METTL3介导的CCNE1 m^(6)A修饰调控乳腺癌细胞对哌柏西利敏感性的研究

目的:探讨RNA甲基转移酶METTL3介导的m^(6)A修饰对乳腺癌细胞哌柏西利敏感性的影响及作用机制。方法:将乳腺癌细胞MCF-7随机分为:si-NC组,si-METTL3组,si-CCNE1组,si-METTL3+OE-NC组和si-METTL3+OE-CCNE1组;qPCR和Western blot检测METTL3和CCNE1的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8检测哌柏西利敏感性;RIP实验检测METTL3和CCNE1 mRNA的相互作用;MeRIP-qPCR检测CCNE1的m^(6)A修饰水平;加入放线菌素D检测CCNE1 mRNA稳定性。结果:在MCF-7细胞中,METTL3和CCNE1的mRNA水平显著升高(P<0.05);抑制METTL3或抑制CCNE1的表达显著提高MCF-7细胞对哌柏西利的敏感性(P<0.05),且抑制METTL3显著降低CCNE1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);RIP实验证实METTL3和CCNE1 mRNA具有相互作用,且CCNE1发生了m^(6)A修饰;与si-NC组相比,si-METTL3组中CCNE1的m^(6)A修饰水平显著减少,CCNE1 mRNA稳定性显著降低;进一步实验表明,与si-METTL3+OE-NC组相比,si-METTL3+OE-CCNE1组中哌柏西利敏感性显著降低(P<0.05)。结论:在MCF-7细胞中,METTL3和CCNE1表达均上调;抑制METTL3能够提高MCF-7细胞对哌柏西利的敏感性,这与METTL3介导的m^(6)A修饰调控CCNE1 mRNA稳定性有关。

miRNA-138-5p通过靶向调控CCNE1抑制黑色素瘤细胞增殖

目的研究miRNA-138-5p在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其发挥作用的机制。方法 MTT法检测miRNA-138-5p转染后黑色素瘤细胞的增殖;Realtime PCR检测miRNA-138-5p转染后其靶基因CCNE1 mRNA水平的变化;Western blot检测miRNA-138-5p转染后CCNE1蛋白水平的变化;Luciferase Repor ter试验检测miRNA-138-5p对CCNE13'非翻译区(3'UTR)及其突变的影响;MTT法检测共转染miRNA-138-5p和CCNE1对黑色素瘤细胞增殖的影响。结果过表达miRNA-138-5p可抑制黑色素瘤细胞的增殖。CCNE1是miRNA-138-5p的一个功能性靶基因,转染miRNA-138-5p可以降低细胞中CCNE1的mRNA和蛋白水平。共转染miRNA-138-5p和CCNE1可以部分消除miRNA-138-5p对黑色素瘤细胞增殖的影响。结论 miRNA-138-5p通过其靶基因CCNE1在黑色素瘤细胞的增殖中发挥了重要的作用,miRNA-138-5p在黑色素瘤细胞中可能作为一个关键的药物靶点。

CCNE1基因表达状态在卵巢癌中的预后价值

目的:探讨CCNE1基因表达状态对卵巢癌总生存结果的影响及预后价值。方法:利用The Kaplan Meier plotter数据库中的卵巢癌患者生存资料及CCNE1基因表达资料,分析不同CCNE1基因表达状态下卵巢癌的总生存差异,探索CCNE1基因表达的预后价值。结果:共检出1 656例卵巢癌患者用于最终的生存分析,根据CCNE1基因表达状态,分为低表达组(1 171例)和高表达组(485例),低表达组卵巢癌中位总生存时间为48.0个月,高表达组为37.4个月,差异有统计学意义(P=0.001),风险比HR=1.26,95%CI(1.10,1.44)。结论:CCNE1基因高表达降低卵巢癌总生存,是不良预后因子。

SENP1调控CCNE1参与结肠癌的增殖、侵袭和成瘤能力

目的 探讨SENP1/CCNE1在结肠癌发生发展中的作用。方法 选取2018年6月至2019年6月新疆医科大学第五附属医院收治的32例结肠癌患者,采用RT-qPCR和Western blot检测患者结肠癌组织和相应癌旁组织中SENP1和CCNE1的表达。首先使用Pearson相关系数法分析SENP1和CCNE1 mRNA的表达相关性,通过Kaplan-Meier法分析SENP1表达与结肠癌患者总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的关系。进一步采用RT-qPCR和Western blot方法检测正常肠道细胞HIEC和结肠癌细胞SW480中SENP1的表达,将SW480细胞分为sh-NC组和sh-SENP1组,观察沉默SENP1对SW480细胞中CCNE1蛋白表达水平的影响,分别采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell检测沉默SENP1对SW480细胞细胞增殖能力、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。最后将裸鼠随机分为sh-NC组和sh-SENP1组,每组6只,观察结肠癌细胞体内成瘤能力。结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织中SENP1和CCNE1 mRNA以及蛋白均呈高表达(P<0.05),且SENP1与CCNE1的表达呈正相关(r=0.401 7,P=0.022 7)。与正常肠道细胞HIEC相比,结肠癌细胞SW480中SENP1 mRNA和蛋白呈高表达(P<0.01)。SENP1高表达组患者OS和DFS均明显低于SENP1低表达组(χ^(2)=11.272,P=0.001;χ^(2)=5.575,P=0.018)。与sh-NC组相比,sh-SENP1组细胞中CCNE1的表达降低(t=19.282,P<0.01),并且细胞周期停滞(t=9.520,P<0.01),细胞增殖缓慢(t=13.499,P<0.05),细胞侵袭能力降低(t=15.839,P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示,沉默SENP1后成瘤能力降低。结论 SENP1通过促进CCNE1的表达,促进结肠癌细胞增殖和细胞周期进展及体内成瘤能力,最终促进结肠癌的发生。

miR-497-5p靶向调控CCNE1基因抑制胰腺癌细胞增殖

目的明确miR-497-5p在胰腺癌(PaCa)中的表达及临床意义,并探究其对PaCa细胞增殖的影响及机制。方法实时荧光定量PCR实验检测miR-497-5p的表达,卡方检验和Kaplan-Meier生存法分析miR-497-5p的表达与临床病理特征及预后的关系;CCK-8实验和流式细胞术检测过表达miR-497-5p对Capan-2和PANC-1细胞增殖和周期的影响,Spearman相关性检验分析miR-497-5p表达与G1/S特异性细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)mRNA表达的关系;双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-497-5p对CCNE1表达的调控作用。结果miR-497-5p在癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001),T3+T4期患者癌组织中miR-497-5p的表达显著低于T1+T2期癌组织(P<0.001);低表达miR-497-5p与较高的T分期相关(P=0.003);低表达miR-497-5p的患者5年总体生存率显著低于高表达者(P=0.036)。与对照组相比,miR-497-5p过表达组细胞增殖显著降低,G0/G1期比例增加,S期比例减少。CCNE1 mRNA在癌组织的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.001),且与miR-497-5p表达呈负相关(P<0.001)。miR-497-5p可直接与CCNE1 mRNA 3’-UTR互补结合从而抑制CCNE1蛋白的表达。结论miR-497-5p在PaCa中低表达,且与较高的T分期及不良预后相关;过表达miR-497-5p通过靶向调控CCNE1基因诱导细胞周期阻滞进而抑制PaCa细胞增殖。

lncRNA CYTOR靶向调控miR-503/CCNE1信号轴促进上皮性卵巢癌细胞增殖

目的:探讨细胞骨架调节剂(lncRNA cytoskeleton regulator,CYTOR)是否通过靶向调控miR-503来促进细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)影响上皮性卵巢癌增殖。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CYTOR在不同临床分期、病理分级和有无淋巴结转移患者人上皮性卵巢癌组织、癌旁组织和正常组织以及不同卵巢癌细胞中的表达;starBase数据库(网址:http://starbase.sysu.edu.cn/)预测分析CYTOR和miR-503以及miR-503与CCNE1之间的关系,同时荧光素酶实验进行验证;RT-qPCR和免疫荧光分别检测miR-503与CCNE1在人上皮性卵巢癌组织、癌旁组织和正常组织以及不同卵巢癌细胞中的表达;RNA转染技术在A2780中细胞分别沉默CYTOR、过表达miR-503和沉默CCNE1表达,CCK-8检测各组细胞增殖能力变化;RT-qPCR和免疫荧光检测沉默CYTOR后miR-503和CCNE1的表达以及过表达miR-503后CCNE1的表达。结果:CYTOR和CCNE1在上皮性卵巢癌组织中表达增加,同时在临床分期III-IV期、病理分级G_(3)级、淋巴结转移阳性患者肿瘤组织中表达同样显著增加且导致卵巢癌患者术后预后较差;通过数据库分析CYTOR可直接靶向抑制miR-503,而miR-503可直接靶向抑制CCNE1表达,双荧光素酶实验结果与之相同;CYTOR和CCNE1促进上皮性卵巢癌增殖,而miR-503抑制上皮性卵巢癌增殖作用。结论:lncRNA CYTOR通过调控miR-503/CCNE1轴促进上皮性卵巢癌的增殖。

卵巢高级别浆液性癌驱动基因相关的临床病理研究进展

卵巢高级别浆液性癌(high grade serous ovarian carcinoma,HGSOC)具有多种遗传学变异:TP53突变在HGSOC中广泛存在,是HGSOC发生的基础;BRCA1/2突变影响同源重组修复;CCNE1扩增和RB1突变或失活导致细胞周期不受控;PTEN和NF1突变或失活引起细胞增殖相关信号通路等持续激活;MYC扩增促进基因转录;错配修复基因突变或失活致DNA修复错误累积。不同基因异常的HGSOC患者在预后和靶向药物选择上存在差异:BRCA1/2突变、RB1突变/失活和错配修复缺陷患者预后较好;CCNE1扩增、PTEN表达缺失、NF1突变/失活和MYC扩增患者预后相对较差。BRCA1/2突变者对PARP抑制剂反应较好;错配修复缺陷患者可受益于免疫检查点抑制剂;其余基因变异尚无明确有效临床靶向药物。该文对HGSOC中不同基因变异特点进行综述,帮助构建HGSOC遗传学变异框架,为靶向药物选择、改善患者预后提供理论依据。

CCNE1在高级别浆液性卵巢癌中的表达及临床意义

目的 探究细胞周期蛋白E1(CCNE1)在高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)中的表达及临床意义。方法 通过免疫组织化学的方法检测CCNE1在2015年1月至2019年1月期间本院收集的168例高级别浆液性卵巢癌患者的组织及32例正常卵巢组织中的表达情况。分析CCNE1的表达与高级别浆液性卵巢癌患者总生存期之间的关系。结果CCNE1蛋白在高级别浆液性卵巢癌组织及正常卵巢组织中阳性表达率分别为23.8%(40/168)及3.1%(1/32);CCNE1在高级别浆液性卵巢癌组织中阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);CCNE1高表达的患者中位总生存期为35.5个月,低表达患者中位总生存期为49个月,两者具有显著统计学意义(P<0.0001)。结论 CCNE1的高表达降低了高级别浆液性卵巢癌患者的总生存期。CCNE1是高级别浆液性卵巢癌的一个不良预后因子。

miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的研究miR-497在宫颈癌HeLa细胞中对细胞周期蛋白E1(CCNE1)的靶向作用及其对HeLa细胞增殖的影响。方法构建pre-miR-497、CCNE1野生型(WT-CCNE1)和突变型(MT-CCNE1)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证pre-miR-497载体的有效性,采用MTT法检测miR-497对HeLa细胞增殖的影响,采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR和Western blot法验证miR-497对CCNE1的靶向关系。结果测序结果提示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-497、pmirGLO-CCNE1野生型和突变型表达载体构建成功,qRT-PCR证明转染pre-miR-497的HeLa细胞miR-497的表达显著升高。MTT法结果显示转染pre-miR-497的HeLa细胞增殖活性显著低于阴性对照miR组(P<0.05)。此外,双萤光素酶法检测共转染pre-miR-497和WT-CCNE1的HeLa细胞,其萤光素酶活性显著低于对照组(P<0.01),qRT-PCR及Western blot法也分别证实转染pre-miR-497的HeLa细胞其CCNE1的mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论 miR-497能够通过靶向CCNE1调控宫颈癌HeLa细胞的增殖活性。

榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用

目的观察榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株。采用MTT法测定榄香烯对SK-N-SH细胞的抑制率,应用实时qPCR和Western blotting法测定榄香烯对SK-N-SH细胞中神经元限制性沉默因子(REST)的调控作用,并进一步用实时qPCR检测SK-N-SH细胞中细胞周期相关基因CCND1和CCNE1的表达。结果榄香烯对SK-N-SH细胞的增殖有明显的抑制作用(P=0.001 16),并呈时间和浓度依赖性;榄香烯下调REST mRNA(P=0.000 38)和蛋白表达(P=0.003 39),并且抑制细胞周期相关基因CCND1 mRNA表达(P=0.001 91)和CCNE1 mRNA表达(P=0.000 15)。结论榄香烯对神经母细胞瘤的增殖有抑制作用,并且抑制其REST和细胞周期相关基因CCND1和CCNE1的表达。

miR-103在牛骨骼肌卫星细胞中的分化调节作用

为了阐明miR-103对牛骨骼肌卫星细胞的分化调节作用,试验将miR-103的过表达载体和miR-103抑制剂分别转染到分离培养的卫星细胞中,利用EDU功能检测试验、Real-time PCR和免疫荧光试验来分析miR-103对卫星细胞增殖和分化的调控作用,并用Western-blot和实时定量PCR检测miR-103对靶基因CCNE1的蛋白和mRNA水平表达情况的影响。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,miR-103能促进卫星细胞的分化并抑制细胞的增殖。说明miR-103是牛骨骼肌卫星细胞分化的一种重要的调控因子。

细胞周期蛋白E1基因在卵巢癌诊治中的作用

肿瘤细胞中基因拷贝数变异可影响细胞稳态,导致细胞恶变。细胞周期蛋白E1基因(CCNE1)编码细胞周期蛋白E1(Cyclin E1),CCNE1扩增或过表达改变Cyclin E1的表达,并影响其他基因的表达,参与多种恶性肿瘤的发生、发展。CCNE1扩增或过表达与卵巢癌的发生、耐药、靶向治疗及预后密切相关。该文综述CCNE1表达在卵巢癌诊治中的作用,以期有助于探寻新的卵巢癌治疗方法。

过表达miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制肺癌A549细胞的上皮间质转化

目的:探讨过表达miR-497靶向细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)对肺癌A549细胞上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的影响。方法:常规培养人肺癌A549细胞,细胞实验分为正常组(不加干预)、对照组(转染miR-497 mimics-NC)、实验组(转染miR-497 mimics)。采用Transwell小室实验、免疫荧光染色、qPCR、Western blotting法分别检测各组细胞迁移和侵袭能力、蛋白间质标志物α-SMA和上皮标志物E-cadherin的表达、miR-497和CCNE1的表达水平,荧光素酶基因基因报告实验验证miR-497和CCNE1的靶向关系。结果:与对照组和正常组相比,实验组A549细胞迁移和侵袭的数量明显减少(均P<0.05),细胞的间质标志物α-SMA的绿色荧光强度明显减弱[(36.95±5.81)vs(98.69±2.36)、(97.94±2.63),均P<0.05],上皮标志物E-cadherin的绿色荧光强度明显增强[(388.41±10.93)vs(100.95±6.37)、(102.55±3.18),均P<0.05],miR-497的表达明显升高(均P<0.05),CCNE1的表达均明显下降(均P<0.05)。miR-497能够靶向调控CCNE1的表达。结论:在肺癌A549细胞中miR-497能够靶向调控CCNE1的表达,上调miR-497的表达后能明显抑制A549细胞迁移和侵袭能力,影响EMT相关蛋白的表达。

MiR-15b促进急性早幼粒细胞白血病细胞分化并抑制增殖

该文探讨了miR-15b在全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)过程中发挥的作用。采用实时荧光定量PCR检测miR-15b的表达;流式细胞术检测细胞的分化情况;CCK-8实验检测细胞增殖;双荧光素酶报告实验检测miR-15b与CCNE1 3′UTR端的结合能力;Western blot检测下游靶基因CCNE1的表达。结果显示,ATRA促进miR-15b的表达;过表达miR-15b增强了ATRA对APL细胞的分化作用,而抑制miR-15b表达后则出现相反结果;miR-15b抑制了APL细胞的增殖能力;双荧光素酶报告实验显示miR-15b与CCNE1的3′UTR端结合;Western blot显示mi R-15b可以抑制下游靶基因CCNE1的表达。这些结果表明, miR-15b通过抑制CCNE1的表达促进APL细胞分化,抑制细胞增殖。

miR-107靶向细胞周期蛋白E1对人非小细胞肺癌A549细胞功能的影响研究

目的探讨miR-107对非小细胞肺癌A549细胞功能的影响及可能的靶基因。方法实验分为脂质体+miR-107模拟物过表达组(OV-miR-107组)、脂质体+miR-107抑制模拟物下调组(KD-miR-107组)和脂质体+阴性对照模拟物组(NC组),siRNA的细胞转染分别为siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞实验检测细胞周期,双荧光素酶报告基因实验检测miR-107下游靶基因,实时定量逆转录PCR和Western blot分别检测下游靶基因mRNA和蛋白表达。结果miR-107呈时间和剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖(P<0.05);miR-107阻滞更多A549细胞停留在G0G1期,而S期和G2M期占比下降(P<0.05);miR-107结合于细胞周期蛋白E1(CCNE1)的3′-UTR区域246~253bp位点,并降低CCNE1mRNA和蛋白表达(P<0.05);A549细胞中下调CCNE1后,siRNA-2抑制细胞增殖(P<0.05)并阻滞细胞停留在G0G1期(P<0.05)。结论 miR-107靶向调节CCNE1抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖和调控细胞周期。