外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的探讨外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果脑梗死组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平依次降低,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、IMT依次增高(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平与IMT呈负相关,TLR4表达与IMT呈正相关(P<0.05)。高血压、CD4^(+)CD25^(+)Treg表达、TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性是As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4表达水平联合检测的预测价值高于单独检测(P<0.05)。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM抗体阳性率与As-ACI患者颈动脉粥样硬化进展有关,外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4联合可以较好预测病变过程。

RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响

目的:探讨RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、成髓细胞瘤转录因子第2亚型(MYBL2)在胃癌患者中的表达及对预后和生存时间的影响。方法:选取2017年1月至2019年1月于本院就诊的134例胃癌患者术后癌组织标本作为研究对象,另选取其中62例胃癌患者相应的癌旁组织标本及40例同期非胃癌患者正常胃黏膜组织标本进行对照,检测癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达情况,分析其对胃癌预后及生存时间的影响。结果:RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2在癌组织中的阳性率均明显高于癌旁组织和正常胃黏膜组织(P<0.05)。胃癌患者术后平均生存时间为(28.61±1.34)个月,其中RhoA、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2阳性患者的生存时间均短于阴性患者(P<0.05)。RhoA(+)、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(+)、MYBL2(+)是胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:检测RhoA,CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、MYBL2的表达可作为胃癌病情严重程度、预后及生存时间评估的重要补充手段。

外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌患者腹腔镜根治术后预后的预测价值

目的分析外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期宫颈癌(CC)患者腹腔镜根治术后预后的预测价值。方法招募2018年9月至2020年9月于儋州市人民医院接受腹腔镜根治术治疗的早期CC患者204例,根据患者术后随访期间预后情况分为预后不良组(43例)和预后良好组(161例)。比较两组临床资料。采用Spearman秩相关分析外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平的相关性。采用多因素logistic回归分析早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平对早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良的预测价值。结果预后不良组CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)水平,术后切缘阳性占比以及术中宫旁浸润占比高于预后良好组,CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,早期CC患者外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平与CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平呈负相关(r_(s)=-0.478,P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的CEA、CA125、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞水平是促进早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立危险因素(P<0.05),较高的CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平是抑制早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良(P<0.05),两项指标联合可进一步提高预测效能[AUC(95%CI)=0.939(0.898~0.979),P<0.001],灵敏度和特异度分别为86.00%、88.20%。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)、CD8^(+)CD28^(+)调节性T细胞水平与早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良有关,二者能有效预测早期CC患者腹腔镜根治术后预后不良。

口腔扁平苔藓组织中IL-35表达水平与外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg的相关性

目的探究口腔扁平苔藓(OLP)组织中白介素-35(IL-35)表达水平与外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞(Treg)的相关性。方法收集2016年9月至2018年9月期间我院口腔科收治的口腔扁平苔藓患者38例,设为OLP组,另选同期来我院体检的健康人群20例作为对照组。取两组外周静脉血,荧光定量PCR检测外周血单个核细胞内IL-35两个亚基EB病毒诱导蛋白3(EBI3)、IL-12 p35和CD4^(+)CD25^(+)Treg标志物叉状头转录因子P3(FOXP3)的表达,酶联免疫吸附法检测血清IL-35、白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)和转化生长因子β1(TGF-β1)的含量,流式细胞仪检测外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平,分析IL-35和CD4^(+)CD25^(+)Treg水平与OLP患者临床病理特征之间的关系,Pearson法分析EBI3、IL-35与CD4^(+)CD25^(+)Treg的相关性。结果与对照组相比,OLP组外周血单个核细胞内EBI3、IL-12 p35、FOXP3的mRNA均显著上调(P<0.05)。与对照组相比,OLP组患者血清IL-35、IL-10、IL17、TGF-β1含量显著均上调,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,OLP组患者外周血CD4^(+)T细胞和CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);IL-35和CD4^(+)CD25^(+)Treg水平与患者基底细胞变性程度有关(P<0.05),而与性别、年龄、病程、疾病类型和淋巴细胞浸润无关(P>0.05)。OLP中IL-35与外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg的水平呈正相关(r=0.3644,P<0.05)。结论OLP中IL-35与CD4^(+)CD25^(+)Treg表达均显著升高,且二者具有正相关关系。

外周血CD4^(+)PD-1^(+)Tcells及CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与复发性卵巢癌疗效的相关性分析

目的 探讨外周血CD4^(+)程序性细胞死亡受体-1(PD-1)^(+)T cells及CD4^(+)T淋巴细胞三磷酸腺苷(ATP)含量与复发性卵巢癌疗效的相关性。方法 选取30例复发性卵巢癌患者为复发组,30例未复发卵巢癌患者为非复发组;另选取30名同期体检健康者作为对照组。评估外周血CD4^(+)PD-1^(+)T cells及CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与复发性卵巢癌疗效的相关性。结果 复发组和非复发组的CD4^(+)PD-1^(+)T cells较对照组明显升高(P<0.05)。复发组和非复发组的CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量较对照组明显降低(P<0.05)。复发组治疗后CD4^(+)PD-1^(+)Tcells显著低于治疗前(P<0.05),治疗后CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量显著高于治疗前(P<0.05)。CD4^(+)PD-1^(+)T cells与复发性卵巢癌疗效成负相关(r=-0.393,P=0.039),CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与复发性卵巢癌疗效成正相关(r=0.449,P=0.031)。结论 复发性卵巢癌患者外周血CD4^(+)PD-1^(+)T cells及CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与疗效密切相关。

胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例的相关性及临床意义

目的探讨胃癌患者血清糖类抗原72-4(CA72-4)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平与外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T(Treg)细胞比例的相关性和临床意义。方法回顾性分析2020年1月至2022年12月在西安长安医院就诊的胃癌患者68例作为胃癌组,另选取同期体检的健康志愿者50例作为对照组。检测并比较两组患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例。比较胃癌组不同临床资料患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例,采用Pearson相关分析胃癌组CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例的相关性。结果胃癌组血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例比对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例比Ⅰ~Ⅱ期患者高,高~中分化程度患者CA72-4、CEA、CA19-9水平比低分化程度患者低,淋巴结转移患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例比淋巴结未转移患者高,差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例均呈正相关(r=0.587,0.678,0.696,P<0.05)。结论胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例明显升高且存在正相关性,与胃癌的发生、发展及肿瘤浸润转移密切相关;CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例随肿瘤负荷的变化而变化,对胃癌患者病情评估、监测机体免疫状态及判断预后具有一定临床价值。

急性非ST抬高心肌梗死患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg和IL-27变化的临床意义

目的观察急性非ST抬高心肌梗死患者(Non-STMI)治疗过程中外周血CD4^(+)CD25^(+)T/CD4^(+)T、CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25high T比例及细胞因子TGF-β1、IL-10、INF-γ、IL-27的浓度变化,阐明Non-STMI患者是否存在调节性T细胞比例及功能异常。方法选取2012年8月至2016年4月入住中山大学附属第一医院急诊病房和CCU的Non-STMI40名,不稳定性心绞痛(UA)患者19名和同龄健康志愿者20名作为对照组(HC)。患者诊断明确后次日清晨和经规范治疗后5~7天,留取空腹外周血标本。流式细胞术检测CD4^(+)CD25^(+)T/CD4^(+)T、CD4^(+)CD25high Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25high T细胞。ELISA法检测细胞因子TGF-β1、IL-10、INF-γ和IL-27浓度。结果UA、Non-STMI组CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25highT比例较HC组减低(P<0.01);Non-STMI明显低于UA组(P<0.05),而治疗后Non-STMI组Foxp3^(+)Treg细胞比例显著升高(P<0.05)。入院时Non-STMI和UA组TGF-β1、IL-10浓度较HC组明显降低(P<0.05),而INF-γ和IL-27浓度明显升高(P<0.05)。治疗后Non-STMI组IL-27迅速下降,而UA组变化不明显。治疗前IL-27浓度与CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25highT呈线性负相关、与INF-γ浓度呈线性正相关。治疗后只有IL-27和CD4^(+)CD25high Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25highT呈线性负相关。结论Non-STMI患者CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg比例及功能异常,细胞因子IL-27有助于判断患者的临床疗效。

冷冻消融联合养肺方治疗对Lewis肺癌CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg的影响及机制

目的 探讨冷冻消融联合养肺方治疗对Lewis肺癌CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞影响及机制。方法 构建C57BL/6小鼠肺癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、冷冻消融组、冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组,每组5只。模型组行假手术,在小鼠移植瘤部位切开缝合,其余各组均行双循环冷冻消融术。术后冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组分别给予1.64、3.28、6.56 g/kg养肺方灌胃,模型组、冷冻消融组分别给予等体积的生理盐水灌胃,均1次/d,连续给药14 d。给药期间观察并记录各组小鼠肿瘤体积,末次给药后剥离脾脏和移植瘤,称取瘤体质量并计算抑瘤率;流式细胞术检测脾脏CD4^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞比例;qRT-PCR和Western blot法检测瘤组织中Foxp3表达。结果 各组小鼠肿瘤体积均逐渐增长,增长速度为模型组>冷冻消融组>冷冻消融联合养肺方低剂量组>冷冻消融联合养肺方中剂量组>冷冻消融联合养肺方高剂量组。手术联合药物干预14 d后,与模型组比较,各治疗组肿瘤体积小(P<0.05);与冷冻消融组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组肿瘤体积小(P<0.01);冷冻消融联合养肺方高剂量组肿瘤体积小于低剂量组(P<0.01)。与模型组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组瘤体质量小(P<0.05);与冷冻消融组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组瘤体质量小(P<0.05)。冷冻消融组、冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组抑瘤率逐渐升高。与模型组比较,各治疗组CD4^(+)T细胞比例低(P<0.05),冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组的CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T%细胞比例低(P<0.05);与冷冻消融组比较,冷冻消融联合养肺方高剂量组CD4^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞比例低(P<0.05);冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组CD4^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞比例逐渐降低。与模型组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组肿瘤组织中Foxp3 mRNA相对表达量和Foxp3蛋白表达均降低(P<0.01);冷冻消融联合养肺方中、高剂量组Foxp3 mRNA相对表达量和Foxp3蛋白表达均低于冷冻消融组(P<0.01)和冷冻消融联合养肺方低剂量组(P<0.05)。结论冷冻消融联合养肺方通过减少Lewis肺癌小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞比例,下调肿瘤组织中Foxp3表达,发挥抑制Lewis肺癌增殖作用,其机制可能与增强机体抗肿瘤免疫应答,改善肿瘤免疫抑制有关。

Peripheral CD4^(+)CD8^(+) double positive T cells:A potential marker to evaluate renal impairment susceptibility during systemic lupus erythematosus

Lupus nephritis(LN) has a high incidence in systemic lupus erythematosus(SLE) patients, but there is a lack of sensitive predictive markers. The purpose of the study was to investigate the association between the CD4^(+)CD8^(+)double positive T(DPT) lymphocytes and LN. The study included patients with SLE without renal impairment(SLE-NRI), LN, nephritic syndrome(NS), or nephritis. Peripheral blood lymphocyte subsets were analyzed by flow cytometry. Biochemical measurements were performed with peripheral blood in accordance with the recommendations proposed by the National Center for Clinical Laboratories. The proportions of DPT cells in the LN group were significantly higher than that in the SLE-NRI group(t=4.012, P<0.001), NS group(t=3.240,P=0.001), and nephritis group(t=2.57, P=0.011). In the LN group, the risk of renal impairment increased significantly in a DPT cells proportion-dependent manner. The risk of LN was 5.136 times(95% confidence interval, 2.115–12.473) higher in cases with a high proportion of DPT cells than those whose proportion of DPT cells within the normal range. These findings indicated that the proportion of DPT cells could be a potential marker to evaluate LN susceptibility, and the interference of NS and nephritis could be effectively excluded when assessing the risk of renal impairment during SLE with DPT cell proportion.

Correlation between CD4^＋CD25^＋Treg Cells and CCR4 in Nasopharyngeal Carcinoma

OBJECTIVE CD4^＋CD25^＋ T regulatory （Treg） cells are a population of T cells which suppress an overactive immune system. CCR4 is a chemokine receptor involved in the recruitment of lymphocytes. Nasopharyngeal carcinoma （NPC） is resistant to immunosurveillance, owing to the increased number of tumor-infiltrating Treg cells which are recruited to the tumor bv CCR4.

类风湿性关节炎患者抗环瓜氨酸肽抗体、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞与类风湿因子的检验价值分析

目的探讨抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-CCP)、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞与类风湿因子(RF)在类风湿性关节炎患者中的检出结果及意义。方法选取2019年1月至2021年5月的昆明市延安医院的130例疑似类风湿性关节炎患者作为研究对象,进行Anti-CCP、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞与RF水平进行检测,以晨僵持续1 h以上、3组关节肿胀与特异性抗体检测阳性作为金标准,分析上述指标的诊断效能,并对比类风湿性关节炎患者和非类风湿性关节炎患者的上述指标水平、不同活动度的类风湿性关节炎患者的指标水平。结果RF、Anti-CCP与CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞检测对类风湿性关节炎的诊断准确率为97.69%、特异度为98.11%、敏感度为97.70%、阳性预测值为98.84%、阴性预测值为96.30%。类风湿性关节炎患者的RF平均值、Anti-CCP平均值指标高于非类风湿性关节炎患者,且CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞低于非类风湿性关节炎患者,差异有统计学意义(P<0.05)。高度活动组患者RF平均值、Anti-CCP平均值高于低中度活动组,且CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞低于低中度活动组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Anti-CCP、CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞与RF指标检测有助于对类风湿性关节炎患者进行鉴别,并判断患者的疾病活动情况。

25-羟基胆固醇通过调控干扰素调节因子4抑制CD4^(+)T细胞IL-17的表达

目的探讨25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25-HC)对人外周血单个核细胞(PBMCs)产生IL-17的抑制作用及其机制。方法用抗人CD3抗体联合抗CD28抗体刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)和纯化CD4^(+)T细胞,加或不加25-HC进行培养,ELISA、ELISPOT和PCR检测IL-17和IFN-γ的表达;流式细胞术检测T细胞转录因子(RORγt、RUNX1和IRF4)的表达、细胞表面活化分子的表达以及T细胞分裂增殖情况。通过电转染过表达IRF4,检测其对IL-17表达的影响。结果25-HC呈时间和剂量依赖的方式抑制T细胞产生IL-17,且主要抑制CD4^(+)T细胞中IL-17的表达。进一步研究发现,25-HC抑制T细胞晚期活化分子的表达和细胞分裂增殖,抑制IL-17相关转录因子IRF4的表达;过表达IRF4后,25-HC对IL-17表达的抑制作用被恢复。结论25-HC抑制Th17细胞的活化和增殖,并通过下调IRF4的表达抑制CD4^(+)T细胞产生IL-17。25-HC可能是IL-17相关炎症性疾病的一个具有前景的调控靶点。

氧化苦参碱对 CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞(Tr)和淋巴细胞增殖的影响(英文)

目的通过分析氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)各剂量组对小鼠外周血调节性T细胞(regulatory Tcells,Tr细胞)数量的影响,同时检测OMT对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学作用机制,以期为临床用OMT治疗变态反应性疾病提供更深入的理论和实验依据。方法建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射(ip),在实验进程的第1、7、14、21和28天小鼠尾静脉采血,抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行三色免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。实验数据以SPSS10.0以及CELLQuest软件进行处理。结果体外实验证明,在500、125和31μg/mL组的OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而在16、8、4和2μg/mL组的OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖起促进作用,但其剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数量,与HCT组比较(P<0.01),与PBS组比较(P<0.01)。结论OMT对小鼠淋巴结T细胞的增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数量;即OMT对免疫系统的影响呈双向作用,OMT是一种双向免疫调节剂。

花姜酮对小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞分化功能的影响及机制

目的:建立小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的体外诱导及培养方法,同时探讨花姜酮(Zerumbone)对Treg细胞的分化、分泌功能的影响及其机制。方法:从BABL/c小鼠的脾脏分离、纯化CD4^+CD62L^+T细胞,加入转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β(5 ng/mL)、白细胞介素(interleukin,IL)-2(30μg/mL)促进CD4^+CD62L^+T细胞向Treg细胞分化。Treg细胞被分为5组:正常组、模型对照组、Zerumbone(1μmol/L)组、Zerumbone(10μmol/L)组、Zerumbone(30μmol/L)组。流式细胞术检测各组Treg细胞的比例,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测IL-10含量,Foxp3、IL-10 mRNA的表达用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。结果:本实验方法使Treg细胞的诱导比例明显升高(P<0.01)。与模型对照组相比,Zerumbone组的Treg细胞比例呈剂量依赖性升高(P均<0.05)。IL-10蛋白的表达与模型对照组比较也呈剂量依赖性升高(P均<0.05),Foxp3、IL-10 mRNA的表达同样升高(P<0.05),其中Zerumbone(30μmol/L)组升高最明显(P<0.01)。结论:在体外实验中,Zerumbone可以促进BABL/c小鼠体内的CD4^+CD62L^+T细胞向Treg细胞分化,并促进IL-10蛋白的表达,其机制可能与诱导CD4^+CD25^+Treg特异性转录因子Foxp3的表达有关。

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及其特异标志物Foxp3表达水平的研究

目的:通过检测炎症性肠病(IBD)不同病期患者以及对照组外周血CD4+CD25+Treg及其特异标志物Foxp3的表达,来分析与IBD疾病活动性关系,探讨CD4+CD25+Treg和Foxp3在IBD发病机制中的作用。方法:52例IBD患者和35例正常对照组分别应用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中CD4+CD25+T细胞亚群的百分率测定和外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于疾病缓解期患者和正常对照组(P<0.01);活动期IBD患者中使用激素和/或免疫抑制剂与未使用激素和/或免疫抑制剂结果差异有统计学意义;IBD患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3 mRNA表达水平低于缓解期和正常人,差异有显著性(P<0.05);缓解期Foxp3 mRNA水平与正常人差异无显著性(P>0.05);IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达率及PBMC中的Foxp3 mR-NA表达水平与疾病活动指数评分呈负相关性。结论:活动期IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3 mRNA表达下调,而恢复期其表达回升,且二者呈正相关,并与临床活动评分呈负相关,因此认为CD4+CD25+Treg细胞和Foxp3可能参与疾病的发生发展,与疾病的活动性密切相关。

慢性丙型病毒性肝炎患者CD4^+CD25^+ Treg细胞与自身抗体的相关性研究

目的探讨慢性丙型病毒性肝炎患者CD4^+CD25^+Treg细胞水平与自身抗体之间的关系及其临床意义。方法选取2013年10月至2015年2月该院收治的324例新入院且未经治疗的慢性丙型病毒性肝炎患者,利用间接免疫荧光和免疫印迹方法检测患者自身抗体谱的表达状况,同时使用流式细胞术计数患者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞数量。结果 324例慢性丙型病毒性肝炎患者,有136例患者至少有1项自身抗体阳性,另有188例慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗体谱表达均为阴性。自身抗体阳性组CD4^+CD25^+Treg细胞百分比明显低于自身抗体阴性组(P<0.05);同时慢性丙型肝炎患者CD4^+CD25^+Treg细胞水平随着自身抗体表达数的增加而降低,呈负相关。结论对HCV感染患者进行CD4^+CD25^+Treg细胞水平监测,能有效预判患者发生免疫耐受的可能性。

升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜CD_4^+CD_(25)^+Treg细胞的影响

目的:探讨升血小板胶囊对免疫性血小板减少性紫癜患者外周血CD+4CD+25Treg细胞计数和分泌因子水平的影响。方法:选取医院收治的免疫性血小板减少性紫癜患者66例,以随机数字法分为两组;对照组常规泼尼松治疗,观察组在对照组的基础上服用升血小板胶囊,对比临床疗效;并分别于治疗前后抽取患者空腹静脉血,以流式细胞法测定CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数,以ELISA试剂盒测定IL-10及TGF-β1血清含量。结果:两组患者的总有效率无显著差异,但观察组的整体临床疗效和显效率均显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞计数比和血清IL-10、TGF-β1血清含量无显著差异(P>0.05);治疗后,两组患者各项指标均有不等程度的升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论:CD+4CD25调节性T细胞数量减少或功能缺陷可能参与了免疫性血小板减少性紫癜的发病进程,升血小板胶囊可能能够通过该环节发挥治疗作用。

Effects of estrogen on CD4^+ CD25^+ regulatory T cell in peripheral blood during pregnancy

Objective To investigate the effects of estrogen(E_2)level on regulatory T cells(Treg)in peripheral blood during pregnancy.Methods:A total of 30 healthy non-pregnant women were selected as control group,90 pregnant women of early,middle and late pregnancy and 30 postpartum women at 1 month after parturition were selected as experimental groups including early pregnancy group,middle pregnancy group and late pregnancy group;the proportions of CD4^+CD25^+Treg and CD4^+CD25^+CD127^-Treg among CD4 T cells were detected by flow cytometry;the serum estrogen content in peripheral blood was detected by electrochemical immune luminescence method.Results:E_2 level was coincident with the change of Tregs number during pregnancy.The estrogen content in peripheral blood increased gradually from early pregnancy to late pregnancy,then decreased significantly after parturition,and the level at 1 month after parturition down to the level in non-pregnancy group(P>0.05);the level of E_2 in pregnancy groups were significantly higher than those in non-pregnancy group(P<0.01);and there were significant differences among early pregnancy group,middle pregnancy group and late pregnancy group(P<0.05).The proportions of CD4^+CD25^+Treg and CD4^+CD25^+CD127^-Treg in pregnancy groups were significantly higher than those in non-pregnancy group(P<0.05),but decreased significantly after parturition,and there was no significant difference between non-pregnancy group and postpartum women group(P>0.05):the proportions in middle and late pregnancy groups were significantly higher than those in early pregnancy group(P<0.05).but decreased slightly in late pregnancy group,there was no significant difference between late pregnancy group and middle pregnancy group(P>0.05).There was correlation between Tregs number with estrogen level during pregnancy.The proportion of CD4^+CD25^+Treg and CD4^+CD25^+CD 127^-Treg were positively correlated with estrogen level.Conclusions:High proportion of CD4^+CD25^+Trcg and CD4^+CD25^+CD127^-Treg is closely related to the high level of E,during pregnancy.It suggested that high level of estrogen may induce an increase of CD4^+CD25^+Treg in peripheral blood.and then influence the immune function of pregnant women.The results of this experiment might play an important role of estrogen in immune-modulation during pregnancy.

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

CD4^+CD25^+Treg在急性淋巴细胞白血病患者外周血中的表达及其体外实验研究

目的初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,CD4+CD25+Treg)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患者化疗前及化疗缓解后外周血中的表达水平,并研究患者血清能否诱导外周血CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+Treg。方法①采用流式细胞术分别检测ALL初诊组、化疗完全缓解或部分缓解组及正常对照组外周血中CD4+CD25+T细胞所占比例,然后通过荧光定量RT-PCR检测各组外周血中转录因子Foxp3mRNA的表达水平,并逐层分析比较。②采集正常人外周血单个核细胞后,对照组用正常人血清,实验组用患者血清并分别设浓度梯度进行培养,72h后采用流式细胞术、荧光定量RT-PCR分别检测CD4+CD25+T细胞和Foxp3mRNA表达。结果ALL化疗缓解组CD4+CD25+T细胞及Foxp3mRNA表达水平均明显高于ALL初诊组和正常对照组(P<0.05),后两者之间CD4+CD25+T细胞水平无统计学差异(P>0.05),但ALL初诊组Foxp3mRNA含量较正常对照组明显升高(P<0.01),差异具有统计学意义;并且血清培养对照组CD4+CD25+T细胞水平及Foxp3mRNA含量均明显低于实验组(P<0.05),且其表达并不随血清浓度的增加而升高。结论CD4+CD25+Foxp3+Treg在ALL初诊组及化疗缓解组患者外周血中比例明显升高,且初步表明患者血清中的可溶性物质可诱导外周血CD4+CD25+T细胞转化为CD4+CD25+Treg,提示CD4+CD25+Treg可能是ALL免疫抑制的一个重要原因。