ZCCHC10通过激活P53促进急性髓系白血病细胞中CCL18基因的转录

肿瘤抑制因子P53是一种转录因子,可激活一系列靶基因的转录,从而调控细胞周期停滞、DNA修复、免疫、炎症和细胞凋亡等多种生理或病理过程。前期研究表明,CCHC型锌指蛋白10(zinc finger CCHC-type containing 10,ZCCHC10)通过激活P53在肺癌和急性髓系白血病中发挥抑癌作用。为进一步探讨ZCCHC10在急性髓系白血病中的作用机制,本文通过RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术对过表达ZCCHC10或空载体的ML2细胞进行了转录组分析,一共鉴定到1284个差异基因[|log2(fold change)|逸1,q值约0.05],包括778个上调基因和506个下调基因。其中,趋化因子CCL18在过表达ZCCHC10的ML2细胞中上调18倍。生物信息学分析显示,CCL18基因启动子上含有两个P53反应元件。生物素标记DNA亲和实验和染色质免疫共沉淀实验证实,P53可结合到CCL18基因启动子上。荧光素酶活性分析表明,P53可以增强CCL18基因启动子的活性。这些研究表明ZCCHC10通过激活P53促进CCL18基因的表达。

急性心肌梗死患者血清内脂素、Lp-a及CCL18水平与心功能和预后的关系

目的 分析急性心肌梗死(AMI)患者血清内脂素、脂蛋白(Lp-a)及趋化因子配体18(CCL18)水平与心功能和预后的关系。方法 选择AMI患者100例(急性心梗组),按心功能分级或预后分亚组;另选健康体检者70例(对照组)。比较各组血清内脂素、Lp-a及CCL18水平。采用Spearman相关性分析各指标与心功能分级的相关性,采用ROC分析内脂素、Lp-a及CCL18预测患者预后的效能。结果 AMI组内脂素、Lp-a及CCL18高于对照组;随心功能分级增加,内脂素、Lp-a及CCL18水平逐渐升高;预后不良组内脂素、Lp-a及CCL18高于预后良好组(P<0.05)。血清内脂素、Lp-a及CCL18与AMI患者心功能分级均呈正相关(P<0.05)。血清内脂素、Lp-a、CCL18三者联合预测AMI患者预后的效能最高(P<0.05)。结论 AMI患者血清内脂素、Lp-a、CCL18水平升高,与心功能密切相关,三者联合检测对预后有一定的预测价值。

CCL18在胶质母细胞瘤中的表达及其对U87MG细胞增殖和迁移的影响

目的探讨趋化因子配体18(CCL18)在胶质母细胞瘤(GBM)中的表达与GBM临床预后的关系以及对U87MG细胞增殖和迁移的影响。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)和基因型-组织表达(GTEx)数据库中GBM和正常脑组织数据,分析CCL18在GBM与正常脑组织中的表达差异,采用免疫组织化学染色进行验证。应用Kaplan-Meier生存分析、单因素和多因素Cox回归分析评估CCL18对GBM患者预后的影响。基于多因素Cox回归模型构建生存列线图,绘制校准曲线和受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。将人胶质母细胞瘤U87MG细胞分为siRNACCL18组、siRNA-NC组和Mock-siRNA组,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞中CCL18 mRNA表达,CCK-8法和细胞划痕愈合实验检测U87MG细胞的增殖和迁移能力。结果TCGA和GTEx数据库分析结果显示,GBM组织中CCL18基因表达水平高于正常脑组织;免疫组织化学染色结果显示,GBM组CCL18阳性表达率高于对照组(P<0.05)。CCL18高表达组患者预后较低表达组差(P<0.01)。Cox回归分析结果显示,IDH野生型和CCL18高表达是GBM患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。校准曲线显示列线图预测模型与实际生存有较好一致性,ROC曲线表明该模型对GBM患者生存概率有较好预测能力。siRNA-CCL18组CCL18 mRNA表达水平、细胞增殖(48 h、72 h和96 h)和迁移能力(24 h)均低于siRNA-NC组和Mock-siRNA组(P<0.05)。结论CCL18在GBM中表达上调,可促进GBM肿瘤细胞增殖和迁移,且可导致患者预后不良。

CCL18及其受体在女性恶性肿瘤中的研究现状

在女性恶性肿瘤发生发展过程中,趋化因子CCL18及其作用受体起到了非常重要的作用。在乳腺癌中,CCL18主要作用于PITPNM3受体激活下游信号通路NF-κB以及PI3K/Akt/GSK3β/Snail促进肿瘤转移。在宫颈癌、卵巢癌中CCL18相关基因呈现高表达,并可以作为诊断的生物标志物。CCL18还可以作用于子宫内膜癌的ERα受体促进子宫内膜癌细胞的上皮间充质转化。CCL18及其受体在女性恶性肿瘤进展中起至关重要作用,但是在子宫内膜癌、宫颈癌及卵巢癌中的具体作用受体及调控机制仍不明确,这有待后续的进一步研究。

AECOPD患者外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平与预后的关系探讨

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者外周血核转录因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)、白细胞介素34(interleukin-34,IL-34)、趋化因子配体18(chemokine ligand 18,CCL18)水平与预后的关系。方法选取AECOPD患者100例作为AECOPD组,慢性阻塞性肺疾病稳定期(stable chronic obstructive pulmonary disease,SCOPD)患者100例作为SCOPD组,另选取体检健康者100例作为对照组,检测所有受试者外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平。分析外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平对AECOPD患者住院期间死亡的预测价值。结果AECOPD组和SCOPD组外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平高于对照组,AECOPD组外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平高于SCOPD组(P<0.05)。外周血NF-κB、IL-34、CCL18高水平是AECOPD发生的危险因素(P<0.05);外周血NF-κB、IL-34、CCL18高水平患者AECOPD发生风险是低水平患者的4.165倍、4.012倍、4.027倍。住院期间死亡的AECOPD患者外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平及急性生理与慢性健康评估(acute physiology and chronic health evaluation,APACHE)Ⅱ评分均高于住院期间生存患者(P<0.05)。AECOPD患者外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平与APACHEⅡ评分呈正相关关系(P<0.05)。外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平联合预测AECOPD患者住院期间死亡的曲线下面积最大,为0.933。结论AECOPD患者外周血NF-κB、IL-34、CCL18水平明显升高,且其水平升高与患者病情程度及预后密切相关,临床检测NF-κB、IL-34、CCL18水平可有效预测AECOPD患者预后。

泛癌中 CCL18 的差异表达、预后及其与免疫细胞浸润的相关性分析

目的旨在通过多数据库的分析来揭示CCL18在33种癌症类型中的表达、预后及其与免疫细胞浸润的相关性。方法通过GTEx数据库、CCLE数据库、TCGA数据库综合分析CCL18在泛癌中的表达模式。单因素Cox回归用于分析CCL18在泛癌中的生存和预后。通过TIMER2.0数据库分析CCL18与免疫微环境的关系。分析了CCL18与免疫检查点基因表达谱、DNA错配修复基因(MMRs)和甲基转移酶编码基因的关系。Spearman用于分析CCL18表达水平与肿瘤突变负荷(TMB)和微卫星不稳定性(MSI)的关系。结果在本研究中,发现CCL18在大多数癌症中异常过表达。CCL18与肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤分期和免疫亚型等临床参数密切相关。单因素回归分析表明CCL18表达与患者在ACC、DLBC、LAML、UVM、CESC和LGG中的不良预后密切相关。在大多数癌症中,CCL18的表达与28种免疫细胞亚型、免疫相关通路、肿瘤微环境呈正相关。CCL18与主要组织相容性复合体、免疫激活剂、免疫抑制剂、趋化因子和趋化因子受体相关基因共表达。此外,CCL18与许多癌症中的肿瘤新抗原、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性以及免疫检查点、错配修复和DNA甲基化转移酶相关基因的表达显著有关。GSEA分析表明CCL18表达显著富集了大多数肿瘤中的几种癌症相关通路和免疫相关通路。结论CCL18可能是确定癌症预后和免疫浸润的潜在分子生物标志物。

siRNA沉默CCL18的表达抑制卵巢上皮癌SKOV3细胞的侵袭和迁移

目的:探讨体外沉默CCL18基因的表达对卵巢上皮癌SKOV3细胞侵袭和迁移的影响。方法:化学合成3对靶向CCL18的siRNA(CCL18-siRNA61、CCL18-siRNA127、CCL18-siRNA224),体外转染至CCL18阳性的SKOV3细胞,RT-PCR检测SKOV3细胞中CCL18 mRNA的表达,选取其中干扰效率最好的序列,构建靶向CCL18的干扰质粒pSilencer4.1-CCL18-siRNA61。pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染SKOV3细胞后,MTT法测定SKOV3细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的细胞周期,采用Transwell法、Migration法以及Fibronectin黏附法分别测定细胞的体外侵袭、迁移、黏附能力。结果:3对靶向CCL18的siRNA中CCL18-siRNA61干扰效果最好,进而成功构建靶向CCL18的pSilencer4.1-CCL18-siRNA61干扰质粒,pSi-lencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染可显著下调SKOV3细胞中CCL18 mRNA的表达。pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染不影响SKOV3细胞的增殖,但pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染组SKOV3细胞中(S+G2+M)期细胞比例明显低于对照质粒pSilencer4.1-Ctrl-siRNA转染组[(19.71±4.4)%vs(26.45±7.91)%,P<0.05];且与pSilencer4.1-Ctrl-siRNA质粒转染相比,pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染可有效抑制SKOV3细胞的侵袭、迁移和黏附能力[(9.91±3.41)%vs(23.75±6.81)%,(16.80±8.71)%vs(31.74±11.23)%,(6.73±4.33)%vs(17.53±6.54)%;均P<0.05]。结论:siRNA沉默CCL18的表达可抑制卵巢上皮癌细胞株SKOV3的侵袭、迁移和黏附能力。

PLK1、CCL18在原发性肝癌中的表达及其与临床病理的关系

目的探讨Polo样激酶（Polo-like kinase 1,PLK1）、趋化因子配体18（Chemokine CC motif ligand18,CCL18）在原发性肝癌组织中的表达情况,分析PLK1、CCL18表达与肝癌患者临床病理特征的关系。方法 2009年2月~2010年12月于该院接受手术治疗的原发性肝癌患者60例,取肿瘤边缘处非坏死组织制作离体标本,采用免疫组化技术观察PLK1、CCL18的表达情况。结果 PLK1基因蛋白表达与癌栓、包膜是否完整、BCLC分期、Edmondson分级有关（P〈0.01）;病灶转移、肝硬化有关与CCL18基因蛋白表达有关（P〈0.05）;PLK1阳性表达与CCL18表达呈正相关（P〈0.05）。结论 PLK1、CCL18与肝癌病理特征密切相关,能够作为诊断、治疗的重要指标。

CCL18检测在儿童过敏性疾病中的临床价值

目的探索趋化因子CCL18在儿童过敏性疾病发生、发展过程中的作用。方法利用ELISA法对诊断为过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性眼结膜炎的患儿和同期健康体检学生的血清CCL18水平进行检测,并在临床治疗6个月后重新复检该指标。结合临床相关检查资料,对检测结果采用SPSS18.0统计软件进行分析,采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性眼结膜炎3组患儿的CCL18水平与健康对照组相比较,均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);轻、中度和重症患儿两组比较,重症患儿组CCL18水平升高的幅度明显高于轻、中度患儿组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗6个月后,3组患儿的CCL18水平较治疗前均有明显的下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CCL18水平与患儿病情的严重程度明显相关,治疗后明显下降,提示CCL18的检测在过敏性患儿的病情诊断、病情严重程度的评估和治疗效果的监测过程中有着重要的临床价值。

乳腺癌细胞表面受体与CCL18结合促进肿瘤迁移的实验

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源的CCL18对乳腺癌迁移影响,为抑制乳腺癌迁移提供实验基础。方法用免疫荧光的方法检测CCL18与乳腺癌细胞表面受体结合及细胞骨架的变化;用迁移实验检测CCL18对乳腺癌迁移的作用。结果 CCL18与乳腺癌细胞表面受体结合,引起细胞骨架聚集;CCL18促进乳腺癌迁移。结论 CCL18通过其受体引起细胞骨架的聚集,促进乳腺癌细胞迁移。

CCL18通过N-Ras/c-myc/lin28下调乳腺癌细胞miR98的表达

目的探讨CCL18是否参与了乳腺癌miRNAs的表达调控。方法采用miRNAs芯片筛查CCL18处理前后乳腺癌细胞miRNAs的表达差异,QRT-PCR和Luciferase Reporter Assay对芯片结果进行验证。瞬时转染法分别改变乳腺癌细胞miR98和c-myc的表达,应用QRT-PCR和Western blot检测c-myc和lin28 mRNA和蛋白的表达。结果 miRNAs芯片结果显示CCL18处理后乳腺癌细胞共20种miRNAs发生变化,QRT-PCR和Luciferase Reporter Assay证实CCL18下调乳腺癌细胞miR98的表达。CCL18可上调乳腺癌细胞c-myc和lin28mRNA和蛋白的表达,转染c-myc siRNAs可逆转CCL18调控lin28和miR98表达的功能。CCL18通过miR98转录后调控乳腺癌细胞N-Ras蛋白的表达。结论CCL18通过N-Ras/c-myc/lin28通路下调miR98,下调的miR98通过转录后调控增加N-Ras蛋白的表达,从而进一步激活c-myc/lin28通路,维持miR98的持续降低,形成了一个正反馈环路。

CCL18通过促进整合素的聚集增强乳腺癌细胞黏附于细胞外基质

背景与目的:在乳腺癌微环境中,肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)分泌CCL18,CCL18与病人的预后呈负相关。本文旨在探讨来源于TAMs的CCL18是否能促进乳腺癌细胞黏附于细胞外基质(extracellular matrix,ECM),进一步阐明CCL18促进乳腺癌细胞黏附于ECM的分子机制。方法:在无血清培养体系中,用纤粘连蛋白包被培养板,用黏附实验的方法检测CCL18对乳腺癌SK-3rd细胞黏附于ECM的作用;用免疫荧光的方法检测CCL18对SK-3rd细胞表面整合素的影响。结果:CCL18通过引起乳腺癌SK-3rd细胞表面整合素的聚集,导致乳腺癌SK-3rd细胞黏附于ECM的数量明显增多。结论:CCL18通过促进整合素聚集而促进乳腺癌细胞黏附于ECM。

乳腺癌患者血浆中CCL18的表达水平及其意义

目的探讨乳腺癌患者血浆中CCL18的表达水平及意义。方法收集广州医学院第一附属医院就诊乳腺肿瘤患者108例,均为女性。病理确诊的良性乳腺病20例,乳腺癌88例,乳腺癌组43例接受了新辅助化疗,均收集新辅助化疗前、后的血液标本,其余入组病例均收集初始干预前血液标本,另取36例健康女性体检者血液标本做为健康对照组。以酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血浆中CCL18表达水平。结果乳腺癌组比健康对照组血浆中CCL18的表达水平明显升高,(P<0.05),乳腺癌组比良性乳腺病组血浆中CCL18表达水平明显升高(P<0.05)。血浆中CCL18表达水平与乳腺癌的雌激素受体(ER)存在负相关关系(P=0.018)。新辅助化疗效果达到临床缓解的患者化疗前后血浆中CCL18表达水平无明显变化(P=0.431),新辅助化疗效果未达到临床缓解的乳癌患者在化疗前后血浆中CCL18表达水平无明显变化(P=0.336)。结论 CCL18是乳腺癌的生物学标志物,其表达水平与乳腺癌的雌激素受体的表达相关,但尚不能作为乳腺癌化疗敏感度独立的预测指标。

CCL18-PITPNM3配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及分子机制研究

目的探讨CCL18-PITPNM3(CC chemokine ligand 18-phosphatidylinositol transfer protein 3,CCL18-PITPNM3)配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及其分子机制。方法采用人重组蛋白CCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,siRNA下调PITPNM3的表达,通过CCK-8(cell counting kit-8)、平板克隆实验、流式周期检测生长增殖能力的变化,划痕愈合实验、Transwell侵袭小室实验检测体外迁移侵袭能力的改变,qRT-PCR、Western blot检测EMT分子标志物的表达情况。结果①rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞后,细胞划痕愈合率增加,穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞明显增多,rhCCL18处理siRNA下调PITPNM3的Tu686、6-10B细胞,下调组细胞的迁移和侵袭能力较亲本细胞处理组明显减弱;②rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,mRNA水平E-cadherin表达降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin表达升高;蛋白质水平E-cadherin表达降低,Vimentin表达升高。下调两株细胞的PITPNM3表达后rhCCL18再次处理,E-cadherin下调和Vimentin、N-cadherin、Fibronectin上调均未显示出亲本细胞的明显趋势;③rhCCL18处理和下调PITPNM3对Tu686、6-10B 6组细胞的生存率、增殖及细胞周期无明显变化。结论CCL18-PITPNM3配体受体轴可促进头颈鳞状细胞癌的体外侵袭转移能力,可能与EMT转化相关。

肿瘤趋化因子CCL18与前列腺癌临床相关性分析

目的:检测CCL18在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法:通过实时荧光定量PCR检测CCL18基因在前列腺癌、前列腺增生组织中mRNA的表达情况,用免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生标本中CCL18蛋白的表达情况。分析CCL18基因的表达水平与临床病理特征的关系。结果:前列腺癌患者组织中CCL18 mRNA显著上调,CCL18蛋白表达与前列腺癌分化程度有正相关的变化趋势,CCL18蛋白表达上调肿瘤发生发展、临床Gleason评分相关(P<0.05)。结论:CCL18蛋白表达与前列腺癌分化程度呈正相关趋势,检测CCL18蛋白表达水平可协助判断前列腺癌分化程度并评估预后。

CCL18通过整合素聚集促进乳腺癌SK-3^(rd)细胞浸润和迁移

目的探讨整合素在CCL18促进乳腺癌SK-3rd细胞浸润和迁移过程中的作用,以阐明CCL18促进乳腺癌细胞浸润和迁移的分子机制。方法用流式细胞检测技术检测CCL18作用下乳腺癌SK-3rd细胞表面整合素的聚集;采用Western blot检测黏着斑激酶(FAK)的激活;用浸润迁移实验检测乳腺癌SK-3rd细胞的浸润迁移。用siRNA转染检测沉默SK-3rd细胞整合素β1的表达。结果 CCL18促进乳腺癌SK-3rd细胞表面整合素的聚集;从而促进整合素介导的FAK磷酸化激活。在CCL18作用下,乳腺癌SK-3rd细胞浸润和迁移的细胞数增多10倍(P<0.01);用siRNA转染检测沉默SK-3rd细胞整合素β1的表达,可以使CCL18作用下的SK-3rd细胞浸润和迁移数量明显减少。结论 CCL18通过整合素聚集可促进乳腺癌细胞浸润和迁移。

IL-4激活的巨噬细胞通过分泌CCL18促进Hela细胞侵袭和迁移

【目的】研究IL-4激活的巨噬细胞对宫颈癌Hela细胞的侵袭、转移作用及其机制。【方法】细胞形态观察、流式细胞术及ELISA检测巨噬细胞的激活状态。Transwell法观察Hela细胞的侵袭转移能力。Western blot检测NF-κB信号蛋白的激活状况及转移相关基因的表达。【结果】(1)IL-4激活的巨噬细胞表现为免疫抑制的M2型表型;(2)IL-4激活的巨噬细胞显著促进Hela细胞的侵袭、迁移,而未激活的巨噬细胞没有这种能力(P<0.001);(3)IL-4激活的巨噬细胞上清中加入CCL18中和抗体而不是同型Ig G对照能削弱M2型巨噬细胞的作用(P<0.001);(4)IL-4激活的巨噬细胞上清能促进共培养肿瘤细胞中NF-κB信号蛋白的激活和vimentin的表达;(5)直接应用CCL18也可以促进Hela细胞的侵袭转移,NF-κB信号蛋白的激活和vimentin的表达。【结论】IL-4激活的巨噬细胞可以促进宫颈癌细胞的侵袭转移,其作用机制为释放CCL18作用于肿瘤细胞的NF-κB通路,进而促进转移相关基因的表达。

CCL18介导肿瘤微环境趋化因子网络导致卵巢癌不良预后的研究

目的分析血清CC趋化因子配体18(CC-chemokine ligand 18,CCL18)与卵巢癌预后的关系及其对卵巢癌微环境中其他趋化因子及受体的调控作用,探讨CCL18促进肿瘤生长和转移的可能机制。方法采用流式荧光微球法检测320例卵巢癌患者、150例盆腔良性肿块患者及100名正常对照女性血清样本中CCL18的表达,分析基因表达谱(Gene Expression Omnibus,GEO)以及癌症基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中CCL18基因表达与卵巢癌患者预后的关系。采用过表达CCL18的卵巢上皮癌细胞SKOV3-GFP-CCL18建立裸鼠皮下移植瘤模型,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测移植瘤内其他趋化因子及受体的表达。结果卵巢癌患者血清中CCL18的表达水平显著高于盆腔良性肿块患者和正常对照女性[(238.04±93.59)ng/mL vs(94.36±59.17)ng/mL,P<0.001;(238.04±93.59)ng/mL vs(31.68±26.10) ng/mL,P<0.001],且高表达CCL18的卵巢癌患者中位无疾病进展生存期较低表达者短(15.0个月vs18.2个月,HR=1.25,95%CI:1.08～1.44,P=0.003)。CCL18激活卵巢癌微环境的XCL1-XCR1、XCL2-XCR1、CCL2-CCR2、CCL11-CCR3、CCL17-CCR4、CXCL9-CXCR3、CXCL11-CXCR3、CXCL12-CXCR4趋化因子-受体轴表达,抑制了CXCL1-CXCR2、CXCL6-CXCR2、CXCL8-CXCR2、CCL5-CCR1、CCL5-CCR5、CCL27-CCR10、CCL28-CCR10趋化因子-受体轴的表达。结论 CCL18促进卵巢癌细胞转移可能与激活转移趋化因子-受体XCL1-XCR1、XCL2-XCR1、CCL2-CCR2、CCL17-CCR4表达和下调CCL5-CCR5、CCL27-CCR10和CCL28-CCR10表达有关,其可能造成卵巢癌患者不良预后。

CCL18通过ANXA2促进肺腺癌的侵袭

背景与目的 ANXA2在癌症进展中起着非常重要的作用,趋化因子18(chemokine ligand 18, CCL18)与肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)的侵袭、迁移、转移及预后不良有关。本研究旨在探究CCL18是否通过ANXA2促进LUAD侵袭以及其在LUAD侵袭中的作用和分子机制。方法 Western blot检测LUAD组织与癌周正常组织中ANXA2表达量,并检测转染效率及ANXA2作为上游调节剂在AKT/cofilin信号通路中的作用。细胞趋化实验、Transwell侵袭实验等实验探讨ANXA2对LUAD的作用机理。F-actin聚合实验和Western blot检测转染Si RNA的A549细胞侵袭是否与F-actin相关。结果与相邻非肿瘤组织相比,癌组织中A NX A2的蛋白表达水平升高(P<0.05)。敲低A NX A2组的LUA D细胞中CCL18诱导的趋化运动能力和侵袭能力下降(P<0.05)。与对照组相比,敲低ANXA2的LUAD细胞的F-actin聚合明显降低,而敲低ANXA2的LUAD细胞中AKT在Ser473和Thr308位点的磷酸化和cofilin、LIMK的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论敲低ANXA2可以通过降低AKT及下游通路磷酸化,进而降低CCL18对LUAD细胞的侵袭性的影响。

黄芪甲苷抑制U937巨噬细胞CCL18表达及其作用机制研究

目的研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)抑制组织细胞淋巴瘤细胞U937,刺激巨噬细胞分泌肿瘤促进因子CCL18表达及其作用机制。方法考察黄芪甲苷对白细胞介素4(IL-4)刺激巨噬细胞CCL18表达的影响;实时PCR检测CCL18mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附检测(Elisa)法测定CCL18蛋白水平;流式细胞仪检测白细胞介素4受体(IL-4R)的表达水平;Elisa法检测信号传导及转录激活因子6(STAT6)磷酸化水平;采用Z″-LYTETM激酶检测法检测Janus激酶(JAK)活性。结果黄芪甲苷能显著抑制IL-4诱导的U937巨噬细胞CCL18表达上调,且呈明显的量效依赖性,但对IL-4受体组成亚基表达影响不显著;黄芪甲苷可抑制STAT6的磷酸化,但作用小于AS1517499;黄芪甲苷可抑制JAK1,JAK3和酪氨酸激酶2(TYK2)的活性。结论黄芪甲苷可抑制IL-4刺激的U937巨噬细胞CCL18的表达。其作用途径之一可能是通过抑制JAK激酶活性,引起STAT6的转录活性下调,从而抑制CCL18基因表达。