流式细胞术联合测定保存血小板表达的磷脂酰丝氨酸和CD62p

人类血小板通过不同的技术进行离体保存后 ,其特性改变差异较大。建立适用于各种保存血小板特性分析的流式细胞术 (FCM)对保存血小板的质量监测和新保存方法研究有重要意义。本研究通过对FCM分析方法主要条件的优化评估 ,建立了联合测定血小板膜表面包括磷脂酰丝氨酸在内的多参数FCM定量分析方法。在标本制作中 ,血小板不需要洗涤即可直接进行标记 ,减少了血小板离心洗涤过程中的激活。除了FCM常用的同型对照外 ,文中还将新鲜富含血小板血浆 (FPRP)、凝血酶激活FPRP和液氮处理FPRP作为血小板标准阴性、阳性对照 ,直接应用于FCM分析 ,且效果良好。该方法中Gly Pro Arg Pro乙酸盐 (GPRP)的选择应用 ,既防止了血小板聚集和纤维蛋白的形成 ,同时可稳定血小板 ,减少制备过程中人为激活 ,克服了在血小板、Ca2 + 和血浆共存条件下FCM定量分析血小板的困难 ,尤其是为深低温处理血小板包括PS在内的多参数分析提供了良好的方法基础。研究表明该方法标本处理简单 ,结果分析简便、准确 ,重复性好。作者还通过低温、低渗或激活剂的方法制备了几种膜表面分子标记显著不同的血小板应用于FCM分析 ,不仅证实了所建立的FCM分析方法在各种不同膜表面分子标记的血小板分析中的实用性 ,又表明了文中制备的这 4种不同膜表面分?

清开灵注射液对急性脑梗死患者血小板CD62P与细胞因子的影响

目的:观察清开灵注射液对急性脑梗死(ACI)患者的临床疗效及血小板 CD62P阳性表达率与细胞因子含量动态变化的影响。方法:65例发病在 3天以内的 ACI患者随机分为两组,治疗组用清开灵注射液和低分子右旋糖研治疗,对照组用低分子右旋糖研治疗。采用流式细胞仪(FCM)、电化学发光(EC)等技术测定两组 ACI患者治疗前后血小板 CD62P的阳性表达率与肿瘤坏死因子a(TNF-α)、白细胞介素-2受体(IL-2R),白细胞介素一6(IL.6)等指标的水平,并以3O例健康人作正常对照及相关分析。结果:ACI患者治疗前后CD62P、TNF-a、I丁ZR、IL-6水平均显著高于健康人组(P<0.05或P<0.01),ACI患者CD62P表达与 TNF-a、IL-ZR二L-6水平升高呈正相关;治疗组治疗后 CD62P、TNF.a、IL.ZR、IL-6水平的降低较对照组显著(P<0.05),临床治愈率、显效率亦明显高于对照组(P<0.05)。结论:清开灵注射液治疗ACI的作用机制与其抑制血小板活化增强、减轻细胞因子介导的中枢神经系统免疫应答及炎症损伤等有关。

奥扎格雷对急性脑梗死患者血小板CD62p和CD63表达的影响及其疗效

目的观察奥扎格雷对急性脑梗死(ACI)患者血小板CD62p、CD63表达的影响及其疗效。方法将64例ACI患者随机分为奥扎格雷治疗组和血塞通治疗组(对照组),采用流式细胞术检测ACI患者治疗前后及正常人(正常组)血小板CD62p、CD63的表达;观察奥扎格雷治疗组和对照组的临床疗效并进行比较。结果ACI患者血小板CD62p、CD63表达水平明显高于正常组(均P<0.01);奥扎格雷治疗组与对照组治疗后血小板CD62p、CD63表达水平较治疗前均有明显下降(P<0.05～0.01),奥扎格雷治疗组又明显低于对照组,差异有显著性(均P<0.05)。奥扎格雷治疗组的基本痊愈率、显著进步率、总有效率明显高于对照组(均P<0.05)。结论ACI发病后血小板CD62p、CD63表达水平显著增高;奥扎格雷有明显抑制血小板表达CD62p、CD63的作用,对ACI的治疗效果显著。

灯盏细辛注射液对急性脑梗塞患者血小板CD62p及TNF-α、IL-6的影响

目的观察灯盏细辛注射液对急性脑梗塞(acutecerebralinfarction ,ACI)患者的临床疗效及对血小板CD6 2 p阳性表达率和血清肿瘤坏死因子(TNF -α)、白细胞介素- 6 (IL -6 )含量的影响。方法6 8例ACI患者随机分为灯盏细辛治疗组(35例)和常规治疗组(33例) ,两组均予常规治疗,灯盏细辛治疗组每天加用灯盏细辛注射液4 0ml,静脉滴注,疗程15天。采用流式细胞仪(FCM )、电化学发光(ECL)技术检测两组ACI患者治疗前后血小板CD6 2 p、TNF -α及IL -6的水平。结果灯盏细辛治疗组的治疗总有效率(88 6 % )明显高于常规治疗组(6 6. 7% ,P <0 .0 5 ) ,两治疗组治疗前后血小板CD6 2 p、TNF- α、IL- 6的水平显著高于健康人组(P <0 . 0 5 ) ,两组治疗后CD6 2p、TNF -α、IL -6均明显下降,灯盏细辛治疗组降低较常规治疗组更明显(P <0 . 0 5 )。结论灯盏细辛注射液治疗ACI可能与其下调血小板CD6 2 p的表达、减轻细胞因子所介导的中枢神经系统的免疫应答及炎性损伤有关。

优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达

CD62p阳性率是保存血小板质量监测的重要指标之一。为在静脉全血内血小板CD62 p测定方法的基础上优化建立流式细胞术 (FCM)测定保存血小板表达CD62p的方法 ,在血小板检测标本内加入 0 .1mmol/L潘生丁稳定血小板 ;对TBS溶液进行了改良 ,添加了 1 .1mmol/L的EDTA和 1 0 0 μmol/L潘生丁 ,用以代替PBS ;采用新鲜富含血小板血浆 (FPRP)制备的阴、阳性对照 ;进行方法学评价。结果表明 :加入 0 .1mmol/L潘生丁和 1 .1mmol/L的EDTA可以有效防止实验过程中的血小板人为激活 ;采用新鲜富含血小板血浆 (FPRP)制备的阴、阳性对照既可优化FCM分析方法 ,还可用于检验所购荧光抗体的质量 ,保证实验结果的有效性。采用泛血小板特异性标志物CD61可灵敏特异地识别血小板 ,提高了实验抗干扰能力。制备保存血小板时采用的是专用大号采血针 ,抽血流畅 ,对血小板CD62p表达测定人为影响很小 ,明显优于用注射器采集患者静脉全血的做法。CD62 p测定灵敏度可达 1 % ,制备的标本可稳定 48小时。结论 :利用该流式细胞术可以灵敏而特异地测定保存血小板的CD62P表达率 ;该方法简便易行 ,提高了结果的准确性 。

糖尿病并血管病变患者血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达及血小板四参数的研究

目的 :探讨血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达及血小板四参数与糖尿病并血管病变患者的关系。 方法 :采用流式细胞术测定 42例 2型糖尿病并发血管性疾病患者 (糖尿病伴血管病变组 )血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达 ,同时用自动血细胞计数仪对其进行血小板四参数的测定 ,并与 50例糖尿病不伴血管病变组和 46例正常对照组比较。 结果 :糖尿病伴血管病变组CD62p (11 64± 3 79) %、CD63 (15 73± 4 2 2 ) %的表达和血小板平均体积 (11 85± 2 3 1)fl等 3指标与正常对照组CD62p (2 2 7± 2 11) % ,CD63 (6 83± 2 85) % ,血小板平均体积 (10 72± 1 63 )fl比较均显著性增高(P值分别为 <0 0 0 1,<0 0 0 1和 <0 0 1) ,血小板计数、血小板压积和血小板分布宽度在两组间差异无统计学意义 (P >0 0 5) ;与不伴血管病变组比较 ,CD62p (10 0 1± 3 65) %和CD63 (14 0 2± 3 87) %也显著性增高 (P <0 0 5) ,血小板平均体积、血小板计数、血小板压积和血小板分布宽度在两组间差异无统计学意义 (P >0 0 5)。结论

富含血小板血浆制备过程中血小板CD62p表达

为了探索大批量制备冰冻保存富含血小板血浆 (Cryo PRP)全过程中影响血小板质量变化的因素 ,以优化Cryo PRP制作过程 ,提高Cryo PRP质量 ,采用流式细胞术测定Cryo PRP全过程中血小板膜表面CD6 2 p表达。冰冻保存血小板全过程包括血液采集、离心制备、添加DMSO、- 80℃冰箱保存和 38℃水浴解冻。结果表明 ,在血液采集、离心制备、添加DMSO过程中血小板膜表面CD6 2 p表达逐步升高 ,但升高幅度较小 ,血小板CD6 2 p阳性率约为 5 .2 5 % ,而降温、解冻过程中血小板CD6 2 p阳性率有一个突然的升高 ,其幅度约占整个过程的 82 % ,对血小板的损害较大。结论 :在Cryo PRP的制备过程中 ,血小板的离心制备和DMSO的添加方式均可以得到良好的优化 ,而对冰冻富含血小板血浆的质量影响也易于控制 ,但冰冻保存对血小板的损害较大 ,且不可避免。因此 ,迫切需要一种新型的血小板冰冻保护液和改进冰冻保存方法 ,以减轻冰冻损害 。

急性脑梗死患者体内血小板CD62P和sTLT-1的表达水平

目的大量研究表明血小板CD62P和sTLT-1能够促进动脉粥样硬化性血栓的形成,因此我们检测急性脑梗死患者体内血小板CD62P和sTLT-1的表达水平,以作为评价动脉粥样硬化性血栓形成的功能指标。方法选择急性脑梗死患者(发病时间≤7 d)102例作为病例组,同期选择来我科就诊的非急性脑梗死患者93例为对照组,采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测血小板CD62P的表达水平,用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中sTLT-1的表达水平。结果急性脑梗死组的血小板CD62P和sTLT-1的表达水平均明显高于对照组(P<0.01),CD62P和sTLT-1的表达水平与急性脑梗死患者的神经功能缺损程度及梗死灶体积呈正相关;CD62P和sTLT-1之间呈直线正相关(r=0.247,P<0.01);多元Logistic回归分析,CD62P和sTLT-1在校正其他相关危险因素后[CD62P(%)OR值=1.102,95%CI:1.062~1.143,P<0.01;sTLT-1(pg/ml)OR值=1.004,95%CI:1.002~1.006,P<0.01]。结论血小板CD62P和sTLT-1是脑梗死发病的危险因素,可能是急性脑梗死患者体内动脉粥样硬化性血栓形成的独立危险因素。

麝香注射液对急性脑梗死患者CD62P与TNF-α的影响

目的 :观察麝香注射液治疗急性脑梗死 ( ACI)的作用机制。方法 :6 3例 ACI患者随机分为两组 ,治疗组 32例用麝香注射液加盐酸川芎嗪注射液治疗 ,对照组 31例用盐酸川芎嗪注射液治疗。采用流式细胞仪、电化学发光法测定两组 ACI患者治疗前后血小板 CD6 2 P的阳性表达率与肿瘤坏死因子 α( TNFα)、白介素 6( IL 6 )水平 ,并与 30例健康人组作对照及相关分析。结果 :ACI患者治疗前后 CD6 2 P、TNFα和 IL 6均显著高于健康人组 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,ACI患者 CD6 2 P表达与 TNFα、IL 6水平升高呈正相关 ;麝香注射液组治疗后 CD6 2 P、TNFα和 IL 6水平的降低较对照组显著 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,临床治愈、显效率亦明显高于对照组 ( P均 <0 .0 5 )。结论 :麝香注射液治疗 ACI的作用机制与其抑制血小板活化增强、减轻细胞因子介导的中枢神经系统免疫应答及炎症损伤等有关。

血小板CD62p表达率与血小板输注效果的关联分析

目的探讨血小板CD62p表达率与血小板输注效果的关联性。方法根据血小板输注后1及24 h血小板计数增加值(CCI),将黄石市中心医院115名患者分为输注有效组(n=94)和无效组(n=21)。选择2013年6月-2014年12月符合无偿捐献血小板标准的献血者血小板115份,采用SEPSA排除血小板相关抗体引起的血小板输注无效,使用流式细胞术检测输注前CD62p表达水平。结果血小板输注有效组血小板CD62p表达率(10.3±3.2)%高于无效组(21.8±5.2)%(P<0.05),血小板CD62p表达率与1h CCI(r=-0.423,P<0.001)和24 h CCI(r=-0.541,P<0.001)有相关性。结论血小板CD62p表达率对血小板输注效果有影响,血小板CD62p表达率越高,CCI越低,血小板输注效果越差。

25Gy γ射线辐照对手工富集人血小板CD62p表达的影响

本研究观察25Gyγ射线照射对22℃保存条件下的手工富集血小板悬液不同保存期CD62p、血小板计数及平均血小板体积(MPV)的影响。将富浆法分离的16袋血小板,每袋平均分为两份,其中1袋经25Gy137铯γ射线辐照,另1份不辐照,然后按美国血库协会(AABB)标准保存72小时。经辐照的血小板作为观察组,未辐照的血小板作为对照组。流式细胞术检测两组血小板辐照前及保存24和72小时后P选择蛋白的表达水平;同时用血细胞计数仪检测血小板数和平均血小板体积(MPV)。结果表明:辐照组与对照组血小板表达CD62p百分率均随保存时间的延长而增高;保存24小时与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05),保存72小时与保存24小时比较有非常显著性差异(p(0.01)。在保存24、72小时后,两组血小板CD62p表达率、血小板计数无显著差异(p>0.05);但两组血小板在保存72小时后MPV与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05)。结论:γ射线照射不影响血小板的数量和质量,但手工血小板液态储存时间应尽可能缩短。

类风湿关节炎患者CD62P、CD41/CD61的表达及意义

目的:通过检测类风湿关节炎(RA)患者血小板表面活化标志物CD41/CD61、CD62P的表达,研究血小板活化与RA及RA活动性的关系。方法:采用流式细胞技术检测RA患者及健康对照组血小板CD41/CD61、CD62P的表达阳性率。结果:血小板CD62P阳性率在RA活动组及RA组患者分别高于缓解组和健康对照组,CD41、CD61阳性率差别在各组间无统计学意义。结论:(1)RA患者血小板CD62P表达增高与疾病活动有关;(2)血小板CD62P高表达可能是RA患者好发心血管疾病的原因之一;(3)CD41/CD61可能与RA炎症及其好发心血管病无关。

不同浓度血小板激活剂激活血小板微粒膜表达PAC-1、CD62p的比较

目的 比较不同浓度的激活剂激活血小板形成的血小板微粒 (PMP)膜表达PAC 1、CD6 2p的差异。方法 抽取 10例健康人静脉血 ,以枸橼酸钠抗凝 ,离心得富血小板血浆 ,分别以不同浓度的ADP(5、10、2 0 μmol/L)、凝血酶 (0 .1、0 .5、1.0U/ml)、胶原 (5、10、2 0 μg/ml)作诱导剂 ,激活同一标本中的血小板 ,比较其PMP表达PAC 1和CD6 2p的情况。 结果 随着激活剂浓度的增加 ,CD6 2p+ PMP、PAC 1+ PMP的百分率都逐渐增加 ,同一诱导剂各浓度间有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 不同刺激强度的血小板诱导剂ADP、凝血酶、胶原 ,随浓度的增加 ,其诱导血小板所形成的CD6 2p+ PMP、PAC 1+ PMP的百分率逐渐增加。

恶性肿瘤患者血小板、红细胞黏附分子CD35、CD44、CD62P的表达与肿瘤转移的关系

目的:研究血小板以及红细胞CD35、CD44和CD62P分子的表达变化与肿瘤转移的生物学意义。方法:通过流式细胞仪测定正常人和恶性肿瘤患者血小板和红细胞CD35、CD44和CD62P的表达情况。结果:肿瘤患者血小板CD62P平均荧光强度(MFI)明显高于正常人,转移组明显高于未转移组;转移组血小板CD35明显高于正常人;转移组红细胞CD35明显低于正常人;肿瘤患者红细胞CD44明显低于正常人。结论:恶性肿瘤患者血小板CD35和CD62P分子处于高表达状态,而红细胞CD35、CD44分子表达减少,这些变化可能对肿瘤的生长和转移具有重要意义。

机采浓缩血小板-80℃长期冻存条件下CD62p表达与ADP诱导的再表达

目的通过对冻存损伤关键因素的了解评估冻存血小板潜在的冻存期限。方法采用流式细胞技术观察冻存1～6年复苏后血小板CD62p表达和ADP诱导后CD62p再表达能力。结果在-80℃保存12～48个月，冻存血小板CD62p的表达受得良好抑制，可与22℃保存28h的液体血小板质量相近；而ADP-CD62p再表达能力充分，36个月时为（70．2±10．3）％，与常温24h的液体血小板的（70．4±21．5）％相比无显著性差异（P〉0．05）；但48个月时下降至（35．2±18．2）％，与冻存36个月比较有非常显著性差异（P〈0．01）。作为对照，液体血小板在采集后1h的CD62p表达率为（2．2±1．5）％，在22℃条件下随保存时间的延长迅速升高，24h有显著性差异（P〈0．05），48h和72h有极显著性差异（P〈0．01）；而采集后1h的ADP．CD62p再表达率为（83．5±14．7）％，其后迅速下降，48h后有极显著性差异（P〈0．01）。结论新鲜血小板常温条件下待冻期间发生的代谢损伤是影响冻存血小板质量的关键因素，选择≤24h的新鲜血小板用于-80℃冻存至少可以保存3年。

冰冻机采血小板超微结构回收率以及CD62P,PAC-Ⅰ的改变

目的 研究以终浓度 5 %二甲亚砜 (DMSO)为主的冷冻保存剂加入机采血小板冻存 1周、4周后血小板超微结构 ,体外回收率 (RR)以及CD62P和PAC Ⅰ的改变。方法 跟踪 3 0例机采血小板产品 ,采用全自动血细胞分析仪 ,透射电镜 (TEM)技术和流式细胞术 (FCM)等分析并比较加入以DMSO为主的冷冻保存剂在 -12 0℃冻存 1周 ,4周后血小板的超微结构 ,RR值及CD62P和PAC Ⅰ的改变。结果 3 0例冷冻保存 1周及 4周后的血小板仍然具有相对完整的超微结构。冻存 1周及 4周后血小板的RR分别为冻前的 79 49%± 6 14 %和 74 0 7%± 5 3 9%。新鲜机采血小板的CD62P及PAC Ⅰ的值分别为 5 0 72 %± 14 3 1% ,5 3 2 3 %±2 0 2 6% ;冻存一周及四周后CD62P和PAC Ⅰ的值分别为 3 0 96%± 11 0 2 % ,2 2 96%± 9 90 % ;3 2 0 7%± 9 2 1% ,19 5 5 %± 10 3 3 %。结论 与新鲜机采血小板相比 ,冰冻血小板仍然具有较高的回收率和相对完整的超微结构 ,但也显示了不同程度的激活。与较高的回收率相对应 ,冷冻保存 1周及 4周后的机采血小板产品仍然具有较高的CD62P及PAC Ⅰ活性 ,其CD62P及PAC Ⅰ值无显著性差异 (P >0 0 5 )。

益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响

目的分析益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭(CRF)患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响。方法选取我科2012年1月至2014年1月长期接受血液透析的CRF患者92例,随机分为实验组和对照组。对照组采用碳酸氢盐血液透析液,实验组在对照组基础上,加用益气活血中药。对比两组患者透析3个月后中医症候评分、血生化、和血清CD62P水平。结果治疗3个月后,两组患者的中医症候评分较治疗前显著降低(P<0.05);实验组治疗3个月后中医症候评分较对照组显著降低(P<0.05)。治疗3个月后,两组患者的血肌酐、尿素氮、血钾、血磷和免疫反应性甲状旁腺激素(i PTH)较治疗前显著降低,血钙较治疗前显著上升(P<0.05);治疗3个月后,实验组的血肌酐、尿素氮、血钾、血磷和i PTH较对照组显著降低,血钙较对照组显著上升(P<0.05)。治疗3个月后,实验组的红细胞、血红蛋白和尿渗透压较对照组显著升高,尿ACR较对照组显著降低,(P<0.05)。治疗3个月后,两组患者的血清CD62P水平较治疗前显著降低(P<0.05);治疗3个月后,实验组血清CD62P水平较对照组显著降低(P<0.05)。结论益气活血中药血液透析液用于CRF患者透析可降低其CD62P水平,改善肾功能,具有一定的应用价值。

系统性红斑狼疮患者血小板PAC-1和CD62P表达的研究

目的探讨SLE患者外周血血小板PAC-1和CD62P的表达情况及其临床意义。方法用流式细胞仪检测40例SLE患者及20名健康志愿者(对照组)外周血PAC-1和CD62P的表达率,对40例SLE患者进行SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分,与PAC-1、CD62P与SLEDAI评分进行相关性分析。结果 SLE患者PAC-1和CD62P的阳性表达率高于对照组(P﹤0.05或0.01),其中狼疮活动组比狼疮非活动组明显升高(P﹤0.01)。SLE患者PAC-1、CD62P的阳性表达率与SLEDAI呈正相关(r分别为0.503,0.583,P均<0.05)。SLE患者狼疮性肾炎组与非狼疮性肾炎组的PAC-1和CD62P的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PAC-1和CD62P作为血小板活化的标志,在SLE患者外周血中的表达明显升高,并与SLEDAI评分呈正相关,表明血小板活化水平能反映狼疮病情活动,可作为狼疮活动监测指标;血小板活化可能在狼疮活动中发挥作用。

CD62p在诊断急性脑梗死疾病中的作用

目的通过测定血小板膜糖蛋白CD62p的表达率,探讨其与急性脑梗死的关系,绘制ROC曲线,确定阴阳性截点,阐明临床意义。方法使用流式细胞仪采用FITC和PE双标定法检测急性脑梗死组患者血浆CD62p阳性率,并与高危组及正常人组进行对照研究,对CD62p与脑梗死的关系进行ROC曲线分析,确定CD62p阳性率适用于判断急性脑梗死的最佳截点。结果病例组CD62p阳性表达率显著高于高危组及对照组(P<0.01)。动态观察病例组CD62p阳性表达率,第24 h血浆CD62p表达率最高,第7 d、第14 d呈逐渐下降趋势,但第14 d时仍高于高危组及对照组(P<0.01)。使用CD62p阳性表达率绘制ROC曲线,最终选取CD62p阳性表达率5.20%为截点,得出结果提示敏感度92%,特异度95%,阳性预测值98%,阴性预测值73%,符合率(正确率)92%。结论在急性脑梗死组、高危组患者体内血小板发生活化的程度增加,但急性脑梗死组血小板活化程度更高,并且CD62p的阳性表达率越高提示病情越重。经CD62p阳性表达率绘制的ROC曲线证实,当检测CD62p高于5.2%时,预示发生脑梗死的可能性极大,为进一步寻找脑梗死早期筛查指标奠定了基础。