LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)推定配体分布的研究

目的:研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据。方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系。以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达,并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点。结果:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达,在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达。LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合,可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR-2.2和FMU-LAIR-2.1阻断。结论:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致,主要表达于WISH、C32、293T和ECV304细胞系。LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体。

CD305分子在小鼠巨噬细胞的表达

目的:研究CD305分子在不同小鼠巨噬细胞上的表达规律。方法:对小鼠巨噬细胞系、免疫组织中的巨噬细胞和脂多糖刺激的腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞术分析小鼠CD305在各种巨噬细胞上的表达规律。结果:小鼠CD305高表达于小鼠巨噬细胞系和组织中的巨噬细胞。此外,LPS刺激后6 h内腹腔巨噬细胞上小鼠CD305的表达显著下降,与此同时上清中IL-6的水平显著升高。结论:小鼠CD305分子高表达于小鼠巨噬细胞,LPS刺激后表达明显下降(P<0.05)。

系统性红斑狼疮患者免疫细胞表面CD305表达及与发病的关系

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4^+CD45RO^+记忆T细胞的比例及其表面CD305的表达情况,探讨其在SLE发病中的意义。方法收集SLE患者20例为SLE病例组,另外选取年龄、性别相匹配的正常人10例为对照组。采集外周血,提取外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测外周血不同血细胞表面CD305的分布差异以及CD4^+CD45RO^+记忆T细胞在SLE患者的比例变化和其表面CD305的表达。应用单克隆抗体交联CD305进一步观察其对记忆T细胞活化功能的影响。结果 CD305在PBMC中均有表达,以单核细胞的表达最高,其次是B细胞、T细胞和树突状细胞。幼稚T细胞表面CD305的表达显著高于记忆T细胞。SLE患者外周血CD4^+ T细胞表面CD305表达下调,以记忆T细胞下调最为显著,但其阳性细胞比例数未见显著改变。交联CD305可以抑制CD3诱导的记忆T细胞活化。结论记忆T细胞表面CD305表达下调,介导记忆T细胞的异常活化参与SLE的发生发展。

系统性红斑狼疮患者调节性T细胞CD305表达降低且IL-10分泌减少

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血调节性T细胞(Treg)的比例及其CD305的表达,分析CD305对Treg功能的影响。方法募集SLE患者25例及年龄、性别相匹配的正常人16例。提取外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测外周血Treg的数量以及其表面CD305的表达。应用5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)检测SLE患者Treg对初始T(Tn)细胞的增殖抑制功能。应用单克隆抗体交联CD305进一步观察其对Treg分泌白细胞介素10 (IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)的影响。结果与健康对照相比, SLE患者外周血Treg数量变化不明显,但增殖抑制功能显著降低。活动期SLE患者Treg表面CD305表达明显下调。交联CD305可以抑制Treg对Tn细胞的增殖抑制功能,减少IL-10的分泌,对TGF-β的分泌未见显著影响。结论 SLE患者Treg表面CD305下调抑制Treg功能,在SLE的发生发展中起一定作用。

LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较

目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较。方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况。结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点。LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响。结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力。此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据。

CD305分子在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达

为研究CD305分子在类风湿关节炎滑膜中的表达,通过免疫组织化学染色方法分别检测CD305分子在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)、骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)和正常创伤患者滑膜中的分布规律。结果在RA组,CD305分子在所有患者滑膜组织中均有表达。在OA组,CD305分子在部分患者滑膜组织中表达。而在正常患者中,CD305分子在大部分滑膜组织中不表达,仅在部分样本边缘处有少量表达。说明CD305分子在RA患者滑膜组织中表达高于正常创伤患者,且主要在里衬层(lining layer)滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)上高表达。

抑制性受体CD305表达在移植肾排斥反应监测中的意义

目的探讨抑制性受体CD305的表达在移植肾排斥反应中的意义。方法应用双单克隆抗体夹心ELISA法检测153例肾移植术后患者血清中可溶型CD305（5CD305）的表达水平，20例健康志愿者标本作为对照组。结果对照组和98例移植肾功能正常患者血清sCD305表达分别为（4．3±2．3）和（6．3±3．7）μg／L。20例移植肾急性排斥及5例移植肾失功患者血清sCD305表达明显增加，分别为（36．3±14．7）和（28．8±9．4）μg／L，显著高于对照组和移植物功能正常组（P〈0．01）。30例移植肾慢性排斥及6例尿毒症透析患者血清sCD305分别为（13．1±5．5）和（11．2±4．6）μg／L，亦明显高于对照组和移植肾功能正常组（P=0．00）。结论发生移植肾排斥反应的患者血清sCD305有较高水平的表达，可望作为移植肾排斥反应的监测指标之一。

肿瘤患者外周血中抑制性受体LAIR-1表达升高

目的:研究LAIR-1在肿瘤患者中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫应答中的作用。方法:应用夹心ELISA检测肿瘤患者血清中可溶型sLAIR-1的水平;应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察LAIR-1在患者PBMC中NK细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞上的表达。结果:肿瘤患者血清sLAIR-1水平为(4.6±3.2)μg/L,明显高于正常人血清sLAIR-1水平(3.9±3.0)μg/L,P<0.05。NK细胞,CD4+T细胞及CD8+T细胞表达LAIR-1水平上调。肺癌患者CD4/CD8比值明显低于正常人,B细胞百分率明显高于正常人。NK细胞、CD4+T细胞CD8+T细胞中LAIR-1的表达阳性率高于对照组。结论:在肿瘤患者LAIR-1分子表达水平高于正常人。肿瘤患者抑制性受体LAIR-1表达水平的上调可能与肿瘤的免疫逃逸有关。

人白细胞相关免疫球蛋白样受体1／白细胞相关免疫球蛋白样受体2可能配体的生物信息学分析及鉴定

背景:通过筛选小鼠反转录病毒cDNA文库和质谱分析的方法鉴定出一种跨膜的胶原XVII是白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体之一,然而,二者的其他配体尚未得到鉴定。目的:采用生物信息学法鉴定白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD305/306)的候选配体分子。设计、时间及地点:生物信息学预测及生物学方法验证,于2006-03/2007-09在第四军医大学免疫教研室完成。材料:人WISH和Hela细胞系由第四军医大学免疫教研室冻存。方法:应用生物信息学方法搜索白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2序列同源分子,并通过文献检索初步推测白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体候选分子。最后应用候选分子基因转染K562细胞,并应用白细胞相关免疫球蛋白样受体1-Fc/白细胞相关免疫球蛋白样受体2-Fc融合蛋白进行活细胞荧光染色,流式细胞术分析鉴定候选分子是否与融合蛋白结合。同时,合成两对候选分子的引物,提取高表达白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2配体分子的细胞系WISH的cDNA,进行巢式PCR,检测WISH中候选分子的表达情况。主要观察指标:应用人类基因组数据库对白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2分子氨基酸序列同源性比对结果,流式细胞术分析白细胞相关免疫球蛋白样受体分子是否与可能配体基因转染细胞结合,巢式PCR分析白细胞相关免疫球蛋白样受体配体高表达细胞是否表达可能配体基因。结果:应用生物信息学方法和文献检索初步推测白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体候选分子为人类白细胞抗原G分子。经流式细胞术鉴定,白细胞相关免疫球蛋白样受体1-Fc/白细胞相关免疫球蛋白样受体2-Fc融合蛋白对人类白细胞抗原G基因转染的K562细胞的荧光染色结果为阴性;经巢式PCR鉴定,高表达白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2配体分子的WISH细胞系中未发现人类白细胞抗原G基因。结论:人类白细胞抗原G不是白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体。

可溶型LAIR分子与肾移植术后巨细胞病毒肺炎的关系

目的探讨可溶型LAIR分子（sCD305，CD306）与。肾移植术后巨细胞病毒（CMV）肺炎的关系。方法肾移植受者血清19份，分为肺炎组（10份）和对照组（9份）；以夹心ELISA方法定量检测血清中sCD305和CD306的浓度；用CHISS软件进行t检验。结果2组sCD305浓度均不符合正态分布，肺炎组波动于0．000-3．039μg／L，对照组波动于0．000～8．375μg／L；肺炎组CD306浓度不符合正态分布，波动于0．000～0．017μg／L，对照组符合正态分布，浓度为（0．046±0．035）Mg／L，CD305在CMV肺炎患者血清内的表达降低，与对照组相比差异有统计学意义（P=0．000），而sCD305在2组的表达差异无统计学意义（P=0．316）。结论CD306在肾移植术后发生CMV肺炎的患者血清内表达明显降低，CMV—PP65抗原检测联合CD305检测，有助于临床准确早期诊断CMV肺炎。