膜外二三磷酸核苷水解酶-1(CD39/NTPDase-1)与血栓形成及血管保护研究进展

血小板保持血管的完整性,当血管受损时参与止血,在病理状态下如冠脉粥样硬化、脑部血管或周围血管受损时血小板活化并聚集,形成血栓造成组织缺血。膜外二三磷酸核苷水解酶-1(NTPDase-1,或称CD39)位于内皮细胞表面,通过水解ADP来减少促血栓物质,抑制血栓形成,保持血管内流动性。此外,水溶性CD39还能明显减弱去甲肾上腺素的释放,表明CD39可通过ATP调节去甲肾上腺素起到心血管保护的作用。在CD39缺失的小鼠脑卒中模型还发现水溶性CD39可改善其后遗症,提示CD39是一种治疗血管血栓及其并发症的新途径。

PON1、CD39/ATP轴对急性百草枯中毒预后的预测价值

目的探究对氧磷脂酶1(PON1)、CD39/三磷酸腺苷(ATP)轴在急性百草枯中毒(APP)患者中的水平变化,并分析其预测预后价值。方法选取本院APP患者82例,根据90 d预后分为生存组(64例)与死亡组(18例),检测两组血浆PON1活性、CD39细胞比例、血清ATP水平,并分析其临床意义。结果死亡组血浆PON1活性、血清ATP水平低于生存组,CD39细胞比例高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05);血浆PON1活性、血清ATP水平与中毒剂量(r=-0.698、-0.741)、中毒程度(r=-0.749、-0.725)呈负相关,CD39细胞比例与中毒剂量、中毒程度呈正相关(r=0.665、0.708,P<0.05);血浆PON1活性、CD39细胞比例、血清ATP水平是APP预后的重要影响因素(P<0.05);血浆PON1活性、CD39细胞比例、血清ATP水平预测APP预后的AUC均>0.7,各指标联合预测的AUC最大,为0.920,具有较高预测效能。结论血浆PON1活性、CD39细胞比例、血清ATP可作为预测APP患者预后的标志物。

青蒿琥酯上调肺癌患者CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚群CD39、CD279和颗粒酶B表达

目的探讨青蒿琥酯(ART)对肺癌患者T淋巴细胞免疫功能的影响。方法随机选取健康体检者15例(NC组),肺癌患者21例(LC组),收集临床信息,采集并分离外周血单个核细胞(PBMC)。用ART处理PBMC 24h后,流式细胞术(FCM)检测ART的半数杀伤浓度(LC_(50))及诱导T细胞高表达CD39和CD279的最佳浓度;最佳浓度的ART诱导后,FCM检测NC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279的表达水平,以及LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279、CD38、CD28、颗粒酶B(GrzB)、穿孔素(PerF)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)的水平。结果ART的LC_(50)为522μmol/L,最佳浓度为200μmol/L。LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD279的基线表达显著高于NC组;200μmol/L ART诱导后,在NC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞中,CD39的表达显著升高;在LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞中,CD39、CD279和GrzB的表达显著升高,IL-2表达显著降低,而CD38、CD28、IFN-γ和PerF等表达未见显著差异。促进ART诱导CD8^(+)T细胞表达CD39的临床因素有未放疗;促进ART诱导CD8^(+)T细胞表达CD279的因素有年龄>60岁、淋巴细胞数>1.26×10^(9)/L、中性粒细胞/淋巴细胞比率(NLR)<5、放疗、0.29×10^(9)/L≤单核细胞数≤0.95×10^(9)/L。结论肺癌患者T淋巴细胞高表达CD279;ART诱导肺癌患者CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279和GrzB的表达上调,从而调节T细胞亚群的免疫功能。

CD39在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达及其预后价值

目的:检测CD39在头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织中的表达,分析其表达与患者临床病理特征的关系及其预后意义。方法:选用2012年5月至2013年12月在天津市肿瘤医院接受外科手术的85例HNSCC患者的组织标本及病例资料,Oncomine数据库获取的基因芯片,以及HNSCC细胞系SCC15、UM1和Cal25。在线分析CD39在HNSCC组织与正常颊黏膜组织转录水平的差异性,用Western blotting和免疫组化法检测HNSCC组织中CD39蛋白的表达。采用Spearman’s检验分析HNSCC组织中CD39的表达与患者临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier曲线法和Log rank检验分析HNSCC组织CD39表达与生存的关系,Cox风险比例回归模型评价CD39表达与复发风险的关系。结果:CD39在HNSCC组织的转录水平显著高于正常颊黏膜组织(P<0.01),其在HNSCC细胞Cal25、SCC-15和UM1中均有表达,UM1细胞中CD39的表达呈地塞米松(dexamethasone,DXM)剂量依赖性。CD39高表达患者53(62.4%)例,其高表达与术前化疗正相关(r=0.234,P<0.05),CD39高表达患者的无复发生存期较低表达组显著缩短(P<0.05),CD39高表达是HNSCC复发的独立风险因素(HR=2.328,95%CI=1.091~4.967;P<0.05)。结论:CD39在HNSCC中呈DXM诱导性表达和组成性表达,其在癌组织中过表达是HNSCC患者不良预后的独立预测因子,提示其在HNSCC进展过程中可能发挥重要作用。

cAMP差异调控CD39^(+)、CTLA-4^(+)、PD-1^(+)T细胞亚群产生

目的:分析CD39、CTLA-4及PD-1在T细胞上的表达及表达模型,探讨环磷酸腺苷(cAMP)对其表达的影响,解析调控其表达的关键通路。方法:通过腺苷酸环化酶(ACs)激活剂、磷酸二酯酶(PDE)抑制剂、蛋白激酶A(PKA)抑制剂以及PKA-CREB抑制剂等小分子化合物体外刺激猕猴外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD39、CTLA-4、PD-1阳性(CD39^(+)、CTLA-4^(+)、PD-1^(+))T细胞的比率变化,分析其表达模式,对比小分子对表达/共表达的阳性细胞比率的影响,明确表达模式及调控表达的分子与通路。结果:正常猕猴的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞中CD39^(+)、CTLA-4^(+)和PD-1^(+)细胞比率较低,且阳性细胞主要表达其中一种分子;增加胞内cAMP浓度,不影响CD39^(+)T细胞比率,显著增加CTLA-4^(+)T细胞比率,降低PD-1^(+)CD8^(+)T细胞比率,涉及细胞群为CTLA-4和PD-1单表达的细胞群;抑制PKA活性可降低PDE广谱抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)对CTLA-4表达的增效作用,但不影响PD-1的表达;交换蛋白激动剂不影响CTLA-4的表达,但下调PD-1^(+)CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比率;PDE4B选择性抑制剂对CTLA-4的上调作用与IBMX相似,而PDE3和PDE5A选择性抑制剂对PD-1表达的调控与IBMX相似。结论:CD39、CTLA-4和PD-1在T细胞上有不同表达模型,但受cAMP水平不同的调控,且参与表达调控的cAMP下游信号通路不同。

Moderate expression of CD39 in GPC3-CAR-T cells shows high efficacy against hepatocellular carcinoma

CD39 serves as a crucial biomarker for neoantigen-specific CD8^(+)T cells and is associated with antitumor activity and exhaustion.However,the relationship between CD39 expression levels and the function of chimeric antigen receptor T(CAR-T)cells remains controversial.This study aimed to investigate the role of CD39 in the functional performance of CAR-T cells against hepatocellular carcinoma(HCC)and explore the therapeutic potential of CD39 modulators,such as mitochondrial division inhibitor-1(mdivi-1),or knockdown CD39 through short hairpin RNA.Our findings demonstrated that glypican-3-CAR-T cells with moderate CD39 expression exhibited a strong antitumor activity,while high and low levels of CD39 led to an impaired cellular function.Methods modulating the proportion of CD39 intermediate(CD39^(int))-phenotype CAR-T cells such as mdivi-1 and CD39 knockdown enhanced and impaired T cell function,respectively.The combination of mdivi-1 and CD39 knockdown in CAR-T cells yielded the highest proportion of infiltrated CD39^(int)CAR-T cells and demonstrated a robust antitumor activity in vivo.In conclusion,this study revealed the crucial role of CD39 in CAR-T cell function,demonstrated the potential therapeutic efficacy of combining mdivi-1 with CD39 knockdown in HCC,and provided a novel treatment strategy for HCC patients in the field of cellular immunotherapy.

HIV-1慢性感染者CD39^+PD-1^+CD4^+T淋巴细胞特点与抗病毒治疗疗效的关系

目的通过分析1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者不同疾病阶段CD39^+PD-1^+CD4^+T淋巴细胞(简称CD39^+PD-1^+CD4细胞)的特点及其与潜伏病毒库形成的关系,探讨CD39^+PD-1^+CD4细胞的临床意义。方法通过流式细胞术检测CD4细胞上CD39及PD-1的表达情况,分析CD39^+PD-1^+CD4细胞与CD4细胞计数、病毒载量及CD4细胞内病毒指标的相关性。通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测免疫重建成功患者(CRs)和免疫重建失败患者(INRs)的HIV库,分析CD39^+PD-1^+CD4细胞与HIV库的关系。结果入组11例健康对照(HCs)和69例HIV-1感染者,其中包括38例未抗病毒治疗(ART)者(TNs)、21例CRs、10例INRs。(1)与HCs相比,TNs组患者CD39^+PD-1^+CD4细胞亚群占比显著升高(平均值0.99%vs.2.50%);与TNs组相比,ART后,CRs组患者的CD39^+PD-1^+CD4细胞亚群占比显著降低(平均值2.50%vs.0.86%);而INRs组患者该细胞亚群占比显著高于CRs组(平均值2.74%vs.0.86%);(2)在TNs组患者中CD39^+PD-1^+CD4细胞亚群占比与CD4细胞计数呈负相关(r=-0.3596,P=0.0266),与病毒载量呈正相关(r=0.4511,P=0.0045);(3)ART两年以上患者CD39^+PD-1^+CD4细胞亚群占比与HIV脱氧核糖核酸(HIV DNA)正相关(r=0.5659,P=0.0473),与细胞相关的未剪接HIV核糖核酸(HIV us RNA)正相关(r=0.6758,P=0.0137)。结论CD39^+PD-1^+CD4细胞与ART后免疫重建失败相关,其机制可能是CD39^+PD-1^+CD4细胞促进HIV建立潜伏病毒库。

外周血CD39/ATP轴和PON1及miR-214在急性有机磷中毒病情评估及预后预测中的临床意义

目的探究外周血CD39/三磷酸腺苷(ATP)轴、对氧磷酶1(PON1)、miR-214在急性有机磷中毒(AOPP)患者中的临床价值。方法选取资阳市第一人民医院2018年6月-2020年8月收治的AOPP患者104例,根据住院期间是否死亡分为存活组(n=77)与死亡组(n=27)。比较两组入院时临床资料、外周血CD39/ATP轴、PON1、miR-214水平,评价外周血指标CD39、ATP、PON1、miR-214与中毒严重程度(PSS)评分、急性生理与慢性健康评价系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分相关性,分析AOPP预后影响因素,评价外周血指标CD39、ATP、PON1、miR-214对预后的预测价值。结果两组中毒至就诊时间、有机磷摄入量、PSS评分、APACHEⅡ评分差异有统计学意义(χ^(2)/t=14.276、20.680、23.168、6.958,P均<0.001)。死亡组外周血CD39、miR-214高于存活组,ATP、PON1低于存活组,差异均有统计学意义(t=9.523、7.246、5.982、4.912,P均<0.001)。Pearson相关性分析显示,外周血CD39、miR-214与PSS、APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.707、0.547;0.588、0.445),ATP、PON1与PSS、APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.634、-0.514;-0.505、-0.510)(P<0.05)。COX回归分析,将中毒至就诊时间、有机磷摄入量、PSS评分、APACHEⅡ评分等其他混杂因素控制后,外周血CD39、ATP、PON1、miR-214与AOPP预后显著相关(P<0.05);ROC曲线分析,将外周血CD39、ATP、PON1、miR-214进行Logistic二元回归拟合,返回预测概率Logit(P)作为独立检验变量,获取联合预测曲线下面积(AUC)为0.887,95%CI为0.812~0.963,敏感度为88.89%,特异度为79.22%,优于各指标单独预测(P<0.05)。结论外周血CD39/ATP轴、PON1、miR-214与AOPP患者病情程度显著相关,联合检测在预测预后方面具有良好价值。

两种不同HLA-B分子对NK细胞表面受体表达的研究

目的 :探讨两种HLA B分子 (HLA B5 1和HLA B39)对NK细胞表面活化性受体CD16和抑制性受体KIR3DL1表达的调节。方法 :采用流式细胞仪检测NK细胞分别与转染HLA B5 1和HLA B39分子的K5 6 2细胞相互作用后 ,CD16和KIR3DL1的表达情况。结果 :外周血淋巴细胞与K5 6 2细胞作用 2 4小时后 ,CD5 6 +CD16 +细胞数、KIR3DL1+细胞数均明显增加。与表达HLA B39的K5 6 2细胞相比 ,表达HLA B5 1的K5 6 2细胞与外周血淋巴细胞作用后 ,CD5 6 +CD16 +细胞数、KIR3DL1+细胞数均明显下降。结论 :NK细胞杀伤靶细胞时 ,活化性受体CD16表达上调后会伴有抑制性受体KIR3DL1的上调 ;HLA B5 1分子表达在K5 6 2细胞后 ,表达外源性HLA B5 1分子的K5 6 2细胞与NK细胞作用 ,NK细胞表面受体KIR3DL1的表达可下调 。

慈菇平岩方联合内分泌治疗对LuminalA型乳腺癌患者临床疗效的影响

目的 :观察慈菇平岩方联合内分泌治疗对LuminalA型乳腺癌患者CD39、程序性死亡受体-1(PD-1)表达的影响,并分析临床预后与CD39、PD-1表达的相关性。方法:采用巢式对照研究法,以确诊为晚期LuminalA型乳腺癌为研究起点,将接受内分泌治疗(枸橼酸他莫昔芬片或来曲唑片)的病例作为内分对照组(35例),将与内分对照组基线资料相匹配的接受内分泌治疗+慈菇平岩方治疗的病例作为慈菇内分组(35例)。观察内分对照组和慈菇内分组临床预后情况(总生存月数)、药物不良反应及血清指标(CD39、PD-1)表达情况,并采用生存时间Kaplan-Meier曲线分析CD39、PD-1表达对临床预后的影响。结果:慈菇内分组平均总生存时间为(21.71±1.10)个月,长于内分对照组(15.06±0.48)个月(Chi-Square=3.419,P=0.044)。慈菇内分组的骨不良事件率(5.71%)、妇科不良事件率(2.86%)、心血管事件率(5.71%)、胃肠道不良事件率(2.86%)、实验室指标异常率(5.71%)低于内分对照组(22.86%、17.14%、25.71%、20.00%、22.86%)(P<0.05)。内分对照组和慈菇内分组治疗后的CD39、PD-1表达水平相较于治疗前均下降,但慈菇内分组的下降幅度优于内分对照组(P<0.05)。CD39阴性表达病例的平均总生存时间为(21.60±1.19)个月,长于CD39阳性表达病例(18.79±1.00)个月(Chi-Square=5.681,P=0.017)。PD-1阴性表达病例的平均总生存时间为(20.09±0.92)个月,长于PD-1阳性表达病例(18.49±1.15)个月(Chi-Square=5.828,P=0.016)。结论:与内分泌治疗方案比较,慈菇平岩方+内分泌治疗方案能够使LuminalA型乳腺癌患者生存时间延长,不良反应降低,其机制可能与慈菇平岩方联合内分泌治疗改善患者免疫相关因子CD39、PD-1表达,恢复机体抗肿瘤免疫力有关。

阿帕替尼联合艾瑞卡对NSCLC患者免疫细胞表面分子表达的影响

目的分析阿帕替尼联合艾瑞卡对非小细胞肺癌患者免疫细胞表面分子表达的影响,并免疫细胞表面分子与临床预后的相关性。方法采用巢式对照研究法,以确诊为晚期非小细胞肺癌为研究起点,将接受放化疗+阿帕替尼靶向治疗的病例作为阿帕替尼组35例,将与阿帕替尼组基线资料相匹配的接受放化疗+阿帕替尼+艾瑞卡的病例作为阿帕艾瑞组30例。观察阿帕替尼组和阿帕艾瑞组临床预后情况(总生存月数)及血清免疫指标(CD4^(+)T细胞、Treg细胞及表面分子CD39^(+)、PD-1^(+))表达情况,并采用生存时间Kaplan-Meier曲线分析CD39、PD-1表达对临床预后的影响。结果阿帕艾瑞组平均总生存时间(8.57±1.34)个月长于阿帕替尼组(6.70±0.54)个月,P<0.05。与治疗前比较,治疗后阿帕替尼组和阿帕艾瑞组的CD4^(+)CD39^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)表达水平均下降,但阿帕艾瑞组的CD4^(+)CD39^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)表达水平下降幅度高于阿帕替尼组(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后阿帕替尼组和阿帕艾瑞组的Treg^(+)CD39^(+)、Treg^(+)PD-1^(+)表达水平均下降,但阿帕艾瑞组的Treg^(+)CD39^(+)、Treg^(+)PD-1^(+)表达水平下降幅度高于阿帕替尼组(P<0.05)。CD39阳性表达病例的平均总生存时间(5.48±0.34)个月短于CD39阴性表达病例(9.61±1.28)个月(P<0.05)。PD-1阳性表达病例的平均总生存时间(5.44±0.28)个月短于PD-1阴性表达病例(9.89±1.19)个月(P<0.05)。结论与阿帕替尼辅助放化疗方案比较,阿帕替尼联合艾瑞卡辅助放化疗可获取到更佳总生存时间收益,可改善非小细胞肺癌患者免疫相关细胞CD39、PD-1蛋白的表达,可能与艾瑞卡的恢复机体抗肿瘤免疫力有关。