CD_3^+CD_(56)^+NKT细胞及CD_3^-CD_(56)^+NK细胞在恶性肿瘤患者的临床意义研究

背景与目的细胞毒性淋巴细胞在抗肿瘤免疫效应中发挥着重要作用,CD3+CD56+NKT细胞作为一类新的具有细胞毒性的效应细胞,目前关于其抗肿瘤意义的探讨主要集中于血液系统恶性疾病,而在实体肿瘤中的应用和临床价值研究尚少。本研究旨在初步探讨抗肿瘤细胞CD3+CD56+NKT细胞及CD3-CD56+NK细胞在恶性肿瘤患者外周血的表达状态及其临床意义。方法采用流式细胞术分析118例恶性肿瘤患者(55例肺癌患者和63例乳腺癌患者)及46例健康对照组外周血中的T细胞亚群及CD3+CD56+NKT细胞、CD3-CD56+NK细胞表达。结果恶性肿瘤患者组CD3+CD8+T细胞、CD3+CD56+NKT细胞以及CD3-CD56+NK细胞表达率均明显高于健康对照组(P<0.01)。肺癌患者中以CD3+CD8+T细胞和CD3+CD56+NKT细胞明显增加为主;乳腺癌患者中以CD3+CD56+NKT细胞和CD3-CD56+NK细胞明显增加为主。结论CD3+CD56+NKT细胞在肺癌和乳腺癌患者的抗肿瘤效应中占据重要地位,而CD3+CD8+CTL和CD3-CD56+NK细胞在不同类型肿瘤患者中具有不同的重要性。

高纯度CD3^-CD56^+CD16^+NK细胞体外扩增技术的研究

本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p<0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p>0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p<0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(<1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。

CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化在急性胰腺炎严重程度预测中的作用

目的分析急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)发病早期CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数在AP严重程度预测中的作用。方法采用流式细胞仪荧光抗体标记法分别对164例AP患者的外周血单核细胞进行CD3、CD16、CD56荧光抗体标记,分析比较AP患者CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数情况,及其与AP严重程度的关系。用ROC曲线和AUC评价CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数对SAP的诊断价值。结果与正常对照组相比,MAP组、MSAP组和SAP组的CD3^-CD16^+CD56^+百分比和计数均显著下降,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CD3^-CD16^+CD56^+细胞百分比的AUC为0.86(95%CI:0.745~0.973),取值≤5.27%时,特异性为0.92,敏感性为0.79;CD3^-CD16^+CD56^+细胞计数的AUC为0.89(95%CI:0.808~0.961),取值≤0.056×109/L时特异性为0.90,敏感性为0.79。结论 CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和细胞计数对SAP早期诊断有一定的价值。

Graves病治疗前后CD3^-CD56^+的变化及临床意义

目的检测CD3-CD56+在Graves病治疗前后变化,探讨NK细胞在治疗过程中的变化及ADCC效应对Graves的影响或作用。方法选取正常对照组22例,Graves病初次发现且未治疗病人33例,抗甲状腺药物(ATD)治疗后缓解患者30例,完全缓解患者12例,及复发患者11例,用流式细胞术检测CD3-CD56+的比值。结果正常对照组结果为7.03±3.91,初发组结果为4.83±2.72,缓解组结果为5.12±3.19,完全缓解组结果为7.91±4.05,复发组结果为6.97±3.28;初发组及缓解组结果低于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.018,P=0.043),初发组结果明显高于完全缓解组,差异有统计学意义(P=0.007);缓解组结果低于完全缓解组,差异有统计学意义(P=0.016)。结论 Graves病CD3-CD56+低于正常,ADCC效应及NK细胞的其他免疫功能有可能受到损害或限制,破坏体内的免疫平衡或免疫功能紊乱。CD3-CD56+结果对Graves各阶段病程的诊断、治疗及预后有临床意义。

系统性红斑狼疮患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化的临床意义

分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化。94例SLE患者作为研究对象,另选取同期健康体检者50例为对照组。结果显示SLE组CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数和百分率均明显低于对照组(P<0.05);Pearson积差分析显示CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数与SLEDAI评分和24 h尿蛋白定量呈明显负相关性(P<0.05);以8.04%为临界值,CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数判断SLE活动性的灵敏度为57.78%,特异度为78.57%,AUC为0.677。实验表明SLE患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞表达明显减少,观察其表达水平变化可为判断病情活动度和肾功能损害提供参考依据。

外周血CD3^+CD56^+T细胞在恶性肿瘤患者中的表现及临床意义

目的了解 CD3+ CD5 6 + T细胞与 CD3- CD5 6 + 、CD3+ CD5 6 - 的关系及其在参与恶性肿瘤患者抗肿瘤免疫中的作用。方法采用流式细胞术对 10 0例恶性肿瘤患者 (5 5例实体瘤患者和 45例非实体瘤患者 )及 46例健康对照组外周血中的 CD3+ CD5 6 +、CD3- CD5 6 +、CD3+ CD5 6 - 3类淋巴细胞进行标记分析。结果在实体瘤和非实体瘤患者组中 :CD3+ CD5 6 + T细胞均有高表达 ,2组患者与健康对照组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。 CD3+ CD5 6 - T细胞在实体瘤组的表达都显著低于非实体瘤组和健康对照组 ,2组间比较均有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ;而 CD3- CD5 6 + NK细胞在 2患者组中的表达与健康对照组比较均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 CD3+ CD5 6 + T细胞在恶性肿瘤患者外周血中的高表达较 CD3- CD5 6 + NK细胞更明显 ,并且不受恶性肿瘤细胞类型的影响 ,提示高表达的 CD3+ CD5 6 +

人外周血Vα24 NKT细胞和CD3^+CD56^+CIK细胞生物学特性的比较研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24+Vβ11+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4+和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8+T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3+CD56+CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3+CD56+CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3+CD56+CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。

CD8^+CD28^-Ts、CD3^+CD56+NKT细胞在B细胞非霍奇金淋巴瘤患者外周血中分布的分析

背景及目的:目前认为B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)常伴随免疫抑制,CD8+CD28-Ts(Ts)细胞和CD3+CD56+NKT(NKT)是新鉴定的新型免疫抑制性调节细胞,在肿瘤的免疫抑制及免疫逃逸机制中起重要作用,但它们在B细胞淋巴瘤患者外周血的分布情况及其免疫抑制中的作用目前尚不清楚。本文通过分析两者在化疗前及化疗后B-NHL患者外周血中比例及变化规律,初步探讨它们在B-NHL的免疫抑制作用及其影响因素,为有效干预患者的免疫功能提供参考。方法:应用流式细胞仪检测79例治疗前的B-NHL患者、经4～6周期化疗后完全缓解(CR)的18例患者、30例健康志愿者外周静脉血中NKT及Ts细胞的比例。结果:在79例治疗前B-NHL患者的外周血中,Ts细胞比例为(18.19±5.03)%,较正常对照组(11.20±3.49)%明显增高(P<0.01);NKT的比例为(6.08±3.29)%,亦较正常对照组的(3.52±1.56)%明显增高(P<0.01)。Ts在不同临床分期的患者之间无显著性差异P>0.05;Ⅰ期为(17.56±4.10)%、Ⅱ期为(18.05±5.64)%、Ⅲ期为(18.14±5.58)%、Ⅳ期为(18.95±4.64)%;在不同恶性程度的患者之间亦无显著性差异P>0.05;低度恶性为(17.81±5.24)%、中度恶性为(18.37±4.83)%、高度恶性为(18.31±5.93)%;在治疗前(18.64±4.55)%和CR后(19.42±4.95)

CD_3^+ CD_(56)^+ NKT细胞在中晚期胃癌治疗中的临床疗效观察

目的:评估CD3+CD56+NK T细胞治疗73例中晚期胃癌的疗效及不良反应。方法:血细胞分离机采集患者外周血单个核细胞,加入细胞因子rhINF-γ、rhIL-2、rhIL-1及CD3McAb培养,10 d后定向诱导成CD3+CD56+NKT细胞,分次回输给患者,每疗程回输细胞总数为(5~10)×109个。治疗4 w后,用流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群状态及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应。结果:在73例接受治疗的患者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为37例(50.68%),稳定(SD)21例(28.76%),进展(PD)15例(20.54%);CD3、CD4、CD8T细胞的百分比在治疗后均较治疗前显著增高(P<0.05),且72.60%(53例)的患者CD4/CD8比例调整至正常;80.82%(59例)的患者治疗后Th1类细胞因子分泌增加,61.64%(45例)的患者Th1/Th2细胞因子比例恢复平衡;治疗后42例食欲增加,51例体力及睡眠改善,23例体重回升大于治疗前体重的5%;输注后的副反应包括寒颤、发热、呕吐、兴奋失眠、皮疹、疲乏,经对症处理后短时缓解,无1例出现毛细血管渗漏综合征(SCLS)及实质脏器的损害。结论:过继性CD3+CD56+NKT细胞输注治疗能显著调整中晚期胃癌患者的免疫功能,改善临床症状,是一种安全、有效的辅助治疗手段。

初诊恶性肿瘤患者外周血CD3^+ CD56^+ NKT样细胞的检测

目的:探讨初次诊断为恶性肿瘤患者的外周血CD3^+ CD56^+ T淋巴细胞(NKT样细胞)及T调节细胞(regulatory T cells,Treg)的比率并分析其意义。方法:用流式细胞仪检测健康体检者(A组)、非恶性肿瘤患者(B组)、初诊恶性肿瘤患者Ⅰ~Ⅱ期(C组)、初诊恶性肿瘤患者Ⅲ~Ⅳ期(D组)4组患者外周血中CD4^+ CD25^(high)CD127^(low)细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率(Treg细胞)及CD3~ +CD56^+细胞占CD3^+T淋巴细胞的百分率(NKT样细胞)。结果:A、B、C、D 4组患者外周血中Treg细胞分别为(6.72±3.16)%、(6.49±2.83)%、(6.80±3.07)%、(7.63±3.47)%,4组之间比较差异均无显著性(均P>0.05);A、B、C、D4组患者外周血中NKT样细胞分别为(3.13±1.66)%、(2.56±1.27)%、(7.22±2.70)%、(7.72±3.10)%,A、B两组患者的外周血NKT样细胞差异无显著性(P>0.05),C、D两组患者比A、B两组患者的外周血NKT样细胞明显升高(P<0.05)。结论:初次诊断为恶性肿瘤的患者外周血中NKT样细胞有明显升高的趋势。

异体手移植术后测定外周血CD3/HLA-DR及CD3/CD(16+56)的临床意义

为探讨手移植患者术后外周血CD3/HLA DR及CD3/CD( 16 +5 6 )的变化和意义 ,提取患者的外周血细胞 ,加入双荧光标记的鼠抗人单克隆抗体CD3/CD ( 16 +5 6 )、CD3/HLA DR ,单荧光标记的鼠抗人单克隆抗体CD2 5 ,流式细胞分析仪测定。结果发现 ,术后 1周内活化T细胞 (CD2 5 + ,CD3+ /HLA DR+ )和静止性T细胞[CD3+ /CD( 16 +5 6 ) -,CD3+ /HLA DA-]明显下降 ,1周后均逐渐恢复至术前水平 ;NK细胞 [CD3-/CD( 16 +5 6 ) + ]术后 1天内显著升高 ,但第 2天直线下降并维持在低水平。提示免疫抑制剂对移植术后的淋巴细胞亚群有明显的影响 ,术后动态测定CD3/HLA DR及CD3/CD( 16 +5 6 )可为异体手移植的免疫学监测提供参考。

NKG2D在口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞中的作用

目的:探讨口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D受体抗肿瘤免疫的调节作用。方法:分别从30例口腔鳞癌患者和30例正常人外周血中提取CD3(+)CD56(+)NKT细胞,实时定量PCR和Western印迹分析NKG2D在分子水平和蛋白水平的表达差异。通过siRNA-NKG2D转染方法,分析NKG2D受体对CD3(+)CD56(+)NKT细胞的细胞毒性,分泌IL-2和IFN-μ的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行t检验和方差分析。结果:口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D的表达显著低于正常人(P<0.05);转染siRNA-NKG2D的CD3(+)CD56(+)NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用显著降低。结论:与正常人相比,口腔鳞癌患者中CD3(+)CD56(+)NKT细胞因NKG2D表达下降,其肿瘤免疫调控作用受到影响。这些发现为NKG2D应用于口腔鳞癌的免疫治疗奠定了基础。

CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞及其细胞因子在Graves病患者体内的表达

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞(NKT细胞)及其细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]在毒性弥漫性甲状腺肿[Graves病(GD)]患者体内的表达情况。方法选择19例GD患者作为实验组,另选择19例健康志愿者作为对照组。检测并比较两组甲状腺功能指标[血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、IL-6、TNF-α及NKT细胞水平,IL-2、IL-10阳性率,探讨FT4、TSH、TPOAb与NKT细胞及细胞因子的相关性。结果实验组FT3、FT4、TPOAb、TNF-α和NKT细胞水平均高于对照组,TSH和IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组IL-2和IL-10阳性率分别为89.47%、100.00%,均高于对照组的0、0,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-2、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平与FT4、TSH和TPOAb水平密切相关,IL-6水平与TSH水平密切相关(P<0.05)。以TSH水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TSH水平呈负相关(P<0.05)。以TPOAb水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α和NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TPOAb水平呈负相关(P<0.05)。结论GD患者外周血NKT细胞水平增加,其相关的细胞因子在GD发病中具有重要意义。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在急性白血病患者体内表达的研究

目的探讨CD3+CD56+NKT样细胞在急性白血病患者治疗前后体内的表达情况。方法分别取急性白血病(急性髓系白血病43例,急性淋巴细胞白血病12例,急性混合细胞白血病5例)及非恶性肿瘤(10例)患者骨髓血2ml送流式细胞仪检测,比较白血病患者治疗前后及非恶性肿瘤患者体内CD3+CD56+NKT样细胞的表达情况。结果急性白血病患者初治组与非恶性肿瘤患者对照组间比较,急性白血病患者骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比对照组低(P<0.01);急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比治疗前高(P<0.01),且与缓解程度及时间呈正相关;急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例与非恶性肿瘤对照组比较无统计学意义(P>0.05);不同类型白血病之间,急性早幼粒细胞白血病治疗后CD3+CD56+NKT样细胞比例明显较其他类型高(P<0.05),急性髓系白血病(除M3外)与急性淋巴细胞白血病之间比较CD3+CD56+NKT样细胞比值结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论急性白血病患者CD3+CD56+NKT样细胞反映了机体的免疫功能,化疗后CD3+CD56+NKT样细胞明显增多可能是预后较好的标志之一。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在胃癌患者外周血中的检测及其功能下降的机制

目的分析CD3^+CD56^+NKT细胞在胃癌患者外周血中的应答水平和功能特征,并初步探讨其功能下降的机制。方法采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例及其功能,同时采用胃癌患者外周血浆刺激单个核细胞并加入抗体阻断,探讨外周血中细胞因子对CD3^+CD56^+NKT样细胞功能的影响,最后分析其功能变化与疾病进展的关联性。结果与正常对照组和胃溃疡患者组相比,胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例无统计学差异;但其表达的INF-γ和TNF-α水平显著下降(P<0.05);体外刺激实验显示,胃癌患者外周血来源的TGF-β1可抑制CD3^+CD56^+NKT样细胞分泌INF-γ和TNF-α(P<0.05);晚期胃癌患者外周血中表达INF-γ和TNF-α的CD3^+CD56^+NKT样细胞水平显著低于早期胃癌患者(P<0.05)。结论胃癌患者外周血中的TGF-β1抑制了CD3^+CD56^+NKT样细胞的抗肿瘤功能,从而导致了胃癌的进展。

Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平对儿童肺炎支原体肺炎病情及预后的评估价值

目的探讨Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平对儿童肺炎支原体肺炎病情及预后的评估价值。方法以2019年2月至2021年2月在该院进行治疗的80例肺炎支原体肺炎患儿作为观察组,另选取同期健康儿童40例作为对照组,比较两组研究对象,以及不同严重程度、激素治疗与非激素治疗、不同预后患儿的Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平对儿童肺炎支原体肺炎预后的预测价值。结果观察组的Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平明显高于对照组,轻度患儿的Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平明显低于重度患儿,预后良好患儿的Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平明显低于预后不良患儿,非激素治疗患儿的Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平明显高于激素治疗患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT联合检测预测不良预后患儿的曲线下面积明显大于单独检测的AUC(P<0.05),Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT的cut-off值分别为1.33%、36.91%。结论Th17/Treg、CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞水平对儿童肺炎支原体肺炎的病情评估具有重要意义,也可作为临床判断患者预后的重要依据。

固相MICA协同s4-1BBL、IL-15体外高效扩增CD3^+CD56^+细胞的研究

目的:观察固相MHCⅠ类相关抗原A(iMICA)是否协同s4-1BBL、IL-15促进外周血CD3+CD56+细胞的增殖并增强其活性。方法:首先将iMICA联合s4-1BBL、IL-15分别刺激外周血单个核细胞或纯化的CD3+CD56+细胞,共培养19天,动态观察CD3+CD56+细胞频率变化及记录其增殖曲线;其次利用LDH释放法和ELISA分别检测长期培养的CD3+CD56+细胞杀伤活性及IFNγ-、IL-4的分泌;最后检测CD3+CD56+细胞表面活性相关受体的表达。结果:iMICA联合s4-1BBL、IL-15促进CD3+CD56+细胞的频率自2%升高至21.7%,绝对细胞数平均增长32倍;扩增后的CD3+CD56+细胞杀伤K562活性明显增高,IFNγ-分泌能力增强,不分泌IL-4;其表面活化性受体表达上调,抑制性受体表达下调。结论:iMICA联合s4-1BBL、IL-15能高效扩增CD3+CD56+细胞,体外大量增殖后可用于肿瘤的过继免疫治疗。

妊娠期Graves病患者体内CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达与妊娠结局的相关性研究

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病(grave disease,GD)患者体内的表达情况及其与妊娠结局的相关性。方法选取2018年10月至2021年3月东莞东华医院收治的53例妊娠期GD患者作为GD组,同期选取53例正常妊娠者作为对照组。依据随访结果将GD组分为正常结局组、流产组、产后出血组、低出生体重儿组4个亚组。采用流式细胞仪检测CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目。抽取外周静脉血检测2组甲状腺激素游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)的水平及甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)和促甲状腺素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)的滴度。比较GD组与对照组间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目与甲状腺激素、甲状腺激素抗体指标水平。分析GD组患者NKT细胞与甲状腺功能指标的相关性,GD组各亚组患者间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞数目差异,并分析细胞数目与妊娠结局的相关性。结果GD组患者外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平与外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。流产组、产后出血组、低出生体重儿组患者血清中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的平均数目均低于正常结局组,差异具有统计学意义(P<0.05);调控年龄、BMI等因素后,CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目仍然是流产等不良妊娠结局的独立危险因素。结论CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病患者体内表达降低,并与Graves病严重程度及不良妊娠结局具有一定的相关性,积极检测妊娠期Graves病患者CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达水平具有重要的临床应用价值。

探讨CRTh2、CysLT1R及H1R在支气管哮喘患者外周血CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞中的表达

目的:探讨Th2细胞趋化因子同源分子(chemoattractant receptor homologous molecule expressed on Th2 cells,CRTh2)、半胱氨酸白三烯受体1(cysteinyl leukotriene 1 receptor,CysLT1R)及组胺1型受体(histamine 1 receptor,H1R)在支气管哮喘(bronchial asthma,BA)患者外周血CD3^(+)CD56^(+)自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT)中的表达情况及临床意义。方法:收集2020年9月至2021年9月锦州医科大学附属医院BA患者(BA组,n=40)和健康对照组(healthy control,HC组,n=38)的外周血,流式细胞仪检测BA组和HC组外周血中CRTh2、CysLT1R及H1R在CD3^(+)CD56^(+)标记的NKT细胞上的表达,同时对其与血清总IgE(total immunoglobulin E,TIgE)、呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)及肺功能第一秒用力呼气量/用力肺活量%(forced expiratory volume in the first second/forced vital capacity%,FEV1/FVC%)的相关性分析。结果:BA组[22.50(15.78,29.20)]外周血CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞百分比较HC组[27.90(21.50,32.45)]降低(P=0.024);进一步比较BA组[70.05(63.20,78.45)]CD3^(+)淋巴细胞百分比低于HC组[73.70(69.88,79.38)](P=0.035)。BA组[0.08(0.05,0.17)]CysLT1R百分比较HC组[0.16(0.10,0.34)]降低(P=0.004);BA组CRTH2、H1R百分比[1.12(0.53,1.88);5.21(1.41,10.10)]与HC组[1.17(0.60,4.25);4.61(1.42,8.53)]比较,无统计学差异(P=0.234;P=0.697)。进一步对比CRTh2、H1R的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),BA组[925.52(623.50,1279.25)]CRTh2 MFI较HC组[1345.50(891.00,1977.75)]降低(P=0.002);BA组[769(657.50,975.00)]H1R MFI与HC组[835.00(560.00,959.25)]无统计学差异(P=0.834)。CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞与血清TIgE、FeNO无明显相关性(r=-0.052、r=0.014),与FEV1/FVC%水平呈正相关(r=0.402,P=0.01)。CRTH2(r=0.166、r=-0.040)、CysLT1R(r=0.114、r=-0.150)及H1R(r=0.103、r=-0.096)与血清TIgE、FeNO无明显相关性。结论:CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞可能在支气管哮喘发病过程中起重要作用,H1R在CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞上可能不表达,CRTh2与CysLT1R在BA患者CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞上表达减少可能会为临床精准诊疗提供依据。

外周血CD3^+CD45^+T细胞在原发性肝癌患者中的表达及意义

目的探讨原发性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)患者外周血中CD3+CD56+T细胞、CD3+CD56-T细胞、CD3-CD56+NK细胞在(HCC)细胞免疫中所发挥的作用。方法采用流式细胞技术对14例HCC患者及30例健康对照人群外周血中的CD3+CD56+T细胞、CD3+CD56-T细胞、CD3-CD56+NK细胞进行检测。结果14例HCC患者与30例正常对照组外周血测定结果比较发现:HCC患者外周血中CD3+CD56-明显降低,CD3+CD56+则明显升高,与正常对照组比较差异具有极显著性(P均小于0.005)。HCC患者CD3-CD56+(NK)较正常对照组下降,两组比较差异具有显著性(P小于0.05)。结论CD3+CD56+T细胞在HCC患者外周血中增生活跃,提示高表达的CD3+CD56+T细胞在肝癌免疫应答中具有重要意义。