CD41单克隆抗体建立慢性免疫性血小板减少症小鼠模型失败的初步分析

目的:通过向Balb/c小鼠腹腔注射不同次数和不同剂量CD41单克隆抗体(MWReg30),探究该方法能否构建出一种稳定的慢性免疫性血小板减少症(ITP)模型,并在造模结束后采用党参提取液干预此模型小鼠,以明确其对造模小鼠异常血小板计数的调整作用。方法:首先,使用MWReg30的常用剂量对Balb/c小鼠建立慢性ITP模型,并在抗体注射结束后探究党参提取液对造模小鼠的影响;随后,分别对不同组别的小鼠进行MWReg30的2次注射和2倍剂量注射,明确注射次数和剂量的增加是否有助于建立慢性ITP模型。结果:向小鼠体内注射MWReg30的造模方式不能使Balb/c小鼠血小板数量长期维持低水平,并且通过增加抗体注射次数和剂量的方法也难以实现此目的。但是,MWReg30的2次注射和2倍剂量注射分别使小鼠血小板计数在抗体注射结束7 d内和14 d内反弹升高至较高水平,且低剂量党参提取液干预造模小鼠可使其异常升高的血小板数量呈现下降趋势。结论:对小鼠腹腔注射MWReg30的造模方法无法复制出稳定的慢性ITP模型,此方法能否成为一种理想的慢性ITP模型建立方式仍有待进一步证实。而增加MWReg30的注射剂量能够延长模型小鼠血小板计数低水平的维持时间;且低剂量的党参提取液可能会对造模小鼠异常升高的血小板数量起纠正作用。

HLA-Ⅰ抗体及血小板膜糖蛋白CD41a的表达与血小板输注无效的相关性及影响因素分析

目的:分析HLA-Ⅰ抗体及血小板膜糖蛋白CD41a的表达与血小板输注无效(PTR)相关性及影响因素。方法:将2019年7月—2020年10月收治的50例PTR患者作为观察组,50例行血小板输注治疗有效患者作为对照组;采集患者临床资料,检测患者血小板HLA-Ⅰ抗体和CD41a表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析HLA-Ⅰ抗体及CD41a单独和联合应用预测PTR的发生价值,采用Logistic回归模型分析PTR的影响因素。结果:观察组患者血中HLA-Ⅰ抗体和CD41a阳性率均明显高于对照组(P<0.05);联合检测患者血中HLA-Ⅰ抗体和CD41a预测患者PTR的敏感度、特异度及ROC曲线下面积均明显高于各指标单独应用(P<0.05);HLA-Ⅰ抗体、CD41a、自身抗体、其他抗体、脾肿大、高热及出血是影响PTR发生的独立性影响因素(P<0.05)。结论:HLA-Ⅰ抗体及CD41a的表达在PTR患者中呈阳性,且HLA-Ⅰ抗体、CD41a、自身抗体、其他抗体、脾肿大、高热及出血是影响PTR发生的独立性危险因素。

利用PGT-M和PGT-HLA技术辅助β地中海贫血基因突变患者成功孕育健康婴儿1例

1病例报告患者,30岁,因发现β地中海贫血基因突变18个月,拟孕育健康子代于2021年3月4日到兰州大学第一医院生殖医学中心进行辅助生殖治疗。18个月前患者夫妻及其女儿于外院行地中海贫血基因检测结果示:患者为HBB基因CD41-42杂合携带者,其丈夫为HBB基因-29杂合携带者,其女儿为HBB基因-29、CD41-42杂合携带者。

体外循环对血小板功能的影响

目的探讨体外循环(CPB)对血小板计数、血小板膜糖蛋白及血小板聚集功能的影响。方法随机选取15例择期CPB下行心脏手术的病人,在全身肝素化前、肝素化后10min、转流30min、转流结束肝素中和后10min及术后24h分别检测血小板数(PLT)、血小板聚集率(PAGM)及血小板膜糖蛋白(CD41a、CD42a、CD61、CD62p)阳性表达率和平均荧光强度(meanfluorescenceintension,MFI)的变化。结果肝素化后10minPLT及PAGM明显下降,转流结束肝素中和后10min为最低,术后24h渐趋恢复;CD41a、CD42a、CD61的阳性表达率各时段间无明显差异(P>0.05),但CD41a、CD61的MFI明显增强,CD42a的MFI明显减弱,与转流前相比有明显差异(P<0.05、P<0.01);CD62p的阳性表达率及MFI在各时段间均有显著差异(P<0.05、P<0.01)。结论CPB过程中,血小板数量急剧下降,聚集功能受损;血小板膜糖蛋白的表达受明显影响。

流式细胞术分析骨髓增生异常综合征小巨核细胞的初步研究

目的建立基于巨核细胞糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（CD41a）和碘化丙啶（PI）双标记的流式细胞术（FCM）分析骨髓小巨核细胞的方法,并研究其在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断中的意义。方法采用异硫氰酸荧光素标记的单克隆抗体标记CD41a,PI标记巨核细胞DNA,用FCM分析巨核细胞倍体分布。结果 42例MDS患者,FCM检测小巨核细胞阳性率为90.5%,瑞氏-姬姆萨染色和免疫组织化学方法检测阳性率分别为54.8%和64.3%,三者比较差异有统计学意义（χ~2=13.640,P=0.001）;FCM检测MDS低危组和高危组小巨核细胞阳性率分别为81.8%和100%,差异有统计学意义（χ~2=4.019,P=0.045）。结论 FCM检测MDS小巨核细胞检出率高,且高危患者小巨核细胞检出率更高,有助于MDS的早期诊断和预后评估。

氨磷汀对人巨核细胞白血病Dami细胞增殖及分化的影响

目的探讨氨磷汀(依硫磷酸,Amf)对人巨核细胞白血病Dami细胞分化的影响。方法 Amf0.01~5.0 mmol·L^(-1)分别处理Dami细胞12 d,每天光镜下观察细胞形态,计数Dami细胞数量,绘制增殖曲线;第12天,计数直径>20μm细胞数量,透射电镜观察Dami细胞血小板分界膜系统的形成,流式细胞仪检测细胞DNA倍体化及细胞表面抗原CD33,CD34和CD41a的变化。结果 Amf 0.1~1.0 mmol·L^(-1)促进Dami细胞分化;Amf>1.0 mmol·L^(-1)时抑制Dami细胞增殖,Amf 1.0 mmol·L^(-1)作用12 d后光镜下观察到细胞体积增大,直径>20μm细胞比例增加24.6%(P<0.01);透射电镜观察可见细胞出现血小板分界膜系统;流式细胞仪发现,髓系细胞分化抗原CD33表达减少13.6%;巨核细胞相关分化抗原CD41a表达增加11.9%(P<0.05);DNA倍体分析发现,实验组4N和8N细胞分别增至31.56%和8.83%(P<0.01),并出现16N的超多倍体细胞(3.43%)。结论 Amf>1.0 mmol·L^(-1)时抑制Dami细胞增殖,0.1~1.0 mmol·L^(-1)时诱导Dami细胞向成熟巨核细胞分化。

特发性血小板减少性紫癜与血小板相关抗体、膜糖蛋白表达的关系

目的：观察ＩＴＰ患者不同年龄组中ＰＡＩｇ升高的类型及ＣＤ ４１ａ和ＣＤ ６２ｐ的血小板阳性率和荧光强度。方法：采用 ＥＬＪＳＡ法对 ２２０例 ＩＴＰ患者进行 ＰＡＩｇＧ、Ｍ、Ａ测定，其中 ４０例采用流式细胞术测定 ＣＤ ４１ａ和 ＣＤ ６２ ｐ血小板阳性率及荧光强度。结果：ＰＡＩｇＧ、Ｍ、Ａ均升高在三组中占大多数，ＰＡＩｇＧ、Ｍ升高，青中年组高于其它二组，单纯 ＰＡＩｇＧ升高，儿童组高于其它二组。ＣＤ ４１ａ和 ＣＤ ６２ ｐ血小板阳性率及荧光强度，儿童组高于其它二组。ＣＤ ４１ａ和 ＣＤ ６２ ｐ双阳性血小板儿童组、青中年组高于老年组。结论： Ｐ以 ＰＡＩｇＧ、Ｍ、Ａ三者均升高为主要类型， ＣＤ ４１ａ血小板阳性率及荧光强度在 ＩＴＰ中随着年龄增加而降低，ＣＤ ６２ ｐ也有同样的趋势。

混合血小板在保存期中的活化情况的研究

目的 了解混合血小板在保存期中的活化情况。方法 用无菌导管链接器将多袋同一血型的白膜层合并为 1袋 ,并制成混合血小板 ,用流式细胞术测定该血小板的CD6 2p和CD4 1表达量 ,同时检测其细胞因子IL 2、IFN γ的浓度、血小板计数和pH值。结果 在保存期 0～ 3d内混合血小板的血小板计数、pH值、CD6 2p和CD4 1表达量无显著差异 ,并且其中IL 2和IFN γ的浓度亦无显著差异。在 0、1和 3d时 ,该血小板的CD6 2p阳性率和CD4 1的平均荧光强度分别为 (2 5 .36± 10 .4 6 ) %、(2 6 .5 7± 11.2 5 ) %、(2 9.83± 10 .4 2 ) %及 9.85± 3.2 8、10 .2 9± 3.19、12 .17± 4 .71;其IL 2 (pg/ml)和IFN γ(pg/ml)的浓度分别为 2 9.6 4± 4 .5 6、33.2 9± 5 .86、31.30± 4 .5 9及 6 4 .6 5± 8.74、6 6 .0 2± 8.87、6 2 .5 1± 9.4 7。结论 混合血小板在保存期中其血小板和残余白细胞无明显活化情况。

清远地区CD41-42β地中海贫血人群基因型组合特点及红细胞参数特点分析

目的了解清远地区人群CD41-42β地中海贫血(以下简称地贫)基因携带情况及基因型组合特点,分析其红细胞参数特点,为更好地筛查和预防地贫提供参考资料。方法收集地贫基因诊断标本2 080例,其中儿童标本517例,成人标本1 563例。采用gap-PCR扩增法检测3种常见的缺失型α地贫基因,PCR-膜反向点杂交(PCR-RDB)技术检测17种突变型β地贫基因;并对基因型为CD41-42的受检者进行血常规检测,根据性别、年龄将CD41-42杂合子数据进行分组,观察不同人群红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、红细胞压积(Hct)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)5项指标的差异。结果 (1)调查人群中,检出CD41-42基因型139例,CD41-42总携带率为6.68%(139/2 080),其中CD41-42杂合子110例(5.29%),CD41-42复合α地贫20例(0.96%),CD41-42复合β地贫9例(0.43%);CD41-42杂合子携带率、CD41-42复合α地贫基因儿童与成人间携带率差异无统计学意义(P>0.05),CD41-42复合β地贫基因儿童与成人间携带率差异有统计学意义(P<0.05),成人目前仅发现CD41-42/βEM一种β地贫双重杂合子。(2)各基因型对红细胞参数影响大小顺序分别为CD41-42复合β地贫>CD41-42>CD41-42复合α地贫(P<0.05)。(3)CD41-42杂合子红细胞参数分析,儿童男女组间各红细胞参数差异无统计学意义(P>0.05);成人男女组间RBC、Hb、Hct差异有统计学意义(P<0.05),MCV、MCH差异无统计学意义(P>0.05);男性儿童与男性成人比较,组间各参数差异有统计学意义(P<0.05);女性儿童与女性成人比较,组间RBC、Hb、Hct差异无统计学意义(P>0.05),MCV、MCH差异有统计学意义(P<0.05)。结论清远地区人群中,CD41-42β地贫以CD41-42杂合子最为常见,其次为CD41-42复合α地贫,CD41-42复合β地贫最为少见。CD41-42杂合子与其他类型地贫突变合并存在时,不同组合其红细胞参数差异较大,在进行遗传咨询时,应做好遗传告知;CD41-42基因携带者红细胞参数受性别、年龄影响较大,在制定筛查指标临界值时,需考虑性别、年龄因素。

冠状动脉支架术患者停用氯吡格雷后血小板功能的变化

目的观察经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术患者氯吡格雷停用后血小板聚集率及血小板CD41+CD62P+表达的变化。方法对52例已服用氯吡格雷12个月但即将停药的PCI患者,比较氯吡格雷治疗前(T0)、治疗后1周(T1),停药前1周(T2)、停药后1周(T3)及停药后1个月(T4)血小板聚集率和血小板CD41+CD62P+阳性率。结果与T0比较,T1血小板聚集率及CD41+CD62P+表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);T2仍维持较低水平;T3血小板聚集率及CD41+CD62P+表达升高,T4血小板聚集率及CD41+CD62P+恢复至T0水平,T0、T1、T2、T3、T4各时间点血小板聚集率分别为(44.20±18.36)%、(25.38±12.10)%、(23.74±8.15)%、(51.79±10.55)%、(45.97±16.42)%,血小板CD41+CD62P+阳性率分别为(12.96±11.48)%、(3.93±3.33)%、(4.72±3.14)%、(13.90±10.38)%、(10.84±8.13)%。结论 PCI术后已服用氯吡格雷12个月者,停用氯吡格雷后1周时血小板聚集率、血小板CD41+CD62P+阳性率轻度增加,在停药后1个月时逐渐恢复至停药前水平。

重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞

目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、

类风湿性关节炎患者血清CD_(62p)、CD_(41)、TNF-α水平变化及意义

采用流式细胞术、双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定活动期、缓解期类风湿关节炎患者及健康体检者血小板膜CD62P、CD41及血清TNF-α水平。结果活动期类风湿性关节炎(RA)患者血小板膜CD62p、CD41、血清TNF-α水平分别显著高于缓解期患者和正常对照组(P均<0.05)。三者与病情活动显著相关。血清TNF-α与血小板膜CD62p和CD41呈正相关(r分别为0.74、0.67,P均<0.05)。认为血小板膜CD62p、CD41、血清TNF-α水平可作为评价类风湿性关节炎病情及预后的参考指标。

菊花煎灌肠对溃疡性结肠炎血小板膜糖蛋白的影响

目的:观察菊花煎灌肠对溃疡性结肠炎(UlcerativeColitis,UC)血小板膜糖蛋白的影响。方法:采用流式细胞仪和血小板单克隆抗体,测定溃疡性结肠炎病人血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62P)、溶酶体膜糖蛋白(CD63)和血小板膜糖蛋白(CD41a)的含量,并观察菊花煎灌肠治疗前后的变化。结果:上述指标在治疗前显著增高(P<001),缓解期较活动期虽呈下降趋势,但仍高于正常对照组(P<005)。经中药菊花煎灌肠治疗,治愈率为6563%,总有效率为9375%。治疗后各项检测指标显著降低(P<001或P<005),与正常人相比无明显差异(P>005)。结论:血小板膜糖蛋白异常在溃疡性结肠炎发病过程中起重要作用,菊花煎灌肠可抑制其表达,对溃疡性结肠炎有良好疗效。

亚临床甲减与冠心病患者C反应蛋白、脉搏波传导速度及血小板活化的关系

目的 研究亚临床甲减与冠心病患者超敏C反应蛋白、臂踝脉搏波传导速度、血小板活化因子（CD41、CD62P）等心血管事件危险预测因素的关系.方法 选择冠心病合并亚临床甲减及冠心病无亚临床甲减患者各50例.所有患者晚间禁食12h后抽取静脉血行血脂、同型半胱氨酸、甲状腺功能、超敏C反应蛋白、血小板活化因子（CD41、CD62P）检测,并行臂踝脉搏波传导速度检查.比较两组各指标的差异.结果 与甲状腺功能正常冠心病组相比,冠心病合并亚临床甲减组甘油三酯[（1.75±0.63）mmol/L比（1.49±0.48）mmol/L]、总胆固醇[（5.60±0.72） mmol/L比（4.35±0.47）mmol/L]、同型半胱氨酸[（15.63 ±0.96） μmol/L比（13.62±1.41）μmol/L]、超敏C反应蛋白[（4.9±1.4）mg/L比（3.5±1.2）mg/L]、臂踝脉搏波传导速度[（1678.3±211.2）cm/s比（1556.8±206.3）cm/s]和血小板活化因子CD41[（24.3±3.2）％比（18.4±4.1）％]、CD62P[（56.8±3.6）％比（44.9土3.8）％]均升高,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.结论 亚临床甲减不但影响冠心病患者血脂、同型半胱氨酸代谢,而且与冠心病患者超敏C反应蛋白、臂踝脉搏波传导速度、血小板活化因子（CD41、CD62P）等心血管事件危险预测因素有关.亚临床甲减会增加冠心病患者心血管事件的危险性.

GM-CSF体外促进多倍体巨核细胞的生成

在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF,从脐血CD34+细胞定向诱导巨核细胞的形成,以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO+IL-3、TPO+IL-3+GM-CSF(5、20、100μg/L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多倍体的作用。结果发现:在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加GM-CSF有利于总细胞的扩增,对巨核细胞的纯度没有显著的影响。体外培养14d后,培养物巨核细胞中多倍体(≥8N)巨核细胞比例明显提高,从中可以看出GM-CSF能促进巨核细胞多倍体的形成。

不同检测方法计数血小板的准确性评价

目的评价4种血小板(PLT)计数方法的准确性。方法筛选70例PLT计数不准确的标本,将其分为4组(小红细胞组,大血小板组,低值血小板组,血小板聚集组),分别用阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)、荧光法(PLT-F)、显微镜法计数,PLT计数结果与参考方法进行比较。结果各组样本的阻抗法计数结果与参考方法比较相关性差(r均<0.9);光学法、荧光法与参考方法相比相关性很高(r均>0.9);显微镜法与参考方法比较,计数低值PLT的相关性较差(r=0.744)。结论阻抗法PLT计数对大血小板、小红细胞、红细胞碎片、低值血小板等样本计数不准确,可以用光学法,荧光法或显微镜法复检。

冠心病患者血小板CD41^+CD62^+与胱抑素C的相关性研究

目的:观察冠心病患者血小板CD62与胱抑素C的相关性。方法:选择116例在我院经冠状动脉造影检查确诊冠心病的患者为观察对象,于治疗前采静脉血,应用流式细胞术检测治疗前后血小板CD41+CD62+的阳性率,ELISA法测定血清中胱抑素C的浓度,酶法测定血清中肌酐的浓度。Pearson法分析血小板CD41+CD62+的阳性率与胱抑素C、肌酐的相关性。随访3个月,观察两组患者心血管不良事件发生率。结果:116例患者血小板CD41+CD62P+阳性率为(15.84±13.14)%,血清胱抑素C的浓度为(1.47±0.69)mg/L,血清肌酐浓度为(69.76±35.15)μmol/L,Pearson相关性分析显示血小板CD41+CD62P+与血清胱抑素C、肌酐存在相关(P<0.05)。结论:胱抑素C可能参与了动脉粥样硬化过程及血小板的激活。

单独采集血小板和浓缩血小板在保存期中的活化情况

研究单独采集血小板 (单采血小板 )和浓缩血小板在保存期中的活化情况。用流式细胞术对这两种血小板的CD62 p和CD41表达量进行测定。结果表明 :在保存 0 ,1 ,3和 5天时 ,单采血小板的CD62 p阳性率和CD41的平均荧光强度分别为 (1 8 91± 6 2 5) % ,(1 9 48± 8 2 7) % ,(2 2 82± 6 0 6) % ,(56 71± 1 1 79) %及 (8 0 9±2 38) % ,(8 1 3± 2 45) % ,(8 44± 2 51 ) % ,(1 9 87± 6 1 3) % ,而浓缩血小板的分别为 (30 65± 1 2 33) % ,(31 46± 1 1 86) % ,(32 51± 1 3 0 5) % ,(63 55± 1 3 2 7) %及 (1 0 33± 4 37) % ,(1 1 0 9± 6 61 ) % ,(1 3 46± 9 69) % ,(2 4 41± 1 0 1 5) %。二项指标均随保存时间推移而上升。对这两种血小板的计数和 pH值测定显示 ,二者均随保存时间推移而下降。在保存 0 - 3天内两种血小板的计数 ,pH值 ,CD62 p和CD41表达量无显著差异。在第 5天血小板计数和pH值出现显著下降 (P <0 0 0 1 ) ;而CD62p和CD41表达量出现显著上升 (P <0 0 0 1 )。结论

类风湿关节炎患者CD62P、CD41/CD61的表达及意义

目的:通过检测类风湿关节炎(RA)患者血小板表面活化标志物CD41/CD61、CD62P的表达,研究血小板活化与RA及RA活动性的关系。方法:采用流式细胞技术检测RA患者及健康对照组血小板CD41/CD61、CD62P的表达阳性率。结果:血小板CD62P阳性率在RA活动组及RA组患者分别高于缓解组和健康对照组,CD41、CD61阳性率差别在各组间无统计学意义。结论:(1)RA患者血小板CD62P表达增高与疾病活动有关;(2)血小板CD62P高表达可能是RA患者好发心血管疾病的原因之一;(3)CD41/CD61可能与RA炎症及其好发心血管病无关。

CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42的构建及其稳定转染HeLa细胞模型的建立

目的:构建CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42和HeLaCD41-42细胞模型,为β地中海贫血CD41-42突变型细胞、小鼠模型建立及进一步基因治疗提供依据。方法:在β地中海贫血CD41-42突变的纯合子患者外周血中提取DNA,PCR法扩增含有βCD41-42的β-珠蛋白基因片段。将PCR产物βCD41-42珠蛋白基因克隆到pEGFP-C2载体中,用脂质体2000将pEGFP-C2-βCD41-42质粒转染HeLa细胞,观察转染后βCD41-42在HeLa细胞中荧光表达情况。RT-PCR法检测βCD41-42在HeLa细胞中的表达。结果:重组质粒pEGFP-C2-βCD41-42转染HeLa细胞24h后细胞发出绿色荧光,G418筛选后,有大量荧光表达。RT-PCR扩增得到227bp的特异性条带,而稳定转染pEGFP-C2空质粒的HeLa细胞中不表达特异性条带。结论:成功构建β地中海贫血pEGFP-C2-βCD41-42突变基因重组载体,并成功构建HeLaCD41-42细胞模型。