人疱疹病毒6型特异性CD4^+ T细胞的初步克隆

目的克隆人疱疹病毒6型(HHV-6)特异性CD4+ T细胞,并分析其基本特征。方法采用微孔有限稀释法克隆HHV-6特异性CD4+ T细胞;3H-TdR掺入法细胞增殖试验筛选HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆;流式细胞仪(FACS)分析HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的表面标志,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的细胞因子分泌水平。结果获得的细胞克隆中有4株以HHV-6感染细胞裂解物特异的方式增殖,并且其增殖水平与HHV-6感染细胞裂解物呈剂量依赖性;细胞克隆表面标志为CD3+CD4+;W-2和W-4细胞克隆的细胞因子分泌以白细胞介素10(IL-10)为主,W-1细胞克隆的细胞因子分泌以IL-10及γ干扰素(IFN-γ)为主,W-3细胞克隆的细胞因子分泌以IFN-γ为主。结论初步建立HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆,并分析其表面标志和细胞因子分泌水平,为HHV-6特异性Treg细胞的克隆、筛选及其功能的研究奠定基础。

未经刺激的静止CD4^+ T细胞与克隆CD4^+ T细胞在抗原特异的及主要组织相容性抗原限制的无能诱导中的差异及其意义(英文)

在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本文利用HNT-TCR转基因小鼠高度单一的针对HA多肽抗原的CD4+T细胞群体,以T细胞增殖反应作为检测方法,比较研究了克隆CD4+T细胞和新提取未经刺激的CD4+T细胞对无能诱导的反应。结果表明,经化学交联剂1-ethyl-3-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(ECDI)处理的抗原提呈细胞(APC)与流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽诱导在克隆CD4+T细胞中产生了无能,这种无能是依赖于特异抗原和主要组织相容性抗原(MHC)的;而在同样条件下,新提取未经刺激的CD4+T细胞则不能被诱导产生无能。结果提示,体内T细胞与克隆T细胞存在功能上的不同,体内T细胞的无能诱导可能需要不同的条件。这对体内T细胞免疫耐受产生的机制研究和临床应用都有重要意义。

人类免疫缺陷病毒-1型负向调节因子多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆的建立和筛选

目的 建立和筛选慢性HIV感染者体内HIV-1型负向调节因子（Nef）多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆.方法 采集5例无症状期HIV感染者PBMC,Bulk培养,用Nef蛋白C末端的Nef末端多肽刺激,双荧光流式细胞术分析细胞表面CD4分子和细胞内γ干扰素表达.有限稀释法进行Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆,酶联免疫斑点法（ELISPOT）筛选特异性克隆,挑选生长最好的细胞扩大培养,完成克隆.结果 1例H1V感染者的PBMC中存在特异性CD4＋T淋巴细胞,成功建立T淋巴细胞克隆.经ELISPOT法确认为Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆.人白细胞抗原（HLA）-DRB1分型检测,提示该多肽表位可能为HLA-DRB1＊ 0406限制性.结论 成功建立Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆,发现并鉴定了Nef末端表位及其HLA限制性.