CD41单克隆抗体建立慢性免疫性血小板减少症小鼠模型失败的初步分析

目的:通过向Balb/c小鼠腹腔注射不同次数和不同剂量CD41单克隆抗体(MWReg30),探究该方法能否构建出一种稳定的慢性免疫性血小板减少症(ITP)模型,并在造模结束后采用党参提取液干预此模型小鼠,以明确其对造模小鼠异常血小板计数的调整作用。方法:首先,使用MWReg30的常用剂量对Balb/c小鼠建立慢性ITP模型,并在抗体注射结束后探究党参提取液对造模小鼠的影响;随后,分别对不同组别的小鼠进行MWReg30的2次注射和2倍剂量注射,明确注射次数和剂量的增加是否有助于建立慢性ITP模型。结果:向小鼠体内注射MWReg30的造模方式不能使Balb/c小鼠血小板数量长期维持低水平,并且通过增加抗体注射次数和剂量的方法也难以实现此目的。但是,MWReg30的2次注射和2倍剂量注射分别使小鼠血小板计数在抗体注射结束7 d内和14 d内反弹升高至较高水平,且低剂量党参提取液干预造模小鼠可使其异常升高的血小板数量呈现下降趋势。结论:对小鼠腹腔注射MWReg30的造模方法无法复制出稳定的慢性ITP模型,此方法能否成为一种理想的慢性ITP模型建立方式仍有待进一步证实。而增加MWReg30的注射剂量能够延长模型小鼠血小板计数低水平的维持时间;且低剂量的党参提取液可能会对造模小鼠异常升高的血小板数量起纠正作用。

麦门冬汤辅助治疗对特发性肺纤维化患者炎症因子及血小板CD41、CD62P表达水平的影响

目的:研究麦门冬汤辅助治疗对特发性肺纤维化(IPF)患者炎症因子及血小板活化指标的影响。方法:本研究对象为2019年8月~2022年8月期间收治的94例IPF气阴两虚证患者,随机分为西药组(n=47)和联合组(n=47),西药组给予常规治疗(吡非尼酮胶囊),联合组给予吡非尼酮胶囊+麦门冬汤治疗。比较两组临床疗效、中医证候积分、血清炎症因子、血小板活化指标及治疗安全性。结果:联合组治疗总有效率(89.36%)高于西药组(72.34%,P<0.05);治疗后,两组主症、次症及中医证候积分、血清白细胞介素-6(IL-6)、表面活性蛋白D(SP-D)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平、血小板膜蛋白CD41、CD62P表达水平均降低,且联合组低于西药组(P<0.05);联合组不良反应发生率(12.77%)与西药组(10.65%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:麦门冬汤辅助治疗IPF气阴两虚证的疗效理想,可减轻患者炎症反应,抑制血小板活化,且治疗安全性高。

重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞

目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、

清远地区CD41-42β地中海贫血人群基因型组合特点及红细胞参数特点分析

目的了解清远地区人群CD41-42β地中海贫血(以下简称地贫)基因携带情况及基因型组合特点,分析其红细胞参数特点,为更好地筛查和预防地贫提供参考资料。方法收集地贫基因诊断标本2 080例,其中儿童标本517例,成人标本1 563例。采用gap-PCR扩增法检测3种常见的缺失型α地贫基因,PCR-膜反向点杂交(PCR-RDB)技术检测17种突变型β地贫基因;并对基因型为CD41-42的受检者进行血常规检测,根据性别、年龄将CD41-42杂合子数据进行分组,观察不同人群红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、红细胞压积(Hct)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)5项指标的差异。结果 (1)调查人群中,检出CD41-42基因型139例,CD41-42总携带率为6.68%(139/2 080),其中CD41-42杂合子110例(5.29%),CD41-42复合α地贫20例(0.96%),CD41-42复合β地贫9例(0.43%);CD41-42杂合子携带率、CD41-42复合α地贫基因儿童与成人间携带率差异无统计学意义(P>0.05),CD41-42复合β地贫基因儿童与成人间携带率差异有统计学意义(P<0.05),成人目前仅发现CD41-42/βEM一种β地贫双重杂合子。(2)各基因型对红细胞参数影响大小顺序分别为CD41-42复合β地贫>CD41-42>CD41-42复合α地贫(P<0.05)。(3)CD41-42杂合子红细胞参数分析,儿童男女组间各红细胞参数差异无统计学意义(P>0.05);成人男女组间RBC、Hb、Hct差异有统计学意义(P<0.05),MCV、MCH差异无统计学意义(P>0.05);男性儿童与男性成人比较,组间各参数差异有统计学意义(P<0.05);女性儿童与女性成人比较,组间RBC、Hb、Hct差异无统计学意义(P>0.05),MCV、MCH差异有统计学意义(P<0.05)。结论清远地区人群中,CD41-42β地贫以CD41-42杂合子最为常见,其次为CD41-42复合α地贫,CD41-42复合β地贫最为少见。CD41-42杂合子与其他类型地贫突变合并存在时,不同组合其红细胞参数差异较大,在进行遗传咨询时,应做好遗传告知;CD41-42基因携带者红细胞参数受性别、年龄影响较大,在制定筛查指标临界值时,需考虑性别、年龄因素。

类风湿关节炎患者CD62P、CD41/CD61的表达及意义

目的:通过检测类风湿关节炎(RA)患者血小板表面活化标志物CD41/CD61、CD62P的表达,研究血小板活化与RA及RA活动性的关系。方法:采用流式细胞技术检测RA患者及健康对照组血小板CD41/CD61、CD62P的表达阳性率。结果:血小板CD62P阳性率在RA活动组及RA组患者分别高于缓解组和健康对照组,CD41、CD61阳性率差别在各组间无统计学意义。结论:(1)RA患者血小板CD62P表达增高与疾病活动有关;(2)血小板CD62P高表达可能是RA患者好发心血管疾病的原因之一;(3)CD41/CD61可能与RA炎症及其好发心血管病无关。

血液透析对慢性肾功能衰竭患者血小板聚集功能及CD41、CD61和CD42的影响

目的 通过观察血液透析对慢性肾功能衰竭 ( CRF)患者血小板聚集功能及 CD4 1、CD61和 CD4 2的影响 ,探讨 CRF患者出血倾向的发生机制及血液透析的作用。方法 应用血液凝集仪和流式细胞仪 ,检测 18名正常人和 2 6例 CRF患者血液透析前后的血小板聚集活性及血小板CD4 1、CD61和 CD4 2。结果 血液透析前 ,CRF患者的血小板聚集活性明显低于正常人 ,CD4 1、CD61和 CD4 2低于正常人 ;血液透析后 ,CRF患者的血小板聚集活性明显高于血液透析前 ,且CD4 1、CD61和 CD4 2也高于血液透析前。结论 CRF患者的出血倾向与血小板的聚集功能下降有关 ,且血小板的聚集功能下降与 CD4 1、CD61和 CD4 2的活性受损有关 ,血液透析可以通过改善血小板 CD4 1、CD61和 CD4 2的活性 ,来促进血小板的聚集功能 ,纠正

冠心病患者血小板CD41^+CD62^+与胱抑素C的相关性研究

目的:观察冠心病患者血小板CD62与胱抑素C的相关性。方法:选择116例在我院经冠状动脉造影检查确诊冠心病的患者为观察对象,于治疗前采静脉血,应用流式细胞术检测治疗前后血小板CD41+CD62+的阳性率,ELISA法测定血清中胱抑素C的浓度,酶法测定血清中肌酐的浓度。Pearson法分析血小板CD41+CD62+的阳性率与胱抑素C、肌酐的相关性。随访3个月,观察两组患者心血管不良事件发生率。结果:116例患者血小板CD41+CD62P+阳性率为(15.84±13.14)%,血清胱抑素C的浓度为(1.47±0.69)mg/L,血清肌酐浓度为(69.76±35.15)μmol/L,Pearson相关性分析显示血小板CD41+CD62P+与血清胱抑素C、肌酐存在相关(P<0.05)。结论:胱抑素C可能参与了动脉粥样硬化过程及血小板的激活。

CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42的构建及其稳定转染HeLa细胞模型的建立

目的:构建CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42和HeLaCD41-42细胞模型,为β地中海贫血CD41-42突变型细胞、小鼠模型建立及进一步基因治疗提供依据。方法:在β地中海贫血CD41-42突变的纯合子患者外周血中提取DNA,PCR法扩增含有βCD41-42的β-珠蛋白基因片段。将PCR产物βCD41-42珠蛋白基因克隆到pEGFP-C2载体中,用脂质体2000将pEGFP-C2-βCD41-42质粒转染HeLa细胞,观察转染后βCD41-42在HeLa细胞中荧光表达情况。RT-PCR法检测βCD41-42在HeLa细胞中的表达。结果:重组质粒pEGFP-C2-βCD41-42转染HeLa细胞24h后细胞发出绿色荧光,G418筛选后,有大量荧光表达。RT-PCR扩增得到227bp的特异性条带,而稳定转染pEGFP-C2空质粒的HeLa细胞中不表达特异性条带。结论:成功构建β地中海贫血pEGFP-C2-βCD41-42突变基因重组载体,并成功构建HeLaCD41-42细胞模型。

CD41标记的微小巨核细胞染色在老年贫血诊断中的应用

目的:探讨CD41标记的微小巨核细胞染色法(SAP染色法)在老年贫血诊断及鉴别诊断中的意义。方法:采用瑞特-姬姆萨染色和CD41标记的SAP染色法,分别检测了107例60岁以上老年贫血患者的骨髓涂片中微小巨核细胞的数量和类型。结果:CD41标记的SAP染色法对巨核细胞的检出率明显高于瑞特-姬姆萨染色法,两者相比差异有统计学意义(P<0.01)。不同疾病组比较,微小巨核细胞阳性率MDS组最高,依次为MDS>ITP>MA>ACD>MM>IDA>RA>AA>PRCA>CAA;淋巴样微小巨核细胞MDS组检出率为73.6%,其他组均未检出。结论:CD41标记的SAP染色可以显著提高巨核细胞检出率;且对老年贫血具有一定的鉴别诊断价值。

胃癌患者围手术期血小板黏附蛋白CD41、CD62p的流式细胞术检测

目的 研究胃癌患者围手术期血小板黏附蛋白CD41、CD62p表达的变化 ,为进一步研究肿瘤细胞的生长、转移与血小板黏附蛋白CD41、CD 62 p表达的关系奠定基础 ,为围手术期防凝抗凝提供客观依据。 方法 应用流式细胞术 ,检测 2 1例胃癌患者围手术期CD41、CD 62 p表达的变化 ,同时选择年龄相当的正常人 10例作对照。 结果 与正常人相比 ,胃癌患者CD41、CD62 p表达增多 ,晚期患者表现尤为明显。随着手术的进行 ,CD 41、CD62 p含量逐渐升高 (P <0 .0 5 ) ,手术结束后 3 0min达高峰 (P <0 .0 1) ,至术后第 7天 ,CD 41、CD62 p已有所下降 ,但仍高于术前水平 (P <0 .0 5 )。 结论 胃癌患者血小板黏附蛋白CD41、CD 62 p表达和释放增加 ,处于激活状态。手术促使血小板活化进一步加强 ,术后随时间延长 ,血小板活化程度逐渐恢复。

冠心病患者及介入治疗对CD41水平的影响

目的研究冠心病患者的CD41水平,以及经皮冠脉介入治疗(PCI)术对CD41水平的影响。方法测定行PCI术者(235例)及仅行冠状动脉造影(CAG)的患者(121例)手术前及手术后2h的CD41水平。结果术前冠心病患者的CD41水平明显高于非冠心病者(P<0.05)。而在仅行CAG的患者术前与术后CD41水平无明显变化(P>0.05),CD41水平在PCI术后2h高于术前(P<0.05)。结论冠心病患者的血小板活性高于非冠心病者,PCI术可促进血小板激活。

单抗CD41免疫酶标染色在全血细胞减少症中的诊断意义

目的:通过对116例全血细胞减少症的骨髓涂片采用单抗 CD41免疫酶标染色,观察5种小巨核细胞在此类疾病中的不同。方法:于光学显微镜下,仔细观察染色后小巨核细胞的检出率,并作统计学处理。结果:单抗 CD41免疫酶标染色对小巨核细胞的检出及形态学观察有较好的优越性,能及时发现体积小的淋巴样巨核细胞。结论:单抗 CD41免疫酶标染色检测小巨核细胞具有方法简便、特异、敏感、染色后的巨核细胞颜色鲜明、细胞轮廓清楚、容易测量大小、观察形态等特点,特别容易发现淋巴样小巨核细胞,对 MDS 与其它全血细胞减少症的鉴别诊断有重要价值。

高血压病与冠心病患者血小板表面CD41、CD62p的临床意义

目的 探讨血小板激活在高血压病与冠心病患者的意义。方法 测定正常人和高血压病与冠心病患者血小板表面CD41、CD62P,患者分成A、B、C三组,A组为未经抗血小板治疗的高血压病与冠心病患者37例,B组为正常对照组11例,C组为经抗血小板药治疗的高血压与冠心病患者28例。均取晨空腹静脉血3ml,用FACSCalibur流式细胞仪分析。结果A组CD41、CD41荧光强度和CD62p均高于B组(P<0.05),C组的CD41、CD41荧光强度、CD62p均低于A组(P<0.05)。高血压病组与冠心病组的相关指标比较无显著性差异。结论 高血压病与冠心病患者的血小板活化和激活增强,而抗血小板药物(阿司匹林或抵克立得)能抑制血小板激活。

冠心病患者介入治疗术前后内皮素、血管性假血友病因子、CD41改变与早期并发症的关系

目的研究内皮素(ET)、血管性假血友病因子(vWF)、血小板糖蛋白 GPⅡb/Ⅲa受体(CD41),对经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous coronary intervention,PCI)早期并发症的预测。方法研究对象为我院及河北省人民医院82例至少一支血管的同一病变部位既进行了球囊扩张又进行了冠脉内支架植入术。其中42例不稳定型心绞痛和40例稳定型心绞痛。40例冠状动脉造影正常健康人作对照。结果 82例患者 PCI 术后心脏早期并发症总发生率为12.2%(10/82),其中 UAP 组21.4%(9/42)明显高于 SAP2.5%(1/40)(P<0.05)。10例早期并发症患者术前血浆 ET、vWF 和 CD41水平均明显高于无早期并发症患者(P<0.05);术后血浆 ET、vWF 和 CD41差值也显著高于无早期并发症患者(P<0.05)。早期并发症在术前ET、vWF 和 CD41低、中、高三组的发病率表现出明显的增高趋势。单因素回归分析表明,PCI 术前 ET,vWF,UAP,多支病变,高血压,糖尿病等,对 PCI 术后早期并发症均有较高的预测价值。但多因素回归分析仅 PCI 术前糖尿病(RR=1.587),高血压(RR=1.742),ET(RR=2.148),vWF(RR=2.849)更为显著。早期并发症组术后血浆 vWF 水平差值与 CD41差值之间,vWF 与 ET 差值之间均有明显正相关(分别为γ=0.769,P<0.01,γ=0.838,P<0.01)。结论 PCI 术前 ET、vWF、血小板糖蛋白 GPⅡb/Ⅲa受体水平越高,则术后早期并发症越多。术前 ET、vWF 为 PCI 术后早期并发症较强的独立预测因子。

速避凝对胃癌患者围术期血小板膜糖蛋白CD41、CD62p表达的影响

肿瘤患者血小板活化与术后肿瘤的生长、转移、扩散及血栓形成相关[1],探索削弱或减轻血小板活化水平是麻醉及肿瘤学研究中所关注的课题.

使用抗CD41单抗制备ITP小鼠的研究

目的探讨使用抗CD41单抗制备ITP小鼠的模型的体会。方法 120只BALB/c纯系雌性小鼠制备抗CD41抗体后,腹腔注射后7 d内眦静脉取血观察血小板计数情况。结果给予每只BALB/c纯系雌性小鼠每天腹腔注射2μg,连续注射7天后,超过90%注射后的小鼠,血小板降低到原来50%以下。运用统计软件进行配对t检验,BALB/c纯系雌性小鼠在使用清水+CD41前后变化有统计学意义。结论慢性小鼠ITP造模方法正确,可以使用这种造模方法,制造ITP小鼠模型,以便临床研究所用。