法检测肾脏组织中IL-17、p38MAPK、p-p38MAPK、CCL2蛋白水平表达,免疫组化检测肾组织IL-17和CCL2的表达。结果:与CON组相比,AS组大鼠Scr和BUN显著升高(P<0.01),AS+CHF组和AS+NAC组的Scr和BUN水平较AS组下降(P<0.01);AS组大鼠肾小管上皮细胞空泡样变明显增加、炎性细胞浸润增加,而CHF和NAC的预处理均减轻了肾脏损伤,AS+CHF组空泡样变和炎性细胞浸润的程度较AS+NAC组轻;与CON相比,AS组IL-17、p-p38MAPK、CCL2蛋白表达升高(P<0.01);与AS组相比,AS+CHF组和AS+NAC组IL-17、p-p38MAPK、CCL2蛋白表达明显回落(P<0.01);IL-17和CCL2的免疫组化结果与免疫蛋白印记结果一致。结论:川黄方能减轻三价砷诱导的急性肾损伤,其机制是通过抑制IL-17/p38 MAPK/CCL2炎症通路活化、进而减轻其诱导的肾组织炎症反应。

血清CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平对NSCLC患者靶向治疗效果的预测价值

目的分析血清趋化因子配体20(CCL-20)、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、细胞角化素蛋白片段19(CYFRA21-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者靶向治疗效果的预测价值。方法选取进行靶向治疗的79例中晚期NSCLC患者,均持续治疗2月,评价患者近期疗效。收集患者一般临床资料,并于治疗前后分别检测患者血清趋化因子CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平,比较不同疗效患者间相关资料差异,分析影响疗效的因素,并利用ROC分析血清趋化因子CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平预测近期疗效的价值。结果79例中晚期NSCLC患者均完成2个月的靶向治疗,治疗总有效率为45.57%(36/79)。有效组共36例,无效组(SD+PD)共43例,2组年龄、性别、病理类型相较无差异(P>0.05);有效组TNMⅢB期、高分化占比高于无效组(P<0.05);有效组治疗前后血清CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平均低于无效组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,治疗前血清CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平为影响疗效的独立因素(OR=9.574,10.903,11.156,P<0.05)。ROC分析结果显示,治疗前血清CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平均具有预测临床疗效的价值(AUC=0.775,0.896,0.669,P<0.05)。结论中晚期NSCLC患者血清CCL-20、PDGF-BB、CYFRA21-1水平与靶向治疗效果有关,可作为靶向治疗近期疗效评估的辅助性指标。

miR-325-3p通过CCL19基因调控非小细胞肺癌脑部转移的发展

目的:探索非小细胞肺癌患者发生脑部转移的分子机制。方法:采用2个独立的分析数据来源(GEO公共数据库芯片和临床募集非小细胞肺癌患者样本)寻找最为显著的差异基因和差异miRNA。定量PCR方法检测差异基因在非小细胞肺癌脑部转移患者和无脑部转移患者中的差异性。利用非小细胞肺癌细胞系A549,检测靶点基因对于肺癌细胞增殖、分化、凋亡以及侵袭的影响,并进一步研究下游分子通路。结果:与非小细胞肺癌无脑部转移患者相比,非小细胞肺癌脑部转移患者呈现352个差异性表达基因,其中CCL19基因差异性最显著(低表达,P<0.01)。CCL19是miR-325-3p的主要候选靶标。CCL19在非小细胞肺癌脑部转移组患者肺部组织中存在低表达,而miR-325-3p存在高表达。荧光素酶实验可以证实miR-325-3p直接调控CCL19的表达活性。miR-325-3p抑制剂转染后,A549细胞的侵袭、增殖和集落形成有了显著的降低(P<0.05),而细胞凋亡水平有了明显的增加。同时转染CCL19 siRNA可以有效地降低miR-325-3p抑制剂对于非小细胞肺癌细胞的调节功能。研究表明,CCL19主要通过调节下游Erk的磷酸化水平影响肺癌细胞功能调控。结论:初步证实,miR-325-3p作为致癌基因,通过调控CCL19的功能,继而影响下游Erk分子信号,最终控制肺癌细胞的侵袭、增殖和集落形成。

五味子苷B调控miR-370-3p/CCL3轴对幼年肺炎小鼠免疫炎症因子水平的影响

目的:探讨五味子苷B(Sch B)在幼年肺炎小鼠的作用机制。方法:将90只幼年雄性小鼠随机分为对照组、模型组、Sch B低剂量组(Sch BL组)、Sch B高剂量组(Sch BH组)、Sch BH+antagomir-NC组、Sch BH+miR-370-3p antagomir组各15只。Sch BL组和Sch BH组小鼠分别灌胃20、60 mg/kg的Sch B;Sch BH+antagomir-NC组和Sch BH+miR-370-3p antagomir组,先将1 nmol的miR-370-3p antagomir、antagomir-NC用20μL的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解,在Sch B灌胃后将miR-370-3p antagomir、antagomir-NC质粒分别经尾静脉注射到小鼠体内;对照组和模型组给予等量生理盐水。每天1次,持续给药7 d。测定各组小鼠肺组织的湿干质量比;采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织的病理形态;检测各组小鼠肺组织中炎症因子水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群;实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肺组织中miR-370-3p和CCL3的mRNA水平;双荧光素酶实验验证miR-370-3p与CCL3的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组幼鼠肺组织结构紊乱,肺泡壁变厚,出现大量炎性细胞浸润,组织受损严重,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、CCL3 mRNA水平均升高,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,Sch BL组和Sch BH组幼鼠肺组织中肺泡壁变薄,炎性细胞浸润明显减少,损伤减轻,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、TNF-α、IL-6、CCL3 mRNA水平均降低,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均升高(P均<0.05)。加入miR-370-3p antagomir进行回补实验,结果显示Sch B对肺炎幼鼠免疫功能和炎症保护作用被逆转,且CCL3 mRNA水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证了miR-370-3p与CCL3存在靶向关系。结论:Sch B能够通过靶向调节miR-370-3p/CCL3轴来增强幼年肺炎小鼠免疫功能,并抑制炎症反应。

ZCCHC10通过激活P53促进急性髓系白血病细胞中CCL18基因的转录

肿瘤抑制因子P53是一种转录因子,可激活一系列靶基因的转录,从而调控细胞周期停滞、DNA修复、免疫、炎症和细胞凋亡等多种生理或病理过程。前期研究表明,CCHC型锌指蛋白10(zinc finger CCHC-type containing 10,ZCCHC10)通过激活P53在肺癌和急性髓系白血病中发挥抑癌作用。为进一步探讨ZCCHC10在急性髓系白血病中的作用机制,本文通过RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术对过表达ZCCHC10或空载体的ML2细胞进行了转录组分析,一共鉴定到1284个差异基因[|log2(fold change)|逸1,q值约0.05],包括778个上调基因和506个下调基因。其中,趋化因子CCL18在过表达ZCCHC10的ML2细胞中上调18倍。生物信息学分析显示,CCL18基因启动子上含有两个P53反应元件。生物素标记DNA亲和实验和染色质免疫共沉淀实验证实,P53可结合到CCL18基因启动子上。荧光素酶活性分析表明,P53可以增强CCL18基因启动子的活性。这些研究表明ZCCHC10通过激活P53促进CCL18基因的表达。

CCL内玻纤与树脂界面黏结间隙问题研究

在扫描电子显微镜(SEM)下观察覆铜板(CCL)及印制电路板(PCB)的切片,发现玻纤与树脂间存在微裂纹现象。在传统的认知中,对这种现象的解释是由于玻纤与树脂间浸润不良而导致微裂纹的产生,即黏结间隙问题。在SEM下观察切片,发现扫描对焦过程中原本结合良好的玻纤与树脂位置出现裂缝和变形现象。为了深入了解这一现象,设计了试验方案进行验证。通过试验,对玻纤与树脂界面黏结间隙现象进行模拟,筛选出其影响因素,给业界提供一些参考。