CD160在EB病毒感染患儿T淋巴细胞上的表达及临床意义

目的探讨共抑制分子CD160在EB病毒感染患儿外周血CD8^+T淋巴细胞上的表达及临床意义。方法选取2013年1月~2014年12月在武汉市妇女儿童医疗保健中心就诊的急性EB病毒感染患儿、慢性EB病毒感染患儿和同期健康对照儿童各27例。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清EB病毒特异性抗体,实时荧光聚合酶链反应法(Realtime PCR)定量检测外周血淋巴细胞EBV-DNA,流式细胞仪检测外周血CD4^+、CD8^+T细胞亚群比例以及共抑制分子CD160、PD-1和2B4在CD8^+T细胞上的表达率,并将CD160、2B4的表达率与外周血病毒载量行相关性分析。结果急性感染患儿外周血淋巴细胞CD4^+/CD8^+比值急剧降低,慢性感染患儿该比值有所恢复;与对照组相比,共抑制分子CD160和2B4在慢性感染患儿外周血CD8^+T细胞上的表达明显增高(P<0.05),而在急性感染患儿中的表达无明显变化,PD-1在急、慢性感染患儿中的表达均无明显变化;CD160在CD8^+T细胞上的表达率与患儿外周血EB病毒载量呈正相关(r=0.445 8,P<0.05),而2B4的表达率与病毒载量无明显相关性。结论 CD160在慢性EB病毒感染患儿外周血CD8^+T细胞上的表达上调,且与外周血EB病毒DNA载量呈正相关。

慢性HIV感染者外周血T细胞CD28、CD160表达水平的研究

目的探讨CD28、CD160在慢性人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者体内的表达及其临床意义。方法选取2016年1月至2017年1月收治的50例HIV感染患者,作为观察组,并征集50例健康志愿者,作为对照组。观察并记录所有研究参与者一般资料、CD4+、CD8+T细胞上CD160及CD28的表达及初始T细胞(TN)、中央记忆T细胞(TCM)、效应记忆T细胞(TEM)、终末效应记忆T细胞(TEMRA)亚群上CD160表达的百分比及平均荧光强度(MFI)、两种细胞上病毒载量,并分析CD28及CD160的表达水平与患者CD4+T细胞计数和病毒载量的相关性。结果随着CD4+CD160的表达增加,CD4+T细胞呈下降趋势,两者呈负相关(r=-0.561,P<0.05),CD8+T细胞数量呈上升趋势,两者呈正相关(r=0.619,P<0.05),而HIV-RNA拷贝数量随着CD4+T细胞上、CD8+T细胞上CD160表达的增加而增加,两者呈正相关(r=0.684,P<0.05、r=0.459,P<0.05);随着CD4+T细胞上CD28的表达增加,CD4+、CD8+T细胞计数呈上升趋势,两者呈正相关(r=0.621,P<0.05、r=0.527,P<0.05),而HIV-RNA拷贝数量随着CD4+、CD8+T细胞上CD28表达的增加而降低,两者呈负相关(r=-0.634,P<0.05、r=-0.582,P<0.05);两组患者CD8+T细胞CD160在TEMRA亚群表达阳性率及MFI差异无统计学意义(P>0.05),观察组患者CD8+T细胞CD160在TN、TCM、TEM亚群表达阳性率及MFI均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性HIV感染患者中CD28表达有所减少,而CD160表达有所增加,可能与HIV患者CD4+T、CD8+T细胞减少有关,其中CD160主要影响记忆性CD8+T细胞。

CD160在慢性淋巴细胞白血病中的生物学特征研究

目的探讨CD160在慢性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义。方法应用流式细胞仪检测22名健康对照者、91例CLL患者、76例B细胞非霍奇金淋巴瘤CD160的表达。同时检测91例CLL患者和22名对照者PTEN、p-Akt的表达。结果22名健康对照1例(4.5%)CD160呈弱阳性。91例CLL患者89例(97.80%)CD160阳性,远高于对照组,差异有统计学意义(χ2=89.38,P<0.01)。CLL患者PTEN蛋白较对照组表达明显减低,p-Akt表达较对照组显著增高,且CLL患者CD160表达水平与p-Akt表达水平呈正相关,而与PTEN表达水平呈负相关。76例淋巴瘤患者5例(6.58%)CD160阳性,分别为4例HCL,1例SMZL。48例MCL患者CD160均阴性。CD160在CLL中的阳性率远高于淋巴瘤,差异有统计学意义(χ2=140.06,P<0.01)。CLL与MCL免疫表型差异主要是CD23与FMC7的阳性率不同,CD160在CLL中的阳性率远高于MCL,差异有统计学意义(χ2=130.51,P<0.01)。四格表诊断性试验分析显示,CD160在CLL中的敏感度为97.80%,特异性为90.79%,准确度为94.61%。CD160在CLL患者高表达与临床预后无关。结论 CD160在CLL细胞中普遍高表达,有助于CLL的诊断和鉴别诊断。

小鼠CD160胞外段真核表达载体的构建和表达

目的构建小鼠CD160胞外段的真核表达载体,并稳定转染CHO细胞进行真核表达。方法从C57BL/6小鼠脾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增CD160胞外段,然后将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1和pEGFP-N1两种质粒中,构建重组质粒psCD160和pEGFP-sCD160。重组质粒经双酶切鉴定及测序正确后,用脂质体转染CHO细胞,并用RT-PCR和Western blot检测CD160胞外段的表达,流式细胞术检测重组psCD160与其配体的结合能力。结果获得长度约为520 bp的小鼠CD160胞外段基因,经测序证实其序列正确。用脂质体将含有CD160胞外段基因的重组质粒载体转染CHO细胞后,RT-PCR和Western blot分析证实转染的CHO细胞可表达重组的psCD160基因,并且表达的可溶性CD160可与其配体结合。结论成功构建小鼠CD160胞外段基因的真核表达载体,并转染CHO细胞后表达出相应蛋白,为进一步研究CD160胞外段的功能效应奠定实验基础。

CD160在慢性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的:探讨CD160在B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)中的表达及意义。方法:用多参数流式细胞仪检测45例初诊CLL患者骨髓和38例非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者浸润骨髓CD19+细胞CD160表达阳性率。10例健康人骨髓CD19+细胞作为对照。FCM检测患者CD19+细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达平均荧光强度(MFI)。统计学分析CLL细胞CD160与CD5、CD23和Bcl-2表达MFI的相互关系。结果:45例初诊CLL中,41例表达CD160阳性的患者同时表达CD5+、CD23+,4例CD160阴性患者表达CD5+、CD23dim。4例初诊CLL,经过细胞遗传学检查和免疫病理学检查确诊为套细胞淋巴瘤(MCL)。38例NHL中,有5例CD160表达阳性。10例健康对照CD160均为阴性。CD160表达阳性率在41例CLL为(69.94±19.69)%,明显高于NHL(43.63±17.38)%(t=2.47,P<0.05)。41例CLL患者CD160阳性率与CD5+CD23+双阳性率[(76.03±15.76)]%有明显相关性(r=0.8571,P<0.01)。41例CLL患者高表达抗凋亡蛋白Bcl-2,MFI为138.23±54.99。41例CLL细胞计数绝对值与抗凋亡蛋白Bcl-2表达有明显相关性(r=0.7381,P<0.05)。4例确诊为MCL患者抗凋亡蛋白Bcl-2表达无明显异常。结论:CLL患者CD160高表达。CD19+CD160+可以作为鉴别良恶B淋巴细胞特异性的指标。用FCM检测细胞膜CD19、CD160、CD5、CD23等抗原表达情况,对于CLL的诊断和与其他B淋巴细胞增殖性疾病的鉴别有重要的价值。

NK细胞表面CD160分子表达及其介导NK杀伤效应机制的初步研究

目的:研究CD160分子在人自然杀伤(NK)细胞中的表达及与血液肿瘤的可能关系。方法:从RNA和蛋白水平确定人白血病细胞系NK92细胞表达CD160,并检测该细胞系的增殖特征及细胞表面分子的表达特点。建立以NK92为效应细胞、人白血病细胞系K562或THP-1为靶细胞的杀伤反应体系。加入CD160阻断抗体CL1-R2后,明确其对NK92细胞杀伤功能的影响。同时,采用流式细胞术检测不同种类初发血液肿瘤患者的外周血标本中NK细胞的CD160表达水平。结果:RT-PCR及Western blot杂交检测到NK92表达CD160,流式细胞学检测到NK92细胞表面CD160表达强阳性。NK92可有效杀伤2种白血病靶细胞,抗体阻断CD160后,NK92的杀伤功能被显著抑制。2种靶细胞均高表达HVEM,而K562不表达HLAⅠ类分子。不同种类血液肿瘤患者的外周血CD3-CD56+NK细胞CD160表达均低于正常对照细胞。其中急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)受者组与正常对照之间有显著性差异(P <0. 05)。结论:人CD160分子参与并介导了NK细胞的部分杀伤功能,血液肿瘤患者NK细胞表面CD160分子表达存在不同程度的下降,提示CD160表达的下调可能是血液系统肿瘤免疫逃逸的一种新机制。

CD160/BTLA-HVEM-LIGHT/LT-α共信号通路与单纯疱疹病毒性角膜基质炎的研究

单纯疱疹病毒性角膜基质炎（HSK）是主要由CD4^＋ T细胞介导的免疫病理性疾病，是可致盲的角膜感染性疾病之一。单纯疱疹病毒（HSV）进入介导子（HVEM）又名TNFRSF14，在病毒感染时可以通过病毒表面糖蛋白D（gD）介导HSV进入细胞。目前研究证实存在5种配体与HVEM结合，分别为HSV-gD、BALT、CD160、LIGHT和淋巴毒素α（LT-α）。HSV-gD与HVEM结合能够促进病毒包膜与细胞的融合，介导病毒在细胞间的扩散和释放。在T细胞的活化和增生中，HVEM-LIGHT/LT-α提供协同刺激信号，HVEM-BTLA/CD160提供协同抑制信号，此双向作用使HVEM成为一个＂分子开关＂，共同调节机体免疫应答。本文分别阐述HVEM通过与不同的配体结合所发挥不同的生物学作用，并结合CD160/BTLA-HVEM-LIGHT/LT-α共信号通路在HSK的相关实验研究，深入了解HSK的发病机制，并为HSK的有效治疗提供思路。通过有效的临床干预降低炎性免疫反应，从而达到对自身免疫性疾病的复发和慢性免疫性疾病的治疗作用。

Herpes virus entry mediator/CD160介导人调节性T细胞对CD4^+效应性T细胞的抑制作用

目的研究HVEM、CD160在不同CD4+T细胞亚群,不同功能状态下的表达以及HVEM-CD160通路对CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)免疫调节作用的影响。方法采用流式细胞分析术分别检测3例不同个体CD4+CD25+Tregs及CD4+CD25-T细胞在1 000 IU/ml人重组IL-2、与细胞数量1∶1的抗CD3/CD28 mAb包被磁珠的刺激下第0、3、5天HVEM或CD160的表达情况。采用1.25、2.5、5μg/ml HSV1gD蛋白处理4例不同个体Treg,培养5 d后,将处理的Treg与Teff在体外以1∶1混合并加入300 IU/ml IL-2及等量抗CD3/CD28 mAb包被磁珠,行混合淋巴细胞共培养,于培养结束前18 h加入3H-TdR,共培养7 d后检测各组细胞CPM增殖情况。5μg/ml gD蛋白处理5例不同个体Treg后将其细胞浓度调整为5×106并接种于6孔培养板内,加入500 IU/ml IL-2共培养7 d,行RT-PCR(Realtime PCR)分析Treg Foxp3基因表达。结果 HVEM在初始CD4+CD25+Tregs表面呈中度表达,平均表达率为42%,且随着Treg的活化其表达HVEM上调;CD160在初始CD4+CD25-T细胞表面呈低度表达,平均表达率仅7%,但伴随其活化,表达CD160有所上调。采用不同浓度HSV1gD蛋白处理Treg后2.5μg/ml与5μg/ml浓度组抑制CD4+CD25-T细胞增殖作用与空白对照组(276±35)相比明显下降,CPM值分别为(2 014±202)、(6 535±531),差异具有统计学意义(P<0.05),且具有浓度依赖性;RT-PCR分析发现Treg经5μg/ml gD蛋白处理后Foxp3基因表达率下降,仅为空白对照组的48%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论机体接受免疫刺激后Treg通过上调HVEM表达与CD4+CD25-效应性T细胞(ef-fective Tcell,Teff)表面上调表达的受体CD160交联从而上调Treg Foxp3基因的表达,最终介导了Treg对Teff活化、增殖的抑制作用,HVEM-CD160通路对Treg免疫调节作用具有重要意义。

活动性结核病患者自然杀伤(NK)细胞CD160的表达及其与细胞功能的关系

目的分析外周血单个核细胞(PBMC)中CD160 mRNA和蛋白的表达与结核病免疫的关系。方法使用荧光定量PCR检测PBMC中CD160 mRNA的表达,流式细胞术分析PBMC中主要细胞群(T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞和单核细胞)表面CD160蛋白表达情况,使用流式细胞术分析NK细胞中CD160与穿孔素(perforin)、颗粒酶B(granzyme B)、颗粒溶素(granulysin)、CD69、CD107和γ干扰素(IFN-γ)的关系。结果活动性肺结核患者PBMC中CD160 mRNA表达显著性下调,且结核分枝杆菌(MTB)阳性患者显著低于MTB阴性患者;B细胞和单核细胞表面CD160表达比例低;CD3^(+)T细胞表面CD160表达在活动性肺结核患者和正常对照者之间差异不明显;活动性肺结核患者NK细胞表面CD160表达显著低于正常对照者;NK细胞与MTB抗原体外培养可下调NK细胞表面CD160的表达;活动性肺结核患者NK细胞表面活化标志CD69表达显著低于正常对照者;CD160^(+)NK细胞的perforin、granzyme B、granulysin、CD69和CD107表达都显著高于CD160^(-)NK细胞;但是CD160^(+)NK细胞的IFN-γ表达显著低于CD160^(-)NK细胞。结论活动性肺结核患者CD160 mRNA和蛋白表达显著下调,CD160促进NK细胞与结核抗原相关的活化和脱颗粒,抑制NK细胞的IFN-γ的表达,CD160可能成为结核病诊治的新靶标。

HIV感染无症状者外周血中HIV特异性T细胞及其亚群表达CD160情况的研究

目的 探讨HIV感染无症状者外周血中CD160在HIV特异性T细胞及其各亚群中的表达情况.方法 采集2014年6月至2015年11月于解放军第302医院就诊的43例未经抗病毒治疗的HIV感染无症状者和18例健康者的外周血,分离外周血单个核细胞,用免疫荧光染色法标记CD160后,以流式细胞仪检测其在HIV特异性T细胞及其各亚群（Tn、Tcm、Tem和Teff）细胞上的表达情况.结果 HIV感染无症状者外周血中,CD160在总体HIV特异性CD4 ＋T细胞和CD8＋T细胞中表达的频数和MFI均较健康对照组高（P＜0.01）;HIV特异性CD4＋T细胞的各亚群中,CD160在CD4＋ Tn细胞中MFI,CD4＋ Teff细胞中频数和MFI显著升高（P＜0.01）;HIV特异性CD8＋T细胞的各亚群中,CD8＋ Tn细胞、CD8 ＋Tcm细胞及CD8＋ Tem细胞表达CD160的频数和MFI均显著升高（P＜0.01）.结论 慢性HIV感染可导致HIV特异性T细胞及其不同亚群中CD160高表达,引起细胞免疫功能紊乱,可能进而损伤了对HIV病毒的控制能力.

CD160的表达与荷瘤小鼠CD8＋T细胞免疫活性的关系

目的 探讨CD160分子在荷瘤小鼠CD8＋T淋巴细胞上的表达及其对CD8＋T细胞活性和免疫功能的影响.方法 C57BL/6小鼠接种TC-1宫颈癌细胞建立小鼠荷瘤模型,免疫磁珠分选小鼠脾脏细胞获得CD8＋T细胞,流式细胞术检测CD160在CD8＋T细胞上的表达;流式细胞仪（FACS）分选CD8＋T细胞获得CD160＋ CD8＋T细胞群和CD160-CD8＋T细胞群,将两群细胞分别与肿瘤细胞抗原肽热休克蛋白70 （HSP70）-TC-1复合物和去除CD8＋T的脾细胞混合,两群混合细胞各分为两组,其中一组同时加入CD160高亲和力配体单纯疱疹病毒侵入介导子（HVEM）的抗体,刺激培养6d,羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标记法检测CD8＋T细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞胞内穿孔素和γ-干扰素（IFN-γ）的表达.结果 荷瘤3周,小鼠CD8＋T细胞上CD160分子的阳性率为（18.050 ±7.944）％,显著高于对照小鼠的阳性率[（8.663 ±3.921）％,P＜0.01];刺激培养后,CD160＋ CD8＋T细胞群中增殖细胞比例为（3.425 ±2.352）％,显著低于CD160-CD8＋T细胞群的（15.440±6.673）％ （P＜0.01）,抗HVEM抗体阻断CD160与HVEM的相互作用后,CD160＋ CD8＋T细胞群中增殖细胞比例显著增高达到（12.000 ±5.286）％ （P ＜0.01）;同时,CD160＋CD8＋T细胞群中表达穿孔素和IFN-γ的阳性细胞率分别为（5.263±2.752）％和（4.150±2.499）％,显著低于CD160-CD8＋T细胞群的（17.600±7.203）％和（11.480 ±4.790）％ （P＜0.01）,抗HVEM抗体的作用使CD160＋ CD8＋T细胞群中表达穿孔素和IFN-γ的阳性细胞率显著增高,分别达到（12.380±4.922）％和（11.280 ±4.037）％ （P ＜0.01）.结论 CD160在荷瘤小鼠的脾CD8＋T细胞上表达升高且与其免疫活性功能的下降有关;阻断CD160和HVEM的相互作用,部分逆转了CD8＋T细胞的免疫活性的抑制.

可溶性CD160分子对荷瘤小鼠CD4＋T细胞免疫活性的调节作用

目的观察CDl60胞外段（即可溶性CD160分子）对荷瘤小鼠CD4＋T淋巴细胞的活悱和饱疫功能的影响。方法构建小鼠CD160分子胞外段（sCD160）的重组表达载体psCDl60，转让『j1Ij4仓鼠卵巢（CHO）细胞，Westernblot检测培养上清中的sCDl60水平。建立TC-1宫颈癌细胞简蜊小鼠模型，流式细胞术（FCM）检测CDl60存脾CD4＋T细胞上的表达；免疫磁珠分选荷瘤3周小鼠脾CD4＋T细胞，与负载肿瘤细胞抗原肽复合物的树突状细胞（DC）共培养6d，FCM检测CD4＋T细胞tCDl60的表达。负载抗原肽复合物的DC分别在转染pcDNA3．1或psCDl60的CHO培养卜清中孵育18h后，与分选的CD4＋T细胞共培养6d，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标i0法枪测CD4＋T细胞增殖，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测培养上清中白细胞介素-2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-1）的浓度。结果转染psCDl60的CHO细胞表达并分泌可溶性CDl60分子。荷瘤3删小鼠CD4＋T细胞上CDl60分子的阳性率与对照组比较差异无统计学意义[（5．288±2．723）％比（3．213±1．461）％，P〉0．05]，在体外被负载特异性抗原肽复合物的DC再活化后，其CD160阳性著增高达（17．590±7．287）％（P〈0．05）。与未经sCD160作用的DC组相比，经sCD160封闭的负载特异性抗原肽复合物的DC再活化的CD4＋T细胞中增殖细胞百分数[（17．980±5．337）％比（12．610±4．431）％，P〈0．05]、上清巾的IL-2和IFN-γ浓度[（383．9±83．67）ng／L比（237．5±54．64）ng／L，（730．8±135．8）ng／L比（451．9±149．5）ng／L，P〈0．05]均显著升高。结论肿瘤特异性CD4＋T细胞在体外冉活化后CD160的表达升高，可溶性CD160阻断其作用可有效增强CD4＋T细胞增殖和细胞因子分泌的活性。

人CD160基因转染细胞株的建立及其生物学特性的研究

目的克隆人CD160基因,并构建含有该目的基因的pIRES2-EGFP重组质粒载体,获得稳定表达CD160分子的基因转染细胞。方法从人外周血cDNA文库中扩增CD160的基因,另以VSIG4基因的cDNA为模板扩增跨膜区基因片段,将它们一并装入pIRES2-EGFP质粒载体中,脂质体法共转染L929细胞,用G418筛选出能稳定表达CD160分子的L929细胞株。结果成功克隆出了CD160的基因,构建了pIRES2-EGFP/CD160TMV质粒载体,并建立了稳定表达人CD160分子的L929转基因细胞株,该转基因细胞能结合L929/HVEM转基因细胞,证明其功能性。结论构建了含人CD160基因的重组pIRES2-EGFP质粒载体和建立稳定表达人CD160分子的细胞株,为CD160分子的后续研究奠定基础。

甲型流感病毒感染者CD160^+CD8^+T淋巴细胞亚群分析

目的研究甲型流感病毒(IAV)感染者外周血中CD160^+CD8^+T淋巴细胞亚群的特征。方法收集2018年12月至2019年3月流感季就诊于北京大学地坛医院教学医院感染二科IAV感染者共37例及同期体检的健康对照者51例,应用多色流式细胞检测平台,检测外周血不同分化阶段CD160^+CD8^+T淋巴细胞的比例。结果与健康对照相比,IAV感染者外周血T细胞中CD160^+CD8^+T细胞比例下降[24.50%(14.70%,44.10%)vs.8.85%(5.14%,18.15%)],差异有统计学意义(U=326.00、P<0.001)。IAV感染者与健康对照相比,其CD8^+T中初始T细胞(TN)[3.88%(1.28%,9.48%)vs.0.22%(0.12%,0.60%)]、中央记忆性T细胞(TCM)[8.70%(4.43%,15.80%)vs.1.51%(0.69%,2.54%)]、效应记忆性T细胞(TEM)[22.30%(13.80%,30.40%)vs.7.71%(5.23%,16.25%)]和终末效应记忆T细胞(TEMRA)[(46.99±22.91)%vs.(21.60±13.38)%]4个亚群中CD160^+细胞的比例均下降,差异有统计学意义(U=238.50、81.50、412.00,t=6.03;P均<0.001)。IAV感染者出院时较入院时CD160^+CD8^+T细胞比例上升[(8.92±7.84)%vs.(16.40±9.43)%](t=4.09、P=0.001),但仍低于正常水平[24.50%(14.70%,44.10%)vs.(16.40±9.43)%],差异有统计学意义(U=209.50、P=0.0029)。结论甲型流感病毒感染者外周血中T淋巴细胞CD160^+CD8^+T细胞亚群比例显著降低,可能是免疫失衡的重要表现。

慢性HIV感染者流式细胞仪检测外周血CD160的表达及其意义

目的:探讨慢性HIV感染者外周血T和B淋巴细胞上CD160的表达特征及与疾病严重程度的相关性。方法:采用流式细胞仪检测81例慢性HIV感染者[33例长期无进展者(LTN)、25例典型进展者(TP)和23例艾滋病者(AIDS)]及35例健康对照者(NC)的T和B淋巴细胞上CD160的表达比例及平均荧光强度,分析其与疾病进展的相关性。结果:LTN和TP患者及NC组外周血CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T及B淋巴细胞上CD160的表达比率和平均荧光强度均明显低于AIDS患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。HIV感染者B细胞(r=-0.403,P=0.002)、CD3+T细胞(r=-0.572,P<0.001)、CD4^(+)T细胞(r=-0.564,P<0.001)及CD8^(+)T细胞(r=-0.600,P<0.001)上CD160分子表达量均与HIV RNA载量呈显著负相关。结论:AIDS患者中B和T细胞上CD160分子表达量明显增加,与HIV RNA水平呈负相关。

共信号分子CD160的结构功能、信号网络及其在人类疾病中作用的研究新进展

糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的跨膜糖蛋白CD160作为免疫球蛋白超家族(IgSF)成员,可通过与自然杀伤(NK)细胞和T细胞作用影响机体免疫功能。根据是否存在免疫球蛋白(Ig)结构域和细胞膜表面锚定方式的差异,CD160分子可被分为4种异构体。CD160与其配体疱疹病毒进入介质(HVEM)形成的CD160-HVEM复合体是IgSF和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)间直接相互作用的特例,并且根据靶细胞的不同,CD160-HVEM复合体可产生共刺激或共抑制信号,从而调控免疫应答。HVEM作为一个信号分子开关,与不同信号通路相互作用,形成HVEM网络,在免疫应答中发挥重要作用。现有研究结果表明,CD160在多种恶性肿瘤、慢性病毒感染性疾病、自身免疫性疾病、实体器官移植后宿主抗移植物反应等疾病中均发挥作用。笔者对CD160的结构及特点、CD160异构体、CD160-HVEM复合体、HVEM网络,以及CD160在人类疾病中作用的研究新进展进行阐述。

小鼠抗人CD160分子单克隆抗体制备及其生物学功能初步分析

CD160分子是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白,是免疫超家族新成员,与其特异性配体HVEM分子结合所提供的共刺激信号在T细胞的增殖,活化,细胞因子产生和B细胞增殖,活化,分泌抗体产生等方面发挥着重要的调节作用。目前,市面上效果较好的IgG亚型的CD160抗体并不多,通过常规的基因克隆技术,基因重组技术,小鼠免疫技术以及经典的B淋巴细胞杂交瘤技术,获得能持续稳定分泌特异性鼠抗人CD160分子的IgG亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用westen blot和竞争结合抑制实验,对获得的杂交瘤细胞进行生物特性方面的鉴定;采用间接免疫荧光法和流式细胞术分析CD160在健康人PBMC中T细胞表面的表达;T细胞增殖实验表明,此株单抗对于T细胞的体外增殖具有抑制作用。为进一步研究CD160分子的生物学效应提供了新的工具。