CD34^+HPC来源的树突状细胞体外扩增和功能研究

目的研究脐血CD34+HPC体外扩增诱导产生功能性树突状细胞(DCs)的有效方案。方法Ficoll分离脐血获得单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+HPC,3H—TdR检测DCs激发异体T细胞增殖的能力,MTT法检测特异性CTL的杀伤能力。结果SCF+FL+GM-CSF+IL-4诱导生成的DCs激发T细胞增殖和特异性CTL的杀伤能力均高于其他组。结论SCF+FL+GM-CSF+IL-4可有效扩增CD34+HPC并诱导产生功能性DCs。

脐血CD34^+造血干细胞来源的树突状细胞体外培养体系的优化

目的:优化脐血CD34+造血干细胞(HPC)来源的树突状细胞(DCs)诱导培养方法,为体外研究CD34+HPC诱导产生功能性树突状细胞(DCs)的影响因素奠定基础。方法:淋巴细胞分离液(Ficoll)分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+HPC,并用流式细胞术鉴定CD34+HPC纯度;比较GT(GM-CSF+TNF-α)方案和GTI(GM-CSF+TNF-α+IL-4)方案及GTI方案中TNF-α和IL-4不同时段加入对诱导培养产生的DCs成熟的影响;通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞表型及3H-TdR检测DCs激发异体T细胞增殖能力。结果:免疫磁珠阳性分选CD34+HPC纯度可达90%以上;将CD34+HPC按GT方案和GTI方案进行培养,均可诱导产生DCs,但经GT方案诱导的DCsCD14表达较高,CD80、CD86、CD83、CD1a表达不如经GTI方案诱导的高;而GTI方案中,以TNF-α0h加入、IL-448h加入诱导培养的DCs各表型表达相对较佳,并具有激发异体T细胞增殖能力。结论:CD34+HPC经过合适的培养体系能够诱导分化为功能性DCs,以GM-CSF与TNF-α0h加入、IL-448h加入的GM-CSF+TNF-α+IL-4方案更为可取。

健康人骨髓CD34^+造血干/祖细胞衰老与年龄的相关性研究

目的探讨增龄过程中健康人CD34^+造血干/祖细胞(CD34^+HSC/HPCs)衰老的变化过程。方法由重庆医科大学附属第一医院血液科骨穿室提供正常人骨髓9例,将其分为青年组3例(女性31岁、男性26岁、男性28岁)、中年组3例(男性59岁、男性57岁、女性52岁)和老年组3例(男性70岁、男性70岁、女性62岁)。提取骨髓单个核细胞(BMNCs)后,免疫磁性细胞分选法分离纯化CD34^+细胞群,流式细胞术检测细胞纯度,台盼蓝染色检测细胞活性,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各年龄组阳性细胞百分比;造血干/祖细胞混合集落培养比较各年龄组CD34^+造血干/祖细胞形成混合集落能力。结果分选前每106个BMNCs中CD34^+细胞群比例为(1. 31±0. 54)%;免疫磁性分选后每106个细胞中CD34^+细胞群比例为(92. 5±0. 39)%。各年龄组人骨髓CD34^+造血干/祖细胞存活率可达99. 1%以上。人骨髓CD34^+造血干/祖细胞的SA-β-gal染色阳性率出现明显的随增龄变化趋势,老年组明显高于中年组及青年组。CD34^+造血干/祖细胞形成的干细胞混合集落能力随年龄增加降低。结论随年龄增加人骨髓CD34^+造血干/祖细胞出现明显衰老,表现为造血增殖能力下降,可能是造成一些老年人血液学疾病的原因。

系统性红斑狼疮患者血清IL-6对造血干细胞分化发育为树突状细胞的影响

目的观察系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的白细胞介素6(IL-6)对脐血CD34+造血干细胞(HPC)体外诱导分化为树突状细胞(DCs)的影响。方法淋巴细胞分离液分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+HPC,采用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)+IL-4+肿瘤坏死因子α(TNF-α)方案体外诱导分化形成DCs,加入高IL-6水平的SLE患者血清观察对细胞分化的影响。在培养的7、10和14d收集细胞,流式细胞术检测表型,细胞增殖/毒性(CCK-8)试剂盒分析DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果在高IL-6水平SLE血清的作用下,由HPC分化而来的DCs表达CD80、CD86上升,刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力增强;IL-6中和抗体能够降低这种DCs的CD80、CD86表达水平和对同种异体淋巴细胞增殖的刺激能力。结论SLE血清中的IL-6对造血干细胞向DCs分化、发育及DCs功能的活化可能起促进作用。

PGE_2促进人脐血CD34^+造血祖细胞向淋巴样树突状细胞分化

为了探讨前列腺素E2(protaglandin E2,PGE2)对人外周血CD14+单核细胞和脐血CD34+造血祖细胞(hematopoieticprogenitor cells,HPC)体外诱导pDC分化的影响。分别采用IL-4+GM-CSF+TNF-α和SCF+Flt-3L+GM-CSF+TNF-α诱导人外周血CD14+单核细胞和CD34+HPC向pDC分化,采用流式细胞仪分析细胞表型,并观察PGE2加入培养体系后对pDC分化的影响。结果:以CD34+HPC为来源,比CD14+单核细胞能诱导出更多数量且具有功能的pDC。培养体系中加入PGE2显著增强了CD34+HPC向pDC的分化,而对CD14+单核细胞的分化却无明显促进作用。PGE2可有效促进脐血CD34+HPC在多种细胞因子的作用下向pDC的成熟分化。