狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株细胞周期调控通路蛋白cyclin A,cyclin B和cdk 1等的影响

目的研究狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株细胞周期调控通路蛋白cyclinA,cyclinB和cdk1等影响。方法体外培养人多发性骨髓瘤U266细胞,加入终浓度为10,5,2.5mg/L的狗舌草提取物诱导48h,Western蛋白质印迹法检测cyclinA,cyclinB和cdk1蛋白表达。结果Western印迹检测结果显示,10,5,2.5mg/L的狗舌草提取物分别作用于U266细胞48h后,与正常对照组比较,蛋白cyclinB和cdk1的表达下调,cyclinA蛋白表达上调。结论狗舌草提取物诱导U266细胞凋亡的过程中,可能存在cyclinB和cdk1蛋白的表达下调、cyclinA蛋白表达上调参与。

CDK12参与模拟失重抑制成骨细胞增殖的作用及机制

目的失重环境下成骨细胞增殖能力下降是引起失重性骨丢失的重要原因之一,然而其具体机制仍不清楚。本文在前期研究基础上,研究CDK12参与模拟失重抑制成骨细胞增殖的作用及机制。方法采用RPM模拟失重条件,以CDK12高/低表达成骨细胞与对照组成骨细胞为研究对象,分别采用Ed U染色、流式细胞术、细胞免疫荧光染色、Real time PCR和Western Blot检测成骨细胞增殖、细胞周期、CDK12分布,以及CDK12介导的信号转导的变化,并检测CDK12高表达对失重抑制成骨细胞增殖的挽救作用。结果(1)模拟失重条件抑制成骨细胞增殖,改变细胞周期,下调成骨细胞中CDK12表达;(2)CDK12低表达抑制成骨细胞增殖,且改变细胞周期;(3)模拟失重条件或CDK12低表达抑制了RNAPⅡ磷酸化水平,并下调了DNA复制相关基因表达;(4)模拟失重条件下,CDK12高表达促进成骨细胞增殖、增加RNAPⅡ磷酸化水平,并上调DNA复制相关基因表达,对模拟失重条件抑制成骨细胞增殖具有挽救作用。结论CDK12在模拟失重条件抑制成骨细胞增殖中起重要作用。模拟失重条件下,CDK12表达受到抑制,RNAPⅡ磷酸化水平降低,进而抑制CDC6等DNA复制相关基因表达,改变细胞周期,导致成骨细胞增殖能力下降,而CDK12高表达对模拟失重抑制成骨细胞增殖具有挽救作用。

NCAPG和CDK1促进膀胱癌细胞增殖

目的:探讨非SMC凝缩蛋白Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)在膀胱癌细胞和膀胱癌组织中的作用。方法:通过生物信息学分析,比较NCAPG和CDK1在膀胱癌和正常组织中的表达。之后再对NCAPG和CDK1进行相关性分析,对新乡医学院第一和第三附属医院泌尿外科72例膀胱癌患者术后病理组织进行免疫组化染色,进一步验证其相关性。选取膀胱癌细胞T24和5637,将其分为两组,未敲低NCAPG的为对照组,转染shRNA敲低NCAPG的为shRNA组,qRT-PCR和Western印迹验证敲低效果,通过克隆形成和CCK-8实验检测其对膀胱癌细胞增殖的影响,并应用细胞周期实验,检测其对膀胱癌细胞周期的影响。结果:与正常膀胱组织相比,NCAPG和CDK1在膀胱癌组织中表达上调。NCAPG和CDK1免疫组化染色的相关性分析进一步证实了NCAPG与CDK1相关(χ^(2)=10.286,P<0.001)。通过结合临床资料进一步发现,NCAPG的表达与肿瘤大小密切相关(χ^(2)=6.675,P=0.010)。qRT-PCR和Western印迹结果显示,NCAPG shRNA明显抑制了NCAPG mRNA(t=5.422、5.238,均P<0.05)及蛋白的表达(t=4.756、4.122,均P<0.05)。同时CCK-8实验和克隆形成实验发现,敲低NCAPG会抑制膀胱癌细胞的增殖(t=5.886、4.147、3.102、3.745,均P<0.05)。细胞周期结果发现,敲低NCAPG后阻滞了膀胱癌细胞的G2/M期(t=2.566、2.926,均P<0.05)。结论:NCAPG和CDK1在膀胱癌细胞中高表达,会促进膀胱癌细胞的增殖。

二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的表达明显下降且随浓度增加而下降,8μmol/L组下降最明显。氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1蛋白表达水平较对照组降低,4μmol/L组降低最为显著(P<0.05)。结论氧化苦参碱抑制前列腺癌PC-3细胞增殖活力,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡并在细胞增殖周期G1期中阻滞,其中的作用机制可能与CDK4/cyclinD1通路密切相关。

CDK1基因对肝癌细胞HepG2、Huh7增殖、迁移的影响及作用机制

目的:基于生物信息学分析探讨CDK1表达与肝癌预后、临床特征的相关性,并通过实验进一步探讨其对肝癌细胞HepG2、Huh7增殖和迁移的影响。方法:通过检索TIMER数据库和GEPIA数据库,分析CDK1基因在肝癌和正常肝组织中的表达差异。借助UALCAN数据库验证CDK1蛋白在肝癌中的表达水平,运用R软件分析CDK1在GSE45267、GSE121247数据集中表达情况,采用单因素、多因素回归分析CDK1与肝癌临床病理参数的关系及预后价值,采用GEPIA和Kaplan-Meier Plotter数据库分析CDK1的表达与肝癌患者生存率的关系。将肝癌细胞HepG2、Huh7分为对照组和si_CDK1组(细胞转染CDK1-inhibitor),CCK-8法检测细胞增殖率,细胞划痕实验检测细胞愈合率,Transwell迁移实验分析计算细胞迁移数。通过LinkedOmics数据库探讨与CDK1共表达的正负相关基因,并进行通路富集分析。Western blot检测各组细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白表达。结果:CDK1在肝癌组织中的表达显著高于正常肝组织,且CDK1为影响肝癌患者的独立危险因素,CDK1表达越高患者存活率和预后越差;CDK1共表达基因主要参与细胞周期、DNA复制等;与Control组相比,si_CDK1组肝癌细胞的增殖、愈合率和迁移能力明显降低,细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡通路Bcl-2蛋白表达显著降低。结论:CDK1在肝癌组织中表达明显升高,并且与患者预后不良相关,沉默CDK1可以使肝癌细胞的增殖、迁移能力显著下降,引起细胞周期阻滞,促进细胞凋亡。

基于生物信息学研究CDK1在ACC中的表达及临床意义

目的:基于生物信息学探讨细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)在肾上腺皮质癌(ACC)中的表达水平,并用于评估ACC患者预后的价值及与免疫浸润的相关性,分析其潜在的作用机制。方法:通过GEPIA和UALCAN数据库分析CDK1在ACC中的表达与肿瘤分级、分期等临床特征和肿瘤患者预后的相关性。通过TIMER数据库分析ACC中CDK1表达水平与免疫细胞浸润水平的关系。通过STRING数据库和GENEMANIA数据库分析与CDK1相关蛋白的互作网络,并运用METASCAPE数据库对以上蛋白进行GO和KEGG富集分析。结果:CDK1在ACC中的表达显著高于正常组织(P<0.05);CDK1的高表达与ACC患者的预后呈负相关,CDK1表达愈高预后愈差(P<0.05);CDK1的表达水平与浆细胞呈正相关(相关系数R>0,P<0.05),而与CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、M2型巨噬细胞、树突细胞免疫浸润均呈负相关(相关系数R<0,P<0.05)。CDK1及其相互作用蛋白主要参与细胞周期相变、有丝分裂细胞周期的调节、周期蛋白依赖蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性的调控等生物学过程。结论:CDK1可作为ACC预后不良的标志物,CDK1通过影响免疫细胞浸润及细胞增殖分化途径调控ACC的发生发展。

Cyclin B1、CDK1在肺癌中过表达及其意义

采用免疫组化ABC法检测 12例肺癌组织、11例癌旁组织及 3例正常肺组织中cyclinB1、CDK1蛋白的表达情况 ,以探讨细胞周期蛋白cyclinB1及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1在不同肺癌组织中的异常表达及其临床意义 .结果显示cyclinB1在正常肺组织、癌旁组织、癌组织中阳性率分别为 0 %、9.1%和 5 0 .0 % ,CDK1的阳性率则为0 %、18.2 %和 75 .0 % ,cyclinB1、CDK1在小细胞肺癌和鳞癌中存在广泛的过表达 ,而在大细胞肺癌中没有表达 。

白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、cyclinB1表达影响

研究白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达,探讨白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G2/M期阻滞的机制.采用Western blotting法测定白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达的影响.不同质量浓度的白屈菜碱可显著下调人胃癌SGC-7901细胞内Cdk1与cyclinB1蛋白表达水平,同时显著上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达水平,并呈一定的剂量依赖性.白屈菜碱可下调SGC-7901细胞内Cdk1和cyclinB1蛋白的表达,上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达,这可能是白屈菜碱诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞的主要机制之一.

细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1/p34cdc2)对喉癌术后局部复发的预测价值

目的检测喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白表达及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测85例喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白的表达,并收集临床病理资料进行随访。结果在随访2年以上的喉鳞状细胞癌中14例出现局部复发(复发组),71例未复发(未复发组)。在喉鳞状细胞癌和癌切缘组织中p53蛋白阳性率分别为60.0%和36.5%;p21蛋白阳性率分别为38.8%和21.2%;Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为70.6%和29.4%。喉鳞状细胞癌复发组和未复发组的切缘组织中p53蛋白阳性率分别为71.4%和29.6%(P=0.003),切缘组织中p21蛋白阳性率分别为50.0%和15.5%(P=0.004),切缘组织中Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为57.1%和23.9%(P=0.013)。癌旁切缘组织中p53与p21及Cdk1/p34cdc2蛋白表达之间无相关性(P均>0.05)。结论 p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白在喉鳞状细胞癌的发生、发展中可能起重要作用;癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2过表达与喉鳞状细胞癌局部复发密切相关。

CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定

目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的 pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化。经测序等方法鉴定重组克隆。将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HepG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果。结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDK1。结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础。

山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响

目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响。方法:分别用0、20、40、60、80和100μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞。处理24、48和72h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1mRNA的表达水平。结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001),细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001)。结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖。

CDC25A与CDK1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探索CDC25A和CDK1在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化的方法检测119例胃癌组织中CDC25A和CDK1的表达情况,通过统计分析CDC25A和CDK1与胃癌患者的临床病理特征之间的关系。结果:CDC25A和CDK1在高分化胃癌组织低表达,在低分化胃癌组织中高表达,与胃癌的病理分级具有相关性(P<0.001);CDC25A和CDK1在早期胃癌中低表达,在晚期胃癌组织中高表达,与胃癌TNM分期具有相关性(P<0.01);CDC25A和CDK1的表达与胃癌患者有淋巴结转移(P<0.001)相关,CDC25A和CDK1在发生淋巴结转移的胃癌组织中高表达,在未发生淋巴结转移的胃癌组织中低表达。结论:CDC25A与CDK1有望成为胃癌诊断与治疗的潜在的分子标志。

莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G_2/M期阻滞及其对Cdk1和CyclinB1蛋白表达的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)在体外对人肝癌HepG-2细胞G2/M期的阻滞作用,并探讨其分子作用机制。方法:10、20、40μmol·L-1的SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48h后,采用流式细胞仪检测SFN对HepG2细胞周期的影响;WesternBlot法检测SFN对HepG2细胞内Cdk1、p-Cdk1(Thr14)和CyclinB1蛋白表达的影响。结果:SFN作用于HepG-2细胞48h后,随着SFN浓度的增大,G2/M期细胞比例逐渐升高,当SFN浓度达到40μmol·L-1时,G2/M期细胞比例达到31.95%,且出现凋亡峰;随SFN浓度的增大,细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达量显著降低(P<0.01或P<0.05),同时p-Cdk1(Thr14)的表达显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论:SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞发生G2/M期阻滞;SFN可通过下调HepG-2细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达、上调p-Cdk1(Thr14)的蛋白表达水平,进而抑制Cdk1-CyclinB1复合物的形成和活化使人肝癌HepG-2细胞阻滞在G2/M期。

MicroRNA-490-5p靶向CDK1通过ERK信号通路参与胃癌细胞周期调控

目的:探讨miR-490-5p对胃癌细胞增殖与周期的调控作用和分子机制,以期为临床治疗胃癌提供新的有效靶点。方法:收集30例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织标本;采用Real-time PCR法检测miR-490-5p和CDK1的表达水平;分析细胞周期相关蛋白CDK1与miR-490-5p的靶向关系。MTT法和流式细胞仪检测转染后胃癌细胞生长以及细胞周期情况。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-490-5p的表达显著下调(P<0.001);转染miR-490-5p mimics的细胞中miR-490-5p的表达显著上调,而miR-490-5p inhibitors中miR-490-5p显著下降(均P<0.001);CDK1是miR-490-5p的靶基因;下调miR-490-5p、上调CDK1能促进胃癌细胞的增殖能力及G1/S期的转化(均P<0.001)。结论:通过上调miR-490-5p可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,减少CDK1表达,抑制ERK信号途径,降低了G1/S期的转化速率,从而为胃癌诊断及治疗提供新靶标。

P53、P21WAF-1和CDK1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨p53、p21^WAF-1蛋白、CDK1在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集正常乳腺组织120例和乳腺癌组织480例,通过免疫组化EnVision方法检测p53、p21^WAF-1和CDK1蛋白的表达情况,并进行统计学分析。结果p53、p21^WAF-1和CDK1蛋白在正常乳腺组织与乳腺癌组织中的阳性率比较差异显著(P<0.05);且乳腺癌中P53表达率与p21^WAF-1表达率呈负相关(r=-0.364,P<0.05),P53表达率与CDK1表达率呈正相关(r=0.626,P<0.05);p21^WAF-1表达与CDK1表达呈负相关(r=-0.218,P<0.05)。p53、p21^WAF-1表达乳腺癌临床分期、组织学分级、病理类型及淋巴结转移有相关性(P<0.05),与患者年龄无相关性(P>0.05);CDK1表达乳腺癌组织学分级、病理类型及淋巴结转移有相关性(P<0.05),与患者临床分期和年龄无关(P>0.05)。结论p53、p21WAF-1蛋白和CDK1的表达与乳腺癌的发生发展相关,且p53蛋白与CDK1的表达呈正相关,与p21^WAF-1蛋白表达呈负相关,可推断乳腺癌的p53-p21^WAF1-CDK1信号通路调节G2/M检验点机制,参与乳腺癌的发病过程。

P53、P21^(WAF1)和CDK1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义

背景与目的:P53、P21WAF1和CDK1是细胞周期中G2/M期DNA损伤检验点"P53通路"的关键因子,本研究拟探讨P53、P21WAF1和CDK1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、76例卵巢上皮性癌组织中P53、P21WAF1、CDK1蛋白的表达,并分析卵巢上皮性癌组织中P53、P21WAF1、CDK1蛋白表达与其临床病理特征的关系以及各蛋白表达之间的相关性。结果:P53、P21WAF1和CDK1蛋白在卵巢上皮性癌中的阳性率与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤相比其差异均有统计学意义(P<0.05),而在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤之间其阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。在卵巢上皮性癌中,临床分期越晚、组织分化越差,P53蛋白表达越高;随着临床分期的增加,P21WAF1蛋白表达逐渐降低;CDK1蛋白的表达与各临床病理特征无相关性。卵巢上皮性癌中P53蛋白和P21WAF1蛋白的表达与CDK1蛋白的表达呈负相关(r=-0.388,P=0.001;r=-0.282,P=0.014),P53蛋白与CDK1蛋白表达呈正相关(r=0.263,P=0.022)。结论:P53蛋白与卵巢上皮性癌的恶性程度相关,P53和P21WAF1蛋白可能与卵巢上皮性癌的恶性进展有关。检测CDK1可能有助于卵巢癌的早期诊断。

CDK2-AP1基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖及周期的影响

目的:通过过表达手段上调细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白1(CDK2-AP1)基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,并观察其对MCF-7细胞生长和细胞周期调控的作用。方法:将CDK2-AP1基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MCF-7细胞,应用实时定量PCR和Western印迹验证CDK2-AP1基因mRNA和蛋白的表达效率。利用MTT法绘制生长曲线、克隆形成实验观察CDK2-AP1基因过表达后MCF-7细胞生长的变化,PI染色流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的改变。通过Western印迹检测CDK2-AP1过表达后,细胞周期相关蛋白(CDK2,CDK4,P16Ink4A,P21Cip1/Waf1)的表达。结果:过表达CDK2-AP1基因的慢病毒感染MCF-7细胞可上调其mRNA表达6.94倍,蛋白表达也十分显著地增高,两者相一致。生长曲线显示MCF-7细胞过表达CDK2-AP1基因后,增殖能力显著降低(P<0.05);克隆形成实验表明,其形成的克隆数目同样显著减少(P<0.05);流式细胞仪检测证实MCF-7细胞过表达CDK2-AP1能够使细胞周期出现G1期阻滞,并且出现凋亡峰;CDK2-AP1基因表达上调导致P21Cip1/Waf1和P16Ink4A蛋白表达上调,CDK2和CDK4蛋白表达下调。结论:CDK2-AP1基因具有抑癌基因的功能,在乳腺癌MCF-7细胞过表达该基因能够抑制细胞的生长和克隆形成能力,并且使细胞阻滞于G1期。

宫颈癌组织中CDC6、CDK1的表达及其与HPV_(16/18)感染的相关性研究

目的:研究CDC6、CDK1在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制,进一步寻找宫颈癌诊断的新的分子标志物。方法:采用免疫组织化学方法对50例宫颈癌石蜡标本、宫颈上皮内瘤样病变CINⅠ20例、CINⅡ-Ⅲ20例、正常宫颈组织20例进行CDC6、CDK1的检测,同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况。结果:在宫颈癌组织中CDC6、CDK1的阳性率高于CIN和正常宫颈组织,差异有显著性(均P<0.05),且CDC6、CDK1阳性表达率与病理分级有关,差异有显著性(均P<0.05),CDC6阳性表达率均与淋巴结转移有关(P<0.05);CDK1阳性表达率均与淋巴结转移无关(P>0.05);在宫颈癌组织中CDC6和CDK1的阳性表达率与年龄、临床分期无关(均P>0.05)。HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高,差异有显著性(P<0.05),但与临床分期、病理分级、淋巴转移、年龄无关(均P>0.05)。CDK1和CDC6的表达有正相关性(rs=0.529,P<0.05);CDC6与HPV16/18感染有关(rs=0.386,P<0.05);CDK1与HPV16/18感染无关(rs=0.145,P>0.05)。结论:宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中CDC6表达的改变可能与HPV16/18感染有关,且互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生。这些指标综合分析可能为阐明HPV16/18的恶性转化机制以及为提高宫颈癌及其癌前病变诊断率提供参考依据。CDC6、CDK1的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关,可作为宫颈癌筛查、预后判断的有用指标。

探究增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因与细胞周期的相关性

目的:探究与分析增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达与细胞周期之间的相关性。方法:选取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕标本,按照增生性瘢痕的时间段将所采集的标本进行分组,共分为3个月组、6个月组、1年组及2年组,每组各10份标本,另选择同时期采集到的10份正常标本作为常规对照组。观察与对比各个标本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情况,同时对成纤维细胞周期进行检测。结果:3个月组、6个月组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);6个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与3个月组相比差异均有统计学意义(P<0.05);3个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与6个月组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。增生期瘢痕早期高比例在细胞分裂周期中的S期间及G2/M期,结果可见,针对此细胞周期进行相关的基因调控干预,可对增生性瘢痕进一步发生发展起到有效抑制作用。结论:处于不同增生性瘢痕的时期中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达趋势大致相符,增生性瘢痕细胞周期的分布情况与上述三个蛋白执行功能的情况呈相互对应的关系,为临床研究提供可靠依据。