Graves病不同阶段病程中CD3^-CD19^+B细胞含量变化

目的探讨CD3-CD19+在Graves病(GD)各阶段病程中的含量变化及临床意义。方法采用流式细胞术检测GD未治疗组(初发组)、甲状腺缓解组、完全缓解组、复发组及正常对照组CD3-CD19+比值,将各组结果进行统计学分析。结果初发组结果明显高于正常对照组、缓解组、完全缓解组及复发组,差异有统计学意义(P分别为0.002、0.023、0.002、0.026),其余各组别比较虽有差异,但没有统计学意义。结论 CD3-CD19+的结果与GD整个病程的免疫反应相一致,体液免疫反应在GD病程中都起到很重要的作用,CD3-CD19+结果对GD各阶段病程的诊断、治疗及预后有临床意义。

抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。

双功能抗体抗CD3／抗CD19介导T细胞对靶细胞的杀伤作用

背景与目的:双功能抗体有2个抗原结合臂,一方面具有肿瘤相关抗原,另一方面具有和免疫效应细胞表面分子标记结合的能力,并能有效地使效应细胞靶向杀灭肿瘤细胞的作用。本实验探讨抗CD3/抗CD19双功能抗体介导T细胞杀伤靶细胞的作用。方法:利用非放射性荧光染料Calcein-AM进行抗体介导的体外特异性杀伤活性检测,Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞作为效应细胞。首先以Raji细胞为靶细胞,按不同效靶比,不同抗体浓度分组,以PBS、抗CD3scFv+、抗CD3scFv抗体及非相关抗体抗CD3/抗PGP为对照,另设CD19-K562细胞为非相关靶细胞组,比较双功能抗体介导特异性体外杀伤活性。取上述杀伤实验效靶比25∶1,抗体浓度500 ng/mL各组,ELISA法比较激活的T细胞分泌IL-2的量,Real-time PCR法检测T细胞因子IL-3、IFN-γ、TNF-α激活后的表达变化。结果:体外介导T细胞杀伤靶细胞Raji的效果比对照组明显增强(P<0.05),激活T细胞分泌IL-2、IL-3、IFN-γ及TNF-α的表达均明显高于对照组。结论:双功能抗体抗CD3/抗CD19在体外介导T细胞对靶细胞具有较强的杀伤作用。

小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3^- CD19^+ B细胞表达的差异

目的:探索小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3-CD19+B细胞是否存在差异。方法:选取肺癌晚期患者共65例,其中包括小细胞肺癌14例,非小细胞肺癌51例以及20例健康对照。用流式细胞仪检测研究对象外周血淋巴细胞表面CD3-CD19+的表达情况。结果:非小细胞肺癌晚期的患者较健康对照CD3-CD19+B细胞的百分比显著降低;小细胞肺癌晚期的患者较健康对照CD3-CD19+B细胞的百分比无显著性差异;非小细胞肺癌和小细胞肺癌晚期患者CD3-CD19+B细胞的百分比无显著性差异。结论:非小细胞肺癌晚期患者CD3-CD19+B细胞的百分比降低,体液免疫在细胞免疫严重受损时也削弱,但具体机制有待进一步的研究。

Tandab(CD3/CD19)与CD19^+、CD3^+血液病细胞结合力及对PBMC的CD19^+血液病细胞杀伤力观察

目的观察串联四价双特异性抗体Tandab(CD3/CD19)与CD19^+、CD3^+血液病细胞结合力及对外周血单个核细胞(PBMC)的CD19^+血液病细胞杀伤力。方法采用PCR、overlap PCR、酶切、连接等方法构建慢病毒表达载体p LentiR.SV40-Tandab(CD3/CD19),用p LentiR.SV40-Tandab(CD3/CD19)瞬时转染293T细胞,提取并纯化Tandab(CD3/CD19)。采用FACS法检测Tandab(CD3/CD19)与CD19^+(Raji、Daudi、BJAB)、CD3^+(Jurkat)血液病细胞的直接结合力,检测Tandab(CD3/CD19)和抗CD19单克隆抗体HIT19a(或抗CD3单克隆抗体HIT3a)对CD19^+、CD3^+血液病细胞的竞争结合力。采用乳酸脱氢酶释放法观察Tandab(CD3/CD19)对外周血单个核细胞(PBMC)CD19^+血液病细胞杀伤力(以细胞毒性百分比表示)的影响。结果 Tandab(CD3/CD19)可与Raji、Daudi、BJAB、Jurkat直接结合,也可与HIT19a(或HIT3a)竞争性结合Raji、Daudi、BJAB、Jurkat。随Tandab(CD3/CD19)浓度增加,PBMC细胞对Raji、Daudi、BJAB细胞的细胞毒性百分比增加,呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论 Tandab(CD3/CD19)与CD19^+、CD3^+血液病细胞具有直接结合力和竞争结合力,并可促进PBMC对CD19^+血液病细胞的杀伤力。

融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)介导的T细胞对B细胞淋巴瘤细胞杀伤作用观察

目的观察融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)介导的T细胞对人B细胞淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法采用常规酶切、连接等分子克隆方法构建慢病毒表达载体pLentiR.SV40-Tandab(CD3/CD19/4-1BBL),将其瞬时转染至293T细胞,收集培养上清并纯化融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)。采用流式细胞术分析Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)与CD19^(+)细胞(Raji细胞)、CD3^(+)细胞(人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat)、4-1BB^(+)细胞(Jurkat细胞)的结合活性。收集Raji细胞,按照效靶比20∶1加入T细胞,分别加入0.08、0.8、8 pmol/mL的Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)、Tandab(CD3/CD19)、4-1BBL,采用LDH释放实验测算T细胞对Raji细胞的杀伤效率,采用ELISA法检测8 pmol/mL融合蛋白作用后细胞培养液上清中的IL-2、采用流式细胞术检测CD3^(+)CD69^(+)细胞、CD3^(+)CD25^(+)细胞比例。结果pLentiR.SV40-Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)构建成功,表达的融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)可与CD19^(+)、CD3^(+)、4-1BB^(+)细胞结合。Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)组、Tandab(CD3/CD19)组T细胞对Raji细胞杀伤百分比均高于4-1BBL组(P均<0.01)。在效靶比一定时,随着融合蛋白Tandab浓度增高,T细胞对Raji细胞的杀伤百分比逐渐增高(P均<0.01)。Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)组、Tandab(CD3/CD19)组、4-1BBL组细胞培养液上清中的IL-2水平均高于PBS组(P均<0.05)。Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)组、Tandab(CD3/CD19)组CD3^(+)CD69^(+)细胞、CD3^(+)CD25^(+)细胞比例高于4-1BBL组、PBS组(P均<0.01)。结论融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)可有效介导T细胞对B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。

博纳吐单抗治疗成人复发/难治Ph阴性急性B淋巴细胞白血病临床研究

目的:探讨CD19/CD3双抗体博纳吐单抗(blinatumomab)治疗成人难治和复发性Ph阴性急性B淋巴细胞白血病(RR-B-ALL)的疗效及安全性。方法:共10例成人R/R B-ALL患者接受博纳吐单抗治疗,每治疗周期用药28 d,停14 d。第1个周期的d 1-7 d剂量为9μg/d,如无不良反应,d 8-28剂量为28μg/d。从第2个周期开始,每日剂量均为28μg。观察治疗后白血病缓解情况、生存期(EFS和OS)及不良反应。结果:可评价疗效患者9例,4例在1个疗程后获得CR,1例在2个疗程后获CR,总缓解率为55.6%(5/9例),中位EFS为4(1-12)个月,中位OS为6(2-44)个月。10例患者中9例出现不同程度的发热;血清IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ等细胞因子水平发现不同程度升高;2例患者分别因神经毒性和CRS中断治疗1周后恢复用药;1例患者因3级CRS停药并死于热带念珠菌血症。结论:博纳吐单抗用于治疗复发/难治性B-ALL患者获得较好的缓解率,但缓解期维持时间较短。药物相关不良反应主要为CRS和神经毒性,细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ可以作为监测CRS的指标。该双特异性单克隆抗体为R/R-ALL患者异基因造血干细胞移植提供了机会。

CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞和CD19＋B细胞在急性呼吸窘迫综合征发病中的作用

目的 探讨CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞在急性呼吸窘迫综合征（acuterespiratory distress syndrome，ARDS） 发病中的作用。方法 根据2012 年柏林定义的ARDS 的诊断标准，入选2016 年1 月至2017 年1 月宝鸡市中心医院重症医学科ARDS 患者34 例作为研究对象 （ARDS 组），选择同期健康体检者22 例为对照组，收集资料并进行跟踪随访。收集确诊ARDS 患者第1 天的临床资料，根据2012 年柏林定义分为中度组（20 例）和重度组（14 例），随访28 d 根据预后情况分存活组（20 例）和死亡组（14 例）。在患者确诊ARDS 第1 天, 清晨空腹抽外周静脉血3 mL，对照组抽空腹外周静脉血3 mL, 用流式细胞技术检测患者及和健康对照组血清CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞水平，将ARDS 组与健康对照组的CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞水平进行比较；将中度组和重度组的CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞 水平进行比较；将存活组和死亡组的CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞水平进行比较；采用多变量logistic 回归分析ARDS 预后的危险因素, 通过ROC 曲线分析预后指标。结果 确诊ARDS 第1 天，存活组和死亡组在乳酸、血清前白蛋白比较，差异有统计学意义（P〈0.05）；早 期ARDS 患者外周静脉血清CD3＋、CD4＋T 细胞和CD19＋B 明显低于健康对照组, 差异有统计学意义（P〈0.05）,CD8＋ 与健康组比较，差异无统计学意义（P〉0.05） ；中度组患者外周静脉血清CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 水平明显高于重度组，差异有统计学意义（P〈0.05）；存活组患者 CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞水平明显高于死亡组，差异有统计学意义（P〈0.05）；Logistic 回归分析显示， 早期CD19＋B 细胞水平（OR=0.614, 95%CI ：0.416～0.907, P=0.014） 是ARDS 预后的危险因素。入院24 h 内CD19＋B 细胞水平ROC 曲线下面积为0.907，28 d 存活预测最佳临界值为12.59%。结论 早期ARDS 患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T 细胞和CD19＋B 细胞水平有助于评估ARDS 严重程度和预测其预后，CD19＋B 细胞更有助于评估ARDS 严重程度和预测其预后。

二硫键稳定的抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的表达及活性测定

构建了抗CD3/抗CD19(Diabody)微型双功能抗体,并且为增强其稳定性进一步改造为二硫键稳定的抗CD3/抗CD19(ds-Diabody)微型双功能抗体,表达并纯化后测定其生物学活性。构建二硫键稳定的抗CD3/抗CD19表达载体p AYZds CD3CD19,转化感受态大肠杆菌16C9进行原核表达,分离纯化后,经12%SDS-PAGE及Westen-blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测ds-Diabody与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞的结合活性。改造后的ds-Diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达,ds-Diabody在非还原性SDS-PAGE中,在45 k处可见一条带,Westen-blot在同一位置显示有带,在还原性SDSPAGE中45 k处条带消失,在28 k和26 k各有一条带,Western-blot在28 k显示有带,这些均与理论相符,45 k为二硫键稳定的二聚体,在还原剂巯基乙醇作用下二硫键断开,形成28 k和26 k的2条带。FACS检测ds-Diabody可与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制单抗HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合。说明改造后的二硫键稳定的抗CD3/抗CD19双功能抗体既能在原核系统中进行可溶性表达,同时又保留了与细胞的结合活性。

四君子汤总多糖对免疫抑制小鼠肠道sIgA的影响及其机制研究

目的初步探讨四君子汤总多糖对小鼠肠道黏膜体液免疫功能的影响。方法取NIH小鼠随机分为正常对照组、模型组、四君子汤总多糖(SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(SJZFP)组,采用ELISA法检测小鼠小肠sIgA浓度,流式细胞(FCM)技术检测Peyer's结细胞表型,免疫组化法检测小鼠肠道TLR4的表达。结果模型组sIgA浓度小于正常对照组、SJZPS和SJZFP组,差异具有显著性(P<0.01);模型组CD19+细胞比例下降,与正常对照组比较,具有非常显著性差异(P<0.01),SJZPS和SJZFP组CD19+细胞比例上升,与模型组比较,具有非常显著性差异(P<0.01);模型组肠黏膜TLR4蛋白表达明显低于正常对照组,SJZPS和SJZFP组,具有非常显著性差异(P<0.01)。结论SJZPS和SJZFP可提高环磷酰胺抑制的体液免疫功能,具有肠道黏膜免疫调节作用。

淋巴细胞活化在系统性红斑狼疮发病中的意义

目的 : 探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血淋巴细胞HLA -DR以及植物凝集素 (PHA)刺激下的CD3+ CD4 + 、CD3+ CD8+ 、CD19+ 淋巴细胞的早期活化标志CD6 9的表达。方法 : 应用三色荧光标记流式细胞术检测活动期和非活动期SLE患者外周血CD3+ 、CD3+ CD4 + 、CD3+ CD8+ 淋巴细胞晚期活化标志HLA -DR以及在PHA刺激 4h后CD3+ CD4 + 、CD3+ CD8+ 、CD19+ 淋巴细胞的早期活化标志CD6 9的表达。结果 : ①PHA刺激 4小时后 ,活动期SLECD3+ CD4 + 、CD3+ CD8+ 细胞CD6 9的表达明显低于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;而非活动期SLE与正常对照组之间CD6 9表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。②PHA刺激前SLE活动组CD19+ 细胞表达CD6 9较正常对照组和SLE非活动期明显升高 (P <0 .0 5 ) ,PHA刺激 4小时后 ,活动期SLECD19+ 细胞表达CD6 9低于正常对照组和非活动期SLE ,存在显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,而非活动期SLE与正常对照组之间CD19+ CD6 9+ 表达无明显差异 (P >0 .0 5 )。③活动期SLECD3+ HLA -DR+细胞明显高于正常对照组 (P <0 .0 1)和非活动期SLE(P <0 .0 1) ,CD3+ CD4 + HLA -DR+ 细胞、CD3+ CD8+HLA -DR+ 细胞明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而非活动期SLE与正常对照组之间 ,HLA -DR表达无显著性差异 (P >0 .0

化疗及胸腺肽α1对恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响及意义的临床研究

目的探讨化疗及胸腺肽α1对恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响及意义。方法 130例恶性肿瘤患者在化疗前一周及化疗2周期后分别检测外周血T细胞亚群(CD_3^+、CD_4^-、CD_8^+)B细胞(CD_(19)^+)NK细胞(CD_3^-/CD_(16)^-CD_(56)^+),并比较化疗前后的变化,随后随机分为A、B两组,在其他治疗相同的前提下,A组给予胸腺肽α11.6mg QodIH,2～6个月,B组不用胸腺肽α1治疗,2月后两组均行细胞免疫功能(CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+、CD_(19)^+、CD_3/CD_(16)CD_(56)^+)测定。结果恶性肿瘤患者化疗后细胞免疫功能比较CD_3^+、CD_4^+细胞升高,CD_8^+细胞下降(P>0.05),CD_4^+/CD_8^+显著升高(P<0.05);A组与B组相比A组的CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+、CD_4^-/CD_8^+、NK细胞活性较治疗前显著提高(P<0.05),B组各项指标治疗前后无显著差异(P>0.05)。结论化疗不会完全破坏机体的免疫功能,而会使部分免疫功能提高及调整;胸腺肽α1可以提高肿瘤患者的细胞免疫功能,从而增强抑瘤作用。

儿童免疫性血小板减少症患者外周血B淋巴细胞亚群变化的研究

目的探讨儿童免疫性血小板减少症患者(immune thrombocytopenia,ITP)外周血中CD38,CD27,CD19表达阳性的B淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法选取2017年1月～12月中山大学孙逸仙纪念医院收治的初诊ITP患儿21例为初诊未治疗组(untreated ITP,U-ITP),完全缓解ITP患儿30例为完全缓解组(remission ITP,R-ITP)及同期健康体检儿童26例为健康对照组(normal control,NC),运用流式细胞术对其外周血B淋巴细胞亚群进行检测并与ITP患儿的PLT计数进行相关性分析。结果外周血总CD19^+B淋巴细胞比例:U-ITP组显著高于R-ITP组和NC组(F=7.543,P<0.01)。外周血CD19^+CD27^+CD38-记忆性B细胞占CD19^+B细胞百分率:U-ITP组显著高于R-ITP组和NC组(F=8.876,P<0.001)。CD19^+CD27-CD38-初始B细胞占CD19^+B细胞百分率:U-ITP组显著低于R-ITP组)和NC组(F=5.058,P<0.01)。CD19^+CD27^+CD38^+浆母细胞百分率:U-ITP组显著高于R-ITP组和NC组(F=9.588,P<0.001),而R-ITP组与NC组比较,B淋巴细胞各分群差异均无统计学意义(F=0.842～1.258,均P>0.05)。PLT计数与总CD19^+B细胞百分率呈负相关(r=-0.318,P=0.007),与CD19^+CD27^+CD38-记忆性B细胞百分率呈负相关(r=-0.444,P=0.000),与CD19^+CD27-CD38-初始B细胞百分率呈正相关(r=0.416,P=0.000),与CD19^+CD27^+CD38^+浆母细胞百分率呈负相关(r=-0.442,P=0.000)。结论 B淋巴细胞亚群在ITP患儿体内分布存在异常,其检测能够为ITP患儿临床疾病监测与判断预后提供重要的指导作用。

微型双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病细胞

目的:研究抗CD3/抗CD19微型双功能抗体介导人T细胞对白血病细胞的特异性靶向杀伤活性。方法:利用Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞,FACS检测T细胞表面标记CD25和CD69激活后的表达变化,实时定量PCR检测各组穿孔素(Perforin)和颗粒酶A(Granzyme A)的释放,建立BALB/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型,测定该双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果:激活的T细胞,双功能抗体组CD25和CD69的表达以及释放Perforin和Granzyme A的量均明显高于对照组,在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中,抗CD3/抗CD19微型双功能抗体能有效抑制白血病移植瘤的生长。结论:抗CD3/抗CD19微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤白血病细胞,具有潜在的临床应用前景。

外周血淋巴细胞亚群检测对儿童亚急性坏死性淋巴结炎的诊疗意义

目的探讨外周血淋巴细胞亚群检测对儿童亚急性坏死性淋巴结炎(CSNL)的诊疗意义。方法选取2013年1月至2016年12月河南省人民医院小儿外科及内科收治的CSNL患儿51例为CSNL组,同期选择门诊健康体检儿童30例为对照组。采用流式细胞技术检测两组受试对象外周血T淋巴细胞亚群百分率,并观察CSNL治疗效果。结果 51例CSNL患儿中,治愈38例,好转12例,无效1例。治疗前CSNL患儿CD3^+、CD4^+、CD19^+淋巴细胞亚群百分率和CD4^+/CD8^+均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。38例治愈患儿和12例好转患儿治疗中、后外周血CD3^+、CD4^+、CD19^+淋巴细胞亚群百分率和CD4^+/CD8^+显著高于治疗前,治疗后的指标又显著高于治疗中,差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞亚群CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+及CD19^+,可作为临床CSNL诊疗的重要评估指标。

小叶女贞对免疫功能损伤小鼠B淋巴细胞和NK细胞的影响

目的探讨小叶女贞对免疫功能损伤小鼠B淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。方法以环磷酰胺致免疫功能损伤小鼠为研究对象，将BALB／C实验小鼠60只按随机数字表法随机分为5组，每组12只，分别为生理盐水（NS）对照组、环磷酰胺（Cy）对照组、Cy＋小叶女贞水煎液小剂量组（小叶女贞小剂量组）、Cy＋小叶女贞水煎液大剂量组（小叶女贞大剂量组）、Cy＋女贞子水煎液组（女贞子组）。NS对照组给予生理盐水0．2ml／d皮下注射10d，其余各组给予环磷酰胺0．8ml／d皮下注射（20mg／kg·d^-1）10d，建立免疫功能损伤小鼠模型。自第11天起各组分别给予生理盐水、环磷酰胺、小叶女贞水煎液小剂量、小叶女贞水煎液大剂量、女贞子水煎液共7天处死。用流式细胞仪检测实验鼠外周血B淋巴细胞（CD3^-CD19^＋）和NK细胞（CD3^-CDl6^＋CD56^＋）的百分率。结果CD3^-CDl9’、CD3^-CDl6^＋CD56^＋细胞小叶女贞小剂量组[分别为（11．54±0．98）、（12．46±0．08）]，明显低于小叶女贞大剂量组[分别为（20．44±1．78）、（19．12±1．70）]、女贞子组[分别为（19．90±1．42）、（20．17±1．66）]，明显高于环磷酰胺组[分别为（4．53±1．70）、（5．03±1．22）]，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；与NS对照组[分别为（11．84±0．99）、（12．90±0．28）]比较无明显改变（P〉O．05）。结论小叶女贞能提高小鼠B淋巴细胞和NK细胞细胞的数量，使小鼠受损伤的免疫功能得到改善，对免疫功能的调节作用与剂量成正相关。

阿糖胞苷联合双功能抗体介导T细胞杀伤人急性B淋巴细胞白血病细胞体内外研究

目的:通过体内外实验探讨阿糖胞苷对抗CD3/抗CD19双功能抗体介导的T淋巴细胞杀伤人急性B淋巴细胞白血病(B acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞的协同作用。方法:采用流式细胞术检测经阿糖胞苷(0.062 5、0.125、0.25、0.5μmol/L)刺激的Nalm-6细胞(1×106)及5例B-ALL患者临床标本CD80和CD86分子的表达;Ficoll-Hypaque法分选健康志愿者外周血T淋巴细胞,以4×105 Nalm-6细胞(经过或未经Ara-C刺激)为靶细胞,建立T细胞体外杀伤实验并分组加入各种抗体(PBS、抗CD3/抗CD19双抗、抗CD3scFv、抗CD19scFv、抗CD3scFv+抗CD19scFv和抗CD3/抗Pgp双抗组),通过实时定量PCR测定各组激活的T细胞细胞因子IL-3、IFN-γ和TNF-α的表达,利用流式细胞术检测各组T细胞穿孔素和颗粒酶B的释放。以1×107 Nalm-6细胞建立NOD/SCID鼠移植瘤模型,依次注射阿糖胞苷,T细胞及各种或各浓度抗体,比较各组体内靶向杀伤效果。建立临床标本的动物模型,重复上述分组,并进一步验证双抗联合阿糖胞苷介导的体内杀伤效果。结果:Nalm-6经阿糖胞苷刺激后,细胞CD80的表达量MFI为13.25±3.93,0.062 5μmol/L为20.58±3.94,P=0.015;0.125μmol/L为38.6±5.37,P=0.011;0.25μmol/L为62.56±6.24,P=0.007;0.5μmol/L为75.04±4.42,P=0.005,呈浓度依赖性。抗CD3/抗CD19组T淋巴细胞穿孔素(MFI为10.61±2.43,P=0.024)和颗粒酶B(MFI为20.60±2.61,P=0.037)的释放较其余各实验组明显升高,Ara-C刺激Nalm-6细胞组,穿孔素(MFI为23.11±2.90,P=0.015)和颗粒酶B(MFI为31.71±3.08,P=0.008),较未经Ara-C刺激组表达量高。抗CD3/抗CD19组T淋巴细胞IL-3(100.60±8.32,P=0.017)、IFN-γ(67.60±7.41,P=0.025)和TNF-α(47.60±3.24,P=0.031)表达对照T细胞组明显升高,并且Ara-C刺激Nalm-6细胞组IL-3(132.55±5.56)、IFN-γ(109.60±6.50)和TNF-α(64.30±8.55)较未经Ara-C刺激组表达量更高,P值均<0.05。在NOD/SCID鼠移植瘤模型的生物治疗实验中,阿糖胞苷联合双功能抗体组抑制移植瘤的生长效果较对照组明显增强,P<0.05。5例临床标本阿糖胞苷刺激后有2例CD80表达上调,体内实验中该2例标本体内移植瘤生长受到明显抑制,P<0.05。结论:阿糖胞苷通过上调Nalm-6细胞和部分B-ALL患者临床标本共刺激分子CD80的表达,可有效激活T细胞,并增强双功能抗体介导T细胞体内杀伤细胞的作用。