烫伤后金葡菌脓毒症大鼠组织CD14 mRNA表达的改变

业已证明,CD14作为G^-菌脂多糖的重要受体,与脂多糖结合蛋白(LBP)共同构成内毒素增敏系统,在G^-菌脓毒性休克中具有重要地位。新近体外观察发现CD14也可作为G^+菌细胞壁成份(如肽聚糖和脂磷壁酸)的功能受体,在介导G^+菌所致的单核/巨噬细胞活化和细胞因子的产生中可能具有一定作用。

CD14 mRNA、TLR4 mRNA在急性和亚急性MPTP帕金森病小鼠模型中的表达

目的研究急性和亚急性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）帕金森病小鼠模型腹侧中脑与纹状体中脂多糖受体CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达。方法腹腔注射MPTP制作急性（20 mg/kg,4次,每次间隔2 h）和亚急性（20 mg/kg,每天1次,共7 d）帕金森病小鼠模型。实验分为4组：正常对照组（8~10周龄小鼠）、中年小鼠组（8月龄）、急性模型组（8~10周龄）、亚急性模型组（8~10周龄）,每组6只C57BL/6小鼠。模型组小鼠在末次注射MPTP 1d后取脑组织。用酪氨酸羟化酶（TH）免疫组织化学染色,观察亚急性小鼠模型黑质多巴胺能神经元数目改变情况。用RT-PCR方法检测CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达水平。结果亚急性小鼠模型黑质TH阳性细胞减少。急性和亚急性模型组小鼠黑质与纹状体CD14 mRNA表达水平明显增高,高于正常对照组和中年小鼠组（均P〈0.05）,TLR4mRNA表达各组间没有明显差异（P〉0.05）。结论 CD14 mRNA作为内毒素受体在MPTP帕金森病小鼠表达增高,可能涉及脂多糖介导的免疫反应,从而参与神经损伤和帕金森病病理生理过程,针对CD14的阻断中和处理可能作为一种新的帕金森病治疗措施。

CD14 mRNA和TLR4 mRNA表达与帕金森综合征的关系

目的探讨外周血单核细胞CD14和toll样受体(TLR4)mRNA的表达与帕金森综合征(PD)的关系。方法前瞻性选取2016年1月至2017年12月在北京潞河医院治疗的PD患者80例,同时选取健康志愿者80例作为对照组。采用RT-PCR技术检测CD14 mRNA和TLR mRNA表达,同时分析CD14 mRNA和TLR4 mRNA表达与PD患者临床特征的关系,CD14 mRNA和TLR mRNA表达的相关性。结果 PD组CD14 mRNA和TLR mRNA相对表达量分别为(1.522±0.344)和(1.417±0.401),明显高于对照组(P<0.05);H-Y分期>2.5期患者CD14 mRNA和TLR4 mRNA相对表达量分别为(1.843±0.312)和(1.722±0.422),明显高于H-Y分期≤2.5期患者(P<0.05);CD14 mRNA和TLR4 mRNA相对表达量与PD患者性别、年龄、病程、运动并发症、服用受体激动剂和左旋多巴类药物无关(P>0.05);CD14 mRNA和TLR mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05)。结论 CD14 mRNA和TLR4 mRNA表达与PD患者疾病严重程度有一定关系,提示机体固有免疫可能参与了PD的发生发展。

凉膈散含药血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响

目的:研究凉膈散药物血清体外对内毒素刺激小鼠RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响。方法:大鼠以凉膈散灌胃,制备药物血清。以凉膈散药物血清或正常血清的培养液与LPS体外共同培养RAW264.7细胞,原位杂交法检测凉膈散药物血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达变化。结果:与LPS刺激组比较,不同剂量药物血清组CD14mRNA表达量均比它低,呈剂量依赖性;正常血清组则无显著性差异。结论:凉膈散含药血清体外对LPS刺激小鼠单核细胞CD14mRNA转录具有抑制作用。减少LPS效应细胞的CD14mRNA的表达可能是凉膈散减轻LPS对机体损伤,发挥解毒作用的机制之一。

急性脑血管病引发SIRS/MODS患者CD14 mRNA的表达

目的探讨外周血有核细胞CD14mRNA在急性脑血管病(ACVD)引发全身炎症反应综合征(SIRS)及多器官功能障碍综合征(MODS)发病过程中的表达规律以及与病情变化的相关性。方法将153例ACVD患者按病情发展分为单纯ACVD组60例、ACVD引发SIRS组45例及ACVD引发MODS组48例,随机选择无亲缘关系的健康体检者40例作为对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定4组对象外周血有核细胞CD14 mRNA的表达。结果 ACVD患者发病第3日CD14 mRNA表达明显升高,CD14mRNA的表达随着病情的逐步加重(对照组→单纯ACVD组→ACVD引发SIRS组→ACVD引发MODS组)呈递升趋势(P<0.01),且4组两两比较也均有统计学意义(P均<0.01)。ACVD引发MODS组中,积分≥9分患者CD14 mRNA的表达明显高于<9分患者(P<0.05),死亡患者外周血有核细胞CD14 mRNA的表达明显高于存活患者(P<0.01)。结论 ACVD这一外源性非感染疾病引发SIRS和MODS的机制可能与机体过度免疫应答有关。

帕金森综合征患者CD14mRNA与TLR4mRNA的表达及意义

目的探讨CD14mRNA、TLR4mRNA在帕金森综合征患者中的表达及意义。方法2018-02—11焦作市第二人民医院收治的80例帕金森综合征患者为实验组,80例健康志愿者为对照组。应用RT-PCR技术检测2组CD14mRNA、TLR4mRNA基因表达水平,同时探讨CD14mRNA、TLR4mRNA在帕金森综合征患者中的表达与患者性别、年龄、病程、H-Y分期、运动并发症、服用受体激动剂、服用L-DOPA等相关性。结果实验组CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平显著高于对照组,差异显著(P<0.05);实验组探讨CD14mRNA、TLR4mRNA表达水平与患者性别比例、年龄分布、病程、运动并发症、服用药物等无显著差异(P>0.05),而与患者病理H-Y分期相关性显著(P<0.05)。结论CD14mRNA及TLR4mRNA在帕金森综合征患者中的表达具有显著性,固有免疫系统有可能参与了帕金森患者病情发生、发展的全过程,对帕金森患者的发展具有指导意义。

烫伤合并金葡菌感染大鼠组织CD14 mRNA的改变

目的 探讨细菌脂多糖受体CD14在烫伤合并金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )感染中的变化规律及其意义。 方法 采用大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤合并金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,动态检测心、肝、肺、肾等重要器官中CD14mRNA表达的改变 ,同时观察内毒素在动物循环及主要脏器内的分布特点。 结果 烫伤合并金葡菌脓毒症早期 ,各脏器内毒素含量即明显高于正常对照组 ,并于2～ 6h达峰值 ,其中以肝、肺组织内毒素水平升高幅度最为显著 (P <0 .0 5 )。而血浆内毒素水平亦于伤后 2h显著高于正常对照组 (分别为 0 .30 5 6EU/ml和 0 .12 5 0EU/ml,P <0 .0 5 )。与此同时 ,小肠组织中二胺氧化酶的活性明显降低 (P <0 .0 5 )。烫伤合并金葡菌感染后 ,各组织CD14mRNA的表达亦呈不同程度升高 (P <0 .0 5 ) ,其中肺脏改变尤为显著 ,伤后 6、2 4h肺脏CD14mRNA表达分别为正常对照组的 1.80和 1.81倍。 结论 烫伤合并金葡菌攻击可导致内毒素移位和组织CD14mR NA表达不同程度升高 ,CD14基因表达的上调可能与移位内毒素的刺激作用有关。

不同治法方药对脂肪肝大鼠超微结构及Kupffer细胞CD14 mRNA的影响

目的:观察疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同治法方药对脂肪肝大鼠超微结构及Kupffer细胞CD14 mRNA表达的影响。方法:利用高脂饮食、白酒灌胃复制大鼠脂肪肝实验动物模型,同时给予疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同方药进行干预,12周后观察各组大鼠超微结构的改变,同时以Ⅳ型胶原酶、蛋白酶E联合灌注消化、梯度离心、选择性贴壁分离不同组别大鼠Kupffer细胞,采用半定量RT-PCR方法检测不同组别大鼠Kupffer细胞CD14 mRNA的表达。结果:各组中药治法对NAFLD细胞超微结构的改变均有不同程度的修复作用,其中尤以健脾组明显。模型组大鼠Kupffer细胞CD14 mRNA蛋白的表达较正常组明显增加(P<0.05),各干预组CD14 mRNA表达较模型组有所降低(P<0.05),其中健脾组最为明显。结论:模型组大鼠超微结构改变与NAFLD超微结构相吻合,NAFLD模型大鼠Kupffer细胞CD14 mRNA表达明显增高,表明Kupffer细胞CD14 mRNA表达明显增高可能为脂肪肝发病原因之一,抑制Kupffer细胞CD14 mRNA表达可能是健脾等治法方药抗实验性大鼠脂肪肝的作用机制之一。

磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C对内毒素血症大鼠肝组织CD14表达的抑制作用

目的观察磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)对大鼠内毒素血症时肝组织中Kuffer细胞(KCs)的活性、CD14mRNA的表达和血浆细胞因子释放的作用。方法将Wistar大鼠90只,随机分为LPS组(静注LPS5mg/kg)、PI-PLC组(注LPS前30min注PI-PLC100U/kg)和生理盐水NS组。分别于注射前及注射后1、3、6和12h取材,每组每时相点6只,测定血浆内毒素(鲎试剂基质偶氮显色法)、LBP及TNF-α(均用ELISA法)和IL-6(放免法)的含量,用RT-PCR检测肝组织中CD14mRNA的表达,并观察其形态学变化。结果LPS组LBP、TNF-αI、L-6的含量和CD14mRNA的表达明显增加,并伴有KCs激活,数量增多,体积增大,吞噬功能增强,肝细胞出现变性和坏死等;而PI-PLC处理组所致的上述变化明显减轻。结论PI-PLC对内毒素所致肝组织内KCs的激活有一定抑制作用。

CD14基因在大白猪F18大肠杆菌病耐受型和敏感型个体间的差异表达分析

本研究旨在分析CD14基因在大白猪F18大肠杆菌耐受型和敏感型个体间的mRNA表达差异,以探讨CD14基因在断奶仔猪抗F18大肠杆菌中发挥的潜在作用。挑选大白猪耐受型和敏感型个体各4头,通过利用Real-time PCR方法比较分析CD14基因在个体各组织间的表达规律。结果表明:CD14基因在大白猪耐受型和敏感型个体各组织间的表达趋势有着高度的一致性,其中CD14基因在肝中呈现高水平表达,在肺、肾和淋巴结中呈现中度表达,而在其他组织中的表达水平都非常低,CD14基因在耐受型个体各组织间的表达水平几乎都高于敏感组,其中CD14基因表达量在空肠组织中差异达到极显著水平(P<0.01)。由此推测,CD14基因对E.coli F18抗性的调节可能不是通过直接作为F18大肠杆菌的受体来实现,而是通过参与并调节机体的免疫反应来实现的,并且CD14基因的上调可能与F18大肠杆菌的抗性存在一定的联系。

甘露消毒丹对湿热证大鼠内毒素转导信号的动态干预

目的:观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠细胞内毒素特异性受体LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA及NF-κBp65表达变化的动态干预,深入探讨清热化湿方的治疗机制。方法:分为正常组、湿热模型组(高脂+高温高湿+大肠杆菌)、清热化湿组;采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果:模型组在感染6h、12h、24h等不同时相点LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达非常显著增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异,说明随着病程的发展,湿热模型LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA、NF-κB表达逐渐增强。治疗组6h、12h、24h等不同时相点比较,LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA表达减弱,具有非常显著性差异;24h时相点治疗组与模型组比较LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA表达减弱有非常显著性差异,但仍未恢复正常,与正常组比较仍有极显著性差异,说明LBPmR-NA遏制衰减是一个缓慢的过程。而治疗组NF-κB激活6h、12h、24h各时相点间比较均无显著性差异;且与正常组比较NF-κB激活均无显著性变化。结论:甘露消毒丹对温病湿热证大鼠肝巨噬细胞LBPm-RNA及NF-κB的激活具有较好的干预调控作用,能中止炎症介质的转录,限制急性炎症反应。

湿热证模型大鼠内毒素转导信号的动态研究

目的:通过多因素复合造模方法,观察模型大鼠内毒素特异性受体LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA及NF-κBp65表达变化,探讨湿热致病机制。方法:24只大鼠分为正常组、湿热模型组(高脂+高温高湿+大肠杆菌)、模型对照组(高脂+高温高湿)各8只,采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活性。结果:在感染6h、12h、24h等不同时相点湿热模型组LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强(P<0.01);湿热模型组在6h、12h、24h等不同时相点LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达逐渐增强。之间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:靶细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA适量表达及NF-κB激活既是湿热病证的主要致病机理,又是湿热病证的相关性指标。

人外周血耐受性树突状细胞的诱导培养及其DC-STAMP的表达研究

目的:诱导培养人外周血耐受性树突状细胞(TolDCs)并动态观察TolDCs诱导过程树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)mRNA的表达水平。方法:(1)免疫磁珠分选法获得人外周血CD14+单核细胞,采用细胞因子GM-CSF、白介素4(IL-4)、地塞米松和LPS联合培养诱导TolDCs;(2)观察培养细胞的形态变化,流式细胞术检测CD83、CD86和CD14的表达,并将培养的细胞与T淋巴细胞共培养观察T淋巴细胞增殖反应;(3)采用实时定量PCR对TolDCs诱导培养过程中DC-STAMP mRNA表达水平进行动态观察。结果:(1)CD14+单核细胞GM-CSF、IL-4、脂多糖诱导培养后胞体变大,出现树枝状突起,为典型的成熟DCs形态,加地塞米松诱导培养后胞体亦变大,但未见明显树枝状突起,缺乏典型的成熟DCs形态;(2)CD14+单核细胞经GM-CSF、IL-4培养后使CD83和CD86表达上调,CD14表达下调,加Dex联合诱导培养后DCs表面CD83、CD86表达下调,CD14表达上调,与T淋巴细胞共培养后增殖反应明显减弱,显示TolDCs的免疫表型和功能特性;(3)CD14+单核细胞经GM-CSF、IL-4培养后DC-STAMP mRNA的表达水平随培养时间延长而降低,加入地塞米松联合诱导后表达水平明显增加。结论:人外周血CD14+单核细胞采用GM-CSF、IL-4和地塞米松联合培养可诱导TolDCs生成,DC-STAMP可能与DCs的致耐受功能有关。

针刺对脑缺血并发MODS鼠肺组织保护作用机制的研究

目的以脑缺血所致多器官功能障碍综合征(MODS)大鼠模型为研究对象,从组织形态学及基因表达(CD14 mRNA)角度,探讨针刺人中穴内关穴对MODS鼠肺组织的保护作用。方法采用阻断两侧颈总动脉建立脑缺血MODS大鼠模型。将100只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、针刺组,其中模型组针刺组又分为1、6、24、72 h 4个时间段。采用动物呼吸机测定各组大鼠的呼吸频率;HE染色观察肺组织内细胞形态变化;原位杂交技术检测肺组织中CD14 mRNA基因表达。结果 (1)呼吸频率比较:针刺干预后,各针刺组呼吸频率评分较模型对照组均增加,24、72 h组的呼吸频率增加最为明显,与模型对照组、假手术组以及针刺1 h组均有统计学差异(P<0.05)。(2)HE染色镜下观察显示:模型组肺在脑缺血6 h后可见支气管黏膜假复层柱状上皮坏死脱落,黏膜下层有炎细胞浸润,24 h后肺组织结构消失,被大量炎性细胞代替,针刺组6 h肺泡壁明显增厚,水肿,内有大量单个核细胞浸润,针刺组24 h肺泡壁毛细血管狭长,扩张。(3)原位杂交技术检测。脑缺血并发MODS后6 h,大鼠肺组织CD14 mRNA表达呈升高趋势,24 h达到峰值。各针刺组大鼠肺组织CD14 mRNA表达明显低于相对应时相的模型组(P<0.05或P<0.01),24 h针刺组下降幅度最明显(P<0.01)。结论针刺人中、内关穴能改善脑缺血并发MODS鼠的呼吸功能,对肺组织具有一定的保护作用;降低CD14 mRNA表达,可能是针刺保护脑缺血并发MODS鼠肺组织损伤的机制之一。

生长激素预处理对体外循环大鼠肝脏炎性反应的影响

目的探讨生长激素(growth hormone,GH)预处理对体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)大鼠肝脏炎性反应的影响及机制。方法建立大鼠CPB模型,分为GH预处理组(GH组)、CPB对照组(CPB组)和假手术组(SM组),按照CPB后不同时间取静脉血及肝组织,检测血清LPS、TNF-α浓度及肝功能,RT-PCR法检测肝组织CD14mRNA、TNF-α mRNA。结果CPB后CPB组、GH组LPS、TNF-α浓度比CPB前血清LPS(0.25±0.03)IU/L和TNF-α(0.95±0·38)μg/L显著升高,肝组织CD14mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多,肝功能损害明显;GH组同时相点血清LPS和TNF-α浓度以及肝组织CD14mRNA、TNF-α mRNA的表达均比CPB组显著降低(P<0·05,P<0·01),肝功能损害明显减轻。结论GH预处理可明显降低CPB后血清LPS水平,减少肝组织CD14mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善CPB后机体炎症反应,减轻肝损害。