一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基因库NO.FJ216964)设计特异性引物,应用SYBRG reenⅠ荧光染料,采用实时PCR法检测了52例乳腺癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA的表达量,分析CD44v17 mRNA表达与乳腺癌临床生物学特性之间的关系。结果:乳腺癌组织CD44v17 mRNA表达(3.10±1.12)明显高于相应癌旁正常组织(2.31±0.84)(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(4.07±1.13)显著高于无淋巴结转移组(2.75±0.89)(P<0.01);肿瘤组织>5 cm组CD44v17 mRNA表达(4.18±0.95)明显高于肿瘤组织≤5 cm组(2.96±1.07)(P<0.05);髓样癌(5.27±0.30)显著高于导管内癌(3.28±1.08)和浸润性导管癌(2.92±1.04)(P<0.05),导管内癌和浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达(4.18±0.92)明显高于Ⅰ期(2.73±0.97),Ⅱ期(2.76±0.96)(P<0.05);乳腺癌CD44v17 mRNA表达与雌激素受体、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和cerbB-2表达无明显相关性(P>0.05)。结论:CD44v17 mRNA在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能与乳腺癌的侵袭、转移及预后有关。

CD44变异体(CD44v17)在食管癌中的表达及意义

目的:探讨CD44v17在食管癌中的表达及意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基国库序列号FJ216964)设计特异性引物,采用实时定量PCR法检测了73例食管癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,分析CD44v17 mRNA表达与食管癌临床生物学特性之间的关系。结果:食管癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0.05);食管癌CD44v17 mRNA表达与肿瘤的大小、发生部位、病理类型均无相关性(P>0.05),而与食管癌的分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:CD44v17 mRNA在食管癌组织中高表达,可为临床预测食管癌恶性程度,浸润转移潜能,评估预后提供一种重要的参考指标。

CD44v17在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系

目的 探讨一种新的CD44变异体（CD44v17）在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系.方法根据本实验室在MCF-7／Adr中新发现的1种CD44剪切拼接变异体CD44v17设计特异性引物,应用SYBR Green I荧光染料,采用实时PCR法检测87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 Mrna的表达,根据标准曲线计算CD44v17mRNA的表达量,分析CD44v17mRNA表达与胃癌临床生物学特性之间的关系.结果胃癌组织CD44v17 Mrna表达明显高于相应癌旁正常组织（P〈0.05）;肿瘤〉5 cm组CD44v17 Mrna表达与肿瘤≤5 cm组表达比较差异无显著性（P〉0.05）;未分化腺癌组表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组（P〈0.05）,乳头状腺癌组CD44v17 Mrna表达与管状腺癌组比较差异无显著性（P〉0.05）;肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 Mrna表达显著高于侵及黏膜、黏膜下层及肌层组（P〈0.05）,而肿瘤侵及黏膜及黏膜下层组的CD44v17 Mrna表达与侵犯肌层组表达比较差异无显著性（P〉0.05）.淋巴结转移组CD44v17 Mrna表达明显高于淋巴结无转移组（P〈0.05）;有肝脏转移组CD44v17 Mrna表达显著高于无肝脏转移组（P〈0.05）.结论CD44v17 Mrna在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的侵袭、转移及预后有关.

变异性分化抗原簇44(CD44v17)对宫颈癌的临床诊断意义

目的:探讨CD44v17对宫颈癌的临床诊断意义。方法:将CD44v17si RNA、CD44v17、生理盐水转染至传代后的人宫颈癌细胞。检测细胞转染后存活率;检测细胞凋亡率。在裸鼠左肩背部注入人宫颈癌细胞悬液,随机分为CD44v17组、CD44v17si RNA组、对照组。在CD44v17组、CD44v17si RNA组裸鼠瘤体内分别注入CD44v17病毒颗粒、CD44v17si RNA病毒颗粒。检测瘤体的质量与体积。选取疑有宫颈病变患者阴道镜下活检组织80例,正常宫颈组织15例、宫颈上皮内瘤变(CIN)I级组织l5例、CIN II级15例、CIN III级组织15例和宫颈癌组织20例。检测CD44v17在不同组织中的表达量。结果:CD44v17si RNA转染的宫颈癌细胞凋亡率(19.20±2.14%)高于CD44v17转染的宫颈癌细胞凋亡率(6.13±1.08%)(P<0.05)。CD44v17组裸鼠瘤体质量(15.9±3.4)g高于对照组裸鼠瘤体质量(11.8±2.7)g(P<0.05)。CD44v17在不同组织中的表达量,按正常宫颈、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈癌发展过程呈递增趋势(P<0.05)。结论:CD44v17能抑制宫颈癌细胞凋亡,促进宫颈癌细胞的生长、增殖。通过降低CD44v17表达量可能是遏制CIN向宫颈癌发展的一个手段。

CD44基因变异体对人乳腺癌细胞株MCF-7的侵袭作用

目的探讨一种新的CD44基因变异体（CD44v17）对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响及其机制。方法以人乳腺癌耐阿霉素细胞株（MCF-7／ADR）cDNA为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段，将其T．A克隆后，进行测序；构建CIM4v17质粒真核表达载体（pcDNA3．1-CD44v17）；应用脂质体转染法将pcDNA3．1-CD44v17转染入MCF-7细胞中，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及明胶酶谱法测定转染细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMPO的表达；Transwell法检测CD44v17对MCF-7细胞的侵袭力；Western blot检测胞外信号调节蛋白激酶（ERK）及磷酸化蛋白激酶（p-ERK）变化。结果限制性内切酶消化证实，重组载体已正确克隆；DNA序列分析显示，CD44v17包含CD44基因1～4号外显子、16～17号外显子、18号外显子1～205位碱基（GeneBank NO．FJ216964）。MCF-7细胞转染pcDNA3．1-CD44v17后，CD44mRNA表达量和蛋白表达率分别为0．92±0．22和（70．0±2．5）％；透明质酸（HA）处理后，MMP-2mRNA表达量和蛋白活性分别为0．72±0．22和1．14±0．12，MMPOmRNA表达量和蛋白活性分别为0．85±0．19和1．23±0．25，细胞侵袭能力明显增加，侵袭细胞数目为352±33个／视野，而CD44单抗可以阻断这种作用；CD44单抗和促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路抑制剂预处理转染细胞后，显著阻断了p-ERK的表达。结论在MCF-7／ADR细胞中发现CD44v17，并成功克隆和建立pcDNA3．1-CD44v17；HA与CD44v17受体结合，通过CD44→ras→MAPK信号传导通路调节MMP-2和MMPO的表达，从而增加MCF-7细胞的侵袭力。

宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中变异型分化抗原簇44(17)的表达及意义

目的分析变异型分化抗原簇44(17)(CD44v17)在宫颈上皮内瘤变(CIN)向宫颈癌发生、发展中的表达及意义,探讨其与CIN及宫颈癌之间的关系。方法实时荧光定量PCR检测CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级和宫颈鳞状细胞癌组织中CD44v17、基质金属蛋白酶9(MMP9)和细胞核增殖相关抗原Ki67的表达;CD44v17siRNA干扰宫颈癌HeLa、SiHa细胞RNA后,检测CD44v17、MMP9和Ki67的表达;以CD44v17基因慢病毒颗粒作用于荷瘤裸鼠,分析CD44v17siRNA对裸鼠成瘤能力的影响。结果 CD44v17的表达水平在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级和宫颈鳞状细胞癌组织中逐渐升高;以正常宫颈组织为对照,CD44v17、MMP9、Ki67表达水平在CINⅠ级组织无明显上升(P>0.05),在CINⅡ、CINⅢ级和宫颈鳞状细胞癌组织明显上升(P<0.05);将CD44v17siRNA转染宫颈癌细胞后,MMP9、Ki67的表达明显降低(P<0.01);CD44v17基因慢病毒颗粒作用于荷瘤裸鼠后,肿瘤体积、质量均明显降低(P<0.01),荷瘤裸鼠的成瘤能力降低。结论 CD44v17在CIN向宫颈癌发展的过程中可能有一定的促进作用,有望作为判定CIN是否具有恶变潜能的指标之一。

变异型分化抗原簇44(17)对宫颈癌HeLa细胞、SiHa细胞系增殖的影响

目的探讨变异型分化抗原簇44(17)(CD44v17)对人宫颈癌HeLa细胞、SiHa细胞系增殖的影响。方法用lipofectamine 2000将CD44v17siRNA、pc DNA3.1-CD44v17质粒及其阴性对照组转染HeLa细胞、SiHa细胞,通过CCK-8、划痕实验、流式细胞术、免疫印迹法(Western blotting)、细胞周期测定方法等观察CD44v17对人宫颈癌细胞系HeLa细胞及SiHa细胞的增殖、凋亡、迁移等能力的影响。结果 CCK-8法证实CD44v17促进宫颈癌细胞的生长;划痕实验显示CD44v17可增强宫颈癌细胞的迁移能力;流式细胞术及Western blotting检测凋亡相关蛋白验证了CD44v17具有抑制宫颈癌细胞凋亡的作用;细胞周期测定显示干扰CD44v17 RNA后,S期细胞比例降低,G1期细胞增高,细胞阻滞于G1期并诱导细胞凋亡。结论 CD44v17能抑制宫颈癌细胞凋亡,促进宫颈癌细胞的生长,增强宫颈癌细胞的增殖迁移能力,它有可能成为宫颈癌治疗的新靶点。