人胎盘CD133^＋细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性

目的通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC)。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析。结果培养28d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC。

脐血CD133^＋细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

本研究探讨脐血CD133+(UCB-CD133+)细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统(MACS)分选UCB-CD133+细胞,将纯化的UCB-CD133+细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞,在培养第7、10和14天进行细胞计数,流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化,并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位(CFU-MK)培养。结果表明:培养至第7天时,UCB-CD133+细胞扩增效果最佳,扩增了8.2±2.2倍;培养至第14天,细胞总数扩增了116倍;培养至10天时,平均1个CD133+细胞所产生的CD133+CD41+和CD34+CD41+细胞数最多,分别为2.5±0.9和2.6±0.5个,所产生的CD41+细胞为20.3±5.9个;扩增前后的UCB-CD133+细胞均能形成CFU-MK,扩增第10天的UCB-CD133+细胞所形成的CFU-MK总数最多,CFU-MK扩增倍数为59.5±11.8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示,扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态,未见血小板形成。结论:UCB-CD133+细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力,培养第10天扩增效能最佳。

CD133在肿瘤免疫逃逸及诊断的研究进展

肿瘤干细胞(CSCs)是在肿瘤中发现的与正常干细胞一样具有自我更新特性的细胞。近年随着科学研究的不断发展,人们对肿瘤的研究不断加深,CSCs已被定义为促进肿瘤发展的关键因素,参与推动肿瘤复发、转移、化疗、耐药性等。CD133已成为热门的CSCs标志物之一,可在多种CSCs中高表达,且与肿瘤诊断的联系密不可分,可在胃癌、肺癌、脑肿瘤、肝癌、卵巢癌以及结直肠癌中发挥重要诊断及药物研究靶点作用。本文主要介绍CD133的结构、功能、免疫机制逃逸及其介导的肿瘤信号通路,并总结其与各类肿瘤的相关性。

槐耳颗粒通过抑制Bmi-1与CD133表达减少三阴性乳腺癌全身转移的研究

目的研究在不同给药方式下槐耳颗粒对三阴性乳腺癌细胞的作用效果,及槐耳颗粒是否可以影响Bmi-1进而调节肿瘤细胞CD133表达以发挥抑制肿瘤细胞转移的作用。方法选择40只3~4周龄雌性裸鼠随机分成四组,预防组、预防及治疗组、治疗组分别于建模前3周、建模前及建模后3周、建模后3周口服给予槐耳清膏溶液,对照组不给予药物治疗;建模方式采用左心室注射的方法建立三阴性乳腺癌全身转移模型,建模后六周观察期后统一处死裸鼠并取标本;通过Kaplan-Meier法分析裸鼠生存时间,免疫组化法检测裸鼠转移灶内CD133及Bmi-1的表达,组间比较采用方差分析。结果预防及治疗组裸鼠的生存时间最长(MST=42d),其次为治疗组(MST=39d),再次为预防组(MST=38 d),对照组裸鼠的生存时间最短(MST=32d);预防及治疗组的Bmi-1平均表达最低,对照组的Bmi-1平均表达最高,不同给药方式与Bmi-1的表达之间存在显著性差异(P<0.05);预防及治疗组的CD133平均表达最低,对照组的CD133平均表达最高,不同给药方式与CD133的表达之间存在显著性差异(P<0.05)。结论槐耳颗粒对三阴性乳腺癌全身转移具有预防及治疗作用;槐耳颗粒可能通过激活Bmi-1凋亡基因从而减少了三阴性乳腺癌干细胞CD133的比例,进而发挥了预防及治疗三阴性乳腺癌全身转移的作用。

双特异性CAR-T细胞对EGFRvⅢ^(+)/CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤

目的:制备双特异性CAR-T(bs CAR-T)细胞,观察其对表达表皮生长因子Ⅲ型突变阳性(EGFRvⅢ^(+),简称vⅢ^(+))和CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤作用。方法:基于前期研制的vⅢ/CD133双特异性微抗体和二代CAR构建的双特异性CAR(bs CAR),制备慢病毒载体转染人外周血T细胞,FCM和WB法检测bs CAR转染效率和表达水平。bs CAR-T细胞和vⅢ^(+)/CD133^(+)U87胶质瘤干细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、IFN-γ分泌实验检测其特异性杀伤作用和对IFN-γ分泌的促进作用。制备裸鼠vⅢ^(+)/CD133^(+)U87干细胞移植瘤模型检测bs CAR-T细胞对移植瘤生长的抑制作用。结果:vⅢsc Fv和CD133sc Fv通过重叠PCR无缝连接入二代CAR表达框(S-vⅢscFv/CD133scFv-Hinge-TM-CD137-CD3ζ)中,然后克隆入p CDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP载体的Eco RⅠ和Bam HⅠ位点(pbs CAR)。3种质粒(p VSV-G、p CMV-d R8.9和pbs CAR)共转染HEK293T细胞制备慢病毒载体,转染外周血T细胞,FCM检测bs CAR表达率为71.1%,WB法结果显示bs CAR表达正确。bs CAR-T细胞和vⅢ^(+)/CD133^(+)U87干细胞共培养检测结果显示,bs CAR-T细胞对胶质瘤干细胞具有特异性杀伤作用,与效靶比呈正比;IFN-γ分泌量为(2350.6±92)pg·m L^(-1),明显高于对照组(P<0.01)。裸鼠移植瘤动物模型显示,bs CAR-T细胞在体内具有明显的移植瘤抑制作用(P<0.01)。结论:bs CAR-T细胞能够特异性靶向杀伤vⅢ^(+)/CD133^(+)胶质瘤干细胞,实验结果为促进实体瘤的细胞免疫治疗提供了实验依据。

CD133^(+)结肠癌细胞区域变异位点在结肠癌免疫逃逸中的作用研究

目的分析探讨CD133^(+)结肠癌细胞3-UTR区域rs2240688变异位点在结肠癌免疫逃逸中的作用。方法检测CD133^(+)结肠癌细胞3-UTR区域rs2240688位点单核苷酸多态性,并分别检测不同基因型CD133^(+)结肠癌细胞侵袭迁移能力以及NK-92细胞对不同基因型CD133^(+)结肠癌细胞的细胞毒力。结果基因型为G/G的CD133^(+)结肠癌细胞侵袭迁移能力最强,而基因型为T/T的CD133^(+)结肠癌细胞侵袭迁移能力最弱(P均<0.05);NK-92细胞对基因型为G/G的CD133^(+)结肠癌细胞的细胞毒力最弱,而对基因型为T/T的CD133^(+)结肠癌细胞的细胞毒力最强(P均<0.05)。结论CD133^(+)结肠癌细胞3-UTR区域单核苷酸多态性位点基因多态性能够参与机体的免疫逃逸,对CD133^(+)肿瘤干细胞进行深入研究,有望成为结直肠癌临床治疗的新靶点。

人脐血CD133^+细胞体外短期培养中生物学特性的变化

为了解脐血CD133+细胞的生物学特性及其在体外短期扩增培养中的变化 ,探讨其体外扩增的可行性 ,初步观察了脐血CD133+细胞的免疫表型、细胞周期、端粒酶活性以及粘附分子的表达等生物学特性及其在体外扩增中的动态变化并与CD34+细胞进行比较。结果显示 ,新鲜脐血CD133+和CD34+细胞的含量分别为 ( 1.0 5±0 73) %和 ( 1.4 0± 0 .5 6 ) % ,CD34+细胞中 79.6 2 %为CD133+CD34+细胞 ,而CD133+细胞中 97%以上为CD133+CD34+细胞。短期扩增培养结果显示 ,CD133+细胞组扩增第 10天 ,CD133+,CD133+CD34+和CD34+CD38-细胞以及第 6天的CFU mix ,HPP CFC和CD34+CD38-细胞的扩增倍数要高于CD34+细胞组 ( P <0 .0 5 ) ;扩增中 ,CD133+CD34+细胞的比例逐渐下降 ,而CD133-CD34+和CD133-CD34-细胞的比例则逐渐上升。新鲜脐血CD133+和CD34+细胞的端粒酶活性较低 ,但高于CD34-细胞。扩增 1周后 ,端粒酶活性明显上调 ,15天以后又逐渐下降 ;90 %以上脐血CD133+细胞表达CD11a ,CD4 9d和CD5 4 ,约 5 0 %表达CD6 2L。扩增早期 ,CD4 9d表达上调 ,CD11a表达无明显变化 ,而CD5 4和CD6 2L则有下调趋势 ,随着扩增时间的延长 ,各种粘附分子的表达均有不同程度的下调。在整个扩增过程中 ,大部分CD34+细胞仍然表达CD11a,CD4 9d和CD5 4?

胃肠安及四藤方对人结肠癌细胞株干细胞CD133^+的影响

目的观察胃肠安和四藤方对结肠癌细胞株HCT-116、SW480、HT-29及其干细胞CD133^+的抑制作用。方法人结肠癌细胞株(HCT-116、SW480、HT-29)随机分为对照组和不同浓度胃肠安(500 mg/L和1 000mg/L)、四藤方(100 mg/L和200 mg/L)干预组,干预24 h后,CCK-8法测定细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析胃肠安和四藤方对HCT-116、SW480、HT-29中CD133^+表达的影响。结果 CCK-8法检测结果显示,胃肠安及四藤方干预HCT-116、SW480、HT-29细胞后,细胞活力均下降且呈剂量依赖性;倒置显微镜观察发现:胃肠安及四藤方干预24 h,HCT-116、SW480、HT-29的细胞数量减少,细胞体积缩小,遮光性差,细胞悬浮、脱落而死亡。流式细胞术分析结果显示:对照组HCT-116、SW480、HT-29中CD133^+细胞的比例分别为12.52%、10.98%、2.33%;胃肠安方1 000 mg/L干预24 h后,CD133^+细胞比例分别下降为7.49%、5.36%、0.11%;四藤方组200 mg/L干预24 h后,CD133^+细胞比例分别下降为7.83%、6.45%、0.18%。结论不同结肠癌细胞株中CD133^+细胞比例有差异。胃肠安及四藤方均具有抑制结肠癌细胞株HCT-116、SW480、HT-29增殖的作用;但在同样的干预时间内,较高浓度胃肠安(1 000 mg/L)及四藤方(200 mg/L)才具有抑制3种细胞株干细胞CD133^+表达的作用。

骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133^+细胞体外扩增作用的研究

为了探讨胚胎骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)中CD133+细胞的体外扩增作用,将新鲜脐血(CB)中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天。实验分为4组:C组为空白对照组,不含基质细胞和细胞因子;S组为单用基质细胞组;F组为单用细胞因子组;SF组为联合使用基质细胞和细胞因子组。在第0,6,10及14天检测有核细胞总数、CD133+细胞数及集落形成单位(CFU)数。结果表明:各时间点SF组有核细胞总数的扩增倍数均高于其它组;除了第14天外,SF组在第6、10天时CD133+细胞数、CFU数的扩增倍数均高于其它组。结论:胚胎骨髓基质细胞对延缓造血细胞的分化具有重要的作用,基质细胞联合细胞因子可以有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133+细胞,这是一种比较接近于临床移植要求的造血细胞体外扩增方法。

人胎盘CD133^+细胞具有LTC-IC集落启动细胞特性

本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期培养体系中,以检测测试细胞中长期培养启动细胞(LTC-IC)的发生率及其增殖分化能力。结果表明:人胎盘CD133+细胞群中含有LTC-IC,其发生率为1/645;LTC-IC具有增殖分化为粒-单集落形成单位(CFU-GM)和混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;在所有LTC-IC阳性孔中,产生CFU-GM的孔占总阳性孔的71.4%,产生CFU-GM和CFU-Mix的孔占总阳性孔的28.6%。结论:人胎盘组织CD133+细胞群中存在LTC-IC,并具有造血早期祖细胞集落形成能力。

CD13^+CD133^+和CD13_-CD133_-肝癌细胞的生物学差异及临床意义

目的比较HuH7细胞系CD13+CD133+和CD13-CD133-肝细胞癌(HCC)细胞的生物学差异,并探讨其临床意义。方法通过对CD13+CD133+HCC细胞增殖情况、细胞周期、培养10d分化情况、裸鼠体内成瘤能力,以及对5-FU和吡柔比星等化疗药物的敏感性等生物学特征的研究,分析CD13+CD133+HCC细胞亚群的临床意义。结果 CD13+CD133+HCC细胞增殖速度明显快于CD13-CD133-HCC细胞,78.45%的CD13+CD133+HCC细胞处于G0/G1期,2.19%处于G2/M期,19.36%处于S期;62.18%的CD13-CD133-HCC细胞处于G0/G1期,11.88%处于G2/M期,25.95%处于S期。在裸鼠体内,1×103个CD13+CD133+HCC细胞即可成瘤,而1×105个CD13-CD133-HCC才可成瘤。CD13+CD133+HCC细胞对5-FU和吡柔比星具有抵抗特性,而其他3种亚群较易被杀灭。FACS分选的CD13+CD133+HCC和CD13-CD133-HCC细胞经过10d培养后,CD13+CD133+HCC亚群的CD13、CD133标志表达与HuH7细胞系相近,而CD13-CD133-HCC细胞不具有此能力。结论 CD13+CD133+HCC细胞具有肿瘤干细胞的特征,可能与临床肝癌复发和转移有关,是临床治疗过程中尤其需要杀灭的细胞。

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系CD133^+亚群生物学特性的研究

目的研究CD133在人舌鳞癌Tca8113细胞系中的表达,观察纯化的CD133肿瘤细胞体外生长特性。方法采用有限稀释法观察单细胞体外增殖的能力;利用超低黏附板,观察舌鳞癌Tca8113细胞体外悬浮肿瘤细胞成球;流式细胞仪检测舌鳞癌Tca8113细胞系中的CD133表达;免疫磁珠分选技术纯化CD133肿瘤细胞,体外培养并观察其增殖及分化能力。结果单细胞体外增殖12 d后,仅有5.23%的细胞具有持续增殖的能力。体外观察发现,超低黏附96孔培养板中细胞悬浮生长,部分可以形成肿瘤球;Tca8113细胞系中有占肿瘤部分0.95%的CD133肿瘤细胞呈阳性表达,且分选出的CD133+肿瘤细胞的增殖能力均高于CD133-肿瘤细胞及未分选的肿瘤细胞;CD133在培养体系中的比例逐日下降,由培养第1天的92.45%下降至第12天的1.62%。结论 Tca8113细胞系中肿瘤细胞具有异质性,且CD133+细胞占肿瘤细胞比例较低,在体外分化和增殖能力较强,CD133可能是肿瘤起始细胞的表型标志之一。

CD133^＋直肠癌细胞对直肠癌放射线敏感性的影响

目的探讨CD133^＋直肠癌细胞对直肠癌放射线敏感性的影响。方法采用免疫磁珠分选法将直肠癌细胞株SW480分为CD133^＋和CD133一细胞，Westernblot检测其CD133蛋白表达，克隆形成实验检测其克隆形成能力，annexinV—PI法检测放射线照射后细胞凋亡情况。分离、培养人原代直肠癌细胞，制备荷瘤裸鼠，免疫组化法检测肿瘤组织中CD133的表达情况，并观察放射线照射后荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况。结果克隆形成实验显示，CD133^＋和CD133一直肠癌细胞的克隆形成率分别为（67．5±5．5）％和（5．1±3．3）％，CD133^＋直肠癌细胞的克隆形成能力显著强于CD133^-细胞群（P〈0．01）。经放射线照射后，CD133^＋和CD133^-直肠癌细胞的凋亡率分别为（12．6±3．2）％和（38．8±6．7）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。荷瘤裸鼠肿瘤组织照射后第9天，CD133高表达照射组和CD133低表达照射组裸鼠的相对肿瘤体积分别为3．00±0．32和2．55±0．29，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CD133^＋直肠癌细胞群能显著提高直肠癌对放射线的耐受性，是增强直肠癌放疗敏感性的潜在靶点。

分离、鉴定CD133^+人肝癌干细胞以及^(131)I-CD133mAb对其生物学效应的影响

目的分离、鉴定CD133+人肝癌干细胞以及131I-CD133mAb对其生物学效应的影响。方法为选择最适的细胞系,流式细胞仪检测Huh-7和HepG2细胞中CD133表达率;磁珠分选Huh-7细胞,流式细胞仪检测分选后CD133表达率;体外成球、克隆形成实验及体内成瘤实验验证干细胞特性;氯胺T法制备131I标记CD133单克隆抗体(131ICD133mAb)并鉴定;取分选后的CD133+-Huh-7细胞、Huh-7细胞和HepG2细胞进行实验,将每种细胞分成4组(131ICD133mAb组、131I组、CD133mAb组、131I+CD133mAb组);MTT法检测各组对CD133+-Huh-7细胞生长抑制的最适剂量和各组在最适剂量作用后24、48、72 h对3组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测131I-CD133mAb作用3组细胞72 h时细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 Huh-7和HepG2细胞系CD133表达率分别为18.8%和5.2%,故选用Huh-7细胞进行分选;磁珠分选后CD133+-Huh-7细胞CD133的表达率为99.28%,与分选前比较差异有统计学意义(P<0.01)。CD133+-Huh-7细胞相对于CD133--Huh-7细胞具有更强的体外成球能力、克隆形成能力和体内成瘤能力。131I-CD133mAb标记率为87.92%,放射化学纯度为97.54%,具有较好的稳定性和免疫活性。当131I 4.8 MBq/100μL、CD133mAb 4.8μg/100μL时对CD133+-Huh-7细胞抑制率最高(P<0.05),取此放射性浓度进行实验。24、48、72 h时各组对CD133+-Huh-7细胞的抑制作用明显高于Huh-7和HepG2细胞组,131I-CD133mAb组对3种细胞生长抑制率明显高于其余各组,抑制率随时间的增加而升高(P<0.01)。131I-CD133mAb作用CD133+-Huh-7细胞72 h后凋亡率为31.21%,明显高于其余2组(P<0.05)。细胞周期检测结果显示CD133+-Huh-7细胞G0/G1期减少54.77%,明显高于其余2组(P<0.05)。结论 CD133+细胞具有肿瘤干细胞特性,131I-CD133mAb能特异性结合CD133+-Huh-7细胞,调控细胞周期和诱导细胞凋亡。

肺腺癌A549细胞CD133^＋CD44^＋表型在裸鼠体内成瘤能力的研究

目的 探讨肿瘤标志物CD133和CD44的表达与人肺腺癌A549细胞株在裸鼠体内形成肿瘤能力的关系.方法 使用单细胞克隆的方法 ,筛选出能够持续增殖分裂的肿瘤细胞,应用免疫荧光方法 和流式细胞仪检测CD133和CD44在具有增殖分裂能力的A549细胞和普通A549肿瘤细胞的表达情况;按表达结果 对A549细胞进行分组,应用单克隆方法 对各组细胞进行培养,并按不间密度注射于裸鼠皮下,观察各个组别的成瘤能力.结果 （1）在倒置显微镜下观察肿瘤细胞生长情况,发现多数细胞死亡,1周后仅有4.11%的细胞能够增殖分裂形成克隆.（2）具有增殖分裂能力肿瘤细胞的免疫荧光结果 ：CD133阳性率为19.0%,CD44阳性率为57.0%;普通A549肿瘤细胞免疫荧光结果 ：CD133阳性率为2.5%,CD44阳性率为34.0%;具有分裂增殖能力的肿瘤细胞CD133和CD44阳性表达率显著高于普通A549肿瘤细胞（P〈0.01）.（3）裸鼠体内成瘤能力实验提示：CD133^＋CD44^＋（A组）细胞成瘤能力显著高于CD133^-CD44^-（B组）、CD133^-CD44^＋（C组）和CD133^＋CD44^-（D组）细胞（P〈0.05）;裸鼠瘤块病理检查证实均为腺癌,各脏器检查未发现转移：在接种CD133^＋CD44^＋（A组）细胞的瘤块组织中发现除了有CD133^＋CD44^＋细胞外,还有CD133^-CD44^-细胞.结论 肺腺癌A549细胞株中CD133^＋CD44^＋细胞在裸鼠体内的成瘤能力显著高于其他细胞.

人HCT116结肠癌细胞系中CD133^+结肠癌干细胞分离及鉴定

目的从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性。方法利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性。结果HCT116细胞系中存在CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性。结论CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相关蛋白。

CD133^＋肺癌干细胞中基质金属蛋白酶9和缺氧诱导因子2α的表达及其病理学机制

目的 探讨CD133^＋肺癌干细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-9和缺氧诱导因子（HIF）-2α的表达及其病理学机制.方法 选取2009年1至12月苏州大学附属第一人民医院收治的肺癌手术患者组织石蜡标本62例.运用免疫组织化学染色技术检测CD133分子在肺癌组织中的表达,分析其临床意义;实时荧光定量PCR法分析CD133^＋肺癌干细胞中MMP-1、MMP-2、MMP-9、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α和MMP组织抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4等转移相关基因的表达;分别用乱序siRNA和CD133 siRNA转染肺癌细胞株A549,构建对照-si-A549细胞和CD133-si-A549细胞,PCR法分析两组细胞中CD133、MMP-9和HIF-2α基因的表达;肿瘤侵袭试验分析细胞侵袭迁移能力的改变.结果 51.6％的肺癌组织阳性表达CD133分子,其表达与肺癌的转移和患者生存率密切相关（P＜0.05）.CD133^＋与CD133-细胞中TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4、HIF-1α、HIF-1β、MMP-1、MMP-2相对表达量差异均无统计学意义（均P＞0.05）;CD133^＋细胞中HIF-2α和MMP-9的相对表达量均显著高于CD133-细胞（1.58±0.39比1.10±0.31,1.67±0.38比1.05±0.21,均P＜0.05）.CD 133-si-A549细胞中CD133、HIF-2α和MMP-9相对表达量均显著低于对照-si-A549细胞（0.24±0.10比0.85±0.23、0.19±0.09比0.54±0.18和0.31±0.17比1.12±0.31,均P＜0.05）.CD133-si-A549细胞迁移至下室细胞数量显著低于对照-si-A549细胞（207±25比82±10,P＜0.05）.结论 CD133^＋肺癌干细胞与肿瘤转移和患者预后相关,它可通过上调HIF-2α和MMP-9的表达促进肿瘤的转移.

姜黄素对直肠癌CD133^+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响

目的探讨姜黄素对直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响。方法应用免疫磁珠分选器、阳性分离柱分选出直肠癌CD133+肿瘤干细胞,随机分成姜黄素组、姜黄素联合放疗组、放疗组,应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测24、48、72 h各组细胞生长抑制情况;膜联蛋白V-异硫氨基荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染色检测细胞凋亡率。结果姜黄素组随着时间变化肿瘤细胞抑制率变化不大(P>0.05);放疗组和姜黄素联合放疗组24、48、72 h细胞生长抑制率逐渐升高(P<0.05);同期三组细胞生长抑制率均有统计学意义(P<0.05),两两比较24 h细胞生长抑制率,姜黄素组与姜黄素联合放疗组和放疗组之间差异有统计学意义(P<0.05),姜黄素联合放疗组与放疗组之间差异无统计学意义(P>0.05);48、72 h抑制率两两之间差异均有统计学意义(P<0.05);姜黄素组48 h与72 h之间细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),姜黄素联合放疗组和放疗组48 h与72 h之间细胞凋亡率之间差异具有统计学意义(P<0.05)。同期内不同组细胞凋亡率之间的差异有统计学意义(P<0.05),两两比较细胞凋亡率之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素可以增加直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性,抑制肿瘤细胞生长促进细胞凋亡。

CD133^+骨肉瘤细胞的获取及其干细胞特性的初步鉴定

背景与目的:骨肉瘤是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤,目前应用化疗联合手术的治疗策略5年生存率仅为40%~60%,近期多项研究认为骨肉瘤细胞株中可能存在肿瘤干细胞。本研究旨在分离和鉴定骨肉瘤细胞株MG-63中的骨肉瘤干细胞样细胞。方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG-63中的CD133+细胞,应用流式细胞学分析、蛋白质印迹法(Western blot)检测和免疫荧光染色测定CD133+细胞的纯度,应用CCK-8法、平板集落形成试验、划痕试验及Transwell侵袭小室试验,研究CD133+细胞的生物学特性。结果:本研究成功地从MG-63中获得CD133+细胞。流式细胞学分析、免疫荧光染色和Western blot分析显示该细胞群中高表达CD133(纯度约90%～95%);CD133+细胞的增殖、平板集落形成能力、迁移能力及侵袭能力均强于CD133-细胞(P<0.05)。结论:人骨肉瘤MG-63细胞株中存在肿瘤干细胞样细胞,CD133可能是骨肉瘤的干细胞标志物之一。

乳腺浸润性导管癌组织中ALDH1^+/CD133^+干细胞样细胞与血管生成的关系

目的探讨乳腺浸润性导管癌组织中肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD133的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法应用免疫组织化学双染法检测120例乳腺浸润性导管癌组织中ALDH1+/CD133+干细胞样细胞,单染法检测血管性标记CD34、CD105及VEGF的表达情况。统计ALPH1+/CD133+干细胞样细胞与临床病理因素;CD34、CD105与VEGF的关系。结果 25.83%(31/120)的病例存在ALDH1+/CD133+干细胞样细胞,ALDH1+/CD133+干细胞样细胞与ER、VEGF的表达及MVD均相关(P<0.05),但与年龄、肿瘤直径、PR、Her-2、组织学分级及淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论乳腺浸润性导管癌组织中ALDH1+/CD133+干细胞样细胞可能通过调节VEGF的表达促进肿瘤新生血管的生成。