CD133、CD34、ABCG2蛋白表达对肺癌患者术后复发转移的预测价值

目的 探讨CD133、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达对肺癌患者术后复发转移的预测价值。方法 选取行肺癌根治术患者90例,根据术后随访期间是否发生复发转移分为复发组(n=34例)和未复发组(n=56例),收集各NSCLC患者的年龄、性别、病理分级等临床资料。实验室检测患者肺癌组织中CD133、CD34、ABCG2蛋白表达,比较不同组肺癌组织中CD133、CD34、ABCG2蛋白表达,并分析其对肺癌术后复发转移的预测价值。结果 复发组患者CD133、CD34、ABCG2蛋白阳性表达率均高于未复发组(P<0.05)。CD133、CD34、ABCG2蛋白表达与患者年龄、性别、吸烟史、病理类型、TNM分期、肿瘤直径无显著相关性(P>0.05),与细胞分化存在显著相关性(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线分析可知,CD133、CD34、ABCG2蛋白表达预测NSCLC患者术后复发转移的AUC分别为0.619、0.645、0.628(P<0.05),联合检测的AUC为0.733(P<0.05),高于CD133、CD34、ABCG2蛋白单独检测(P<0.05)。结论 CD133、CD34、ABCG2蛋白表达对肺癌患者术后复发转移均有一定的预测价值,且联合检测的预测价值更高。

通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达的影响

目的探究通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion model/reperfusion model,MCAO/R)大鼠脑保护及血管新生的作用。方法将150只SD大鼠随机分为假手术组、通督调神针灸组、常规针刺组、通心络药物组和模型对照组,每组30只。通督调神针灸组取百会穴艾灸,大椎穴刺络放血;常规针刺组选取风池、曲池、合谷、足三里、三阴交针刺治疗;通心络药物组予以通心络胶囊,每日每次1.0g/kg灌胃。假手术组、模型对照组不予治疗;其余各组每日治疗1次,共28d。治疗第7、14、21、28天处死大鼠立即取脑,脑组织石蜡包埋后切片,免疫组织化学法检测缺血皮质区CD34、CD133阳性表达,采用ELISA法检测VEGFR-2的表达。结果MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达量在第7天较高,随后逐渐降低;通督调神针灸法、常规针刺及通心络药物均可不同程度促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达(P<0.05),且通督调神针灸法促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达水平高于常规针刺及通心络药物(P<0.05)。结论通督调神针灸法能有效促进MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达。

多参数流式细胞术分析肺癌幼稚细胞免疫表型CD133、CD34、CD44的表达

目的研究CD133、CD34、CD44在肺癌组织中的表达及其不同表达组合所构成的细胞亚群。方法收集术前病理确诊的肺癌新鲜组织40例,外周正常肺组织10例,制备成单细胞悬液,选用CD133、CD34、CD44、CD117、CD43、CD45、LIN(CD2,CD3,CD31,CD64)单克隆抗体荧光染色,采用流式细胞仪分析上述表面抗原在肺癌组织及正常肺组织细胞中的分布,通过流式双参数图分析CD133、CD34、CD44双抗原组合表达形成的细胞亚群。结果肺癌实质细胞中(LIN系列及CD45阴性),CD133、CD34、CD44表达弱阳性,CD117、CD43阴性;非参数秩和检验示,CD133、CD34、CD44在肺癌及正常肺组织幼稚细胞中表达水平差异无统计学意义;在肺鳞癌与肺腺癌细胞中,CD44+、CD133-CD34-、CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133+CD34+、CD133-CD34+及CD133-CD44+的表达量不同(P<0.05),其余表型的差异均无统计学意义。聚类分析显示,肺癌幼稚细胞可主要归类为4种亚型。结论CD133、CD34、CD44可能是肺癌幼稚细胞标记,有利于更好研究肺癌细胞发育和演变的过程。

CD133、CD34、DOG-1在胃肠间质瘤中的表达及其意义

目的探讨与胃肠间质瘤诊断相关的生物标志物CD133、CD34、DOG-1的表达水平及其临床意义。方法收集胃肠间质瘤患者的病理切片150例作为研究对象,用免疫组化法对CD133、CD34、DOG-1的含量进行染色检测并分析。结果 CD133阳性表达率在年龄因素中的构成比差异具有统计学意义(P <0. 05),CD34阳性表达率在风险分级以及肿瘤直径因素中的构成比差异具有统计学意义(P <0. 05),而DOG-1阳性表达率在性别、肿瘤部位以及肿瘤浸润程度的构成比差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论 CD133、CD34、DOG-1均高表达于胃肠间质瘤组织中,其中DOG-1的阳性表达率最高,并且三者可能存在协同刺激作用,共同促进了胃肠间质瘤的发生发展。

CD133、CD34和Ki-67在普通型骨肉瘤中的表达及其与临床病理因素的相关性

目的 研究CD133、CD34和Ki-67在普通型骨肉瘤组织中的表达,探讨其与临床病理因素之间的关系.方法 应用免疫组织化学染色方法检测64例普通型骨肉瘤组织、25例骨软骨瘤组织和20例正常骨组织中CD133、CD34和Ki-67的表达情况;并分析上述免疫组化指标与临床病理相关因素之间的关系.结果 CD133、CD34和Ki-67在普通型骨肉瘤组织中普遍呈阳性表达,明显高于骨软骨瘤组织和正常骨组织（P〈0.05）;普通型骨肉瘤组织中CD133、CD34和Ki-67在性别、年龄、发生部分、组织学分型之间差异无统计学意义,但 Ki-67增殖指数在Enneking分期与患者5年生存率之间差异有统计学意义（P值均〈0.05）.结论 CD133、CD34和Ki-67在普通型骨肉瘤呈高表达,可作为普通型骨肉瘤诊断的辅助指标;Ki-67可能是预测普通型骨肉瘤分期的指标之一.

出血性卒中病人急性期外周血CD34^+和CD133^+/CD34^+细胞动员及其意义

目的探讨出血性脑卒中病人急性期外周血CD34+和CD133+/CD34+细胞动员情况及其意义。方法选取20例出血性脑卒中病人(出血组)和15名健康体检者(对照组),检测两组外周血中CD34+和CD133+/CD34+细胞数。结果出血组的CD34+细胞与CD133+/CD34+细胞在卒中后1~7 d均低于对照组(均P<0.05)。与1 d时相比,出血组外周血CD34+细胞数在卒中后2 d急剧下降,3 d时开始逐渐上升,5 d时达到最大,随后逐渐下降;CD133+/CD34+细胞数从卒中后1 d时开始逐渐升高,5 d时达到最大,随后逐渐下降。结论出血性卒中病人急性期外周血CD34+和CD133+/CD34+细胞均出现动员,CD34+和CD133+/CD34+细胞数量变化情况可能是急性出血早期敏感指标。

Autologous CD34^+ and CD133^+ stem cells transplantation in patients with end stage liver disease

AIM:To assess the utility of an autologous CD34 + and CD133 + stem cells infusion as a possible therapeutic modality in patients with end-stage liver diseases.METHODS:One hundred and forty patients with endstage liver diseases were randomized into two groups.Group 1,comprising 90 patients,received granulocyte colony stimulating factor for five days followed by autologous CD34 + and CD133 + stem cell infusion in the portal vein.Group 2,comprising 50 patients,received regular liver treatment only and served as a control group.RESULTS:Near normalization of liver enzymes and improvement in synthetic function were observed in 54.5% of the group 1 patients;13.6% of the patients showed stable states in the infused group.None of the patients in the control group showed improvement.No adverse effects were noted.CONCLUSION:Our data showed that a CD34 + and CD133 + stem cells infusion can be used as supportive treatment for end-stage liver disease with satisfactory tolerability.

蛭龙活血通瘀胶囊对心肌梗死模型大鼠外周血CD34^+、CD133^+的影响

目的:通过检测心肌梗死模型大鼠血清中CD34^+、CD133^+的含量,探索蛭龙活血通瘀胶囊对心肌梗死大鼠骨髓的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells EPCs)动员的影响以及可能的机制。方法:健康SD大鼠48只,随机分为假手术组、卡托普利组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊高剂量组(简称蛭龙高剂量组)、蛭龙活血通瘀胶囊中剂量组(简称蛭龙中剂量组)、蛭龙活血通瘀胶囊低剂量组(简称蛭龙低剂量组),每组8只。结扎冠脉前降支复制急性心肌梗死大鼠模型。应用蛭龙活血通瘀胶囊高中低剂量、卡托普利灌胃3周。各组大鼠于术后第0天、第1天、第3天、第5天、第7天、第20天尾静脉采血法取静脉血0.5~1ml,流式细胞仪分别检测血清中CD34^+、CD133^+的含量。处死大鼠,心脏直接采血3~5ml,分离出单核细胞(monocyte MNCs)层,培养4天,观察内皮祖细胞的形态。结果:血清中CD34^+、CD133^+的含量:与假手术组比较,各观察点模型组、卡托普利组、蛭龙高剂量组、蛭龙中剂量组、蛭龙低剂量组血清中CD34^+、CD133^+的含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.001);与模型组比较,各观察点卡托普利组、蛭龙高剂量组、蛭龙中剂量组、蛭龙低剂量组血清中CD34^+、CD133^+含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.001);与卡托普利组比较,各观察点蛭龙高剂量组血清中CD34^+、CD133^+含量无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);与蛭龙中剂量组比较,各观察点卡托普利组、蛭龙高剂量组血清中CD34^+、CD133^+含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.001);与蛭龙低剂量组比较,各观察点卡托普利组、蛭龙高剂量组、蛭龙中剂量组血清中CD34^+、CD133^+含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.001)。培养四天后,EPCs细胞体积较前变大,部分呈椭圆形,数量变多,多数贴壁生长。结论:(1)蛭龙活血通瘀胶囊能够有效促进大模型大鼠心肌梗死后EPCs向外周血动员。(2)蛭龙活血通瘀胶囊可能是通过增加外周血CD34^+、CD133^+的含量,上调血管内皮生长因子(VEGF)的水平,促进骨髓EPCs动员的效应。

CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达

为了探讨CD133抗原与白血病和骨髓增生异常综合症(MDS)发病的关系,采用免疫细胞化学方法检测CD133抗原在白血病和MDS中的表达。结果显示,43例急性白血病患者CD133表达的阳性率为51.2%,急性髓系白血病(AML)组(16/29,55.2%)CD133的表达与对照组(2/15,13.3%)间的差别有统计学意义(P<0.05),慢性髓系白血病(CML)的CD133表达阳性率(2/6)与对照组间的差别无统计学意义(P>0.05)。9例MDS患者中有5例呈CD133表达阳性,阳性率为55.6%,与对照组相比无显著差异(P>0.05)。在所有白血病患者中CD34+患者的CD133表达率高于CD34-患者,且差异有统计学意义(P<0.05)。CD133表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶水平无显著相关性。结论:AML患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照,CD133表达与CD34表达有相关性。CD133高表达可能是急性白血病不良预后的一个因素。

CD133和巢蛋白阳性细胞在脑胶质瘤中的表达及分布特征

目的:探讨脑肿瘤干细胞标记物CD133、巢蛋白(Nestin)和CD34标记的微血管密度(CD34-MVD)在人脑胶质瘤中的表达情况,分析三者的关系及其意义。方法:应用免疫组化方法分析62例人脑胶质瘤中的CD133、Nestin和CD34-MVD的表达情况。结果:脑肿瘤干细胞标记物CD133、Nestin在正常脑组织中未见表达,在低级别脑胶质瘤中低表达,在高级别脑胶质瘤中高表达,各组之间表达有显著性差异(P<0.05)。CD133表达与Nestin表达之间有相关性,两者呈正相关(P<0.05)。CD133、Nestin均阳性染色组的CD34-MVD值高于两者均阴性组(P<0.01)。结论:CD133和Nestin表达呈正相关性,两者与人脑胶质瘤的病理分级呈正相关,与CD34-MVD在分布及数量上存在相关性。

肾癌OS-RC-2细胞CD133的表达及意义

目的:培养肾癌干细胞球,研究其表面分子特性。方法:肾癌细胞悬浮于含有表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的无血清培养基中培养,培养7天后收集细胞球,流式细胞仪检测CD133及CD34的表达。结果:悬浮培养2天后出现肾癌干细胞球,培养7天后干细胞球明显增多,流式细胞仪检测发现表达CD133+CD34-细胞约占(8.33±1.26)%,对照肾癌细胞组表达CD133+CD34-细胞只占(1.24±0.36)%;干细胞球通过含10%胎牛血清培养基继续培养,又恢复原来的生长特点。结论:利用无血清悬浮培养方法得到的肾癌干细胞球高表达干细胞表面分子标记CD133。

脑胶质瘤组织中CD133的表达及其与血管形成的关系

目的探讨CD133在脑胶质瘤组织中的表达和意义与血管形成的关系。方法应用免疫组化方法检测46例脑胶质瘤组织及5例正常脑组织中CD133的表达水平与CD34标记的微血管密度。结果 CD133在脑胶质瘤组织中表达,并随着肿瘤恶性程度的增高而增强,且CD133表达强度与肿瘤组织中微血管密度呈正相关。结论 CD133在胶质瘤的发生、发展中起重要作用,可能成为判断胶质瘤的恶性程度及预后的有效指标。

肝细胞癌组织CD133与VEGF及CD34表达预后意义分析

目的:研究肝癌干细胞标志CD133、血管内皮生长因子(VEGF)及CD34在肝癌组织中的表达及其预后价值。方法:应用免疫组织化学染色方法检测CD133、VEGF和CD34在190例肝癌组织中的表达水平,分析其与各项临床病理指标以及预后之间的相关性。结果:CD133、VEGF和CD34在肝癌组织中的阳性表达率分别为22.1%(42/190)、52.1%(99/190)和50.0%(95/190)。CD133表达与VEGF表达水平、CD34表达水平、肝癌分化程度和镜下血管侵犯相关,42例CD133阳性肝癌组织中,VEGF阳性34例,阴性8例,r=0.785 3,P<0.01;CD34阳性30例,阴性12例,r=0.837 2,P<0.01;低分化肝癌(Ⅲ+Ⅳ)30例,高分化肝癌(Ⅰ+Ⅱ)12例,r=0.842 3,P<0.01;存在镜下血管侵犯33例,无镜下血管侵犯9例,r=0.884 5,P<0.05。生存分析结果表明,CD133阳性组、VEGF阳性组及CD34阳性组肝癌根治术后无瘤生存率均低于阴性组,差异有统计学意义,Log-rank检验统计量值分别为9.31、8.73和8.68,P值分别为0.036、0.012和0.013。结论:肝癌干细胞标志CD133表达影响肝癌新生血管形成以及肝癌分化程度;CD133蛋白表达程度与肝癌术后无瘤生存呈负相关,原因可能与肿瘤细胞低分化以及肿瘤血管微环境有关。

循环内皮祖细胞数量与抑郁症的关系研究

目的 抑郁症患者外周血中循环内皮祖细胞（EPCs）数量的变化,探讨抑郁症患者血管内皮功能的改变及其与抑郁状态的关系.方法 选择抑郁症患者30例为病例组,正常健康成人30例为对照组,以CD34、CD133/AC133、VEGFR2/KDR荧光抗体标记EPCs,采用流式细胞仪检测两组循环EPCs的CD34^＋、CD34^＋/KDR^＋、CD133^＋/KDR^＋、CD34^＋/CD133^＋/KDR^＋表达情况.结果 抑郁症组的CD34^＋、CD34^＋/KDR^＋、CD133^＋/KDR^＋、CD34^＋/CD133^＋/KDR^＋细胞数均明显低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.Pearson相关分析显示汉密尔顿抑郁量表总分与循环EPCs CD34^＋、CD34^＋/CD133^＋/KDR^＋细胞数呈负相关（P＜0.05）,与CD34^＋/KDR^＋、CD133^＋/KDR^＋细胞数无相关关系（P ＞0.05）.结论抑郁症患者的循环EPCs数量减少,且EPCs水平与抑郁症状的严重程度存在负相关.

不同转移潜能肝癌细胞株中CD标志物的表达差异及意义

目的探讨不同转移潜能的肝癌细胞株中几种CD标记物的表达差异及其意义,为进一步利用CD分子标志物分离多潜能肝癌干细胞奠定基础。方法常规培养三种不同转移潜能的肝癌细胞株HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1,胰酶消化获得单细胞悬液后,经流式抗体染色,通过流式细胞仪分析三种肝癌细胞株中CD133、CD90、CD44、CD34、CD24的表达差异及意义。结果 CD133+细胞在HepG2细胞株仅占0.1%,而在MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中表达也较低;CD90+、CD44+、CD90+CD44+表达水平随细胞转移潜能的增加呈递增趋势(P<0.05)。CD44+CD24+在HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中的阳性表达率分别为0.05%、10.3%和0.3%(P<0.05);三者中均无CD34+和CD133+CD90+细胞表达。结论 CD90和CD44与肝癌细胞的转移潜能有一定的相关性,可能成为潜在的肝癌肿瘤干细胞标记物。

CD133和CD34在二乙基亚硝胺诱导小鼠肝癌中的表达

目的：探讨与血管生成密切相关的肝癌干细胞标志CD133和CD34在二乙基亚硝胺诱导的小鼠肝癌组织中表达的变化。方法：采用二乙基亚硝胺和四氯化碳诱导C57BL/6J小鼠肝癌,于16W后处死小鼠取正常肝组织,癌旁组织和癌组织。提取总RNA并采用Real time RT-PCR（SYBR Green）法来检测肿瘤标志基因甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）,肝脏癌组织中CD133、CD34及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）mRNA的表达。结果：C57BL/6J小鼠肝癌组织中AFP表达明显升高（正常组,100±21.49;癌旁组织,161.55±38.59;癌组织,1175.79±325.47,P〈0.01）;与正常组比较（CD133,0.317±0.047;CD34,0.067±0.007;VEGF,3.452±1.265）,肝癌组织及癌旁组织中CD133、CD34和VEGF mRNA表达明显升高,尤其是癌组织（CD133,0.881±0.121;CD34,0.147±0.020;VEGF,8.274±2.621;P〈0.01）。结论：二乙基亚硝胺及四氯化碳诱导的C57BL/6J小鼠肝癌发生过程中干细胞标志CD133和CD34高表达,可能与新生血管有密切关系。

乙醛脱氢酶在检测脐带血造血干/祖细胞中的应用

目的通过比较乙醛脱氢酶(ALDH)与CD34、CD133及粒单核细胞集落形成单位(CFU-GM)在脐带血中含量的差异,探讨ALDH作为脐带血造血干/祖细胞(HSPC)检测指标的有用性。方法采集新鲜脐带血标本28份,用荧光底物法标记ALDH,流式细胞仪检测脐带血中低侧向角高表达ALDH活性(SSCloALDHbr)细胞、CD34+和CD133+含量,并进行CFU-GM的培养。结果脐带血SSCloALDHbr细胞表达率在ALDH反应后直接上机检测组(ALDH组)及在ALDH反应后进一步标记抗体再检测组(ALDH+抗体组)分别为(0.32±0.16)%和(0.30±0.17)%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血CD34+表达率在抗体组和ALDH+抗体组分别为(0.40±0.26)%和(0.36±0.19)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);脐带血CD133+表达率在抗体组和ALDH+抗体组分别为(0.18±0.16)%和(0.17±0.10)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血SSCloALDHbr细胞表达率和CD34+表达率、CD133+表达率及CFU-GM产率均呈正相关(r分别为0.87、0.69和0.54,P均<0.01)。结论ALDH反应后进一步标记抗体不影响脐带血SSCloALDHbr细胞的检测结果,ALDH反应亦不影响进一步标记抗体的检测结果;脐带血SSCloALDHbr细胞表达率和CD34+表达率、CD133+表达率及CFU-GM产率均呈正相关;ALDH活性检测可以作为检测脐带血HSPC的一个有用指标。

人胎盘组织细胞表型特征及其意义

目的:研究足月分娩胎盘组织细胞的表型特征并探讨其意义。方法:采用流式细胞术检测人胎盘组织单个核细胞(MNC)中CD133+细胞及其亚群含量;免疫组织化学法分析胎盘组织CD133、CD34、KDR、vWF和CD144的表达分布。结果:流式细胞仪检测结果表明,在胎盘MNC中,CD133+细胞所占百分率为(1.7±1.1)%,其中CD133+CD34+细胞亚群的比例为(0.5±0.5)%;胎盘CD133+细胞中表达CD34的细胞占(24.1±11.2)%。免疫组织化学结果显示,绒毛间质存在CD133+和CD34+细胞;胎盘绒毛合体滋养层和细胞滋养层细胞也表达CD133;而KDR、vWF和CD144的表达限于胎盘绒毛毛细血管内皮细胞,其表达CD34,但不表达CD133。结论:人足月胎盘组织间质中存在CD34+和CD133+细胞,晚期胎盘绒毛血管无内皮祖细胞存在。

人脐血来源内皮祖细胞的纯化鉴定及定向分化的研究

目的检测CD133+血管内皮祖细胞(EPC)的细胞表面标志物,鉴定其生物学特性。方法采用免疫磁珠法分离人脐血EPC,用EGM-2MV培养基[含表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FCF)2等具有诱导分化作用的细胞因子]进行体外培养。应用流式细胞术、免疫组织化学等方法检测CD133+细胞的比例、原代EPC的生长曲线及生长特性。透射电镜查找Weibel-Palade小体。同时没计EPC裸鼠成瘤实验,观察瘤体生长及血管增生情况,以鉴定EPC的生物学特性。结果CD133+细胞在免疫磁珠分离前后的比例各为0．91％及85．52％。EPC原代培养时细胞形态正常、密度均匀,前3 d为相对抑制期,此后快速增殖,10 d后达80％-90％融合。EPC生长曲线显示,接种后5 d内细胞数量无明显变化,从第7天开始明显增加,第17天达高峰。光学显微镜下可见,原代EPC贴壁后呈梭形,接种后7 d数量明显增加,呈克隆状生长。透射电镜观察到,细胞膜伸出许多伪足丝,基底膜呈多层;细胞质内可见一种短棒状小体,含平行管状的内部结构,即Weibel-Palade小体,确定其为EPC。裸鼠成瘤实验可见EPC组肿瘤瘤体及血管数量大于或多于对照组;抗人血管性假血友病因子(vWF)免疫荧光染色显示,大量EPC参与肿瘤血管生成。结论本实验分离培养的CD133+细胞具有分化为成熟血管内皮细胞的能力,即为EPC。裸鼠成瘤实验初步证明EPC参与血管重建,具有促进血管新生、加速缺血组织血管化的作用。

人脐静脉血内皮祖细胞的分离、扩增和生物学特征

目的:探索人脐静脉血内皮祖细胞的分离和扩增条件,并观测其生物学特性。方法:采集人脐静脉血,应用密度梯度离心法,分离其中单个核细胞,流式细胞术检测CD133+CD34+阳性率;利用差速贴壁法(48h内贴壁和48h后贴壁)联合内皮细胞专用培养基EGM-2培养细胞,接种于预先包埋了明胶培养瓶或培养板,倒置显微镜观察细胞生长形态和形成集落能力,免疫细胞化学法检测其免疫表型,摄取Ac-LDL和连接UEA-1功能,在生长因子培养体系中诱导其向成熟内皮细胞分化。结果:所获单个核细胞中CD133+CD34+百分比为1.06%;在EGM-2培养体系下可获得2种亚型的内皮祖细胞,即早期内皮祖细胞和晚期增殖性内皮祖细胞。其中48h后贴壁细胞属于早期内皮祖细胞,增殖能力较弱,免疫荧光检测,显示CD14和CD34KDR胞浆呈阳性表达,Ac-LDL+UEA-1+功能特征;而48h内贴壁细胞在10～17d时可见由单个细胞增殖形成的克隆,呈铺路石样单层排列,增殖力旺盛形成融合状态,形成次集集落;经免疫荧光检测,显示CD133CD34和CD34KDR细胞质呈阳性表达,Ac-LDL+UEA-1+功能特征,传代后vWF,CD31呈强阳性表达,是晚期增殖性内皮祖细胞。结论:经人脐静脉血可分离培养获得2种亚型的内皮祖细胞,在特定的培养体系中细胞可由祖细胞表型向成熟内皮细胞分化。