RNA干扰抑制CD147表达对宫颈癌细胞增殖、转移和侵袭能力的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)对宫颈癌组织CD147表达及对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取2016年2月至2019年2月济南市第二妇幼保健院病理组织室110份宫颈组织,包括20例正常宫颈上皮组织和90例宫颈癌组织(30例原位宫颈癌组织和60例鳞状宫颈癌组织),免疫组化检测CD147表达。分析CD147表达与宫颈癌患者临床病理参数的相关性。以GFP-shRNA-CD147-NC和GFP-shRNA-CD147分别转染对照组和实验组细胞,另取空白细胞作为正常组。EdU标记实验检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;裸鼠成瘤模型检测细胞体内生长与转移能力;Western blot检测细胞单羧酸转运蛋白1(MCT1)、CD147蛋白表达。结果:与正常宫颈组织相比,原位宫颈癌组织中CD147阳性表达比例明显升高,与原位宫颈癌组织相比,鳞状宫颈癌组织中CD147阳性表达比例明显升高(P<0.05);CD147表达与宫颈癌患者肿瘤大小、浸润深度、淋巴转移关系密切(均P<0.05);与正常组细胞相比,实验组细胞增殖、迁移和侵袭及体内生长和转移能力、MCT1、CD147蛋白表达明显下调(均P<0.05)。结论:宫颈癌组织中CD147表达升高,抑制CD147表达可明显抑制肿瘤细胞体内外增殖、侵袭和转移。

RNAi沉默CD147基因对卵巢癌细胞HO-8910pm生物学行为的影响

目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNA i)技术,利用构建的稳定转染CD147 shRNA表达质粒载体的HO-8910pm/pGE-1 CD147shRNA细胞株观察卵巢癌细胞系HO-8910pm CD147基因的沉默作用及生物学效应。方法:用免疫细胞化学法、激光共聚焦检测HO-8910pm细胞CD147的表达;MTT法绘制细胞生长曲线,观察裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的成瘤性。结果:pGE-1CD147shRNA转染人卵巢癌细胞系后,CD147的表达受到高效且特异的抑制,细胞侵袭力减弱,荷瘤裸鼠成瘤力下降,抑瘤率达58.8%(P<0.01)。结论:RNA i沉默CD147基因可影响卵巢癌的侵袭和成瘤,有可能成为治疗卵巢癌的新途径。

MicroRNA下调SiHa中CD147的表达及对其肿瘤生物学活性的影响

目的:探讨下调宫颈癌细胞系SiHa中CD147蛋白表达对肿瘤细胞增殖成瘤性等生物学活性的影响。方法:构建重组质粒pSilencer 4.1-CMV neo/CD147 siRNA1、2,稳定转染至宫颈癌细胞系SiHa,采用半定量RT-PCR法、Western blot法检测干扰后细胞CD147及凋亡相关基因Bcl-2、caspase-3 mRNA及蛋白的表达;运用MTT法检测干扰后肿瘤细胞增殖变化;裸鼠成瘤实验分析肿瘤细胞CD147蛋白表达下调后的成瘤性。结果:与对照组相比,转染了pSilencer 4.1-CMV neo/CD147 SiRNA 1、2的SiHa中CD147及Bcl-2的mRNA、蛋白表达水平有显著下调,活性caspase-3表达增加,肿瘤增殖活性下降,裸鼠成瘤实验显示干扰后肿瘤细胞成瘤性及癌肿大小均低于对照组。结论:SiRNA转染能有效抑制宫颈癌细胞系SiHa中CD147的表达,且能抑制肿瘤细胞增殖能力,肿瘤的成瘤能力亦明显下降。

CD147-siRNA对甲状腺乳头状癌K1细胞侵袭能力的影响

目的研究小干扰RNA对人甲状腺乳头状癌K1细胞CD147表达及细胞侵袭能力的影响,并筛选出有效的siRNA序列。方法人工设计合成3对CD147-siRNA,并将CD147-siRNA转染人甲状腺乳头状癌K1细胞来沉默CD147基因的表达。用RT-PCR、ELISA分别测定CD147 mRNA和其蛋白的表达,从而验证CD147-siRNA的干扰效果;用RT-PCR、Western blot技术分别测定MMP7 mRNA和其蛋白的表达;Transwell侵袭实验研究干扰后K1细胞的体外侵袭能力。结果 S2、S3组CD147 mRNA及其蛋白表达量较正常组和阴性对照组明显减少(P<0.05)。与正常组相比,CD147 mRNA的表达抑制率分别为67.81%和72.48%;CD147蛋白表达抑制率分别为31.65%和35.47%。S2、S3组K1细胞中MMP7 mR-NA表达抑制率分别为50.25%和53.40%,MMP7蛋白表达抑制率分别为41.58%和40.49%。Transwell小室实验检测转染后72 h的S2、S3组K1细胞,较正常组相比抑制率分别为35.87%和30.16%。而转染的S1、Normal组、Control组在细胞的侵袭力方面差异无统计学意义(P>0.05)。结论 S2、S3组CD147-siRNA可以有效阻断CD147的表达,抑制肿瘤细胞的体外侵袭能力,CD147特异性siRNA作为一种治疗肿瘤的新途径值得进一步研究。

CD147 RNA干扰对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响

目的:探讨CD147对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响,阐明CD147对LNCaP-AI细胞侵袭作用的机制,为研究前列腺癌的侵袭过程提供依据。方法:利用脂质体2000分别转染靶向CD147基因的shRNA质粒和阴性对照质粒至LNCaP-AI细胞中,经G418筛选获得稳定表达株,分别命名为AI/shCD147(CD147沉默组)和AI/Scramble(阴性对照组)。Western blotting法检测2组细胞中CD147蛋白表达。Transwell实验检测2组LNCaP-AI细胞的体外侵袭力。Western blotting法检测2组细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果:Western blotting法,与AI/Scramble组比较,AI/shCD147组LNCaP-AI细胞中CD147蛋白表达水平明显降低。Transwell实验,AI/shCD147组吸光度(A)值(1.43±0.2)明显低于AI/Scramble组(2.08±0.3),差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting法,AI/shCD147组细胞中MMP-2蛋白表达水平(0.46±0.08)明显低于AI/Scramble组(0.85±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CD147可通过诱导MMP-2分泌促进前列腺癌LNCaP-AI细胞的体外侵袭力,其可能成为前列腺癌基因治疗的新策略。

shRNA抑制CD147基因表达对HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响

目的用RNA干扰(RNAi)技术抑制CD147基因的表达,检测其对人结直肠癌细胞系HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响。方法设计合成CD147特异性的RNA干扰表达质粒pYr-mir30-shRNA,稳定转染HT29细胞,分别获得HT29/shRNA-control和HT29/shRNA细胞;RT-PCR和western blot分别检测CD147、MCT1、MCT4 mRNA和蛋白质的表达;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性;CCK8法分析细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;观察结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的致瘤能力。结果与空白组比较,RNA干扰后的细胞中CD147、MCT1 mRNA(F分别为99.645和84.985)及蛋白质(F分别为73.675和19.842)的表达水平均降低(P均<0.01);MMP-2和MMP-9的活性均降低(P均<0.01);细胞增殖(t分别为7.491、15.023、14.584、6.637和11.211,P均<0.01)和侵袭(F=330.443,P<0.01)能力均降低,使裸鼠荷瘤能力下降(F=365.679,P<0.01)。结论 RNA干扰能有效抑制CD147基因的表达,抑制HT29细胞的增殖和侵袭能力。

shRNA抑制CD147表达对喉癌细胞株Hep2增殖和侵袭能力的影响

目的:研究shRNA抑制喉癌细胞株Hep2中CD147表达对喉癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法:将前期构建的重组质粒pSilencer-shRNA1和pSilencer-shRNA2分别转染至喉癌细胞Hep2中,同时以转染空载质粒pSilencer-shRNA-control和空白细胞作为对照,G418筛选稳定转染细胞系。筛选后的4组细胞分别命名为Hep2、Hep2/shRNA-control、Hep2/shRNA1和Hep2/shRNA2。实时荧光定量PCR法和Western blot检测CD147的表达。采用MTT法检测4组细胞增殖能力。采用Transwell法检测4组细胞的体外侵袭能力。结果:转染后的喉癌细胞株Hep2/shRNA1和Hep2/shRNA2中CD147的mRNA和蛋白表达水平与Hep2相比显著下调,细胞增殖能力分别下降到67.49%(P<0.01)和61.37%(P<0.01),侵袭能力也分别下降了61.80%(P<0.01)和73.58%(P<0.01)。结论:CD147 shRNA能下调喉癌细胞株Hep2中CD147的表达,抑制喉癌细胞Hep2的增殖和侵袭能力。

CD147反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定

目的 构建CD14 7反义RNA表达质粒载体。方法 用DNA重组技术将人CD14 7基因反向克隆到真核表达质粒PCD NA3.1中 ,构建成CD14 7反义RNA表达质粒PCDNAasCD14 7。用阳离子脂质体介导转染人卵巢癌细胞系 8910 ,经G4 18筛选后获得的克隆进行鉴定。结果 CD14 7反义RNA表达质粒载体PCDNAasCD14 7经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。流式细胞仪及免疫组化SP法染色均证实 :转染细胞 8910 /PCDNAasCD14 7,与亲本细胞相比 ,CD14 7的表达明显下降。结论 成功构建了CD14 7反义RNA表达质粒载体PCDNAasCD14 7,此实验结果为进一步研究CD14 7蛋白分子的生物学功能以及为卵巢癌的基因治疗研究奠定了基础。

CD147 RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞系生物学行为的影响

目的研究针对CD147 RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞系生物学行为的影响。方法利用针对CD147 RNA干扰片段构建的表达载体转染PC-3细胞,获得稳定表达株。通过RT-PCR和Western blotting鉴定后进行前列腺癌细胞侵袭力实验和动物实验。结果 RT-PCR和Western blotting结果表明干扰片段可以较好地封闭前列腺癌PC-3细胞CD147分子mRNA和蛋白表达水平;与转染空质粒组相比,CD147干扰组前列腺癌PC-3细胞侵袭力下降,荷瘤裸鼠成瘤力下降(P<0.05),抑瘤率达32.82%。结论 RNA干扰封闭CD147基因能抑制前列腺癌细胞的侵袭力和成瘤力,有可能成为前列腺癌基因治疗的新途径。

CD147基因发夹结构干扰RNA表达载体的构建及鉴定

根据人CD147基因mRNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列(shRNA),克隆到空载体pSilencer 4.1-CMV neo中,构建重组质粒,通过测序验证阳性克隆。结果重组质粒测序鉴定与设计的shRNA转录模板序列相同,证实重组质粒构建成功。认为构建CD147 RNA干扰表达载体的成功对未来转移性前列腺癌的基因治疗有重要意义。

调控CD147基因表达的MicroRNA分子鉴定及其抗膀胱癌转移研究

目的 探讨调控CD147基因表达的Micro RNA对膀胱癌的增殖、迁移和浸润的关联性。方法 选取自2015年1月~2016年5月在我院接受治疗的膀胱癌患者50例,分别取膀胱癌组织以及癌旁组织采用免疫组化进行CD147阳性检测,构建CD147 si RNA重组腺病毒（Ad-CD147 si RNA）载体转染膀胱癌细胞,将CD147阳性表达的膀胱癌组织随机分为Ad-CD147 si RNA转染的干扰组,腺病毒颗粒转染的阴性对照以及未加处理的对照组,采用MTT检测肿瘤细胞增殖能力、采用划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力、采用明胶酶谱实验检测MMP-2和MMP-9含量、采用Transwell小室法检测肿瘤细胞浸润能力。结果 CD147在膀胱癌组中阳性率90.00%（45/50）显著高于癌旁组织12.00%（6/50）,差异有统计学意义（P〈0.05）。不同性别和不同年龄间CD147阳性表达比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;而不同的TNM分期及肿瘤细胞分化程度与CD147阳性表达比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。空白组及对照组的膀胱癌细胞迁移距离、侵入基底胶数量、MMP-2以及MMP-9含量明显高于干扰组,体外膀胱癌细胞在490 nm处吸收值显著低于干扰组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CD147基因所表达的Micro RNA能够通过促进MMP-2和MMP-9的分泌而加速膀胱癌组织的血供形成,加速增殖、迁移以及浸润。

RNA干扰CD147稳定表达前列腺癌PC-3细胞株的建立

目的为研究CD147分子在前列腺癌PC-3细胞中的生物学功能,通过RNA干扰(RNAi)技术建立稳定低表达CD147分子的前列腺癌PC-3细胞株。方法利用脂质体2000将靶向CD147干扰质粒导入前列腺癌细胞中,干扰前列腺癌细胞中CD147分子的表达;有限稀释法获取单个细胞克隆,通过G418筛选出抗性克隆并利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western-blot免疫印迹法分别从转录水平和蛋白水平进行鉴定。结果与转染pSilencer-Scramble对照质粒比较,转染pSilencer-CD147干扰质粒明显抑制CD147基因和蛋白表达水平(P<0.05)。结论靶向CD147的干涉载体能有效沉默PC-3细胞中CD147基因和蛋白的表达,通过G418筛选建立出稳定细胞株,为进一步研究CD147的功能打下基础。

顺铂联合siRNA干扰CD147基因抗肝癌效果体外研究

目的探讨化疗药物联合应用RNA干扰技术对体外肝癌细胞生长和侵袭能力的抑制作用。方法利用小片段干扰RNA(si RNA)干扰肝癌SMMC7721、Hep G2及HCC7402细胞CD147基因表达,观察沉默CD147基因增强顺铂对肝癌细胞活力、细胞死亡及侵袭能力的影响。结果沉默CD147基因能显著增强顺铂对肝癌细胞活力的抑制,si RNA-CD147联合顺铂处理组与顺铂处理组SMMC7721细胞生长抑制率分别为62.90%、37.08%(P<0.01);能显著促进肝癌细胞死亡,si RNA-CD147联合顺铂处理组与顺铂处理组SMMC7721细胞死亡率分别为(57±3)%、(45±3)%(P<0.05);同时也能显著增强顺铂对肝癌细胞侵袭能力的抑制作用,si RNA-CD147联合顺铂处理组与顺铂处理组SMMC7721细胞穿膜细胞数分别为14.5±2.3、29±2.5(P<0.01)。结论 si RNA沉默肝癌细胞CD147基因能增强肝癌细胞对顺铂的敏感性,该联合疗法为肝癌的综合治疗提供了新的思路和方法。

CD147 SiRNA对胃癌细胞株SGC7910生长及凋亡的影响

目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默CD147基因在胃癌细胞株SGC7910中的表达,并探讨CD147基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响。方法:根据CD147 cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pSilencerTM 4.1-CMV neo构建重组表达载体,鉴定后转染至SGC7910细胞,western blotting检测抑制效果,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果:成功构建了针对CD147基因表达的干扰质粒,有效抑制了SGC7910细胞增殖,促进了SGC7910细胞凋亡。结论:CD147靶向RNA干扰重组表达载体为肝癌的基因治疗提供了可能。

SiRNA抑制肝癌细胞株HepG2中CD147基因表达对survivin表达的影响

目的:探讨CD147与survivin(SVV)的关系。方法:设计、合成两对CD147编码基因的反向重复序列,运用瞬时转染方法抑制HepG2中CD147表达,运用RT-PCR、Western blot方法检测干扰后CD147、SVV及caspase-3表达的改变,流式细胞术检测干扰后肿瘤细胞的凋亡情况。结果:SiRNA sequence1、2均可有效地抑制CD147基因的表达(P<0.05),伴随着SVV mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);干扰后caspase-3 mRNA水平升高(P<0.05),活性caspase-3蛋白水平增高(P<0.05),肿瘤细胞凋亡增加,以细胞早期凋亡改变最为明显(P<0.05)。结论:沉默HepG2中CD147基因能下调SVV基因表达,致使肿瘤细胞凋亡增加。CD147与SVV在细胞内可能存在着相互调节机制,然而其确切机制还有待进一步研究。

siRNA沉默CD147基因对肝癌细胞的影响

目的观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默CD147基因在肝癌细胞HepG2中的表达,探讨CD147基因对肝癌细胞生长、凋亡的影响。方法根据CD147 cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pSilencerTM 4.1-CMV neo构建重组表达载体,鉴定后转染至HepG2细胞,Western blotting法检测抑制效果,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果成功构建了针对CD147基因表达的干扰质粒,有效抑制了HepG2细胞增殖,促进了HepG2细胞凋亡。结论 CD147靶向RNA干扰重组表达载体为肝癌的基因治疗提供了可能。

CD147慢病毒载体对兔外周血单核巨噬细胞的沉默作用

目的设计合成干扰细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)基因表达并筛选出能高效抑制兔外周血单核/巨噬细胞中CD147表达的shRNA慢病毒表达载体。方法根据兔源CD147 mRNA的序列构建慢病毒表达载体,实验分为6组:空白对照组,阴性对照组(NC),构建4对干扰CD147基因表达的shRNA慢病毒组(A、B、C、D),并转染兔外周血单核/巨噬细胞,72h后通过荧光显微镜观察转染效果,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Elisa,观察CD147 mRNA和蛋白表达情况。结果转染后72h收集细胞,空白对照组CD147 mRNA相对表达量为(0.98±0.09),CD147蛋白表达(119.69±16.40)pg/ml,NC对照组(1.00±0.05)pg/ml及(115.66±13.88)pg/ml,4对shRNA慢病毒载体组分别为A组(0.42±0.03)pg/ml及(58.74±5.11)pg/ml、B组(0.56±0.04)pg/ml及(70.99±7.42)pg/ml、C组(0.63±0.08)pg/ml及(82.79±7.71)pg/ml、D组(0.53±0.04)pg/ml及(69.71±5.84)pg/ml。设计合成的4对shRNA慢病毒载体中A组可以特异性抑制巨噬细胞中CD147 mRNA和蛋白表达,分别减少57.72%和50.92%(P<0.05)。结论成功构建了针对CD147基因的shRNA慢病毒载体,并从中筛选出能特异且高效阻断CD147表达的shRNA。

转染CD147干扰质粒肝癌细胞7721的鉴定

目的构建CD147干扰质粒,对肝癌细胞7721内源性CD147表达的抑制效果进行检测。方法设计及构建3对pGenesil-1-CD147/shRNA及1对阴性对照干扰质粒,通过测序鉴定。将干扰质粒用Lipofec-tamineTM2000转染肝癌细胞,通过瞬时转染获得细胞系,实时PCR和蛋白印迹法检测3对干扰质粒、阴性对照质粒的mRNA及蛋白表达水平。结果实时PCR和蛋白印迹法结果显示干扰质粒pGenesil-1-CD147/shRNA3对肝癌细胞7721内CD147mRNA及蛋白的抑制效果最显著。结论成功构建了CD147干扰真核表达载体,筛选出有效干扰质粒,为进一步研究低表达CD147的肝癌细胞7721在肝癌发生发展中的机制提供基础。

CD147 siRNA对恶性黑素瘤细胞株A375增殖及CD147表达的影响

目的研究CD147 siRNA转染对恶性黑素瘤细胞株A375中CD147表达及细胞增殖的影响。方法将前期构建的重组质粒pSUPER／CD147 siRNA稳定转染至恶性黑素瘤细胞株A375中,采用半定量RT-PCR法检测转染细胞中CD147 mRNA的表达。采用MTT法检测转染pSUPER／CD147 siRNA对肿瘤细胞增殖的影响。结果转染了pSUPER／CD147 siRNA的恶性黑素瘤细胞株A375中CD147 mRNA 表达水平显著下调,其在转染后24 h、48 h和72 h的增殖水平均显著下降。结论 siRNA转染能有效抑制恶性黑素瘤细胞株A375中CD147的表达,且能抑制肿瘤细胞的增殖能力。

小RNA干扰沉默CD147基因对膀胱癌T-24细胞生物学行为的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)沉默CD147基因表达对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:构建针对CD147基因的siRNA重组腺病毒表达载体Ad-CD147siRNA,感染人膀胱癌T-24细胞。实验设空白对照组(Mock)、阴性对照组(Ad-siControl)和干扰组(Ad-CD147siRNA)。采用RT-PCR检测CD147和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测CD147蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法和划痕实验检测对细胞侵袭和迁移能力的影响;明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的分泌情况;ELISA法检测VEGF蛋白分泌水平。结果:成功构建了Ad-CD147siRNA腺病毒表达载体,Ad-CD147siRNA可使T-24细胞CD147mRNA和蛋白表达量下调>90%(P<0.01),细胞增殖速率下降>40%(P<0.01),细胞侵袭力和迁移力明显下降(P<0.01),MMP-2和MMP-9的分泌量分别下降了68.5%和37.1%(P<0.01),VEGF mRNA和蛋白表达水平分别下降了57.2%(P<0.01)和56.5%(P<0.01)。结论:Ad-CD147siRNA能有效抑制T-24细胞中CD147基因的表达,继而降低细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此,CD147有可能成为膀胱癌基因治疗的一个新靶点。