双特异性CAR-T细胞对EGFRvⅢ^(+)/CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤

目的:制备双特异性CAR-T(bs CAR-T)细胞,观察其对表达表皮生长因子Ⅲ型突变阳性(EGFRvⅢ^(+),简称vⅢ^(+))和CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤作用。方法:基于前期研制的vⅢ/CD133双特异性微抗体和二代CAR构建的双特异性CAR(bs CAR),制备慢病毒载体转染人外周血T细胞,FCM和WB法检测bs CAR转染效率和表达水平。bs CAR-T细胞和vⅢ^(+)/CD133^(+)U87胶质瘤干细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、IFN-γ分泌实验检测其特异性杀伤作用和对IFN-γ分泌的促进作用。制备裸鼠vⅢ^(+)/CD133^(+)U87干细胞移植瘤模型检测bs CAR-T细胞对移植瘤生长的抑制作用。结果:vⅢsc Fv和CD133sc Fv通过重叠PCR无缝连接入二代CAR表达框(S-vⅢscFv/CD133scFv-Hinge-TM-CD137-CD3ζ)中,然后克隆入p CDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP载体的Eco RⅠ和Bam HⅠ位点(pbs CAR)。3种质粒(p VSV-G、p CMV-d R8.9和pbs CAR)共转染HEK293T细胞制备慢病毒载体,转染外周血T细胞,FCM检测bs CAR表达率为71.1%,WB法结果显示bs CAR表达正确。bs CAR-T细胞和vⅢ^(+)/CD133^(+)U87干细胞共培养检测结果显示,bs CAR-T细胞对胶质瘤干细胞具有特异性杀伤作用,与效靶比呈正比;IFN-γ分泌量为(2350.6±92)pg·m L^(-1),明显高于对照组(P<0.01)。裸鼠移植瘤动物模型显示,bs CAR-T细胞在体内具有明显的移植瘤抑制作用(P<0.01)。结论:bs CAR-T细胞能够特异性靶向杀伤vⅢ^(+)/CD133^(+)胶质瘤干细胞,实验结果为促进实体瘤的细胞免疫治疗提供了实验依据。

人脐血CD133^+细胞体外短期培养中生物学特性的变化

为了解脐血CD133+细胞的生物学特性及其在体外短期扩增培养中的变化 ,探讨其体外扩增的可行性 ,初步观察了脐血CD133+细胞的免疫表型、细胞周期、端粒酶活性以及粘附分子的表达等生物学特性及其在体外扩增中的动态变化并与CD34+细胞进行比较。结果显示 ,新鲜脐血CD133+和CD34+细胞的含量分别为 ( 1.0 5±0 73) %和 ( 1.4 0± 0 .5 6 ) % ,CD34+细胞中 79.6 2 %为CD133+CD34+细胞 ,而CD133+细胞中 97%以上为CD133+CD34+细胞。短期扩增培养结果显示 ,CD133+细胞组扩增第 10天 ,CD133+,CD133+CD34+和CD34+CD38-细胞以及第 6天的CFU mix ,HPP CFC和CD34+CD38-细胞的扩增倍数要高于CD34+细胞组 ( P <0 .0 5 ) ;扩增中 ,CD133+CD34+细胞的比例逐渐下降 ,而CD133-CD34+和CD133-CD34-细胞的比例则逐渐上升。新鲜脐血CD133+和CD34+细胞的端粒酶活性较低 ,但高于CD34-细胞。扩增 1周后 ,端粒酶活性明显上调 ,15天以后又逐渐下降 ;90 %以上脐血CD133+细胞表达CD11a ,CD4 9d和CD5 4 ,约 5 0 %表达CD6 2L。扩增早期 ,CD4 9d表达上调 ,CD11a表达无明显变化 ,而CD5 4和CD6 2L则有下调趋势 ,随着扩增时间的延长 ,各种粘附分子的表达均有不同程度的下调。在整个扩增过程中 ,大部分CD34+细胞仍然表达CD11a,CD4 9d和CD5 4?

CD133^+胶质瘤干细胞化疗耐受机制分析

目的:探讨ABC超家族转运体蛋白在CD133+胶质瘤干细胞多药耐药性中的作用机制。方法:选取30例人脑胶质瘤标本,利用免疫磁珠法分选标本中的CD133+胶质瘤干细胞(悬浮细胞)和CD133-肿瘤细胞(黏附细胞),并进行分选细胞的体外扩增培养、传代与鉴定,应用免疫组化和RT-PCR法分别检测细胞中MDR1和MRP1的蛋白及其活性表达情况。结果:3例胶质母细胞瘤来源的CD133+细胞能在含血清培养基中形成肿瘤干细胞球,并进行1～3次传代;MDR1与MRP1耐药蛋白在CD133+细胞中高度表达,阳性细胞比例范围分别为18%～67%和23%～73%;MDR1与MRP1在CD133+细胞中的表达活性分别为在CD133-细胞中的16.1倍和19.6倍;多药耐药蛋白的阳性细胞比例和其表达活性与肿瘤的恶性程度呈正相关,而表达阳性率与肿瘤的病理级别无关;MDR1与MRP1在CD133+细胞中的表达有明显的相关性。结论:神经上皮肿瘤中仅有小部分细胞亚型(CD133+胶质瘤干细胞)具有内在耐药性(天然耐药性),而ABC超家族转运体蛋白MDR1与MRP1在CD133+胶质瘤干细胞中的共同过度表达是胶质瘤多药耐药的主要原因之一;CD133+细胞是胶质瘤化疗的关键性治疗标靶。

胃肠安及四藤方对人结肠癌细胞株干细胞CD133^+的影响

目的观察胃肠安和四藤方对结肠癌细胞株HCT-116、SW480、HT-29及其干细胞CD133^+的抑制作用。方法人结肠癌细胞株(HCT-116、SW480、HT-29)随机分为对照组和不同浓度胃肠安(500 mg/L和1 000mg/L)、四藤方(100 mg/L和200 mg/L)干预组,干预24 h后,CCK-8法测定细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析胃肠安和四藤方对HCT-116、SW480、HT-29中CD133^+表达的影响。结果 CCK-8法检测结果显示,胃肠安及四藤方干预HCT-116、SW480、HT-29细胞后,细胞活力均下降且呈剂量依赖性;倒置显微镜观察发现:胃肠安及四藤方干预24 h,HCT-116、SW480、HT-29的细胞数量减少,细胞体积缩小,遮光性差,细胞悬浮、脱落而死亡。流式细胞术分析结果显示:对照组HCT-116、SW480、HT-29中CD133^+细胞的比例分别为12.52%、10.98%、2.33%;胃肠安方1 000 mg/L干预24 h后,CD133^+细胞比例分别下降为7.49%、5.36%、0.11%;四藤方组200 mg/L干预24 h后,CD133^+细胞比例分别下降为7.83%、6.45%、0.18%。结论不同结肠癌细胞株中CD133^+细胞比例有差异。胃肠安及四藤方均具有抑制结肠癌细胞株HCT-116、SW480、HT-29增殖的作用;但在同样的干预时间内,较高浓度胃肠安(1 000 mg/L)及四藤方(200 mg/L)才具有抑制3种细胞株干细胞CD133^+表达的作用。

骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133^+细胞体外扩增作用的研究

为了探讨胚胎骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)中CD133+细胞的体外扩增作用,将新鲜脐血(CB)中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天。实验分为4组:C组为空白对照组,不含基质细胞和细胞因子;S组为单用基质细胞组;F组为单用细胞因子组;SF组为联合使用基质细胞和细胞因子组。在第0,6,10及14天检测有核细胞总数、CD133+细胞数及集落形成单位(CFU)数。结果表明:各时间点SF组有核细胞总数的扩增倍数均高于其它组;除了第14天外,SF组在第6、10天时CD133+细胞数、CFU数的扩增倍数均高于其它组。结论:胚胎骨髓基质细胞对延缓造血细胞的分化具有重要的作用,基质细胞联合细胞因子可以有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133+细胞,这是一种比较接近于临床移植要求的造血细胞体外扩增方法。

人胎盘CD133^＋细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性

目的通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC)。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析。结果培养28d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC。

人胎盘CD133^+细胞具有LTC-IC集落启动细胞特性

本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期培养体系中,以检测测试细胞中长期培养启动细胞(LTC-IC)的发生率及其增殖分化能力。结果表明:人胎盘CD133+细胞群中含有LTC-IC,其发生率为1/645;LTC-IC具有增殖分化为粒-单集落形成单位(CFU-GM)和混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;在所有LTC-IC阳性孔中,产生CFU-GM的孔占总阳性孔的71.4%,产生CFU-GM和CFU-Mix的孔占总阳性孔的28.6%。结论:人胎盘组织CD133+细胞群中存在LTC-IC,并具有造血早期祖细胞集落形成能力。

基因芯片筛选CD133^+/CD133^-肺腺癌细胞中新的耐药基因

背景与目的肿瘤干细胞可能是肿瘤多药耐药的主要原因,CD133是目前较为公认的肿瘤干细胞标记物。本研究旨在应用功能分类基因芯片筛选CD133+和CD133-肺腺癌细胞中差异表达的肿瘤耐药基因,寻求新的肺癌耐药相关基因。方法免疫磁珠分选法分选A549细胞,采用功能分类基因芯片筛选CD133+和CD133-肺腺癌细胞中差异表达的肿瘤耐药基因,并使用RT-qPCR验证。顺铂半数有效抑制浓度(half inhibiting concentration,IC50)、阿霉素IC50作用A549细胞48 h后,RT-qPCR检测肿瘤耐药基因CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、GSK3α、PPARα和PPARβ/δ的表达变化。结果共筛查出31个差异表达的肿瘤耐药基因,与CD133-细胞相比,CD133+细胞有30个基因表达上调,1个基因表达下调。RT-qPCR结果与芯片一致。A549细胞经1.97μg/mL顺铂或0.61μg/mL阿霉素作用48 h后,CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、GSK3α、PPARα和PPARβ/δ等肿瘤耐药基因表达上调。结论利用功能分类基因芯片筛选出31个可能与CD133+肺腺癌细胞耐药相关的基因,其中CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、GSK3α、PPARα和PPARβ/δ为新发现的肺癌耐药相关基因。

喉癌Hep-2细胞CD44^+CD133^+生物学特性研究

目的分选培养和鉴定人喉癌Hep-2细胞珠,并研究其体外生物学特性。方法通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法,分选培养和鉴定CD44^+CD133^+喉癌干细胞,应用免疫磁珠分选技术分选CD44^+CD133^+、CD44^+CD133^-、CD44^-CD133^+、CD44^-CD133^-4种亚群,对4种细胞绘制生长曲线,应用流式细胞仪检测其阳性率,应用侵袭实验、黏附实验和克隆形成实验评价其侵袭能力、黏附能力和克隆形成能力,用CCK8法检测其耐药性。结果对Hep-2、CD44^+CD133^+亚群、CD44^+CD133^-亚群、CD44^-CD133^+亚群、CD44^-CD133^-亚群5种细胞进行生物学特性研究,CD44^+CD133^+细胞亚群的增殖、侵袭、黏附、克隆形成能力及耐药性均增强,CD44^+CD133^+>CD44^-CD133^+>Hep-2>CD44^+CD133^->CD44^-CD133^-。结论免疫磁珠技术是分选CD44^+CD133^+的有效方法,CD44^+CD133^+细胞亚群具有明显的肿瘤干细胞特征,有望为喉癌细胞高表达标志物做一些新的探索。

HepG2细胞系CD133^+细胞对多柔比星的抗性及其机制

目的:探讨Hep G2中CD133^+细胞对多柔比星(doxorubicin,DOX)的抗性及其作用机制。方法:通过磁珠分选实验对Hep G2细胞中CD133^+细胞进行分选,流式细胞术检测CD133^+细胞阳性率,MTT法检测CD133^+细胞对DOX诱导凋亡的抗性,免疫荧光实验检测DOX处理各组细胞后P65激活转运情况,q RT-PCR检测各组细胞乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)m RNA表达水平;Western blotting检测CD133^+细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:磁珠分选可以高效地富集Hep G2细胞中CD133^+细胞。与CD133-细胞相比,CD133^+细胞对DOX具有更强的抗性(P<0.05);与CD133-细胞、Hep G2细胞相比,CD133^+细胞中P65激活速度与表达水平明显提高(均P<0.05);CD133^+细胞中BCRP m RNA表达水平明显高于CD133-细胞和Hep G2细胞(均P<0.05);与Hep G2、CD133-组相比,CD133^+细胞组Bax和p53蛋白表达水平显著减少、Bcl-2和Survivin蛋白表达量显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:Hep G2细胞中CD133^+细胞亚群对DOX高耐药性的分子机制在于高表达存活相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Survivin以及耐药性转运蛋白BCRP,而低表达促凋亡相关蛋白p53、Bax。

肿瘤细胞与CD_(133)^+细胞数检测对恶性胸腔积液患者病情与治疗效果的预测价值

目的:研究肿瘤细胞与CD_(133)^+细胞数对恶性胸腔积液患者病情与治疗效果的预测价值。方法:选取伴有恶性胸腔积液的患者58例,所有患者均在我院进行了CT检查,所有患者在治疗前收集胸腔积液进行肿瘤细胞计数操作,研究细胞个数与恶性胸腔积液患者临床病理特征及治疗效果预测方面的关系。结果:肿瘤细胞数在不同性别、不同年龄段以及肺癌的病理类型之间没有显著差异,肿瘤细胞数在不同转移范围中差异有统计学意义(P<0.05)。CD_(133)^+细胞数在不同性别、不同年龄段以及肺癌的病理类型之间没有显著差异,肿瘤细胞数在不同转移范围中差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤细胞数和CD_(133)^+细胞数少的患者临床疗效明显优于细胞数多的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胸腔积液中的肿瘤细胞和CD_(133)^+细胞数可以较为准确的反映恶性胸腔积液患者病情,同时它们可能是晚期肺癌的有效预测因子。

人脐带血中CD133^+细胞的分布情况以及与CD34的共表达

目的:了解CD133^+细胞在脐带血中的分布情况以及与CD34共表达的情况,为今后脐带血移植提供基础理论依据。方法:采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法联合应用分离脐带血单个核细胞。采用流式细胞技术检测单个核细胞中的CD34^+/CD133^+百分率。结果:单个核细胞中CD133^+百分比为0.17%±0.08%,在CD34^+细胞中同时表达CD133的百分比为78.49%±7.53%。结论:CD133在人脐带血中主要表达与CD34^+细胞亚群上,且CD133^+细胞在单个核细胞中所占的比例较CD34^+细胞低。

脐血CD133^＋细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

本研究探讨脐血CD133+(UCB-CD133+)细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统(MACS)分选UCB-CD133+细胞,将纯化的UCB-CD133+细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞,在培养第7、10和14天进行细胞计数,流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化,并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位(CFU-MK)培养。结果表明:培养至第7天时,UCB-CD133+细胞扩增效果最佳,扩增了8.2±2.2倍;培养至第14天,细胞总数扩增了116倍;培养至10天时,平均1个CD133+细胞所产生的CD133+CD41+和CD34+CD41+细胞数最多,分别为2.5±0.9和2.6±0.5个,所产生的CD41+细胞为20.3±5.9个;扩增前后的UCB-CD133+细胞均能形成CFU-MK,扩增第10天的UCB-CD133+细胞所形成的CFU-MK总数最多,CFU-MK扩增倍数为59.5±11.8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示,扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态,未见血小板形成。结论:UCB-CD133+细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力,培养第10天扩增效能最佳。

磁珠细胞分选CD 133^+/CD 44^+前列腺癌干细胞的初步鉴定

目的:通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133+/CD44+干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光(immunofluorescence,IF)表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和Western blot检测诱导分化前后前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phos-phatase,PAP)蛋白情况。结果:FCM检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33±0.05)%和(0.87±0.06)%,而MACS分选后PAP分别为(84.82±0.07)%和(99.91±0.03)%;IF检测CD133+/CD44+细胞培养后继续呈阳性表达;CD133+/CD44+细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0,P=0.008)以及高于诱导后的CD133+/CD44+细胞(t=40.1,P=0.001);CD133+/CD44+细胞经过转化生长因子-β诱导后IHC和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133+/CD44+细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133+/CD44+细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。

CD_(133)^+、TLR2和TLR4表达水平对老年陈旧性心肌梗死患者细胞心肌成形术早期预后的影响

目的探讨循环CD133+、Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达水平对老年陈旧性心肌梗死患者细胞心肌成形术早期预后的影响。方法采用流式细胞仪检测经皮冠状动脉介入治疗(PCI)+支架植入术患者和PCI+支架植入术+人脐带造血干细胞(hUCM-SCs)移植术患者循环CD133+、TLR2和TLR4的表达水平与心肌梗死面积和左心室射血分数(LVEF)的关系。评估CD133+、TLR2和TLR4对细胞心肌成形术早期预后的影响。结果 PCI+支架植入术后8周CD133+(0.05±0.02)%、TLR2(5.9±2.2)荧光强度(MFI),TLR4(3.7±1.8)MFI;PCI+支架植入术+hUCM-SCs移植后8周CD133+(0.07±0.01)%,TLR2(3.6±0.3)MFI,TLR4(2.2±1.3)MFI。2组患者治疗8周后CD133+、TLR2和TLR4水平比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论 CD133+、TLR2和TLR4表达水平可能影响老年陈旧性心肌梗死患者细胞心肌成形术的早期预后。

CD133^+脐血干细胞对大肠癌SW480细胞生长、黏附及迁移的影响

背景与目的:转移是恶性肿瘤的最重要的生物学特性,是临床上癌症患者死亡的最主要原因,近年实验显示CD133+造血干细胞对鼠源性肿瘤细胞株具有促转移作用,但在人癌实验层次未见报道。本实验旨在体外探讨CD133+脐血干细胞对人大肠癌细胞株SW480增殖、迁移及黏附的影响。方法:采用密度梯度离心及免疫磁珠分选法分离并培养人CD133+脐血干细胞,将CD133+脐血干细胞与SW480共同趋化培养,用MTT法检测肿瘤细胞的增殖及黏附能力,用Transwell小室法检测肿瘤细胞的迁移能力。结果:CD133+人脐血干细胞能显著促进SW480细胞的生长(P<0.05),能促进肿瘤细胞的形态学改变,即肿瘤细胞的核深染,异型明显,细胞呈多角形,能显著促进SW480细胞的黏附及迁移能力(实验组A490为0.11±0.01,对照组A490为0.05±0.01,P<0.05)。结论:CD133+脐血干细胞可显著促进大肠癌细胞的增殖及侵袭能力,宿主造血干细胞可能对肿瘤转移形成具有重要影响。

CD133^+细胞在乳腺良恶性病变中的分布特点及其临床病理意义

目的:研究CD133^+细胞在乳腺普通型增生、乳腺不典型增生、乳腺原位癌、浸润性乳腺癌中的分布特点及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法对45例正常乳腺组织、41例普通型增生乳腺组织、39例不典型增生乳腺组织、51例乳腺原位癌组织、121例乳腺癌组织中CD133^+的表达进行检测,分析CD133^+细胞在乳腺良恶性病变中的分布特点。结果:CD133^+在正常乳腺组织中不表达,在乳腺普通型增生、不典型增生、原位癌、浸润性癌的表达率逐渐增高,分别为31.7%(13/41)、48.7%(19/39)、64.7%(33/51)、74.4%(90/121),有显著性差异(P<0.01)。CD133^+的表达率随乳腺癌组织学分级[Ⅰ级63.6%(21/33)、Ⅱ级72.2%(26/36)、Ⅲ级82.7%(43/52),P<0.05]和TNM分期[Ⅰ期57.1%(12/21)、Ⅱ期69.4%(34/49)、Ⅲ期68.7%(11/16)、Ⅳ期94.3%(33/35),P<0.001]的增高而增高;有淋巴结转移或远处转移者分别高于无转移者、无远处转移者(P<0.05);有复发者高于无复发者(P<0.05);与患者年龄、月经状态、肿瘤的组织学类型、肿瘤大小、ER、PR、Her-2的表达无显著相关(P>0.05)。结论:CD133^+细胞可能在乳腺增生与癌变过程中起重要作用;CD133^+的乳腺癌细胞与乳腺癌的侵袭、转移和复发密切相关,CD133^+是提示乳腺癌恶性程度和预后的指标之一。

雷帕霉素对人骨肉瘤CD133^(+)U2OS细胞增殖和干性维持的影响

目的探讨雷帕霉素对人骨肉瘤CD133^(+)U2OS细胞增殖和干性维持的影响。方法(1)自U2OS细胞中分离CD133^(+)U2OS细胞,分为预对照组、低剂量雷帕霉素组和高剂量雷帕霉素组,分别加入含0 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL雷帕霉素进行培养。干预24 h、48 h、72 h后检测各组细胞的增殖抑制情况,然后选择适宜的干预剂量和时间进行后续试验。(2)将CD133^(+)U2OS细胞分为对照组和雷帕霉素组,分别使用不含雷帕霉素的培养基、含雷帕霉素的培养基培养。干预48 h后检测两组细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR及干性标志蛋白[SRY盒转录因子2(Sox2)、八聚体结合转录因子4(Oct4)]的相对表达量。结果(1)与预对照组相比,低剂量雷帕霉素组和高剂量雷帕霉素组细胞的增殖均受到抑制,且随着干预时间的延长和剂量的增加细胞增殖抑制率有增高的趋势(均P<0.05)。故在后续实验选择100 ng/mL雷帕霉素干预48 h。(2)雷帕霉素组mTOR、磷酸化mTOR、Sox2、Oct4的相对表达量均较对照组降低(均P<0.05)。结论雷帕霉素能够抑制人骨肉瘤CD133^(+)U2OS细胞的增殖和干性维持,这可能与其降低mTOR信号通路活性有关。

骨髓间充质干细胞与CD133^(+)肾脏细胞治疗急性肾损伤的机制研究

目的:研究骨髓间充质干细胞(MSC)与分化抗原簇蛋白133(CD133)+肾脏细胞治疗急性肾损伤的机制。方法:选取6~8周龄雄性C57 BL/6的48只小鼠作为实验对象,根据不同的治疗方案将48只小鼠分为正常对照组、缺血再灌注损伤(I/R)组、I/R+MSCs组及I/R+CD133^(+)组4组,每组12只。比较各组小鼠术后不同时间点血清尿素氮(BUN)与肌酐(Cr)水平、ATN评分、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素⁃10(IL⁃10)、肝细胞生长因子(HGF)及骨形态发生蛋白⁃7(BMP⁃7)水平。结果:I/R+MSCs组、I/R+CD133^(+)组术后BUN、Cr水平、ATN评分、TNF⁃α水平均显著高于正常对照组;术后4、7 d的BUN、Cr水平、ATN评分、TNF⁃α水平均低于I/R组,其中I/R+MSCs组以术后8 d最为显著(P<0.05);I/R+CD133^(+)组以术后4 d最为显著(P<0.05)。I/R+MSCs组、I/R+CD133^(+)组术后IL⁃10、HGF、BMP⁃7水平均低于正常对照组,高于I/R组(P<0.05)。与I/R+MSCs组比较,I/R+CD133^(+)组术后BUN、Cr水平,ATN评分及TNF⁃α水平较低,IL⁃10、HGF、BMP⁃7水平较高。结论:骨髓MSCs、CD133^(+)肾脏细胞均可通过内分泌方式调控细胞因子,促进由I/R诱导的AKI恢复,但CD133^(+)肾脏细胞对AKI的修复作用更为显著。

肿瘤干细胞标志物CD133和内皮素转化酶对非小细胞肺癌预后的影响

目的研究肿瘤干细胞标志物CD133和内皮素转化酶(ECE)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达的临床意义。方法用免疫组织化学方法检测77例NSCLC组织中CD133和ECE的表达,分析其与肿瘤大小、组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后的关系。结果77例NSCLC组织中CD133与ECE的阳性表达率分别为51.9%(40/77)和45.5%(35/77)。CD133和ECE的表达与淋巴结转移呈正相关(r=0.246,P<0.05;r=0.339,P<0.05);CD133和ECE的表达均与患者术后生存时间呈负相关(P<0.05)。CD133和ECE的表达与肿瘤大小、组织学类型和组织分化程度均无关(P>0.05)。CD133与ECE的表达之间呈正相关(r=0.249,P<0.05)。结论肿瘤干细胞标志物CD133和ECE的表达与NSCLC的淋巴转移和预后密切相关,它们的高表达提示患者预后不良。